Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2018-01-16T11:14:58Z No. of bitstreams: 1 FERNANDA_SOUZA_MACCHI_DIS.pdf: 4481387 bytes, checksum: 59f26900156a5b5c1a267893bdc6f655 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-01-26T12:32:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FERNANDA_SOUZA_MACCHI_DIS.pdf: 4481387 bytes, checksum: 59f26900156a5b5c1a267893bdc6f655 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-26T12:40:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FERNANDA_SOUZA_MACCHI_DIS.pdf: 4481387 bytes, checksum: 59f26900156a5b5c1a267893bdc6f655 (MD5) Previous issue date: 2017-11-22 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Using the classical hybridization approach series of 1H-benzo[d]imidazoles and 3,4-dihydroquinazolin-4-ones were synthesized and evaluated as inhibitors of Mycobacterium tuberculosis growth. Chemical modifications and structure-activity relationship studies yielding potent antitubercular agents with minimum inhibitory concentration values in submicromolar range. Further, the synthesized compounds were active against drug-resistant strains and were devoid of apparent toxicity to HepG2, HaCat, and Vero cells. In addition, some 3,4-dihydroquinazolin-4-ones showed low risk of cardiac toxicity, no signals of neurotoxicity or morphological alteration in zebrafish (Danio rerio) models. Therefore, these data denote that this class of molecules may furnish candidates for future development of novel anti-TB drug alternatives. / Usando a abordagem cl?ssica de hibrida??o molecular, s?ries de 1H-benzo[d]imidaz?is e 3,4-diidroquinazolin-4-onas foram sintetizadas e ensaiadas como inibidores de crescimento de Mycobacterium tuberculosis. Modifica??es qu?micas e estudos de rela??o estrutura-atividade nos conduziram a potentes agentes antituberculose com valores submicromolares de concentra??o inibit?ria m?nima. Os compostos sintetizados tamb?m foram ativos contra cepas resistentes ? f?rmacos e demonstraram desprovida citotoxicidade aparente em c?lulas HepG2, HaCat e Vero. Al?m disso, algumas 3,4-diidroquinazolin-4-onas apresentaram baixo risco de toxicidade card?aca, e nenhum sinal de neurotoxicidade ou altera??o morfol?gica em modelo de peixe-zebra (Danio rerio). Sendo assim, os resultados indicam que essa classe de mol?cular pode fornecer condidatos para o desenvolvimento futuro de novos f?rmacos contra a tuberculose.

Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2018-02-20T13:36:43Z No. of bitstreams: 1 MARIA_EDUARDA_AZAMBUJA_AMARAL_DIS.pdf: 3946234 bytes, checksum: 4e7a733b9d2337c3a887b3d9bbb56a93 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-02-23T18:05:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MARIA_EDUARDA_AZAMBUJA_AMARAL_DIS.pdf: 3946234 bytes, checksum: 4e7a733b9d2337c3a887b3d9bbb56a93 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-23T18:29:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARIA_EDUARDA_AZAMBUJA_AMARAL_DIS.pdf: 3946234 bytes, checksum: 4e7a733b9d2337c3a887b3d9bbb56a93 (MD5) Previous issue date: 2018-01-14 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Background Breast cancer is highly prevalent among women worldwide. It is classified into three main subtypes: the estrogen receptor positive (ER+), the human epidermal growth factor receptor 2 positive (HER2+), and the triple negative breast cancer (TNBC). This latter type is the most prevalent in clinics. Each type requires a specific treatment, being TNBC an actual challenge for treating. Drug repurposing is an easy and cheaper methodology to identify new therapies for cancer treatment. This study evaluated the effects of aspirin and metformin, isolated or in combination, in breast cancer cells of different subtypes. Methods The breast cancer cell lines MCF-7, MDAMB- 231, and SK-BR-3 were treated with aspirin and/or metformin (0.01 mM - 10 mM); functional in vitro assays were performed. The interactions with the estrogen receptors (ER) were evaluated in silico. Results Metformin altered the morphology, and reduced the viability and migration of the ER+ cell line MCF-7. A synergistic effect for the combination of metformin and aspirin was observed in the TNBC cell subtype MDAMB- 231, according to the evaluation of viability and colony formation. No significant effects were observed for either drugs in the HER2+ cell subtype SK-BR-3. The effects of metformin and aspirin partly rely on cyclooxigenase-2 (COX-2) upregulation, without any alteration of lipoxin production. In silico, metformin and aspirin bound the ERa receptor with the same energy. Conclusion We provide novel evidence on the mechanisms of action of aspirin and metformin in breast cancer cells, showing favorable outcomes for these drugs in the ER+ and TNBC subtypes. / O c?ncer de mama ? uma doen?a altamente prevalente entre mulheres nos cinco continentes, sendo uma das principais causas de morte associadas ao c?ncer. Esse tumor ? classificado em tr?s subtipos principais: c?ncer de mama estrog?nio positivo (ER+), c?ncer de mama HER2 positivo (HER2+) e, c?ncer de mama triplo negativo (TNBC). A necessidade da identifica??o do subtipo tumoral ? de extrema import?ncia para escolha do tratamento. Atualmente, o subtipo triplo negativo ? o que gera maiores desafios cl?nicos, pois o tratamento ainda ? pouco espec?fico, n?o sendo eficiente em muitos casos. O reposicionamento de drogas baseia-se na determina??o de indica??es diferentes daquelas para as quais os f?rmacos foram previamente aprovados. Representa um m?todo f?cil e r?pido para a identifica??o de novos tratamentos, se comparado com o desenvolvimento tradicional de novos f?rmacos. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da aspirina e da metformina, dois medicamentos j? aprovados internacionalmente, isolados ou em combina??o, em linhagens de c?ncer de mama de tr?s diferentes subtipos. As linhagens celulares utilizadas foram MCF-7 (ER+), MDA-MB-231 (triplo negativa) e SK-BR-3 (HER2+), as quais foram submetidas ao tratamento com metformina e/ou aspirina (0.01 mM - 10 mM). Ap?s o tratamento, foram realizados ensaios funcionais in vitro. Al?m disso, an?lises in silico foram empregadas para identificar a intera??o entre o receptor de estrog?nio (ER) e os f?rmacos. Na linhagem MCF-7, a metformina induziu altera??es morfol?gicas, redu??o da viabilidade e da migra??o celular. Foi observado um efeito sinerg?stico entre a combina??o de metformina e aspirina na linhagem MDA-MB-231, em rela??o ? viabilidade celular e ? capacidade de forma??o col?nias. Entretanto, na linhagem SK-BR-3, n?o foram obtidos efeitos significativos. Acredita-se que os efeitos da metformina e da aspirina podem estar relacionados ? indu??o da express?o de COX-2, independente da produ??o de lipoxinas. Dados in silico demonstraram que a aspirina e a metformina possuem a capacidade de se ligar, com a mesma energia, ao ERa. O presente estudo traz novas evid?ncias sobre os mecanismos de a??o da aspirina e da metformina em c?lulas de c?ncer de mama, com efeitos antitumorais predominantes nos subtipos ER+ e triplo negativo.

Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2018-04-06T17:32:47Z No. of bitstreams: 1 VANESSA_KAPPEL_DASILVA_TES.pdf: 5900313 bytes, checksum: 98206f797d5710ed04b0cd1d6529092e (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-04-16T19:58:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 VANESSA_KAPPEL_DASILVA_TES.pdf: 5900313 bytes, checksum: 98206f797d5710ed04b0cd1d6529092e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-16T20:04:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VANESSA_KAPPEL_DASILVA_TES.pdf: 5900313 bytes, checksum: 98206f797d5710ed04b0cd1d6529092e (MD5) Previous issue date: 2018-03-07 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Brain iron accumulation has been observed both in normal aging and in many neurodegenerative diseases. In previous studies, we have described that brain iron overload results in persistent memory deficits, accompanied by oxidative stress. The high metabolic rate of the nervous system makes mitochondria essential for nerve cells. These organelles control iron homeostasis in its interior and the management of reactive oxygen species. When deregulation in these activities occurs, mitochondrial functioning is compromised, resulting in failures in the energy supply mainly for the synapses. Inadequate functioning of neural circuits may culminate in the activation of cell death pathways, a feature strongly associated with neurodegenerative diseases. In the present study we analyzed the effects of neonatal iron overload on complex I deletions in the mitochondrial DNA ; on methylation and hydroxymethylation of mitochondrial DNA; on mitochondrial proteins involved on iron homeostasis, on the enzymatic activity of Succinate Dehydrogenase and Creatine Kinase, enzymes involved in the cells energy supply; and on proteins involved in apoptotic pathways, such as Caspase 8, Caspase 9, Caspase 3, Cytochrome c, APAF1, and PARP in the hippocampus of adult rats. In addition, we investigated the effects of cannabidiol (CBD), the main non-psychotropic component of Cannabis sativa, in reversing iron-induced effects on all parameters analyzed. Male rats received vehicle or iron carbonyl (30 mg / kg) from the 12th to the 14th postnatal day and were treated with vehicle or CBD (10mg / kg) for 14 days in adulthood. Iron treatment induced increased deletions of mitochondrial DNA and expression of proteins involved in apoptosis, while induced reductions of methylation and hydroxymethylation, enzymatic activity and mitochondrial ferritin, an iron storage protein. CBD reversed iron-induced effects, recovering hydroxymethylation levels, mitochondrial ferritin, Succinate dehydrogenase activity, apoptotic proteins Caspase 3, Caspase 9, PARP and APAF1 at levels comparable to controls. These results suggest that iron can affect mechanisms of mitochondrial functioning and trigger cell death pathways by apoptosis. The reversal of some of these effects by CBD indicates its neuroprotective potential. / O ac?mulo de ferro no c?rebro tem sido observado tanto no envelhecimento normal quanto em muitas doen?as neurodegenerativas. Nossos estudos anteriores mostraram que a sobrecarga de ferro cerebral resulta em d?ficits de mem?ria persistentes, acompanhados por estresse oxidativo. A elevada taxa metab?lica do sistema nervoso torna as mitoc?ndrias essenciais para c?lulas nervosas. Essas organelas t?m como fun??o o controle da homeostasia do ferro em seu interior e o gerenciamento das esp?cies reativas de oxig?nio. Uma vez que ocorre desregula??o nessas atividades, o funcionamento das mitoc?ndrias fica comprometido, resultando em falhas no aporte energ?tico principalmente para as sinapses. O funcionamento inadequado de circuitos neurais pode culminar na ativa??o de vias de morte celular, uma caracter?stica bastante associada ?s doen?as neurodegenerativas. No presente trabalho analisamos os efeitos da sobrecarga de ferro neonatal sobre as dele??es no complexo I do DNA mitocondrial; sobre os mecanismos de metila??o e hidroximetila??o do DNA mitocondrial; sobre prote?nas envolvidas no metabolismo de ferro mitocondrial (Ferritina mitocondrial e Mitoferrina 2), sobre a atividade enzim?tica da Succinato desidrogenase e Creatina quinase, envolvidas no aporte energ?tico para as c?lulas; e sobre prote?nas envolvidas nas vias apopt?ticas, como a Caspase 8, Caspase 9, Caspase 3, Citocromo c, APAF1 e PARP em hipocampos de ratos adultos. Al?m disso, investigamos os efeitos do canabidiol (CBD), principal componente n?o psicotr?pico da Cannabis sativa, na revers?o dos efeitos induzidos pelo ferro sobre todos os par?metros analisados. Ratos machos receberam ve?culo ou ferro carbonila (30 mg/kg) do 12? ao 14? dia p?s-natal e na idade adulta foram tratados com ve?culo ou CBD (10 mg/kg) durante 14 dias. O tratamento com ferro induziu o aumento das dele??es do DNA mitocondrial e das prote?nas envolvidas na via intr?nseca da apoptose, enquanto induziu a redu??o de metila??o e hidroximetila??o no DNA mitocondrial, bem como da atividade enzim?tica e da ferritina mitocondrial, prote?na de armazenamento de ferro. O CBD reverteu os efeitos induzidos pelo ferro, recuperando os n?veis de hidroximetila??o, de ferritina mitocondrial, da atividade da Succinato dehidrogenase, e das prote?nas apopt?ticas Caspase 3, Caspase 9, PARP e APAF1 a n?veis compar?veis com o controle. Os resultados sugerem que o ferro pode afetar mecanismos de funcionamento mitocondrial e desencadear vias de morte celular por apoptose. A revers?o de alguns desses efeitos pelo CBD indica o seu potencial neuroprotetor.

Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2018-04-04T12:33:24Z No. of bitstreams: 1 DARLAN_GUSSO_DIS.pdf: 1507228 bytes, checksum: e2389f511956dbb64bb7b767d8f73e40 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-04-19T16:26:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DARLAN_GUSSO_DIS.pdf: 1507228 bytes, checksum: e2389f511956dbb64bb7b767d8f73e40 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-19T16:43:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DARLAN_GUSSO_DIS.pdf: 1507228 bytes, checksum: e2389f511956dbb64bb7b767d8f73e40 (MD5) Previous issue date: 2018-02-21 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Mosquitoes are responsible for the transmission of various pathogens. Over the past three years, the world has witnessed epidemics affecting all age groups, such as dengue fever, yellow fever, chikungunya and zika virus. To control and eliminate Aedes vectors responsible for the transmission of these diseases, it is necessary to use larvicides and insecticides such as pyriproxyfen. Pyriproxyfen is a larvicide used to control mosquitoes, mainly of the genus Aedes. This study evaluated the effects of pyriproxyfen on survival, morphology, behavior, and endocrine parameters at different stages of zebrafish development. We have demonstrated that pyriproxyfen can cause changes in the survival rate, behavior and morphology of exposed larvae, adults exposed at the larval stage, and adult offspring of exposed parents. Larvae exposed to pyriproxyfen for 1-96 hpf (hours post-fertilization) showed a decrease in survival rate, heart rate 3 dpf (days post-fertilization), and body length at 5 and 8 dpf. The distance traveled and the mean velocities of the exposed larvae were reduced in comparison to the vehicle group (1% DMSO). Therefore, pyriproxyfen changes the morphology and behavior of zebrafish in early stages of development and may affect the next generations. However, when the exposed larvae were maintained until the adult stage (6 months), we did not observe differences in locomotor parameters. Parental exposure to pyriproxyfen induced decrease in locomotion of zebrafish adult offspring as well as an anxiolytic-like behavior. We also tested pyriproxyfen exposure for 96 hours in adult zebrafish and the locomotion, anxiety, memory and endocrine parameters were analyzed as well as the gene expression of the glucocorticoid receptor (GR) and corticotropin-releasing factor (CRF). These results showed that there was no significant difference in locomotion, anxiety and endocrine parameters. In addition, there was an impairment of habituation memory in adult zebrafish exposed to pyriproxyfen. Therefore, it is important to control the use of larvicides due to their toxic effects on non-target species. Our findings demonstrated the importance of studies related to the use of larvicides, since they are potential causes of morphological and behavioral alterations in aquatic species, such as zebrafish. / Mosquitos s?o respons?veis pela transmiss?o de v?rios agentes patog?nicos. Nos ?ltimos tr?s anos, o mundo testemunhou epidemias que afetam todas as faixas et?rias, tais como dengue, febre amarela, chikungunya e zika v?rus. Para controlar e eliminar vetores do g?nero Aedes, respons?vel pela transmiss?o destas doen?as, ? necess?rio usar larvicidas e inseticidas como o piriproxifeno. O piriproxifeno ? um larvicida usado para eliminar mosquitos, principalmente do g?nero Aedes. Este estudo avaliou os efeitos do piriproxifeno sobre a sobreviv?ncia, morfologia, comportamento e par?metros end?crinos em diferentes est?gios de desenvolvimento de peixe-zebra. N?s demonstramos que o piriproxifeno pode causar altera??es na taxa de sobreviv?ncia, comportamento e morfologia de larvas expostas, adultos expostos no est?gio larval e descendentes adultos de pais expostos. As larvas expostas ao piriproxifeno durante 1-96 hpf (horas p?s-fertiliza??o) mostraram uma diminui??o na taxa de sobreviv?ncia, frequ?ncia card?aca 3 dpf e comprimento corporal nos 5 e 8 dpf (dias p?s- fertiliza??o). A dist?ncia percorrida e a velocidade m?dia das larvas expostas foram reduzidas em rela??o ao grupo ve?culo (1% de DMSO). Portanto, o piriproxifeno altera a morfologia e o comportamento do peixe-zebra em est?gios iniciais de desenvolvimento e pode afetar as pr?ximas gera??es. No entanto, quando as larvas expostas foram mantidas at? o est?gio adulto (6 meses), n?o observamos diferen?as nos par?metros locomotores. A exposi??o parental ao piriproxifeno induziu uma diminui??o na locomo??o da prole adulta, bem como um comportamento do tipo ansiol?tico. N?s tamb?m avaliamos o efeito da exposi??o ao piriproxifeno em peixe-zebra na fase adulta durante 96 horas sobre a locomo??o, ansiedade, mem?ria e par?metros end?crinos, como express?o g?nica do receptor de glicocorticoide (GR) e fator de libera??o de corticotrofina (CRF). Os resultados demonstraram que n?o houve diferen?a significativa na locomo??o, ansiedade e par?metros end?crinos. Al?m disso, houve um preju?zo da mem?ria de habitua??o do peixe-zebra adulto exposto ? piriproxifeno. Portanto, ? importante controlar o uso de larvicidas devido aos seus efeitos t?xicos em esp?cies n?o-alvo. Nossos achados demonstram a import?ncia de estudos relacionados com a utiliza??o de larvicidas, uma vez que s?o potenciais causadores de altera??es morfol?gicas e comportamentais em esp?cies aqu?ticas, como o peixe-zebra.

Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2018-04-17T11:40:30Z No. of bitstreams: 1 KELLY_GOULART_LIMA_TES.pdf: 13016256 bytes, checksum: b2a78492cbc6e285501d0eed5538a8ee (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-05-04T16:48:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KELLY_GOULART_LIMA_TES.pdf: 13016256 bytes, checksum: b2a78492cbc6e285501d0eed5538a8ee (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-04T16:56:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KELLY_GOULART_LIMA_TES.pdf: 13016256 bytes, checksum: b2a78492cbc6e285501d0eed5538a8ee (MD5) Previous issue date: 2018-03-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Octyl gallate (OG) is an antioxidant used in the food, cosmetic and medications industries that has shown antitumor effect on cell lineage of leukemia, melanoma and B cell lymphoma, as well as on animal model of pulmonary metastasis. Hepatocellular carcinoma (HC) is the main primary liver cancer affecting the world's population. Although surgical resection, ablation and liver transplantation are curative options, few patients are eligible for these therapies. The application of these therapeutic options is indicated only in the early stages of the disease and unfortunately most patients are diagnosed at advanced stage. In addition, there are reports in the literature of resistance to the only drug approved for systemic treatment, sorafenibe. In this study, we investigated the effect of OG on cell proliferation and lipidic metabolism in hepatocellular carcinoma HepG2 cells. Moreover, we developed a protocol for the quantitative evaluation of lipid droplets. We report, for the first time, that treatment with OG for 24 h inhibited HepG2 cell growth by decreasing mitochondrial activity and mass, which led to the reduction of ATP levels. This reduction in the energy supply triggered a decrease in Ki67 protein expression, leading to cycle arrest in S phase. In addition, the use of two treatments with OG with interval 24 hours induced loss of mitochondrial functionality and apoptosis without inducing resistance. These results showed that OG targets the mitochondria and is a candidate for new research on therapies for CH. We also report, for the first time, the effect of OG on lipidic metabolism, since our results showed that OG was able to increase the amount of lipids, triglyceride levels and the area of lipid droplets without involving the mTOR/SREBP-1c signaling pathway or modification of PPAR-? and PPAR-? gene expression. As the ability of OG to inhibit mitochondrial activity and induce apoptosis is known, it is strongly suggested that reduction of mitochondrial fatty acid b-oxidation is involved in the OG mechanism in the accumulation of lipids. We also describe, for the first time, a protocol for the quantitative evaluation of lipid droplets using confocal laser scanning microscopy that compared to conventional fluorescence microscopy, provided great gain in the quality of the images. / O galato de octila (GO) ? um antioxidante utilizado na ind?stria de alimentos, cosm?ticos e de medicamentos que tem mostrado efeito antitumoral em linhagem celular de leucemia, melanoma e linfoma de c?lulas B, assim como em modelo animal de met?stase pulmonar. O Carcinoma hepatocelular (CH) ? o principal c?ncer prim?rio hep?tico que afeta a popula??o mundial. Embora a ressec??o cir?rgica, a abla??o e o transplante hep?tico sejam considerados terapias curativas, poucos pacientes s?o eleg?veis. A aplica??o dessas op??es terap?uticas ? indicada somente para est?gios iniciais da doen?a e infelizmente a maioria dos pacientes ? diagnosticado em est?gio avan?ado. Al?m disso, existem relatos na literatura de resist?ncia ? ?nica droga aprovada para tratamento sist?mico, o sorafenibe. Nesse estudo, n?s investigamos o efeito do GO sobre a prolifera??o celular e metabolismo lip?dico nas c?lulas de carcinoma hepatocelular HepG2. Al?m disso, desenvolvemos um protocolo para avalia??o quantitativa de gotas lip?dicas. N?s reportamos, pela primeira vez, que o tratamento com GO por 24 horas inibiu a prolifera??o das c?lulas HepG2 por reduzir a atividade e massa mitocondrial, que levou ? redu??o dos n?veis de ATP. Essa redu??o no fornecimento de energia desencadeou a diminui??o na express?o da prote?na Ki67, levando ? parada do ciclo celular em fase S. Al?m disso, o uso de dois tratamentos com GO com intervalo de 24 horas induziu perda da funcionalidade mitocondrial e apoptose, sem induzir resist?ncia. Esses resultados mostraram que o GO tem como alvo a mitoc?ndria, sendo um candidato para novas pesquisas sobre terapias para o CH. Reportamos tamb?m, pela primeira vez, o efeito do GO sobre o metabolismo lip?dico, visto que nossos resultados mostraram que o composto foi capaz de aumentar a quantidade de lip?deos, os n?veis de triglicer?deos e a ?rea de gotas lip?dicas, sem envolver a via de sinaliza??o mTOR/SREBP-1c ou a modifica??o da express?o dos genes PPAR-? e PPAR-?. Uma vez que a capacidade do GO em inibir a atividade mitocondrial e induzir a apoptose ? conhecida, ? fortemente sugerido que a redu??o da ?-oxida??o mitocondrial de ?cidos graxos esteja envolvida no mecanismo do GO no ac?mulo de lip?deos. Descrevemos tamb?m, pela primeira vez, um protocolo para avalia??o quantitativa de gotas lip?dicas usando microscopia confocal de varredura a laser que comparado ? microscopia de fluoresc?ncia convencional, proporcionou grande ganho na qualidade das imagens.

Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2018-04-24T12:44:41Z No. of bitstreams: 1 KARINA_VIDARTE_GASPARY_DIS.pdf: 1111674 bytes, checksum: e2b2dc4b1b1eea8b10007b7c07f592ec (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-05-11T17:57:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KARINA_VIDARTE_GASPARY_DIS.pdf: 1111674 bytes, checksum: e2b2dc4b1b1eea8b10007b7c07f592ec (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-11T18:03:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KARINA_VIDARTE_GASPARY_DIS.pdf: 1111674 bytes, checksum: e2b2dc4b1b1eea8b10007b7c07f592ec (MD5) Previous issue date: 2018-02-08 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Memory and learning allow animals to adapt and modify their behavior towards new experiences. Some factors may result in memory deficits such as: neurodegenerative diseases, changes due to intoxication and the use of drugs. Zebrafish can be used to model complex human behavioral traits such as learning and memory. This study aims to establish a protocol for evaluating the object recognition memory or object location tasks in zebrafish. We evaluated novel object recognition memory and analyzed the exploration time of novel and familiar objects in the training and test sessions. There was a preference of the animal to explore the new object in comparison to the familiar object (61% of exploration time). We also evaluated the object location task and measured the exploration time of each object in the familiar and novel object locations. There was a preference of the animal to explore the object in the novel location in comparison to the object in the familiar location (63% of exploration time). We also evaluated the effect of the non-competitive NMDA receptor antagonist MK-801 on the object recognition and object location memory in zebrafish. In this regimen treatment, control (water only) and treated animals (5 ?M MK-801) presented a significant preference in exploring the familiar object in comparison to the new object (66 and 68% of exploration time, respectively); however, 10 ?M MK-801-treated animals did not show differences in the exploration time of the objects. In the object location task, the animals treated with the 5 or 10 ?M MK-801 did not show a significant preference for the familiar or novel location whereas the control group had a higher preference in exploring the object in the familiar location (64% of exploration time). Therefore, it is possible to suggest that 5 ?M MK-801 impaired the memory formation in an object location task, which is in agreement with previous studies demonstrating the cognitive deficit induced by MK-801 treatment in aversive and spatial memory. Considering the different responses of the control group between original task and in the regimen treatment, we evaluated the impact of habituation on cortisol levels of animals in three different protocols: 1) habituated at the experiment apparatus for 3 days (Condition 1 ? C1), 2) habituated at the experiment apparatus for 3 days plus treatment tank exposure at fourth day (Condition 2 - C2), 3) habituated at the treatment tank exposure and experiment apparatus for 3 days and exposed to treatment tank again at fourth day (Condition 3 ? C3). The results showed higher levels of cortisol in animals submitted to C2 and C3 conditions compared to animals submitted to C1. These results demonstrated that the animals submitted to treatment tank exposure have a different performance in object recognition and object location memory due to stress responses. Therefore, these tasks are prone to evaluate memory in physiological and pathological conditions, but its use is limited to perform pharmacological studies due to sensitivity to stress caused by manipulation. / A mem?ria permite que os animais possam adaptar e modificar seu comportamento diante de novas experi?ncias. Uma s?rie de fatores pode resultar num d?ficit de mem?ria como: doen?as neurodegenerativas, altera??es decorrentes de intoxica??es e uso de f?rmacos. O peixe-zebra vem sendo usado para modelar caracter?sticas comportamentais humanas complexas, como o aprendizado e mem?ria. Este estudo tem como objetivo estabelecer um protocolo para avaliar tarefas de mem?ria de reconhecimento de objetos ou de localiza??o de objetos no peixe-zebra. N?s avaliamos a mem?ria de reconhecimento de objeto novo e analisamos o tempo de explora??o de objetos novos e familiares nas sess?es de treino e teste. Houve uma prefer?ncia do animal em explorar o novo objeto em compara??o com o objeto familiar (61% do tempo de explora??o). Tamb?m avaliamos a tarefa de localiza??o de objeto e medimos o tempo de explora??o de cada objeto nos locais familiares e novos. Houve uma prefer?ncia do animal para explorar o objeto na localiza??o nova em compara??o com o objeto na localiza??o familiar (63% do tempo de explora??o). Tamb?m avaliamos o efeito do antagonista n?o competitivo do receptor NMDA MK-801 na mem?ria de reconhecimento de objeto novo e na localiza??o de objeto em peixe-zebra. Neste tratamento, o controle (somente ?gua) e os animais tratados (MK-801 5 ?M) apresentaram uma prefer?ncia significativa na explora??o do objeto familiar em compara??o com o novo objeto (66 e 68% do tempo de explora??o, respectivamente); no entanto, animais tratados com MK-801 10 ?M n?o mostraram diferen?as no tempo de explora??o dos objetos. Na tarefa de localiza??o de objeto, os animais tratados com MK-801 5 ou 10 ?M n?o mostraram prefer?ncia significativa pelo objeto na localiza??o familiar ou nova, enquanto que o grupo controle teve uma prefer?ncia maior em explorar o objeto na localiza??o familiar (64% de tempo de explora??o). Portanto, sugere-se que o MK-801 5 ?M prejudicou a forma??o da mem?ria em uma tarefa de localiza??o de objeto, o que est? de acordo com estudos pr?vios, demonstrando o d?ficit cognitivo induzido pelo MK-801 em mem?rias aversivas ou espaciais. Considerando as diferentes respostas do grupo controle entre a tarefa original e no tratamento, avaliamos o impacto da habitua??o nos n?veis de cortisol dos animais em tr?s protocolos diferentes: 1) habituado ao aparato experimental por 3 dias (Condi??o 1 - C1) 2) habituado ao aparato experimental por 3 dias mais a exposi??o ao aqu?rio de tratamento no quarto dia (Condi??o 2 - C2), 3) habituado na exposi??o ao aqu?rio de tratamento e no aparato experimental por 3 dias e exposto ao aqu?rio de tratamento novamente no quarto dia (Condi??o 3 - C3). Os resultados mostraram n?veis mais elevados de cortisol em animais submetidos a condi??es C2 e C3 em compara??o com animais submetidos a C1. Esses resultados demonstraram que os animais submetidos ? exposi??o ao aqu?rio de tratamento apresentam desempenho diferente nas tarefas de mem?ria de reconhecimento de objetos e de localiza??o do objeto devido ao estresse. Portanto, essas tarefas s?o adequadas para avaliar a mem?ria em condi??es fisiol?gicas e patol?gicas, mas seu uso ? limitado em estudos farmacol?gicos devido ? sensibilidade ao estresse causado pela manipula??o.

Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2018-05-24T14:27:28Z No. of bitstreams: 1 FABIANO_PERES_MENEZES_TES.pdf: 24793474 bytes, checksum: 8b7fdf3efa2bb4839dd339d485cee522 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-06-11T14:26:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 FABIANO_PERES_MENEZES_TES.pdf: 24793474 bytes, checksum: 8b7fdf3efa2bb4839dd339d485cee522 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-11T14:31:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FABIANO_PERES_MENEZES_TES.pdf: 24793474 bytes, checksum: 8b7fdf3efa2bb4839dd339d485cee522 (MD5) Previous issue date: 2018-03-16 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Epilepsy is the most serious neurological condition in the world. It is characterized by recurrent seizures from synchronous neuronal discharges. Disturbances in neuronal signaling in the early stages of development may lead to increased susceptibility to seizures in adulthood, as well as seizures in the early stages of development may lead to alterations in neurotransmission systems. Adenosinergic signaling is known to act as an endogenous anticonvulsant through its neuromodulatory function. Disturbances in adenosinergic signaling in early stages of development lead to changes in the susceptibility to seizures conditionally at the stage of development in which the disturbance occurs, and time of exposure to the disturbing agent. In the four chapters of this thesis, it was discussed about factors that influence the susceptibility to pentylenetetrazole (PTZ)-induced seizure under different aspects using zebrafish. In the first chapter, it was analyzed the influence of temperature on zebrafish sensitivity to PTZ as well as the ability of the MK-801 antagonist to reverse the effects of hyperthermia on susceptibility to PTZ-induced seizures. In addition, it was verifyed possible differences in the susceptibility to seizures according to gender or weight. In the second chapter, it was used transient molecular blockade through the morpholine technique to block the translation of the transcripts corresponding to the adenosinergic A1 and A2A receptors at the beginning of embryogenesis. The animals that underwent transient blockade were evaluated for survival rate and morphology, at 7 days post-fertilization (dpf) and locomotor activity and susceptibility to seizures caused by PTZ at 7 dpf and in adulthood. In the third chapter, it was used the morpholine technique to block the translation of the transcripts corresponding to the enzyme ecto-5'-nucleotidase and concentrative nucleoside transporters type 2 (CNT2) at the beginning of embryogenesis. The animals that underwent transient blockade were evaluated for survival rate and morphology at 7 days post-fertilization (dpf) and locomotor activity and susceptibility to seizures caused by PTZ at 7 dpf and in adulthood. In the fourth chapter, it was performed microinjection of the 8-Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine (DPCPX), antagonist of A1 receptor; ZM241385, A2A antagonist; caffeine, non-selective adenosine receptor antagonist; dipyridamole, equilibrative nucleoside transporter blocker (ENT) and Adenosine 5 '- (?, ?-methylene) diphosphate (AMPCP), ecto-5'-nucleotidase enzyme inhibitor, in zebrafish eggs (1 hour post -fertilization). The animals exposed to these drugs were evaluated for survival rate, morphology and locomotor activity at 7 dpf and susceptibility to seizures caused by PTZ at 7 dpf and in adulthood. These results indicated that hyperthermia increases the susceptibility of zebrafish to PTZ-induced seizures and that this effect is prevented by the administration of MK-801. In addition, there was no difference in susceptibility to PTZ dependent on gender or body mass. These results indicated that disturbances in adenosinergic signaling through blockade via morpholine or in the higher doses of the drugs mentioned above, caused a decrease in the survival rate and high rates of morphological changes. None of the approaches caused alterations in the locomotor activity in the initial phase of development, whereas in the adult phase, there were occasional changes. At 7dpf, none of the targets blocked by morpholine caused alterations in the susceptibility to seizures caused by PTZ, whereas among the targets blocked by drugs there was alteration mainly in animals microinjected with DPCPX, Caffeine and Dipyridamole. However, in the adult phase all the targets blocked by morpholine triggered in greater susceptibility to seizures, while those blocked by drugs showed changes in specific doses and seizure stage. These results corroborate a series of studies that report the importance of adenosinergic signaling in the early stages of development as well as the deleterious effects of both exogenous and endogenous perturbations in this signaling pathway. / A epilepsia ? a condi??o neurol?gica grave de maior incid?ncia no mundo. ? caracterizada por crises convulsivas recorrentes, provenientes de descargas neuronais sincr?nicas. Dist?rbios na sinaliza??o neuronal na fase inicial do desenvolvimento podem acarretar em aumento na suscetibilidade a crises convulsivas na fase adulta, assim como crises convulsivas na fase inicial do desenvolvimento podem acarretar em altera??es nos sistemas de neurotransmiss?o. A sinaliza??o adenosin?rgica reconhecidamente ? capaz de agir como um anticonvulsivante end?geno, atrav?s de sua fun??o neuromoduladora. Perturba??es na sinaliza??o adenosin?rgica em fases inicias do desenvolvimento acarretam em altera??es na suscetibilidade a crises convulsivas de forma condicional ao est?gio de desenvolvimento em que a perturba??o ocorre e tempo de exposi??o ao agente perturbador. Nos quatro cap?tulos integrantes dessa tese foram abordados, sob diferentes aspectos, fatores que influenciam a susceptibilidade a crise convulsiva provocada pela exposi??o ao pentilenotetrazol (PTZ) utilizando peixe-zebra. No primeiro cap?tulo, foi analisada a influ?ncia da temperatura na sensibilidade do peixe-zebra ao PTZ, bem como a capacidade do antagonista MK-801 de reverter os efeitos provocados pela hipertermia na suscetibilidade a crises convulsivas induzidas por PTZ. Al?m de serem verificadas as poss?veis diferen?as na suscetibilidade a crises convulsivas em fun??o do g?nero ou peso. No segundo cap?tulo, foi descrito o uso do bloqueio molecular transit?rio atrav?s da t?cnica de morfolinos para bloquear a tradu??o dos transcritos correspondentes aos receptores adenosin?rgicos A1 e A2A no inicio da embriog?nese. Os animais que sofreram o bloqueio transit?rio foram avaliados quanto a taxa de sobreviv?ncia e morfologia at? os 7 dias p?s-fertiliza??o (dpf) e atividade locomotora e suscetibilidade a crises convulsivas provocadas por PTZ aos 7 dpf e na fase adulta. No terceiro cap?tulo, foi descrito o uso da t?cnica de morfolinos para bloquear a tradu??o dos transcritos correspondentes a enzima ecto-5?-nucleotidase (e5?nt) e transportadores concentrativos de nucleos?deo tipo 2 (CNT2) no inicio da embriog?nese. Os animais que sofreram o bloqueio transit?rio foram avaliados quanto a taxa de sobreviv?ncia e morfologia aos 7 dpf e atividade locomotora e suscetibilidade a crises convulsivas provocadas por PTZ aos 7dpf e na fase adulta. No quarto cap?tulo, foi abordado o efeito da microinje??o de 8-Ciclopentil-1,3-dipropilxantina (DPCPX), antagonista do receptor A1; ZM241385 antagonista do receptor A2A; cafe?na, antagonista n?o-seletivo dos receptores de adenosina; dipiridamol, bloqueador do transportador equilibrativo de nucleos?deo (ENT) e Adenosina 5?-(?,?-metileno)difosfato (AMPCP), inibidor da enzima ecto-5?-nucleotidase, nos ovos do peixe-zebra (1 hora p?s-fertiliza??o). Os animais expostos a estes f?rmacos foram avaliados quanto a taxa de sobreviv?ncia, morfologia, atividade locomotora aos 7 dpf e suscetibilidade a crises convulsivas provocadas por PTZ aos 7dpf e na fase adulta. Nossos resultados apontam que a hipertermia aumenta a suscetibilidade do peixe-zebra a crises convulsivas provocadas por PTZ e que esse efeito ? prevenido pela administra??o de MK-801. Al?m disso, n?o houve diferen?a na suscetibilidade do PTZ dependente de g?nero ou massa corporal. Nossos resultados indicam que perturba??es na sinaliza??o adenosin?rgica atrav?s de bloqueio via morfolinos ou nas doses mais altas dos f?rmacos acima citados, provocaram diminui??o na taxa de sobreviv?ncia e altas taxas de altera??es morfol?gicas. Nenhuma das abordagens provocou altera??es na atividade locomotora na fase inicial do desenvolvimento, enquanto que na fase adulta foram verificadas altera??es pontuais. Aos 7dpf nenhum dos alvos bloqueados por morfolinos provocou altera??o na suscetibilidade a crises convulsivas provocadas por PTZ, enquanto que entre os alvos bloqueados por f?rmacos houve altera??o principalmente em animais microinjetados com DPCPX, Cafe?na e Dipiridamol. J? na fase adulta todos os alvos bloqueados por morfolinos desencadearam em maior suscetibilidade a crises convulsivas enquanto os bloqueados por f?rmacos exibiram altera??es em doses e est?gio de convuls?o espec?ficos. Esses resultados corroboram com uma s?rie de estudos que reportam a import?ncia da sinaliza??o adenosin?rgica na fase inicial do desenvolvimento, bem como os efeitos delet?rios provenientes de perturba??es tanto ex?genas quanto end?genas nessa via de sinaliza??o.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2017-07-12T22:04:17Z No. of bitstreams: 1 Tese vers?o final com ficha.pdf: 2919026 bytes, checksum: e0cf3c8db3a8cc81cb105cb2fbb154b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-12T22:04:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese vers?o final com ficha.pdf: 2919026 bytes, checksum: e0cf3c8db3a8cc81cb105cb2fbb154b3 (MD5) Previous issue date: 2016-08-03 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The flavonoid rutin (3-0-rutinos?deo-quercetin) stands out among the natural products as a promising alternative in the fight against degenerative diseases and related to aging. However, the low solubility and stability thereof in different media, especially lipophilic limited applications in pharmaceutical preparations. The biocatalytic transformation by enzymatic acylation has been suggested by several authors, with good reaction yields. In this sense, the objective of this study was to promote the enzymatic acylation of rutin, using castor oil as acylating agent and lipase as a catalyst, to characterize the formed product, estimate the efficiency of bioconversion, and to investigate in vitro the antioxidant activity and cytotoxic effect opposite the reaction product Vero cells. The catalytic transformation occurred at 50?C for 120 hours. The product was subjected to column chromatography, followed by filtration by Sephadex LH-20. The chemical structure of rutin-O-ricinoleate was determined by Nuclear Magnetic Resonance (NMR) 1H and 13C and by liquid chromatography / mass spectroscopy (HPLC/MS). In another experiment, it was observed the formation of the ester content by High Performance Liquid Chromatography coupled to a detector diode arrangements (HPLC-DAD) under conditions which allow assessing the reaction yield over 120 hours. The analytical method proposed has been validated considering the linearity parameters, accuracy, precision, limit of quantification and detection proved to be suitable for quantification of ricinoleato rutin. It was found by this method that the reaction product maintained the antioxidant capacity of rutin and there was no evidence of cytotoxicity. / O flavonoide rutina (quercetina-3-0-rutinos?deo) se destaca entre os produtos naturais como uma alternativa promissora no combate ?s doen?as degenerativas e relacionadas ao envelhecimento. No entanto, a baixa solubilidade e estabilidade da mesma em diferentes meios, especialmente lipof?licos, limitam as aplica??es em prepara??es farmac?uticas. A transforma??o biocatal?tica, atrav?s da acila??o enzim?tica, tem sido sugerida por diversos autores, com bons rendimentos reacionais. Neste sentido, o objetivo do presente trabalho foi promover a acila??o enzim?tica da rutina, utilizando ?leo de mamona como agente acilante e lipase como catalizador, caracterizar o produto formado, estimar o rendimento da bioconvers?o, al?m de investigar in vitro a atividade antioxidante e o efeito citot?xico do produto reacional frente ?s c?lulas Vero. A transforma??o catal?tica ocorreu em temperatura de 50?C, durante 120 horas. O produto foi submetido ? cromatografia em coluna, seguida de filtra??o por Sephadex LH-20. A estrutura qu?mica da rutina-O-ricinoleato, foi determinada por Resson?ncia Magn?tica Nuclear (RMN) 1H e de 13C e por cromatografia l?quida/espectroscopia de massas (CLAE/EM). Em outro experimento, foi verificado o teor de forma??o do ?ster por Cromatografia ? L?quidos de Alta Efici?ncia acoplado a um detector de arranjos Diodos (CLAE-DAD), em condi??es que permitiram avaliar o rendimento reacional ao longo de 120 horas. O m?todo anal?tico proposto foi validado considerando os par?metros de linearidade, exatid?o, precis?o, Limites de quantifica??o e de detec??o mostrando-se adequado para a quantifica??o da rutina ricinoleato. Verificou-se pelos m?todos avaliados, que o produto reacional manteve a capacidade antioxidante da rutina e que n?o houve evid?ncia de citotoxicidade.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2017-11-20T21:56:50Z No. of bitstreams: 1 DISSERTA??O JULIANA PAIX?O-2016.pdf: 2113185 bytes, checksum: 9e5f3d0a2c6c528f026640900a5db77a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-20T21:56:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTA??O JULIANA PAIX?O-2016.pdf: 2113185 bytes, checksum: 9e5f3d0a2c6c528f026640900a5db77a (MD5) Previous issue date: 2016-03-23 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado da Bahia - FAPEB / Chemical characterization and biological activity tests of plants are important approaches to drug discovery, rational use of elements of our biodiversity in view of the variety of plants reflects the diversity of their secondary metabolites and therapeutic potential. Brazil is an invaluable source of natural resources to obtain drugs, however, little study has been done on the pharmacological potential of native species. The Bromeliaceae family includes about 58 genera and about 3,352 species. Brazil comprises about 40% of the total species with Ananas comosus being the best known. Some plants of this family are used for the treatment of various diseases and there are reports on the presence of secondary metabolites such as triterpenoids, steroids, flavonoids, glycerols, cinnamic acid derivatives and others. This study aimed to know the chemical composition and biological activities of accessions and hybrids of different botanical varieties of Ananas genus in partnership with (EMBRAPA). The leaves of the harvested specimens were dried, ground, and subjected to an extraction procedure with methanol and were pre-selected via the screening and biological screening in order to obtain the best species profile. Three accessions and one hybrid were selected, they were subjected to extraction with methanol, then partitioned with solvents of different polarities. Artemia salina lethality, antioxidants and acetylcholinesterase activity tests were performed. The chromatographic fractionation of the species with better chromatography profile was performed using different techniques. The results revealed that 21 collected accessions have different secondary metabolites, and a wide variation among themselves showing no standard. In relation to biological testing several accessions showed lethality to Artemia salina, antioxidants and acetylcholinesterase activity. The results indicate that extracts of accessions contain active constituents that present such activities confirming its biological potential. As a result of preliminary studies the accessions BGA-739, BGA-804, BGA-820 and hybrid HE were selected for further study, and biological tests were conducted. The BGA- 804 access, chloroform fractions (CL) and ethyl acetate (ACT) has been shown to have high potential antioxidant represented by the EC50 in ?g.ml-1 804-CL (203,5?0,528) e 804-ACT 192,5?0,193, lethality represented by the LC50 in ?g.ml-1 804-CL (69,3?0,47) and 804-ACT (87,7?0,49) and inhibition of the enzyme cholinesterase in % 804-ACT (53.230 ? 4,44). Fractionation, chemical profile by HPLC / DAD and chemical characterization of the BGA-804 access, resulted in the finding of the presence of phenolic compounds, flavonoids and the isolation and identification of daucosterol originating from 804 CL fraction. / Caracteriza??o qu?mica de plantas e testes de atividades biol?gicas s?o abordagens importantes na descoberta de novos medicamentos e para o aproveitamento racional de elementos de nossa biodiversidade, tendo em vista que a variedade de plantas reflete a diversidade dos seus metab?litos secund?rios e seu potencial terap?utico. O Brasil ? fonte inestim?vel de recursos naturais para obten??o de farm?cos, contudo as esp?cies nativas t?m sido pouco estudadas quanto ao potencial farmacol?gico. A fam?lia Bromeliaceae inclui aproximadamente 58 g?neros e cerca de 3.352 esp?cies. O Brasil abriga cerca de 40% do total de esp?cies, sendo a mais conhecida o Ananas comosus. Algumas plantas desta fam?lia s?o utilizadas para tratamento de diversas afec??es e existem relatos da presen?a de metab?litos secund?rios, como: triterpenos, esteroides, flavonoides, glicer?is, derivados do ?cido cin?mico e outros. Este estudo teve como objetivo conhecer a composi??o qu?mica e as atividades biol?gicas de acessos e h?bridos de diferentes variedades bot?nicas do g?nero Ananas, em parceria com (EMBRAPA). As folhas dos esp?cimes coletadas foram secas, mo?das, submetidas ao procedimento de extra??o com metanol e pr?-selecionadas via screening e triagem biol?gica, com a finalidade de obter esp?cies com o melhor perfil. Foram selecionados 3 acessos e 1 h?brido, estes foram submetidos a extra??o com metanol, posteriormente particionados com solventes de diferentes polaridades e realizados testes de letalidade frente ? letalidade frente ? Artemia salina, atividade antioxidantes e anticolinester?sica, o fracionamento cromatogr?fico das esp?cies com melhor perfil foi realizado utilizando diferentes t?cnicas de cromatografia. Os resultados revelaram que os 21 acessos coletados apresentam diferentes metab?litos secund?rios e uma varia??o grande entre si, n?o apresentando nenhum padr?o. Com rela??o aos testes biol?gicos v?rios acessos mostraram letalidade frente ? Artemia salina, atividade antioxidantes e anticolinester?sica. Os resultados obtidos indicam que os extratos dos acessos cont?m constituintes ativos que apresentam tais atividades, confirmando seu potencial biol?gico. Como resultado dos estudos preliminares os acessos BGA- 739, BGA-804, BGA-820 e h?brido HE foram selecionados para continua??o dos estudos, sendo realizado os testes biol?gicos. O acesso BGA-804, fra??es clorof?rmio (CL) e acetato de etila (ACT) demonstrou ter alto potencial antioxidante representado pela EC50 em ?g.ml-1 804-CL (203,5?0,528) e 804-ACT 192,5?0,193, letalidade representado pela LC50 em ?g.ml-1 804-CL (69,3?0,47) e 804-ACT (87,7?0,49) e inibi??o da enzima colinesterase em % 804-ACT (53.230 ? 4,44). O fracionamento, perfil qu?mico por CLAE/DAD e a caracteriza??o qu?mica do acesso BGA-804, resultou na verifica??o da presen?a de compostos fen?licos, flavonoides e no isolamento e identifica??o do daucosterol oriundo da fra??o 804 CL.

Made available in DSpace on 2015-03-04T18:50:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Guadalupe.pdf: 2696610 bytes, checksum: c3a517f1d7dc8a87a7bf76c7a5e845aa (MD5) Previous issue date: 2010-08-23 / Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior / The advent of new sequencing technologies and the development of computational tools that facilitate the analysis of genomes, generated the exponential growth of genome databases. New approaches in-silico of the comparative genomics use such data in its comparisons. Nevertheless, recent work on the genome of Escherichia coli indicate that the current state of coding sequences (Coding Sequences - CDS) from annotated genomes contain several errors, which need to be verified (Ochman e Davalos 2006). Therefore the correct description of a CDS is important to allow future genomic comparisons. Currently, there is an innovated proposal of the scientific community of biological databases to establish standards for the submission of the draft genome sequences in the new era of sequencing. Within this context, it is highlighted the identification and/or correction of frameshifts during the assembly of genomic sequences. The goal of this work was developing a tool with two comparative methods to identify CDSs with conflicting attributes. It uses the description of conflict to describe attributes such as frameshifts, large insertions or deletions, truncations, etc.. that are detected from a CDS or several CDSs used as references, depending on model. Also, the proposed tool allows to user to view of the results graphically and provide access to other tools, providing support for future friendly and faster genomic analysis. As a model of study, it was used the analysis of CDSs with conflicting attributes of the genome of E. coli strain CFT073 (NCBI) version AE014075.1, (last update date: April 20 of 2006), with this purpose was used as a reference genome of E.coli strain O157: H7 EDL933 version AE005174.2 (last update date: 6 June of 2008). Through this analysis were identified and stored 1865 CDSs (Included possible paralogs) because they present only alignments with coverage exceeding 30% of the CSD of reference. In a more detailed analysis of these results, 144 CDSs startle in the target genome by probably present frameshifts, of which 21 occur in intergenic regions. The tool developed in this work, also was applied to the case study of a genomic region of the bacterium Klebsiella pneumoniae strain KP13. The genome of this bacterium was sequenced in Computational Genomics Unit (UGC) Darcy Fontoura de Almeida LNCC (unpublished data). From the analysis of these genomes, one can conclude the importance of using the tool in the stages of identification, verification and correction of errors in annotation,and thus the need for its inclusion in the sequencing projects that want to reach high standards in the submission of genomic data. / O advento de novas tecnologias de sequenciamento e o desenvolvimento de ferramentas computacionais que facilitam a análise dos genomas gerou o aumento exponencial dos bancos de dados genômicos. As abordagens in-silico da genômica comparativa usam esse tipo de dados nas suas comparações. Trabalhos recentes desenvolvidos sobre o genoma de Escherichia coli indicam que o estado atual das sequências codificantes (CoDing Sequences CDS) de genomas anotados nos bancos de dados contêm erros nas sequências que precisam ser verificados (Ochman e Davalos 2006). Portanto a correta descrição de uma CDS é importante para permitir futuras comparações genômicas. Atualmente existe uma nova proposta da comunidade científica de bancos de dados biológicos para estabelecer padrões para a submissão de sequências dos projetos de genoma na nova era de sequenciamento. Dentro desse contexto, destaca-se a identificação e/ou correção de frameshifts durante o processo de montagem de sequências genômicas. A finalidade deste trabalho foi desenvolver uma ferramenta com dois métodos comparativos para identificar CDSs com atributos conflitantes. Usa-se a descrição de conflito para descrever atributos como frameshifts , grandes inserções ou deleções, truncamentos, que são detectados a partir de uma CDS ou várias CDSs usadas como referência, dependendo do modelo. Finalmente, a ferramenta proposta permite visualizar os resultados graficamente e fornecer acesso a outras ferramentas, dando suporte para futuras análises genômicas de maneira amigável e rápida. Foi realizada a busca de CDSs com atributos conflitantes no genoma de E. coli estirpe CFT073 (NCBI) versão AE014075.1, (última data de atualização: 20 de abril do 2006), como referência foi usado o genoma da E.coli estirpe O157:H7 EDL933 versão AE005174.2 ( última data de atualização : 6 de junho do 2008). Através dessa análise foram identificadas e armazenadas 1.865 CDSs (incluem-se possíveis parálogos), por apresentarem alinhamentos únicos com cobertura superior a 30% da CDS de referência. Em uma análise mais fina destes resultados, sobressaltam 144 CDSs no genoma alvo que provavelmente apresentam frameshifts , dos quais 21 acontecem em regiões intergênicas. A ferramenta desenvolvida neste trabalho foi também aplicada para o caso de estudo de uma região genômica da bactéria Klebsiella pneumoniae estirpe KP13. O genoma dessa bactéria foi sequenciado na Unidade Genômica Computacional (UGC) Darcy Fontoura de Almeida do LNCC (dados ainda não publicados). A partir das análises destes genomas, pode se concluir a importância do uso da ferramenta nas fases de identificação, verificação e correção de erros de anotação e, portanto a necessidade da sua inclusão em projetos de sequenciamento que desejam atingir altos padrões na submissão de dados genômicos.