Thesis (M.A.) University of Missouri-Columbia, 2006. / The entire dissertation/thesis text is included in the research.pdf file; the official abstract appears in the short.pdf file (which also appears in the research.pdf); a non-technical general description, or public abstract, appears in the public.pdf file. Title from title screen of research.pdf file viewed on (May 20, 2007) Vita. Includes bibliographical references.

Submitted by Barroso Patrícia (barroso.p2010@gmail.com) on 2013-08-12T18:04:34Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Rodrigo.pdf: 3780613 bytes, checksum: fb8cd283c884b0142902a111c69ff14f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-12T18:04:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Rodrigo.pdf: 3780613 bytes, checksum: fb8cd283c884b0142902a111c69ff14f (MD5) Previous issue date: 2010 / Larva migrans visceral (LMV) é uma zoonose causada por ingestão de ovos embrionados de Toxocara canis e T. cati. A prevalência da LMV é mais alta em países em desenvolvimento e a presença desta infecção na população humana ainda não foi estudada na Bahia, Brasil. Esta infecção tem sido associada com aumento de alergia e atopia, entretanto os relatos são contraditórios. O objetivo desse trabalho foi investigar a prevalência e os fatores de risco da infecção humana por T. canis em dois grupos de indivíduos da cidade de Salvador e associar a soroprevalência de anticorpos IgG anti-T. canis com eosinofilia, atopia, rinite e asma. Participaram do estudo 338 indivíduos, sendo 150 moradores oriundos de diversos bairros de Salvador (Grupo 1) e 188 moradores do bairro da Paz (Grupo 2). Foi aplicado um questionário sobre dados demográficos, fatores de risco para a aquisição desta infecção e fatores de risco para asma, rinite e atopia. A infecção foi diagnosticada pela presença de anticorpos IgG séricos anti-T. canis, detectados pelo método de ELISA indireto. A associação entre os fatores de risco e a infecção por T. canis e da correlação da infecção com os desfechos eosinofilia, asma, atopia (teste cutâneo para aeroalérgenos > 3 mm) e rinite foram analisadas por regressão logística univariada e multivariada. A soroprevalência de IgG anti-T canis foi de 52 % e de 65.4 % nos grupos 1 e 2 respectivamente. A infecção foi associada positivamente para classe social mais baixa e contato com cães e gatos. Foi encontrada uma associação positiva e estatisticamente significante entre a infecção por T. canis e eosinofilia ≥ 4 % e asma nos indivíduos do Grupo 1 e com eosinofilia ≥ 10 % nos indivíduos do Grupo 2, porém não houve associação entre esta infecção e atopia e rinite em ambos os grupos. Os resultados obtidos neste estudo apontam para a alta prevalência desta parasitose em população de baixa renda de Salvador e a importância da presença de cães e gatos não vermifugados na veiculação e disseminação da mesma, uma vez que estes são os hospedeiros naturais. A associação desta infecção com classe social economicamente menos favorecida dos indivíduos do estudo, explica-se devido ao baixo nível de escolaridade e piores condições higiênicossanitárias em que vivem estas pessoas e ao contato com animais não vermifugados. Estes achados reforçam o papel da infecção por T. canis no desenvolvimento de eosinofilia grave. O achado de asma associado com infecção por T. canis apenas no grupo com menor prevalência da infecção denota a necessidade de investigar co-fatores que possam influenciar na associação de infecção por T. canis com asma e alergia. / Universidade Federal da Bahia, Instituto de Ciências da Saúde

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6106_DISSERTAÇÃO - MARA RÚBIA.pdf: 928755 bytes, checksum: ecd1f0d756f2f2262aa834ca9d8c7351 (MD5) Previous issue date: 2012-06-26 / Objetivou-se com este estudo determinar por meio da nested-PCR a prevalência da Ehrlichia canis em cães da região de Alegre-ES, e avaliar sua correlação com a presença de mórulas e trombocitopenia. Para isso, foram colhidas amostras sanguíneas de 85 cães, independente de raça, sexo, idade e estado de saúde. Com estas, foram confeccionadas lâminas para a pesquisa de mórulas, trombocitopenia, e execução da técnica de nested-PCR. Foi verificada uma prevalência de 1,17% ao pesquisar a presença de mórulas, 5,6% ao utilizar a técnica da nested-PCR, e foi verificada que 17,64% dos hemogramas apresentavam trombocitopenia. No entanto, somente 40% das amostras positivas pela nested-PCR, apresentaram trombocitopenia. Os resultados apresentados neste estudo demonstram que a introdução de técnicas de diagnóstico molecular como a nested-PCR é um método importante para o auxílio no diagnóstico precoce de patologias.

Orientador: Mirela Tinucci Costa / Banca: Marlos Gonçalves Sousa / Banca: Ricardo Duarte Silva / Resumo: A erliquiose em cães pode conduzir o animal ao óbito, tanto por alterações hematológicas quanto clínicas, que se explicam pelo caráter catabólico multifatorial da doença. O comprometimento adrenocortical pode ser esperado em virtude dos desafios impostos ao sistema imune, gerados pelas infecções e inflamações. Este estudo visou avaliar a ocorrência de alterações hormonais relacionadas às glândulas adrenais, em cães infectados naturalmente por Ehrlichia canis (n=21), positivos na identificação de anticorpos anti-E.canis (Dot-ELISA) e DNA da bactéria (nPCR). Para tanto, foram pesquisadas as concentrações séricas de cortisol, sulfato de dehidroepiandrosterona (DHEA-S) e proteínas de fase aguda (proteína C reativa e haptoglobina) pré e pósestimulação com o hormônio adrenocorticotrópico (ACTH), e comparadas com os valores obtidos de cães saudáveis (n=10). Os resultados demonstraram resposta semelhante dos cães doentes e saudáveis ao teste de estimulação com ACTH, no que concerne ao cortisol. Isto sugere que cães com erliquiose de ocorrência natural mantêm a capacidade de secretar cortisol adequadamente diante o estímulo do ACTH. As concentrações de DHEA-S foram significativamente mais elevadas nos cães doentes, nos momentos pré e pós-ACTH, em relação aos saudáveis, o que ilustra o estresse do organismo na doença em estudo. Não foram observadas diferenças significativas entre os momentos dentro de cada grupo. Aparentemente, a estimulação com ACTH não interferiu na concentração de DHEA-S dosado uma hora após sua administração, sugerindo que a resposta ao estímulo hormonal não foi detectada. Da mesma forma, a estimulação com ACTH não interferiu na concentração das proteínas de fase aguda, embora se apresentassem significativamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ehrlichiosis in dogs may lead to death both for hematological and for clinical alterations that might be explained for its multifactorial catabolic character. The adrenocortical disruption may be expected during the course of the disease due to challenges on the immune system, generated by infection and inflammation. This study aimed to evaluate the occurrence of hormonal disturbances associated to the adrenal glands in dogs naturally infected by Ehrlichia canis (n=21), positive at the identification of anti-E. canis antibodies and of the bacterial DNA (nPCR). For this purpose, serum concentration of cortisol, dehydroepiandrosterone sulfate (DHEA-S) and acute phase proteins (C reactive protein and haptoglobin) pre and post-stimulation with adrenocorticotropic hormone (ACTH) were assessed and compared to values obtained from healthy dogs (n=10). The results have shown similar cortisol response to the ACTH stimulation test between sick and healthy dogs. It suggests that dogs with ehrlichiosis of natural occurrence maintain the capacity of secreting cortisol properly before the ACTH stimulation. DHEA-S concentrations were significantly increased in sick dogs at pre and post-ACTH moments, in relation to healthy dogs, which illustrates the organic stress in the studied disease. Significant differences between both moments were not observed in the groups. Apparently, ACTH stimulation has not interfered in DHEA-S concentration, assessed one hour after its administration, suggesting that the response to the hormonal stimulation was not detected. The same way, ACTH stimulation has not interfered in the acute phase concentrations, although they were significantly increased in sick dogs, which reinforces the role of an inflammatory process in the course of the disease. The results indicate... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Lucia Helena O'Dwyer de Oliveira / Banca: Marcelo Bahia Labruna / Banca: Antônio Vicente Mundim / Banca: Luciene Maura Mascarini / Banca: Alessandro Francisco Talamini Amarante / Resumo: Protozoários do gênero Hepatozoon podem infectar cães e têm como vetor carrapatos Ixodidae. Dados epidemiológicos têm evidenciado alta prevalência da infecção causada por este parasita no Brasil, principalmente em cães de áreas rurais. Rhipicephalus sanguineus é uma espécie de carrapato predominante em ambiente urbano e descrita como transmissora do Hepatozoon canis. Entretanto, cães de área rural, que possivelmente compartilham ambiente com outros hospedeiros domésticos e selvagens, são infestados principalmente por espécies do gênero Amblyomma. Considerando a alta ocorrência de cães de áreas rurais infectados com H. canis, associada à presença de carrapatos do gênero Amblyomma, o objetivo deste projeto foi infectar experimentalmente carrapatos Amblyomma cajennense, Amblyomma aureolatum e Amblyomma ovale, a partir de cães naturalmente infectados por H. canis, e pesquisar a capacidade vetorial dos mesmos, além de comparar a taxa de infecção entre as espécies A. ovale e A. cajennense com R. sanguineus. Cães de áreas rurais foram examinados para a presença da infecção por H. canis, e, demonstraram uma alta prevalência desse parasita. Como metodologia, cães positivos foram infestados com carrapatos e, a seguir, utilizados para a pesquisa de oocistos e para os experimentos de capacidade vetorial. Os resultados obtidos demonstraram que carrapatos A. ovale foram capazes de se infectar e transmitir o protozoário para outros cães. Para A. cajennese, apesar da positividade dos cães infectados durante o experimento, haverá necessidade de novos estudos de transmissão para verificar a capacidade vetorial desse ectoparasita. Já com o A. aureolatum não foi observado nenhuma forma evolutiva do H. canis nos espécimes analisados, e nenhum animal tornou-se positivo após a inoculação oral. Quando comparamos as taxas de infecção por H. canis, nas diferentes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Protozoa of the genus Hepatozoon canis can infect dogs and they have as vector ticks Ixodidae. Epidemic data have been evidencing high prevalence of the infection caused by this parasite in Brazil, mainly in dogs of rural areas. Rhipicephalus sanguineus is a type of tick predominant in urban areas and described as vehicle of the H. canis. However, dogs of rural area that possibly share habitat with other domestic and wild hosts are infested mainly by species of the genus Amblyomma. Considering the high occurrence of dogs in rural areas infected with H. canis, associated to the presence of ticks of the genus Amblyomma, the objective of this project was to experimentally infect ticks Amblyomma cajennense, Amblyomma aureolatum and Amblyomma ovale, from dogs naturally infected by H. canis, and to research the vectorial capacity of the same ones, besides comparing the infection tax between the species A. ovale and A. cajennense with R. sanguineus. During the study, researches were accomplished for positive dogs by H. canis in dogs of rural and urban areas, demonstrating a high prevalence of the infections in dogs of rural areas. As methodology, positive dogs were infested with ticks and, to proceed, used for the oocysts research and for the experiments of vectorial capacity. The obtained results demonstrated that ticks A. ovale were able to infect and to transmit the protozoan for other dogs. For the species A. cajennense in spite of the positivity of the dogs infected during the research, we will need new transmission studies to verify the vectorial capacity of that ectoparasite. With A. aureolatum species we don't observed any evolutionary form of the H. canis in the analyzed specimens and no animal became positive after the oral inoculation. When we compared the infection rate for H. canis, in the different species of ticks, we verified that only the species A. ovale presented oocysts... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El objetivo de este estudio fue indagar la exposición frente a Brucella canis y Leptospira spp. a través de la detección de anticuerpos en cánidos silvestres y domésticos en la Isla Grande de Tierra del Fuego. Se analizó un total de 56 sueros, 15 de zorros culpeo fueguino, 12 de zorros chilla y 29 de perros domésticos. Dos técnicas serológicas fueron utilizadas para la detección de anticuerpos: contrainmunoelectroforesis (CIEF) y aglutinación microscópica (MAT) para brucelosis canina y leptospirosis, respectivamente. Los resultados mostraron la ausencia de anticuerpos contra B. canis y la presencia de anticuerpos contra Leptospira spp., con prevalencias de un 20% para zorros culpeo, 8,3% para zorros chilla y 3,4% para perros domésticos. Estos resultados se pueden explicar por factores tales como las características intrínsecas del agente infeccioso y/o ubicación de los animales analizados. Así, una comprensión más profunda sobre la interacción de los cánidos silvestres y domésticos con otras especies animales en un medio ambiente en común, es una herramienta esencial hacia la conservación de las especies endémicas en peligro de extinción de la Isla Grande de Tierra del Fuego como el zorro fueguino. / The objective of this study was to explore exposure against Brucella canis and Leptospira spp. through the presence of antibodies in wild and domestic canids in Isla Grande de Tierra del Fuego. A total of 56 sera, 15 from Fuegian culpeo foxes, 12 from grey foxes and 29 from domestic dogs, were analyzed. Two serological techniques were used for antibody detection: counterimmunoelectrophoresis (CIEF) and microscopic agglutination (MAT) for canine brucellosis and leptospirosis, respectively. The results showed the absence of antibodies against B. canis and the presence of antibodies against Leptospira spp., with prevalence’s of 20% for culpeo foxes, 8.3% for grey foxes and 3.4% for domestic dogs. These results could be explained by factors such as intrinsic characteristics of the infectious agent and/or location of the test animals. Thus, a deeper understanding of the interaction of wild and domestic canids with other animal species in an environment in common, is an essential tool towards the conservation of the endangered endemic species from the Isla Grande de Tierra del Fuego like the Fuegian fox.

This thesis showed that dogs with natural infection with B. canis had both renal and cardiac dysfunction, both of which can be classified as complications of babesiosis and would thus necessitate supportive therapy. This thesis demonstrated that RTE celluria, proteinuria, and variable enzymuria and azotaemia occur in dogs with babesiosis. However, these were all minimal changes and all could be consistent with hypoxia, reduced GFR, or reduced cardiac output This thesis showed that dogs with naturally occurring babesiosis had significant urine met-haemoglobin with no evidence of blood met-haemoglobin. The possibility would be that the urinary methaemoglobin was either produced in the kidney or possibly by oxidation of haemoglobin to met-haemoglobin in the bladder. It has been shown experimentally that met-haemoglobin can be toxic. The combination of reduced GFR, anaemic hypoxia, and met-haemoglobin can all act synergistically to cause renal damage. Renal haemodynamics are also much more likely to be abnormal when cardiac dysfunction is present Reduced renal blood flow and glomerular filtration rate are evidence of redistribution of blood flow that commonly occurs in early heart failure. An important finding in this thesis was that dogs with babesiosis had lower serum sodium than control dogs but there was no difference between mild, severe, or complicated cases of babesiosis. In addition, dogs with babesiosis had a lower fractional clearance of sodium than Clinically healthy control dogs, which can be interpreted as sodium retention by the kidneys. This sodium retention would also result in water retention , which will result in an expansion of the plasma volume. In the past heart lesions in canine babesiosis were regarded as rare complications, with the majority of lesions being reported as incidental findings at post-mortem examination of complicated babesiosis cases. This thesis has demonstrated that cardiac lesions to be common in canine babesiosis. This thesis showed that that ECG changes in babesiosis were similar to the pattern described for myocarditis and myocardial ischaemia, and together with the histopathological findings indicated that the heart suffers from the same pathological processes described in other organs in canine babesiosis, namely inflammation and hypoxia. As the clinical application of the ECG changes found in this thesis was limited, cardiovascular assessment should be based on functional monitoring rather than ECG. Using cardiac troponin as a marker of myocardial injury, this thesis showed that myocardial cell injury occurs with canine babesiosis. Cardiac troponins, especially troponin I, are sensitive markers of myocardial injury in canine babesiosis, and the magnitude of elevation of plasma troponin I concentrations appears to be proportional to the severity of the disease. ECG changes and serum cardiac troponin were correlated with histopathology. On cardiac histopathology from dogs that succumbed to babesiosis, haemorrhage, necrosis, inflammation and fibrin microthrombi in the myocardium were documented, all of which would have resulted in ECG changes and elevations in cardiac troponin. Myocardial infarction causes left ventricular failure, which will result in hypotension and an expansion of the plasma volume due to homeostatic mechanisms. This thesis showed that dogs with babesiosis had hypoalbuminaemia, which may be because of intravascular volume dilution due to fluid retention. In disease hypoalbuminaemia can occur as a negative acute-phase protein. In the light of the cardiac changes, hyponatraemia, and hypotension, a probable cause would be fluid retention due to myocardial disease. This thesis showed that dogs with babesiosis had left ventricular lesions, which can result in systolic heart failure. / Thesis (PhD)--University of Pretoria, 2005. / Veterinary Tropical Diseases / unrestricted

Brucella canis causes canine brucellosis in dogs inducing mainly contagious abortion. Diagnosis of B. canis is based on bacterial isolation that is timeconsuming and inconsistent; serological tests (more than one test) that is ambiguous and lacks specificity; and PCR that may lack sensitivity as bacteraemia may not be constant. Since bacteraemia of B. canis develops 7-30 days after infection, often resulting in a sustained bacteraemia, PCR was investigated for the detection of B. canis in whole blood of dogs. The PCR sensitivity was validated to detect 3.8 fg Brucella DNA mixed with dog DNA as well as 1 x 102 cfu/ml B. canis in dog blood (mock infection) using primers (ITS66 and ITS279) that amplifies the 16S-23S ribosomal DNA intergenic spacer (ITS) region. The PCR assay for the detection of B. canis in whole blood samples was compared with bacterial isolation, serological tests, which include the rapid slide agglutination test (RSAT), 2-mercaptoethanol RSAT (2ME-RSAT) and imunochromatographic assay (ICA). These techniques were used to test 56 dog samples obtained from the Michangulene and Mafavuca villages at the municipality of Changalane, in District of Namaacha in Maputo, Mozambique for B. canis. No B. canis was isolated from dog blood using the classical microbiology isolation and PCR. A sample was only presumed positive if both the 2ME-RSAT and ICA tested positive. None of the samples in this study tested positive using this criterion for serological testing. Results of this study indicated that B. canis was not present in the 56 dogs sampled in the Maputo region of Mozambique using bacteriology, PCR and serological tests (RSAT, 2ME-RSAT and ICA). Due to the discrepancy between serological tests we cannot conclude that B. canis is not present in the Maputo region of Mozambique. In future the accuracy of the serological tests, bacteriology and PCR assay should be assessed using experimentally infected B. canis dogs over a period followed by a surveillance study in Mozambique that includes urine, semen and blood samples collected from dogs. / Dissertation (MSc)--University of Pretoria, 2010. / Veterinary Tropical Diseases / Unrestricted

Estudos filogenéticos recentes mostram que na América Latina há dois grupos distintos de carrapatos identificados como R. sanguineus. Carrapatos R. sanguineus da chamada América Latina temperada (Chile, Argentina, Uruguai e estado do Rio Grande do Sul) formam um grupo monofilético, claramente distinto de um segundo grupo monofilético, formado por R. sanguineus da denominada América Latina tropical (desde México ao estado Brasileiro de Santa Catarina), com claras possibilidades desses dois grupos estarem representados por duas espécies distintas dentro do complexo sanguineus. Estudos sobre erliquiose canina (causada por Ehrlichia canis) na América Latina indicam que E. canis é altamente prevalente em países da América Latina tropical, porém rara ou escassa na América Latina temperada. Desta forma, a hipótese primária do presente projeto foi que a ausência ou escassez de casos de erliquiose canina na América Latina temperada se deve à baixa competência vetorial dos carrapatos sob o táxon R. sanguineus presentes nessa região, ao contrário da América tropical, em que os carrapatos presentes sob o táxon R. sanguineus possuem alta competência vetorial para E. canis. Baseado no exposto acima, o objetivo geral do presente projeto foi avaliar de forma comparativa a competência vetorial de quatro populações de R. sanguineus da região Neotropical, uma representando a América Latina tropical e três representando a América Latina temperada. Carrapatos nas fases de larvas e ninfas, derivados de quatro populações de R. sanguineus, provenientes da Argentina (América Latina temperada), Estado do Rio Grande do Sul (América Latina temperada), Uruguai (América Latina temperada) e da cidade de São Paulo, Brasil (América Latina tropical) foram expostos a E. canis, ao se alimentarem em cães infectados com E. canis, na fase aguda da doença. Em paralelo, larvas e ninfas não infectadas de cada uma das quatro populações foram levadas a infestar cães não infectados (grupo controle). As larvas e ninfas ingurgitadas, recuperadas nessa primeira fase, foram deixadas em estufa para realizarem ecdise para ninfas e adultos, respectivamente. Parte destas ninfas e adultos foi separada para análises moleculares. Outra parte dessas ninfas e adultos foi levada a infestar cães susceptíveis, a fim de se verificar a competência vetorial desses carrapatos das quatro populações. Nas infestações realizadas, amostras de sangue dos cães infestados foram colhidas semanalmente durante sessenta dias. Parte desse sangue foi processado imediatamente para hemograma, mostrando que somente os cães infestados com adultos de R. sanguineusde São Paulo, expostos a E. canis na fase de ninfa, apresentaram alterações marcantes de números de eritrócitos, volume globular, hemoglobina e plaquetas abaixo do valor mínimo de referência para cães sadios. Todos os demais cães infestados apresentaram valores de hemograma sem grandes alterações significativas. Nenhum cão apresentou febre. A outra parte do sangue colhido semanalmente foi separada para processamento por PCR em tempo real para pesquisa de DNA de E. canis e sorologia para pesquisa de anticorpos anti-E. canis. As análises moleculares (PCR em tempo real para pesquisa de DNA de E. canis) e sorológicas (imunofluorescência indireta) de todos esses cães foram realizadas, assim como as análises moleculares dos carrapatos, a fim de se verificar a freqüência de carrapatos de cada população que se infectou, após se alimentarem em cães infectados. Os resultados indicam que somente os carrapatos da colônia de São Paulo (América Latina tropical) foram competentes para transmitir a doençaa três cães sadios, que se mostraram positivos na PCR em tempo real e na soroconversão para E. canis. Todos os cães infestados com carrapatos das colônias da América Latina temperada (Chile, Argentina, Uruguai e estado do Rio Grande do Sul) não se infectaram por E. canis, mesmo que esses carrapatos haviam se alimentado, num estágio anterior, em um cão sabidamente infectado. Os testes moleculares dos carrapatos corroboram esses resultados, uma vez que nenhum carrapato adulto (exposto E. canis na fase de ninfa) das colônias da Argentina e Uruguai se mostrou positivo na PCR em tempo real, ao passo que pelo menos 1% das ninfas e 28% dos adultos de R. sanguineus da colônia São Paulo se mostraram positivos, após se alimentarem como larvas e ninfas, respectivamente, no mesmo cão infectado que serviu de alimento para os carrapatos da América Latina temperada (Uruguai, Argentina e Rio Grande do Sul). Em relação aos carrapatos provenientes do estado do Rio Grande do Sul, 4% dos adultos analisados logo após a ecdise se apresentaram positivos na PCR em tempo real, mas nenhum adulto foi positivo 30 dias após a ecdise. Como os carrapatos dessa população não foram competentes para transmitir a bactéria para cães susceptíveis, presume-se que os resultados positivos na PCR logo após a ecdise se deva a DNA residual da bactéria ingerida na alimentação da ninfa no cão infectado. Carrapatos adultos das quatro populações estudadas foram inoculados pela via intracelomática com emulsão de células DH82 infectadas com E. canis. Após ficarem incubados por 10 dias numa incubadora BOD a 25oC, se alimentaram por cinco dias em coelhos, quando então foram manualmente retirados e tiveram suas glândulas salivares dissecadas e submetidas a extração de DNA. Pela PCR em tempo real, somente 1 (10%) de 10 carrapatos da população de São Paulo foi positivo para E. canis, ao passo que nenhum carrapato das demais populações (10 carrapatos por população) foi positivo.Amostras de carrapatos adultos do grupo R .sanguineus coletados a campo em diferentes regiões do Brasil foram analisadas através da técnica de PCR em tempo real para verificar a presença da bactéria E. canis. Foram coletados R.sanguineus dos seguintes locais (30 a 374 carrapatos por localidade): São Paulo/SP, Cuiabá/MT, Campo Grande/MS, Paulo Afonso/BA, Cachoeira do Sul/RS, São Luís/MA, Uberlândia/MG, Bandeirantes/PR, Petrolina/PE, Ji-Paraná/RO; e amostras de Montevidéu (Uruguai) e Rafaela (Argentina). Apenas os carrapatos de Cachoeria do Sul/RS, Campo Grande/MS, Montevidéu (Uruguai) e Rafaela (Argentina) foram todos negativos na PCR. Nas demais localidades, o percentual de carrapatos positivos para E. canis variou de 2,0 a 7.9%. Os resultados deste trabalho servem para uma melhor compreensão da ausência de casos de infecção canina por E. canis na América Latina temperada (cone sul) e reforçam a hipótese de que tal fato se deve à baixa competência vetorial dos carrapatos sob o táxon R. sanguineus presentes nessa região, ao contrário da América tropical, onde os carrapatos presentes sob o táxon R. sanguineus possuem alta competência vetorial. / Philogenetic studies have shown that in Latin America two different groups of the tick species Rhipicephalus sanguineus. These two groups found apart in two different regions, the Temperate region (Chile, Argentina, Uruguay and Southern Brazil) and the Tropical region (From Southern Brazil up to Mexico). It is likely that those two groups are represented by two different species within R. sanguineus group. Studies on ehrlichiosis (caused by Ehrlichiacanis) in the Latin America point thet E. canis is highly prevalent in the Tropical region whereas is rarely report in Temperate region. The present study tests the hypothesis that the distribution of ehrlichiosis are related to the low vectorial competence of the tick within the taxon group R. sanguineus found in the Temperate area and the high vectorial competence of the tick within the taxon group R. sanguineus found in the Tropical area. The objective of this study was to evaluate comparatively the vectorial competence of four R. sanguineus tick population, where three were collected in Temperate Area, from Argentina, Uruguay and State of Rio Grande do Sul (Brazil) and one from Tropical Area from the State of São Paulo (Brazil). Ticks from all four populations were exposed to E. canins through feeding upon infected dogs in acute disease phase, a control group were set up for each population by feeding larvae and nymphs on non infected dogs. All larvae and nymphs collected in this part of the study were allowed to molt in incubator (27oC,>85%RH) to nymphs and adults, respectively. Part of the ticks were selected to underwent molecular analysis, other part were released on susceptible dogs, in order to determine the vectorial competence for each of the tick populations. From the carried out infestations, samples of blood from the infested dogs were drawn weekly during 60 days. Part of the drawn blood was processed for hemogram that yielded that dogs infested with ticks from the São Paulo population, exposed to E. canis during the nymphal stage, showed important alteration on the number of erytrocytes, hemoglobine, packed cell volume, and platelets underneath the threshold for health dogs. All other dogs showed no important alteration in blood parameters. No fever was detected in any of the dogs. The other part of the weekly drawn blood from each dog was processed by real time PCR targeting E. canis DNA and processed by serology (Indirect immunofluorescence) seeking for anti-E. canis antibodies. Molecular analysis (real time PCR) on ticks were carried out in order to detect the prevalence of infected ticks on each population. Results show that only the ticks from the São Paulo population (Tropical Region) were competent in transmitting E. canis to three susceptible dogs, since material from these three fogs yielded positive in real time PCR and sorology tests. All dogs infested with ticks from the Argentina, Urugay and State of Rio Grande do Sul (Temperate Regions) population have not being infected by E. canis. The molecular tests on the ticks support this find since no tick from Argentina and Uruguay population yielded positive in the real time PCR, whereas about 1% of the nymphs and 28% of the adults of ticks from São Paulo population yielded positive in the real time PCR. The ticks from the State of Rio Grande do Sul population showed 4% of positive for real time PCR among the adult ticks tested, but when these ticks fed on susceptible dogs, they were not competent in transmitting the bacterium, what may shown that these PCR positive ticks might have residual bacterium DNA in the midgut. Analysis on the salivary gland from the adult ticks from all four tick populations that were either incoculates in vitro with E. canis or feeding upon infected dogs, showed positive for E. canis DNA only in the São Paulo population. Samples of ticks collected from different regions of Brazil were analyzed by real time PCR in order to detect E. canis bacterium DNA. There were collected R. sanguineus from the cities of São Paulo, Cuiabá, Campo Grande, Paulo Afonso, Cachoeira do Sul, São Luís, Uberlândia, Bandeirantes, Petrolina, Ji-Paraná; e amostras de Montevidéu (Uruguay) e Rafaela (Argentina). The State of Maranhão showed 7.94% of positive ticks, that being the highest prevalence found. Samples from State of Rio Grande do Sul, Campo Grande City, alongside with cities of Rafaela (Argentina) and Montevidéu (Uruguay), showed none positive tick for E. canins bacterium DNA. All presented data contribute for a better understanding on the absence of canine ehrlichiosis cases in the Temperate Latin America (Southern South America) and therefore support the hypothesis that this fact is related to the low vetorial competence of the ticks within the R. sanguineus taxon founded in this region, on the other hand, ticks within the R. sanguineus taxon found in Tropical Latin America show high vectorial competence in E. canis transmission.

O presente estudo visou obter informações sobre a epidemiologia da erliquiose canina no Brasil, a partir da caracterização molecular de isolados nacionais e de estudo de prevalência da infecção em cães (Canis familiaris) e carrapatos Rhipicephalus sanguineus. Inicialmente, padronizou-se o isolamento de Ehrlichia canis em cultivo de células DH82, a partir de um cão inoculado com a cepa Jaboticabal, seguida da identificação do isolado pelo sequenciamento de DNA de um fragmento do gene dsb de Ehrlichia. Posteriormente, realizou-se o isolamento de E. canis de um cão naturalmente infectado, atendido no Hospital Veterinário (HOVET) da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. Este novo isolado foi geneticamente caracterizado a partir da PCR almejando fragmentos dos genes dsb, 16S rRNA e P28. Com o estabelecimento do isolado Jaboticabal em cultivo celular, padronizou-se a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), utilizando-a em amostras de soros de 314 cães de áreas urbana e rural do Município de Monte Negro, RO. Finalmente, avaliou-se pela PCR do gene dsb, a freqüência de carrapatos infectados e de cães oriundos de quatro populações de R. sanguineus, uma do município de Monte Negro, RO. e três do estado de São Paulo. Do cão inoculado com o isolado Jaboticabal, constatou-se o crescimento de E. canis em cultivo celular, no 27o dia pós-inoculação, confirmado pela PCR e citologia. Após o seqüenciamento de DNA, o fragmento amplificado a partir do isolado apresentou-se 100% similar a seqüência correspondente ao gene dsb de E. canis depositada no GenBank. O isolamento de E. canis, a partir do cão atendido no HOVET, foi obtido no 14o dia pós-inoculação. Esta nova cepa, designada como isolado São Paulo, apresentou-se idêntica às seqüências do gene dsb e similares às seqüências dos genes 16S r RNA e P28, de outros isolados de E. canis disponíveis no GenBank. Dos soros testados pela RIFI, observou-se prevalência (títulos &plusmn; 40) de 31,2% (98/314), sendo 37,9% (58/153) em cães urbanos e 24,8% (40/161) em cães rurais (P < 0,05) de Monte Negro, Estado de Rondônia. A prevalência de carrapatos infectados (dada como freqüência mínima de infecção) foi de 2,3, 6,2, e 3,7% para as populações 1 (Monte Negro), 2 (Jundiaí, SP), e 3 (São Paulo I, SP), respectivamente (P > 0,05). Nenhum carrapato infectado foi detectado na população 4 (São Paulo II, SP). Os produtos da PCR dos carrapatos e de cães das populações 1, 2 e 3 foram idênticos entre si e à seqüência de E. canis disponível no GenBank. Estes resultados reforçam estudos anteriores, que relataram a infecção por E. canis em cães do Brasil, contudo descreve pela primeira vez no Brasil a infecção natural por E. canis em carrapatos R. sanguineus, tido como o principal carrapatos de cães no país. / The present study was conducted to investigate the canine ehrlichiosis epidemiology in Brazil, through molecular characterization of indigenous isolates and prevalence of infection in dogs (Canis familiaris) and Rhipicephalus sanguineus ticks. Firstly, it was performed the isolation of the Jaboticabal strain of Ehrlichia canis in DH82 cells from an experimentally infected dog, followed by molecular identification of the isolate by sequencing a fragment of the Ehrlichia dsb gene. After that, a new strain of E. canis was isolated from a naturally infected dog, assisted in the Veterinarian Hospital (HOVET) of the Faculty of Veterinary Medicine, University of São Paulo. This isolate was characterized by obtaining dsb, 16S rRNA and P28 nucleotide partial sequences. After the establishment of Jaboticabal strain in DH82 cells, an Indirect Immunofluorescence Test (IFAT) was developed, and 314 urban and rural dogs from Monte Negro Municipality were tested by this technique. Finally the prevalence of E. canis was determined in four different populations of Rhipicephalus sanguineus ticks, being one population from Monte Negro, RO. and three from different areas from São Paulo state using a PCR targeting an erlichial dsb gene fragment. Culture of E. canis Jaboticabal presented positive results by PCR on day 27. The dsb sequence was identical to other E. canis sequences available in GenBank. Cell culture inoculated with material from the dog assisted in the HOVET became positive by day 14 when dsb PCR was positive. This new strain was designated as isolate São Paulo of E. canis and showed to contain identical dsb and high similar partial sequences of 16S rRNA and P28 genes with others E. canis strains available in GenBank. Antibodies Anti-E. canis (titers &plusmn; 40) were detected in 31.2% (98/314) of the dogs, being 37.9% (58/153) in urban and 24.8% (40/161) in rural dogs of Monte Negro; these values were significantly different (P<0.05). The prevalence of infected ticks (given as minimal infection rate) was 2.3, 6.2, and 3.7% for populations 1 (Monte Negro), 2 (Jundiaí, SP), and 3 (São Paulo I, SP), respectively, which were statistically similar (P>0.05). In contrast, no infected tick was detected in population 4 (São Paulo II, SP). DNA sequences were determined for some of the PCR products generated from ticks and dogs from populations 1-3, being all identical to each other and to available sequences of E. canis. These results reinforce previous studies that reported E. canis infecting dogs in Brazil, but report for the first time in Brazil the natural infection of E. canis in its vector, R. sanguineus, which is the commonest tick infesting dog in this country.