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Quantificação de ergosterol como método de confirmação do padrão de susceptibilidade de amostras de Candida tropicalis a fluconazol / Ergosterol quantitation as a tool for defining the fluconazole susceptibility pattern of C. tropicalis strainsSilva, Thelma Alves da [UNIFESP] January 2006 (has links) (PDF)
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Previous issue date: 2006 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Introdução: A literatura registra grande variação nos índices de resistência a fluconazol observadas em amostras de Candida tropicalis, com índices de 0 a 35%. Esta variação faz supor que o fenômeno in vitro conhecido como "trailing", que é caracterizado pela inibição parcial de inóculo na presença de drogas fungistáticas, esteja sendo interpretado como resistência. Devido a essa discrepância de resultados, Arthington-Skaggs e cols.,(1999), sugeriram a técnica de quantificação de ergosterol para determinar valores de CIMs em cepas que apresentam "trailing". Objetivos: 1.Descrever o perfil de susceptibilidade de cepas de C. tropicalis isoladas de episódios de fungemia frente a fluconazol, 2.Avaliar a prevalência de cepas de C. tropicalis com o fenótipo "low-high MICs" observados em leitura após 24 e 48 horas de incubação e 3.Utilizar a quantificação de ergosterol como ferramenta para descriminar cepas verdadeiramente resistentes a fluconazol entre aquelas com "trailing". Material e Métodos: Foram incluídas 224 cepas de C. tropicalis provenientes de episódios de candidemia que foram encaminhados ao Laboratório Especial de Micologia, durante o período de 2000 a 2005. Após triagem de C. albicans, utilizando-se meio cromogênico CHROMagar- Candida, os isolados de Candida não-albicans foram identificados por análise do perfil bioquímico pelo método comercial ID32C e análise de microcultivo. O perfil de susceptibilidade das amostras frente à fluconazol foi realizado pelo método de microdiluição em caldo, de acordo com a normatização do documento do CLSI M27-A2 (2002). Os valores de CIMs foram obtidos nas leituras após 24 e 48 horas de incubação, utilizando critérios visuais e espectrofotométricos. A metodologia padrão utilizada para quantificar ergosterol de células fúngicas foi realizada de acordo com a técnica desenvolvida por Arthington-Skaggs e cols., 1999. Resultados: O perfil de susceptibilidade das 224 cepas de C. tropicalis frente à fluconazol foi analisado pelo método de microdiluição em caldo, de acordo com o documento CLSI M27-A2 (2002). Com relação às leituras realizadas após 24 horas de incubação, os valores de CIM50 foram de 0,5µg/mL para a leitura espectrofotométrica e 1,0 µg/mL para a leitura visual. Já os valores de CIM90 foram de 4,0µg/mL para a leitura espectrofotométrica e 8,0 µg/mL para leitura visual. Com relação às leituras realizadas após 48 horas de incubação, os valores de CIM50 e CIM90 foram de 2,0µg/mL nas duas leituras e os valores de CIM90 foram de 8,0µg/mL também nos dois critérios de leitura. Houve uma concordância entre os resultados das leituras visual e espectrofotométrica de 96,87% e 98,21% após 24 e 48 horas de incubação, respectivamente. O fenômeno de trailing esteve presente em apenas 87 (38,83%) isolados após 24 horas de incubação, sendo que destas 9 (10,35%) foram classificados como trailing moderado/intenso. Já em relação às leituras realizadas após 48 horas de incubação, 118 (52,67%) isolados apresentaram crescimento de trailing e 32 (27,11%) foram classificados como trailing moderado/intenso. Todas as 20 (8,92%) cepas que apresentaram valores CIMs ≥16µg/mL em qualquer leitura após 24 horas de incubação foram submetidas à quantificação de ergosterol de suas membranas, em ensaios com exposição a diferentes concentrações de fluconazol. Destes 20 isolados, 17 (85%) foram considerados sensíveis (CIMs ≤4µg/ml) e apenas 3 (15%) isolados foram considerados resistentes (CIMs ≥64µg/ml) pela técnica de quantificação de ergosterol. Conclusões: 1. As leituras visuais e espectrofotométricas de ensaios com fluconazol apresentam grande semelhança de resultados; 2. O fenômeno de trailing moderado/intenso é muito freqüente com cepas de C tropicalis, dificultando a interpretação dos resultados; 3. A grande maioria (85%) das 20 amostras inicialmente identificadas como resistentes nos ensaios de microdiluição apresentaram redução de ergosterol em suas membranas quando expostas a droga, mostrando tratar-se de trailing; 4. Tais dados sugerem que a ocorrência de cepas de C. tropicalis verdadeiramente resistentes a fluconazol seja bem menos freqüente que o sugerido na literatura. / Introduction: Recently, C. tropicalis resistance to fluconazole has been highlighted as a problem around the world. A large variation on resistance rates was mentioned in previous reports and it may be in part related to the phenomenon "trailing". The term ‘trailing’ has been used to describe the reduced but persistent growth that some isolates of Candida albicans and Candida tropicalis exhibit in susceptibility testing with azole antifungal agents, such as fluconazole. Arthington-Skaggs et al., (1999), suggested the technique of quantification of ergosterol content to determine values of MIC in strains with “trailing” growth. Objectives: The aims of this study were: 1. to evaluate the antifungal susceptibility profile of C. tropicalis bloodstream isolates to fluconazole, 2. to evaluate the prevalence of isolates with the low-high phenotype and 3. to use the quantification of ergosterol content as tool to identify strains truily resistant to fluconazol. Materials and Methods: We obtained a collection of 224 samples of bloodstream C. tropicalis strains isolated between 2000 to 2005. After initial screening for Candida albicans in chromogenic medium CHROMagar® Candida, the samples of non-albicans Candida species were identified based on their micromorphology and biochemical profile evaluated by the commercial system ID32C. The susceptibility testing of clinical isolates was performed by the CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) broth microdilution method. The methodology standard used to quantify the ergosterol content was performed in accordance with Arthington-Skaggs et al., 1999. Results: MIC50 values at 24 hours of incubation was 0,5µg/mL by spectrophotometric reading and 1,0 µg/mL by visual reading. MIC90 values at 24 hours of incubation was 4,0µg/mL by spectrophotometric reading and 8,0 µg/mL by visual reading. After 48 hours of incubation, the MIC50 and MIC90 were 2,0µg/mL and 8,0µg/mL for both readings. The rates of agreement between the visual and spectrophotometric readings were 96,87% and 98,21% after 24 and 48 hours of incubation, respectively. The 20 (8.92%) strains that at 24 hours of incubation exhibited MIC values ≥16µg/mL in any reading were submitted to the quantification of ergosterol content. Seventeen (85%) of these 20 isolates tested were considered susceptible to fluconazole (MICs ≤4µg/ml) and only 3 (15%) isolates were considered truly resistant (MICs ≥64µg/ml). Conclusions: 1. Visual and spectrophotometric readings of fluconazole susceptibility testing presents similarity of results; 2. The phenomenon of moderate/intense “trailing” is very frequent with strains of C. tropicalis, making it difficult to interpret the results; 3. The great majority (85%) of the 20 samples initially identified as resistant in the microdilution method showed reduction of ergosterol content when exposed to the drug, having shown to be susceptible; 4. This data suggest that the occurrence of Candida tropicalis truly resistant to fluconazole is less frequent than suggested in the literature. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Atividade antifúngica in vitro de compostos naftoquinoidais contra cepas de Candida tropicalis resistentes ao fluconazol / In vitro antifungal activity of compounds naftoquinoidais against strains of Candida tropicalis resistant to fluconazoleSantos Neta, Maria Adalgiza dos January 2012 (has links)
SANTOS NETA, Maria Adalgiza dos. Atividade antifúngica in vitro de compostos naftoquinoidais contra cepas de Candida tropicalis resistentes ao fluconazol. 2012. 76 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica)- Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-04-29T13:53:19Z
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Previous issue date: 2012 / The incidence of opportunistic infections caused by fungi, with emphasis on Candida species has increased substantially. Studies report that there has been a notable increase of infections by non-albicans species (Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida parapsilosis and Candida krusei). Clinical isolates resistant to azoles, particularly fluconazole, are increasingly reported. The naphthoquinones are an important class of active molecules biologically presenting antibacterial, antifungal, antiviral, antiinflammatory, antipyretic, anti-cancer and trypanocidal and has been tested extensively in several pharmacological studies. In recent years intensified the interest in in this substances, not only due to your importance in vital biochemical processes as well as the increasing emphasis that they show in various pharmacological studies. This study aimed to evaluate and compare the effect of antifungal naphthoquinones against strains of Candida tropicalis resistant and susceptible to fluconazole, using different techniques such as broth microdilution methods, procedures Flow Cytometry procedures and Comet assay. We use seven strains of Candida tropicalis resistant to fluconazole for this study, which were isolated from blood and were part of the collection of yeasts Experimental Laboratory Bioprospecting in yeast (LABEL), affiliated with the Faculty of Pharmacy, Federal University of Ceará. We used three compounds of naphthoquinones against the seven strains of Candida tropicalis and were subjected to in vitro sensitivity tests, which showed an antifungal activity potent. Through Flow Cytometry, it was possible to assess morphological changes and membrane integrity of these compounds fronts to significant strains in addition to mitochondrial dysfunction and production of reactive oxygen species. Through the Comet assay was possible to find significant damage to DNA. In summary, the results suggest that these compounds may be used as antifungal agents for the treatment of candidemia. / A incidência de infecções oportunistas causadas por fungos, com destaque para as leveduras do gênero Candida vem aumentando substancialmente. Estudos relatam que tem sido observado um notável crescimento de infecções por espécies não albicans (Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida parapsilosis e Candida krusei). Isolados clínicos resistentes aos azólicos, em especial ao fluconazol, são cada vez mais relatados. As naftoquinonas são uma importante classe de moléculas biologicamente ativas, apresentando atividades antibacteriana, antifúngica, antiviral, anti-inflamatória, antipirética, anticancerígena e tripanocida e tem sido amplamente testadas em vários estudos farmacológicos. Nos últimos anos intensificou-se o interesse nestas substâncias, não só devido à sua importância em processos bioquímicos vitais, como também ao destaque cada vez maior que apresentam em variados estudos farmacológicos. O presente trabalho buscou avaliar e comparar o efeito antifúngico de naftoquinonas frente a cepas de Candida tropicalis resistentes e sensíveis ao fluconazol, utilizando diferentes técnicas tais como métodos de microdiluição em caldo, procedimentos de citometria de fluxo e ensaio do Cometa. Utilizamos sete cepas de Candida tropicalis resistentes ao fluconazol para esse estudo, as quais foram isoladas de sangue e faziam parte da colecção de leveduras do Laboratório de Bioprospecção Experimental em leveduras (LABEL), afiliado com a Faculdade de Farmácia da Universidade Federal do Ceará . Foi utilizado três compostos de naftoquinonas frente à 07 cepas de Candida tropicalis e foram submetidas aos testes de Sensibilidade in vitro , onde apresentaram uma potente atividade antifúngica. Através da Citometria de Fluxo, foi possível avaliar alterações morfológicas e de integridade da membrana significativas desses compostos frentes às cepas, além de disfunção mitocondrial e produção de espécies reativas de oxigênio. Através do ensaio do Cometa foi possível encontrar danos significativos ao DNA. Em síntese, os resultados sugerem que estes compostos podem ser usados como agentes antifúngicos para o tratamento de candidemias.
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Avaliação in vitro da atividade antifúngica da β-lapachona frente a cepas de Candida spp. resistentes a derivados azólicos na forma planctônica e em isolados formadores de biofilme / In vitro evaluation of the antifungal activity of β-lapachone against strains of Candida spp. Resistant to planktonic azole derivatives and biofilm forming isolatesSilva, Cecília Rocha da 12 July 2016 (has links)
SILVA, C. R. Avaliação in vitro da atividade antifúngica da β-lapachona frente a cepas de Candida spp. resistentes a derivados azólicos na forma planctônica e em isolados formadores de biofilme. 2016. 106 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T14:18:45Z
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Previous issue date: 2016-07-12 / At the present time, a significant increase of opportunistic fungal infections is observed, mainly in immunocompromised patients. Candidiasis has been the most documented and are often associated with the formation of biofilms. Commercially available antifungal agents are restricted to a small number of drugs when compared to antibacterial agents. These facts, associated with the increase in the resistance frequency of Candida species, demonstrate the need to search for new therapeutic strategies, where natural products stand out. Several works have already demonstrated different biological activities of β-lapachone (naphthoquinone), including antifungal. Thus, the aim of the present study was to evaluate the antifungal potential of β-lapachone on the growth of Candida spp. Resistant to azole derivatives, in planktonic forms and biofilm, as well as to elucidate their possible mechanisms of action. For this, the evaluation of the anti-fungal effect of β-lapachone was performed on 22 strains of Candida spp. Using microdilution in broth. Subsequently, parameters such as cell viability, generation of reactive oxygen species (EROS), mitochondrial damage and phosphatidylserine externalization were evaluated by means of flow cytometric analysis and DNA damage by comet test, contributing to elucidation of the probable mechanism of Β-lapachone action. In addition, a protein expression profile was obtained by proteomic analysis in a representative C. albicans strain after treatment with the compound. And, finally, the cell viability of the biofilms was determined by the tetrazolium salt reduction (MTT) assay. According to the results, β-lapachone presented antifungal activity against strains of Candida spp. Azole resistant, with minimal inhibitory concentration (MIC) ranging from 4 - 16 μg / mL. Β-lapachone altered the permeability of the mitochondrial membrane, increased the intracellular levels of EROS, decreased cell viability in a dose-dependent manner, caused DNA damage and, consequently, led to cell death by apoptosis. Among the proteins identified, some are related to the translation process, energy metabolism, genetic processing and defense against reactive oxygen species. In relation to the biofilm assays, β-lapachone presented an effect on biofilm formed (24 hours), with the C. albicans isolate presenting a 50% reduction in concentrations of 2x MIC, 10x MIC and 50x MIC, while C. tropicalis and C In the concentrations of 10x MIC and 50x MIC (p <0.05). The use of subinhibitory concentrations was able to significantly reduce (p <0.05) the biofilm formation of Candida spp. Therefore, we conclude that β-lapachone is able to inhibit the in vitro growth of Candida spp. Resistant in both planktonic and biofilm forms suggesting that this compound molecule has the potential to act as an antifungal agent with apoptotic activity. / Nos dias atuais, observa-se um aumento significativo das infecções fúngicas oportunistas, principalmente em pacientes imunocomprometidos. A candidíase tem sido a mais documentada e muitas vezes estão associadas à formação de biofilmes. Os agentes antifúngicos disponíveis no mercado são restritos a um pequeno número de fármacos quando comparados aos agentes antibacterianos. Esses fatos associados ao aumento da frequência de resistência de espécies de Candida, demonstram a necessidade de buscar por novas estratégias terapêuticas, onde os produtos naturais se destacam. Diversos trabalhos já demonstram diferentes atividades biológicas de β-lapachona (naftoquinona), incluindo antifúngica. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antifúngico da β-lapachona sobre o crescimento de Candida spp. resistentes a derivados azólicos, nas formas planctônicas e biofilme, bem como elucidar os seus possíveis mecanismos de ação. Para isso, a avaliação do efeito antifúngico da β-lapachona foi realizada em 22 cepas de Candida spp. utilizando microdiluição em caldo. Posteriormente, parâmetros como viabilidade celular, geração de espécies reativas de oxigênio (EROS), danos na mitocôndria e externalização de fosfatidilserina foram avaliados por meio de análises de citometria de fluxo e os danos ao DNA pelo teste do cometa contribuindo para elucidação do provável mecanismo de ação da β-lapachona. Além disso, por meio da análise proteômica foi obtido um perfil de expressão de proteínas em uma cepa representativa de C. albicans após tratamento com o composto. E, por fim, a viabilidade celular dos biofilmes foi determinada por meio do ensaio de redução do sal de tetrazólio (MTT). De acordo com os resultados obtidos, β-lapachona apresentou atividade antifúngica frente a cepas de Candida spp. resistentes a azólicos, com concentração inibitória mínima (CIM) variando entre 4 - 16 μg/mL. β-lapachona alterou a permeabilidade da membrana mitocondrial, aumentou os níveis intracelulares de EROS, diminuiu a viabilidade celular de forma dose-dependente, causou danos ao DNA e, consequentemente, conduziu morte celular por apoptose. Dentre as proteínas identificadas, algumas estão relacionadas com o processo de tradução, metabolismo energético, processamento genético e de defesa contra espécies reativas de oxigênio. Em relação aos ensaios de biofilmes, β-lapachona apresentou efeito sobre biofilme formado (24 horas), com o isolado de C. albicans apresentando redução de 50% nas concentrações de 2x CIM, 10x CIM e 50x CIM, enquanto C. tropicalis e C. parapsilosis nas concentrações de 10x CIM e 50x CIM (p < 0,05). O uso de concentrações subinibitórias foi capaz de reduzir significativamente (p < 0,05) a formação dos biofilmes de Candida spp. Portanto, conclui-se que β-lapachona é capaz de inibir o crescimento in vitro de Candida spp. resistentes a azólicos tanto na forma planctônica como em biofilme sugerindo que esta molécula composto tem potencial para agir como agente antifúngico com atividade apoptótica.
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Mecanismo da atividade antifúngica do fator de necrose tumoral (TNF) frente ao biofilme de Candida albicans / Mechanism of antifungal activity of tumor necrosis factor (TNF) against Candida albicans biofilmAlves, Anelise Maria Costa Vasconcelos 11 July 2017 (has links)
ALVES, A. M. C. V. Mecanismo da atividade antifúngica do fator de necrose tumoral (TNF) frente ao biofilme de Candida albicans. 2017. 109 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Carolinda Oliveira (ppgmm@ufc.br) on 2017-08-08T12:00:12Z
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Previous issue date: 2017-07-11 / Candida albicans is a polymorphic fungus and has as main virulence factor the biofilm formation,particularly, in prosthetic materials and host surfaces of immunosuppressed patients, causing life-threatening infections. Tumor necrosis factor (TNF) is a pleiotropic cytokine that has several functions in the defense mechanisms of the host, among which promote inflammation and, consequently, inhibit the growth of microorganisms. In protozoa, TNF can affect the growth of these through their lectin domains that are spatially distinct from TNF receptors. To our knowledge, a direct TNF effect on yeasts, which lack TNF receptors, has never been reported. Thus, the present study aims to demonstrate that TNF affects the in vitro growth of Candida albicans through a mechanism independent of the TNF receptor. For this, four strains biofilm producerCandida albicans(two strong producer and two weak producer) were cultured in the presence or absence of TNF solutions. Susceptibility to TNF was evaluated using the broth microdilution method. Biofilms were grown on 96-well microtitre plates and evaluated using XTT (2,3-Bis-(2-Methoxy-4-Nitro-5-Sulfophenyl)- 2H-Tetrazolium-5-Carboxanilide) assay, optical, confocal and scanning and transmission electron microscopy.Biochemical biofilm characteristics such as protein quantification and hydrophobicity index (HI) were also evaluated.Thus,it was observed thatTNF did not alter Candida albicans planktonic growth. However, TNF dose-dependently inhibited growing but not established biofilm development, virtually halting yeast filamentation. Preincubation with the TNF antibody adalimumab but not with the immunoglobulin G coupled TNF soluble receptor etanercept blocked TNF activity. Preincubation with the carbohydrate N,N’-diacetylchitobiose, a major component of the yeast cell wall, that binds to TNF lectin domain, abrogated TNF effect against Candida albicans growing biofilm. In conclusion, this is the first demonstration of a receptor independent TNF and no mammalian cells activity, on other words, direct effect against C. albicans biofilm growth. Blockade of TNF effect by N,N’-diacetylchitobiose suggests that it is mediated via the lectin domain of the cytokine. / A Candida albicans é um fungo polimórfico que exprime como principal fator de virulência a formação de biofilmes, especialmente, em implantes médicos na superfícies de pacientes imunossuprimidos, causando infecções potencialmente fatais. O fator de necrose tumoral (TNF) é uma citocina pleitrópicaque denota diversas funções nos mecanismos de defesa do hospedeiro, dentre os quais promover a inflamação e, consequentemente, inibir o crescimento de microrganismos. Em protozoários, o TNF pode afetar o crescimento destes por meio dos seus domínios semelhante à lectina, espacialmente distintos dos receptores de TNF. No conhecimento que se tem, não há relatos de um efeito TNF direto em leveduras, que não possuem receptores de TNF. Assim, este trabalho objetivou demonstrar que o TNF afeta o crescimento in vitro de Candida albicanspor meio de um mecanismo independente do receptor de TNF. Para tal, quatro cepas de Candida albicans produtoras de biofilme (duas fortes e duas fracas formadoras) foram cultivadas na presença ou ausência de soluções de TNF. A susceptibilidade ao TNF foi avaliada utilizando o método de microdiluição em caldo. Os biofilmes foram cultivados em placas de 96 poços e avaliados empregando ensaio de redução de sal de XTT (2,3-Bis- (2-Metoxi-4-Nitro-5-Sulfofenil) -2H-Tetrazolium-5-Carboxanilida), microscopia óptica de campo claro, microscopia confocal e microscopia eletrônica de varredura e de transmissão. Também foram avaliada características bioquímicas do biofilme, como quantificação de proteína e o índice de hidrofobicidade (IH). Assim, foi observado que o TNF não alterou o crescimento planctônico de Candida albicans. O TNF inibiu, contudo, de maneira dose-dependente, a formação de biofilme,por intermédio da modulação da transição de hifa-filamento. A pré-incubação com o anticorpo contra TNF, adalimumab, mas não com o receptor solúvel de TNF acoplado a imunoglobulina G, etanercept,causou um bloqueioda atividade do TNF. A pré-incubação com o carboidrato N, N'-Diacetilquitobiose, um dos principais componentes da parede celular da Candida albicans, que se liga ao domínio semelhante à lectina do TNF, bloqueou o efeito do TNF contra o crescimento de biofilme de Candida albicans.Em conclusão, esse é o primeiro trabalho que demosntra um efeito direto do TNFcontra a formação do biofilme de Candida albicans, ou seja, sem a participação de seus receptores clássicos ou células mamíferas. O bloqueio do efeito do TNF pela N, N'-diacetilquitobiose sugere que este efeito é mediado por meio de um domínio lectina da citocina.
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Uso de antifúngicos em terapia intensiva: estudo prospectivo, observacional e multicêntrico / Use of Antifungals in Intensive Care:Prospective Study, observational, multicenterFigueiredo, Evandro José de Almeida [UNIFESP] January 2008 (has links) (PDF)
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Previous issue date: 2008 / BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Resistência a azólicos em candida spp. de origem veterinária : um fenômeno mediado por bombas de efluxo / Azole resistance in candida spp. from veterinary sources : an efflux-mediated phenomenonMaia, Débora Castelo Branco de Souza Collares January 2011 (has links)
MAIA, Débora Castelo Branco de Souza Collares. Resistência a azólicos em Candida spp. de origem veterinária : um fenômeno mediado por bombas de efluxo. 2011. 96 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-06-21T13:21:06Z
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Previous issue date: 2011 / Monitoring of the antifungal susceptibility of Candida species from veterinary sources is a recent practice and the mechanisms involved in antifungal resistance have not been completely elucidated. Considering that the antifungal arsenal is limited and that antifungal resistance has become more frequent, the comprehension of this phenomenon and the pursuit for therapeutic alternatives are necessary. Thus, the present work aimed at monitoring the in vitro susceptibility of Candida spp. isolated from animals, with emphasis on efflux pump-mediated azole resistance and on the evaluation of the effect of the imidazole levamisole on the growth of these yeasts. For such, in a first approach, 126 Candida isolates (19 C. albicans, 17 C. famata, 5 C. guilliermondii, 8 C. krusei, 29 C. parapsilosis, 48 C. tropicalis), out of which 22 were recovered from raptors, 32 from cactus parakeets, 56 from Amazon parrots, 7 from blue-and-gold macaws and 3 from a Brazilian porcupine. All isolates were submitted to broth microdilution test against amphotericin B, itraconazole and fluconazole, according to the methodology recommended by the Clinical Laboratory Standards Institute (document M27-A3). The MICs ranged from 0.03125 to 2 µg/mL, 0.125 to 250 µg/mL and 0.03125 to 125 µg/mL for amphotericin B, fluconazole and itraconazole, respectively. Out of 126 evaluated isolates, 33 (26.2%) were resistant to azoles, with 7 (5.6%) isolates resistant to fluconazole, 1 (0.8%) isolate resistant to itraconazole and 24 (19%) resistant to both drugs. In a second approach, all these azole resistant isolates, plus 20 C. albicans and 3 C. tropicalis that were recovered from our collection of resistant yeasts from veterinary sources, were submitted to the efflux pump inhibition assay with promethazine, with a total of 56 azole resistant isolates. Thus, MICs for fluconazole and itraconazole significantly reduced from 2 to 250 times for fluconazole and from 16 to 4000 times for itraconazole. The antifungal activity of levamisole against 12 C. albicans, 12 C. krusei, 12 C. parapsilosis and 12 C. tropicalis, was also evaluated, and MICs and minimum fungicidal concentrations varying from 0.58 to 2.34 mg/mL and from 2.34 to 9.37 mg/mL were obtained, respectively. Parallelly, it was demonstrated that levamisole significantly inhibits biofilm formation and interferes with the maintenance of mature biofilms. These data show that azole resistance is partially mediated by efflux-pumps and demonstrate the antifungal potential of the imidazole levamisole and its capacity of inhibiting the biofilm of strains of Candida spp. from animals. / O monitoramento da sensibilidade antifúngica em espécies de Candida de origem veterinária é uma prática recente e os mecanismos envolvidos ainda não foram completamente elucidados. Considerando que o arsenal de drogas antifúngicas é limitado e que o fenômeno de resistência tem se tornado mais freqüente, a compreensão deste fenômeno e a busca por alternativas terapêuticas se fazem necessárias. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo monitorar a sensibilidade in vitro de Candida spp. oriundas de animais, com ênfase na resistência aos azólicos mediada por bombas de efluxo e na avaliação da atividade do imidazólico levamisol sobre o crescimento destas leveduras. Para tanto, em um primeiro momento, foram avaliados 126 isolados de Candida, sendo 19 C. albicans, 17 C. famata, 5 C. guilliermondii, 8 C. krusei, 29 C. parapsilosis, 48 C. tropicalis, dos quais 22 foram isolados de rapinantes, 32 de periquitos do sertão, 56 de papagaios, 7 de araras canindé e 3 de um ouriço-cacheiro. Todas as cepas foram submetidas ao teste de microdiluição em caldo, ante a anfotericina B, itraconazol, fluconazol, segundo metodologia padronizada pelo Clinical Laboratory Standards Institute (documento M27-A3). As concentrações inibitórias mínimas (CIMs) variaram de 0,03125 a 2 µg/mL, 0,125 a 250 µg/mL e de 0,03125 a 125 µg/mL para anfotericina B, fluconazol e itraconazol, respectivamente. Dos 126 isolados avaliados por microdiluição, 33 (26,2%) foram resistentes aos azólicos, sendo 7 (5,6%) resistentes somente a fluconazol, 1 (0.8%) resistente somente ao itraconazol e 24 (19%) resistentes a ambas as drogas. Em um segundo momento, todas estas cepas resistentes aos derivados azólicos, mais 20 C. albicans e 3 C. tropicalis resgatadas da nossa coleção de leveduras resistentes de origem veterinária, foram submetidas ao teste de inibição de bomba de efluxo com prometazina, perfazendo um total de 56 cepas resistentes a azólicos. Dessa forma, as CIMs de fluconazol e itraconazol sofreram reduções significativas de 2 a 250 e de 16 a 4000 vezes, respectivamente. Investigou-se, ainda, a atividade antifúngica do levamisol contra 12 C. albicans, 12 C. krusei, 12 C. parapsilosis e 12 C. tropicalis, sendo obtidas CIMs e concentrações fungicidas mínimas que variaram de 0,58 a 2,34 mg/mL e de 2,34 a 9,37 mg/mL, respectivamente. Paralelamente, foi demonstrado que o levamisol inibe a formação do biofilme de C. albicans e C. tropicalis, bem como interfere na manutenção do biofilme maduro. Os dados apontam que a resistência aos derivados azólicos é, pelo menos em parte, mediada por bombas de efluxo, bem como demonstram o potencial antifúngico do imidazólico levamisol e sua capacidade de inibir o biofilme de cepas de Candida spp. oriundas de animais.
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Atividade da molécula tirosol, vancomicina e antibióticos beta-lactâmicos sobre o crescimento de candida spp. resistentes a derivados azólicos, na forma planctônica e biofilmeTeixeira, Carlos Eduardo Cordeiro January 2014 (has links)
TEIXEIRA, Carlos Eduardo Cordeiro. Atividade da molécula tirosol, vancomicina e antibióticos beta-lactâmicos sobre o crescimento de candida spp. resistentes a derivados azólicos, na forma planctônica e biofilme. 2014. 89 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-10-30T13:42:32Z
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Previous issue date: 2014 / Diversos são os relatos de resistência in vitro de cepas de Candida spp a fármacos antifúngicos, em especial a derivados azólicos A produção de biofilme é um importante fator de virulência e traz grandes repercussões clínica devido ao aumento da resistência à terapia antifúngica Deste modo a prospecção de novos compostos com propriedade antifúngica se faz necessária Alguns estudos têm evidenciado a atividade das moléculas de quorum-sensing farnesol e tirosol e de antibióticos beta-lactâmicos e glicopeptídeos contra espécies de Candida. Por conseguinte o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da molécula quorum-sensing tirosol associados ou não a antifúngicos clássicos e dos antimicrobianos vancomicina meropenem cefepime e piperacilina-tazobactam sobre o crescimento de Candida spp resistentes a derivados azólicos nas formas planctônicas e em biofilme Para tanto foram utilizadas cepas de C albicans (n=10) e C tropicalis (n=10) A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada por meio da técnica de microdiluição preconizada pelo CLSI Adicionalmente foi investigada a ação do tirosol e dos antibacterianos sobre o biofilme em formação e maduro de Candida spp As CIM´s para tirosol variaram de 2,5 a 5 mM e para os antibióticos variaram de 500 a 2000 µg/mL para ambas as espécies Foi observado efeito sinérgico na associação entre itraconazol e tirosol (18/20 cepas) e entre o fluconazol e tirosol (18/20 cepas) enquanto a associação anfotericina B e tirosol apresentou sinergismo em 5 cepas de C tropicalis e 6 cepas de C albicans O tirosol isolado apresentou efeito sobre a formação de biofilme de ambas as espécies na concentração 50XMIC (P<0,0001) Em relação ao efeito do tirosol sobre biofilme formado observou-se um aumento na concentração 10XMIC e uma diminuição na concentração 50XMIC A combinação entre tirosol e drogas antifúngicas apresentou um aumento na atividade do biofilme maduro diretamente proporcional á concentração testada quando o tirosol foi associado a derivados azólicos e uma diminuição quando associado com anfotericina B Todos os antibacterianos apresentaram efeito estatisticamente significativo sobre o biofilme em de Candida spp em formação (P<0,0001) Em relação ao efeito dos antibióticos vancomicina meropenem piperacilina/tazobactam e cefepime sobre o biofilme formado de Candida spp foram observadas reduções estatisticamente significativa na atividade celular nas concentrações MIC/10 (P<0,0001) MIC (P<0,0001) 10XMIC (P<0,0001) e 50XMIC (P<0,0001) Este estudo apresenta uma possível ação do tirosol isolado ou combinado com drogas antifúngicas e de antibacterianos sobre Candida spp na forma planctônica e em biofilme
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Efeito da inibição da calcineurina pela ciclosporina a em células planctônicas e biofilme de complexo Candida parapsilosis / Effect of inhibition of calcineurin by cyclosporin into planktonic cells and complex biofilm Candida parapsilosisMacêdo, Ramila de Brito January 2013 (has links)
MACÊDO, Ramila de Brito. Efeito da inibição da calcineurina pela ciclosporina a em células planctônicas e biofilme de complexo Candida parapsilosis. 2013. 100 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-11T16:04:52Z
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Previous issue date: 2013 / Candida parapsilosis Complex comprises three species, C. parapsilosis sensu stricto, C. metapsilosis and C. orthopsilosis, which have the same phenotypic characteristics, can be differentiated only by the genotype using PCR with restriction enzyme. The C. parapsilosis Complex is gaining prominence in the global epidemiology of candidiasis to be the second or third most isolated species, moreover, reports of resistance to some antifungal agents are worrying. Calcineurin molecule also responsible for resistance to antifungal drugs and thinking of new molecular targets with the objective of this study was to evaluate the potential synergistic antifungal and calcineurin inhibitor, cyclosporin A, against planktonic and biofilm forms of strains C. parapsilosis Complex from clinical sources. The susceptility assays with amphotericin B, fluconazole, voriconazole, caspofungin and cyclosporin A were performed by microdilution in accordance with the guidelines of the Clinical Laboratory Standards Institute. The method board in microdilution assay performed tests for synergism against planktonic cells of strains of C. parapsilosis Complex. Antifungal combinations formed by cyclosporin A were evaluated against biofilms forming and mature in polystyrene plates, where differences in the pattern of antifungal susceptibility among species were observed, but strains of C. parapsilosis sensu stricto were more sensitive to cyclosporin A to C. orthopsilosis and C. metapsilosis. Synergism between the antifungal and cyclosporin A was observed in strains of C. parapsilosis Complex. The combinations formed by antifungal and cyclosporin A were able to prevent the growth of the species in the planktonic phase of the complex, as well as in biofilm formation in CIM10X and CIM50X and showed inhibitory effect against mature biofilms of C. parapsilosis sensu stricto, C. metapsilosis and C. orthopsilosis in CIM50X. These results support the potential of inhibiting fungal calcineurin as a promising approach for increasing the efficiency of antifungal drugs. / O Complexo Candida parapsilosis compreende três espécies, C. parapsilosis stricto sensu, C. metapsilosis e C. orthopsilosis, que possuem características fenotípicas iguais, podendo ser diferenciadas apenas pelo genótipo utilizando a técnica de PCR com enzima de restrição. O Complexo C. parapsilosis vem ganhando destaque na epidemiologia mundial da candidíase por ser a 2a ou 3a espécies mais isolada, além disso, relatos de resistência a alguns antifúngicos são preocupantes. A calcineurina molécula responsável, também, pela resistência aos antifúngicos e pensando em novos alvos moleculares para as drogas que o objetivo desse trabalho foi, avaliar o potencial sinérgico de antifúngicos e do inibidor de calcineurina, ciclosporina A, contra formas planctônicas e biofilmes de cepas do Complexo C. parapsilosis de origens clínicas. Os ensaios de sensibilidade com anfotericina B, fluconazol, voriconazol, caspofungina e ciclosporina A foram realizadas pela técnica de microdiluição, em conformidade com as orientações do Clinical Laboratory Standards Institute. Os testes de sinergismo contra células planctônicas de cepas do Complexo C. parapsilosis foram realizados pelo método de Checkerboard, em ensaio de microdiluição. Combinações formadas por antifúngicos com ciclosporina A foram avaliados contra biofilmes em formação e maduros, em placas de poliestireno, onde diferenças no padrão de sensibilidade aos antifúngicos entre as espécies não foram observadas, porém cepas de C. parapsilosis stricto sensu foram mais sensíveis à ciclosporina A que C. orthopsilosis e C. metapsilosis. O sinergismo entre os antifúngicos e ciclosporina A foi observado em cepas do Complexo C. parapsilosis. As combinações formadas por antifúngicos e ciclosporina A foram capazes de impedir o crescimento das espécies do Complexo na fase planctônica, bem como, na formação de biofilme nas CIM10X e CIM50X e mostrou efeito inibitório contra biofilmes maduros de C. parapsilosis stricto sensu, C. metapsilosis e C. orthopsilosis nas CIM50X. Os resultados obtidos reforçam o potencial de inibição da calcineurina fúngica como uma abordagem promissora para aumentar a eficiência de drogas antifúngicas.
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Produção e caracerização de uma lipase alcalina secretada por um isolado de Candida parapsilosisRibas, Rodolfo Kruger da Camara January 2012 (has links)
Lipases (E.C. 3.1.1.3) são serina-hidrolases e agem em sobre ésteres de ácidos graxos de cadeia curta. Elas exibem atividade específica e enantiosseletiva, e sendo assim, há vasto interesse comercial, em pesquisa e indústria de biotecnologia. Lipases microbianas são interessantes para indústria, devido à facilidade de purificação e alta produção que permitem. Muitas leveduras possuem capacidade de produzir naturalmente estas enzimas, permitindo a obtenção de lipases não-transgênicas e com maior rapidez. Este trabalho teve como objetivo avaliar a produção de lipase em leveduras selvagens e otimizar a sua produção em uma linhagem selecionada, bem como caracterizar esta enzima. Uma varredura inicial foi realizada em placas de Tween 80 e Ágar-óleo. Leveduras com crescimento positivo foram então cultivadas em meio mínimo sob agitação, suplementado com óleo de soja, e o sobrenadante teve a sua atividade enzimática testada sobre p-nitrofenil palmitato (pNPP). Foram testadas 133 linhagens provenientes de diferentes substratos, e treze apresentaram uma atividade lipolítica significativamente alta em comparação com as demais (p <0,001). Otimizações preliminares mostram condições ótimas de secreção da enzima produzida pela levedura selecionada, Candida parapsilosis QU110, em meios de cultura com pH inicial em torno de 6,0, contendo triptona e óleo de oliva como fontes de nitrogênio e carbono, respectivamente. O extrato bruto (sobrenadante livre de células) apresenta estabilidade a surfactantes não-iônicos e n-hexano, mas não a etanol ou metanol. Condições ótimas de atividade da enzima, avaliadas pela metodologia de superfície de resposta, foram observadas a 36 °C e pH 8,0. / Lipases (E.C. 3.1.1.3) are serine-hydrolases, and act on long chain fatty acid ester bonds. They exhibit specific and enantioselective activities, and as such there is plenty of interest for industry. Microbial lipases are interesting for industry, because its ease of purification and high yelds it permits. Several yeasts possess the ability of naturallly produce these enzymes, allowing the fast production of non-transgenic lipases. This work aimed at evaluating lipase production in wild yeast strains and optimizing its production, as well as characterizing this enzyme. An initial screening was made on Tween 80 and oil-agar plates. Growing yeasts were then cultivated under agitation in oil-supplemented minimum medium, and the supernatant had its enzymatic activity tested over p-nitrophenyl palmitate (pNPP). One-hundred and thirty-three strains isolated from different substrates were tested, and thirteen showed significantly high lipolytic activity when compared to the others (p<0,05). Preliminary optimization of lipase production by the selected yeast, Candida parapsilosis QU110, showed optimal enzyme secretion in media with initial pH 6.0, containing olive oil and tryptone as carbon and nitrogen sources, respectively. The crude extract (cell-free supernatant) showed stability against surfactants and n-hexan, but not against ethanol or methanol. Optimal enzyme activity conditions, evaluated through surface response methodology, were observed at 36 °C and pH 8.0.
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Estudo da colonização e variabilidade genética de leveduras do gênero Candida isoladas na cavidade bucal de crianças com Síndrome de DownSouza, Fernanda Bello Costa de 03 December 2009 (has links)
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