Orientador: Janete Dias Almeida / Coorientador: Celina Faig Lima Carta / Banca: Emília Ângela Lo Schiavo Arisawa / Banca: Ana Lia Anbinder / Banca: Alberto José de Araújo / Banca: José Benedito Oliveira Amorim / Resumo: Os carcinógenos do tabaco estão relacionados a diversos tipos de câncer incluindo o carcinoma de células escamosas (CCE) bucal. Aliado ao álcool, o tabaco contribui para o desfecho desfavorável destes casos. A susceptibilidade individual ao câncer pode estar relacionada a expressão das enzimas que metabolizam tais carcinógenos. O objetivo deste trabalho é avaliar a expressão dos genes CYP1A1, CYP1B1, CYP2A6 e CYP2E1 no CCE bucal por meio de qPCR. Foram coletadas amostras de 32 indivíduos com CCE e de 15 controles submetidos a cirurgias bucais por lesões benignas. Foram constituídos quatro grupos: Grupo CCE fumante (n=26), Grupo CCE não fumante (n=6), Grupo controle fumante (n=9) e Grupo controle não fumante (n=6). O Teste de Fagerström para Dependência a Cigarros (TFDC) foi usado para avaliar a dependência nicotínica (DN) e AUDIT para avaliação do consumo de etílicos. Houve diminuição da expressão do gene CYP1B1 nos casos de CCE comparados aos controles. Foram encontradas diferenças estaticamente significativas de expressão gênica de CYP1B1 entre os Grupos CCE fumante e controle fumante (p=0,0018), Grupo CCE não fumante e controle não fumante (p=0,0079) e CCE fumante com CCE não fumante (p=0,0385) e entre os quatro grupos (p<0,0001). Houve diminuição da expressão do CYP2A6 no Grupo CCE fumante em relação ao Grupo controle, mas apenas um paciente do Grupo controle expressou este gene. Houve aumento da expressão de CYP2E1 entre os Grupos CCE fumante e controle fumante (p=0,0424... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tobacco carcinogens are related to various types of cancer, including oral squamous cell carcinoma (OSCC). Allied to alcohol, tobacco contributes to the unfavorable outcome of the cases. Individual cancer susceptibility may be related to an expression of the enzymes that metabolize such carcinogens. The aim of this work is to evaluate the expression of the genes CYP1A1, CYP1B1, CYP2A6 and CYP2E1 on OSCC by qPCR. Samples were collected from 32 individuals with OSCC and 15 controls submitted to oral surgeries due to benign lesions. There were four groups: Smoker SCC group (n = 26), nonsmoker SCC group (n = 6), Smoker control group (n = 9) and nonsmoker control group (n = 6). The Fagerström Test for Cigarette Dependence (TFCD) was used to evaluate nicotinic dependence (ND) and AUDIT for the evaluation of alcohol consumption. There was a decrease in CYP1B1 gene expression in cases of SCC compared to controls. (P = 0.0018); smoker CCE and non-smoker control (p = 0.0079); smoker SCC with nonsmoker SCC (p = 0.0385) and between the four groups (p <0.0001). There was a decreased expression in CYP2A6 in the smoker SCC Group compared to the control group, but only one control group patient expressed this gene. There was an increased expression of CYP2E1 between the smoking and nonsmoking SCC groups (p = 0.0424). In conclusion, large interindividual variability was found in the study of the expression of the genes studied. There was greater expression of CYP1A1 and CYP2E1 in samples from... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Rosina Valeria Lanzellotti Mattiussi Teixeira (rosina.teixeira@unisantos.br) on 2015-04-28T12:44:29Z No. of bitstreams: 1 Victor Miguel Coutinho Fernandes.pdf: 1491721 bytes, checksum: 2c2467271922975844f9dcc9fc53afb8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-28T12:44:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Victor Miguel Coutinho Fernandes.pdf: 1491721 bytes, checksum: 2c2467271922975844f9dcc9fc53afb8 (MD5) Previous issue date: 2013-09-24 / The Cutaneous Squamous Cell Carcinoma (SCC) is the second most common form of skin cancer in the white population worldwide. This carcinoma has shown steady increase in incidence worldwide. Thus, becoming an important public health problem because of its high morbidity and high health service costs. There are few studies evaluating the epidemiological profile of the SCC in the brazilian population and none has specifically been done in the state of Paraíba. OBJECTIVE: To verify the clinical and epidemiological profile of the SCC cases of patients treated at the main referral hospital for cancer treatment in the state of Paraiba from 2009 to 2011, taking into consideration peculiarities of the behavior of this tumor in males and females, as well as the regions the state is divided in. METHODS: A crosssectional study was conducted using secondary data such as sex, age, origin, degree of invasion and tumor differentiation, affected part of the body and largest tumor diameter. It was done a descriptive analysis and used the chi-square test, test to compare two percentages, U Mann-Whitney, Kruskal-Wallis and Dunn's multiple comparison tests. Association analyses were performed and comparison of percentages. The significance level was 5%. RESULTS: There were 1225 cases of SCC, with a 2:1 ratio between men and women (p<0,05), respectively. The average age was 69 years old and the majority of the cases ¿ 940 (77%) - occurred in patients over 60 years old. The sun-exposed regions of the body were the most affected ones with 996 (81,3%) tumors. The head and neck area was the most common place of SCC, with 900 (73,5%) lesions. Most of the identified tumors, i.e. 942 (77%), were of the invasive type; among these, 558 (59%) had moderate grade of differentiation. Men showed SCC in average four years earlier than women (68 vs 72 years). Their SCC was also more aggressive than those identified in women with a higher percentage of poorly differentiated tumors (8,0% vs. 4,2%) (p = 0,02). Besides, men showed a higher proportion of tumors than women when located in the ear (6,9% vs 3,1%) (p=0,048) and chest (15,9% vs 6,7%) (p<0,001). Women had a higher proportion of tumors than men in the lower limbs (7,0% vs 2,1%) (p <0,001). Most patients with tumors, i.e. 643 (52%), came from Zona da Mata ¿ the coastal area of the state. However, considering the regions of the state of Paraíba, there were no statistically significant differences regarding the size of tumors or the degree of invasion and histological differentiation. CONCLUSION: This study has a pioneer character considering it evaluated the profile of the SCC separately from Basal Cell Carcinoma (BCC) in the state of Paraíba. By doing this, it was possible to highlight clinical and epidemiological particularities of the SCC. Doctors and healthcare managers in the state of Paraiba may find the data produced through this study useful in order to take preventive, diagnostic and precocious treatment measures that may contribute to diminish the incidence and morbidity of this malignancy. / O Carcinoma Espinocelular Cutâneo (CEC) é a segunda forma de câncer de pele mais frequente na população branca mundial. Este tumor vem apresentando aumento crescente da incidência em todo o mundo, constituindo-se importante problema de saúde pública devido à sua alta morbidade e aos elevados custos aos serviços de saúde. Existem poucos estudos avaliando o perfil epidemiológico do CEC na população brasileira e nenhum, especificamente, no estado da Paraíba. OBJETIVO: Verificar o perfil clínico-epidemiológico dos casos de CEC dos pacientes atendidos no principal hospital de referência no tratamento do câncer do estado da Paraíba nos 2009 a 2011, observando peculiaridades do comportamento deste tumor nos sexos masculino e feminino, bem como nas mesorregiões que compõem o estado. MÉTODO: Foi realizado um estudo transversal com dados secundários, analisando variáveis como: sexo, idade, procedência, grau de invasão e diferenciação histológica do tumor, local do corpo acometido e tamanho do tumor. Foi realizada análise descritiva e utilizado os testes de qui-quadrado, comparação entre duas porcentagens, teste U de Mann-Whitney, Kruskal-Wallis e teste de comparações múltiplas de Dunn. O nível de significância foi de 5%. RESULTADOS: Foram encontrados 1225 casos de CEC, com uma relação de 2:1 entre homens e mulheres (p<0,05), respectivamente. A média das idades foi de 69 anos, com a maioria - 940 (77%) - dos casos ocorridos em pacientes com mais de 60 anos de idade. As regiões fotoexpostas foram as mais acometidas com 996 (81,3%) tumores. A região da cabeça e pescoço foi a mais comum para o CEC com 900 (73,5%) lesões. A maioria dos tumores identificados foram invasivos ¿ ou seja, 942 (77%) casos ¿ dentre esses, 558 (59%) tinham grau de diferenciação moderado. Os homens apresentaram CEC em média quatro anos antes que as mulheres (68 vs 72 anos). Seus CEC também foram mais agressivos com maior percentual de tumores pouco diferenciados (8,0% vs 4,2%) (p=0,02). Além disso, o sexo masculino apresentou maior proporção de tumores que mulheres quando localizados na orelha (6,9% vs 3,1%) (p=0,048) e no tórax (15,9% vs 6,7%) (p<0,001). As mulheres apresentaram maior proporção de tumores em membros inferiores (7,0% vs 2,1%) (p<0,001). A maioria dos tumores, isto é, 643 (52%) dos casos, veio da Zona da Mata, no litoral do estado. Entretanto, considerando as mesorregiões da Paraíba, não houve diferenças estatisticamente significantes entre as mesmas quanto aos tamanhos de tumores, nem associação estatisticamente significante quanto aos graus de invasão e diferenciação histológica. CONCLUSÃO: O estudo foi pioneiro ao avaliar o perfil do CEC separadamente do Carcinoma Basocelular (CBC) no estado da Paraíba, o que permitiu constatar particularidades clínicas e epidemiológicas desse tumor. Espera-se que os dados obtidos sejam úteis às equipes médicas e aos gestores da saúde no estado da Paraíba para que sejam tomadas medidas de prevenção, diagnóstico e tratamentos precoces que contribuam para a diminuição da incidência e morbimortalidade desta neoplasia.

O carcinoma de células escamosas de cavidade bucal tem alta prevalência e índice de mortalidade considerável entre as principais neoplasias malignas. Acredita-se que carcinógenos químicos promovem a carcinogênese através de danos oxidativos e mutações genéticas, entre outros mecanismos. O organismo evita o acúmulo de espécies reativas de oxigênio (EROs), ou seja, o estresse oxidativo, através da produção endógena de antioxidantes como o -tocoferol, o retinol e a glutationa. Diversos estudos têm demonstrado que a administração de glutamina pode aumentar a produção de glutationa, proteger células de danos oxidativos e alterações genéticas, e, assim, inibir ou retardar a carcinogênese. Esse aminoácido é considerado um agente quimiopreventivo por atuar em alvos moleculares e celulares específicos, no processo de inflamação ou transdução de sinais, além de induzir atividade de enzimas de detoxificação e suprimir proliferação celular. O protocolo de indução de carcinogênese bucal induzida por DMBA, dimetilbenzantraceno dilúido em acetona, aplicado três vezes por semana, foi bem estabelecido em hamsters e sabe-se que a formação de EROs durante sua metabolização pode se difundir a partir do local de geração, para fora da célula, e iniciar a cadeia de peroxidação lipídica. Sabe-se que existe metabolização hepática do DMBA quando aplicado em mucosa jugal. Nesse estudo avaliou-se o efeito da suplementação de glutamina via oral e intragástrica em carcinogênese DMBA-induzida em mucosa de bolsa jugal de hamsters. Dosaram-se níveis de malondialdeído (MDA), principal produto de peroxidação lipídica, e antioxidantes -tocoferol, retinol e glutationa. Obteve-se como resultado a formação de carcinoma de células escamosas na maioria dos animais, independentemente da administração de glutamina, na dosagem testada. Não foram observadas diferenças na quantidade de MDA, glutationa, proteína e retinol no fígado dos animais. Tampouco houve diferença entre os níveis plasmáticos de glutationa entre os grupos. Esses resultados demonstram que não houve estresse oxidativo significativo nos tecidos testados. Porém houve acúmulo de -tocoferol no fígado dos animais tratados com o carcinógeno por 15 semanas, independentemente da administração de glutamina. Conclui-se, portanto, que pode ter ocorrido agressão ao tecido hepático desses animais e que a glutamina não foi eficiente na prevenção de carcinogênese ou agressão hepática. Possivelmente o tecido tumoral apresentaria alteração do equilíbrio oxidante/antioxidante, mas não foi avaliado nesse estudo. / Oral cavity squamous cell carcinoma has a high prevalence and substantial mortality rate among the major malignancies. It is believed that chemical carcinogens promote carcinogenesis by oxidative damage and mutation, among other mechanisms. The body prevents the accumulation of reactive oxygen species (ROS), oxidative stress, through the production of endogenous antioxidants such as -tocopherol, retinol, and glutathione. Several studies have demonstrated that glutamine administration can increase the production of glutathione, protecting cells from oxidative damage and genetic changes, and thus inhibit or delay the carcinogenesis. This amino acid is considered a chemopreventive agent to act on specific molecular and cellular targets, in inflammation or signal transduction, and activity to induce detoxification enzymes and suppress cell proliferation. The dimethylbenzanthracene (DMBA) induced carcinogenesis protocol consists in three times a week application of DMBA diluted in acetone, in hamsters. It is known that the formation of ROS during its metabolism can diffuse from the site of generation, outside the cell, and initiate the lipid peroxidation chain. It is known that there is hepatic metabolism of DMBA when applied to the buccal mucosa. This study evaluated the effect of oral and intragastric glutamine supplementation in DMBA-induced carcinogenesis on the cheek pouch mucosa of hamsters. Levels were assayed for malondialdehyde (MDA), the main product of lipid peroxidation, and the antioxidants -tocopherol, retinol and glutathione. The results show the formation of squamous cell carcinoma in most animals, regardless of this glutamine amount administration. There were no differences in the amount of MDA, glutathione, protein and retinol in the liver of animals. There was no difference between plasma levels of glutathione between groups. These results demonstrate that there was no significant oxidative stress in the tissues tested. However, there was accumulation of -tocopherol in the liver of animals treated with the carcinogen for 15 weeks, regardless of the administration of glutamine. Therefore that may have occurred aggression liver tissue of animals and that glutamine was not effective in the prevention of carcinogenesis or liver injury. Possibly the tumor tissue present shift in the balance oxidant / antioxidant, but it was not evaluated in this study.

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2016-06-22T15:03:16Z No. of bitstreams: 1 vitorrafafelregiani_dissert.pdf: 1149352 bytes, checksum: 542e5f6273639354b00db640f941c027 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-22T15:03:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vitorrafafelregiani_dissert.pdf: 1149352 bytes, checksum: 542e5f6273639354b00db640f941c027 (MD5) Previous issue date: 2015-08-25 / Introduction: DNA methylation plays an important role in regulating gene expression. During tumorigenesis, the hypermethylation of CpG-rich islands in promoter regions (Cytosine phosphodiester Guanine) is a mechanism that can inactivate tumor suppressor genes and contribute to the development of cancer. Objective: This study aimed to evaluate the methylation of promoter regions of tumor suppressor genes RASSF1A (Ras association domain family member 1) and MGMT (O-6-methylguanine-DNA methyltransferase) in squamous cell carcinoma of the head and neck. Methods: The methylation analysis of promoter regions of RASSF1A and MGMT genes was performed using the High Resolution Melting (HRM) in 42 and 37 tumor tissue samples, respectively. Samples of tissue adjacent to the tumor or peripheral blood were used as controls. Results: For the RASSF1A gene, 50% (21 of 42) of tumor tissue samples analyzed were methylated, whereas for MGMT of 37 tumor tissue samples analyzed, 17 (46%) showed methylation. Statistical analysis between pairs of tumor samples and controls (tissue adjacent to the site of tumor and peripheral blood) showed significant differences in the presence of methylation for the RASSF1A gene (P = 0.027, Chi-square test) and the MGMT gene (P = 0.002, Chi-square test). The evaluation of the presence of methylation between tumor tissue and surrounding tissue showed no significant difference for RASSF1A genes (P = 1.0) and MGMT (P = 0.38). For the subset of tumor tissue and peripheral blood statistic was significant for RASSF1A (P = 0.005) and MGMT (P = 0.002) genes. Analysis of the presence of methylation in tumors relative to non-tumor tissues (tissues adjacent to tumor or peripheral blood) in different anatomical sites of primary occurrence showed that in oral cavity and pharynx no statistically significant difference for the RASSF1A gene (P = 0.233) relative to non-tumor samples; MGMT gene statistical results were significant (P = 0.033). In the larynx, the statistical results were significant for the RASSF1A gene (P = 0.04) compared to non-tumor samples, while for the MGMT gene, the result was not statistically significant (P = 0.998). The presence of the methylation of the MGMT gene in both genes simultaneously, RASSF1A and MGMT, were associated with the category N (P = 0.045 and P = 0.035, respectively). For the RASSF1A gene was not observed this association (P = 0.093). The analysis by multiple logistic regression of the influence of epidemiological factors (gender and age), risk factors (smoking and drinking) and clinical parameters of the tumor for the presence of methylation showed no significant association for these variables. Conclusions: The prevalence presence of methylation in the promoter region of RASSF1A and MGMT genes in tumor tissue of the pairs of samples (tumor and non-tumor tissue) suggests the involvement of these genes in the process of squamous cells carcinoma of the head and neck, in particular of the MGMT gene in tumors of the oral cavity and pharynx and RASSF1A gene in larynx tumors. No was observed association between methylation of RASSF1A and MGMT genes and age, gender, the tobacco and alcohol consumption and clinical tumor parameters. / Introdução: A metilação do DNA desempenha um papel importante na regulação da expressão gênica. Durante a tumorigênese, a hipermetilação em regiões promotoras ricas em ilhas CpG (Cytosine phosphodiester Guanine) é um mecanismo que pode inativar genes supressores de tumor e contribuir para o desenvolvimento do câncer. Objetivo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a metilação das regiões promotoras dos genes supressores de tumor RASSF1A (Ras association domain family member 1) e MGMT (O-6-methylguanine-DNA methyltransferase) em carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço. Casuística e Métodos: A análise de metilação das regiões promotoras dos genes RASSF1A e MGMT foi realizada pela técnica High Resolution Melting (HRM) em 42 e 37 amostras de tecidos tumorais, respectivamente. Amostras de tecido adjacente ao tumor ou de sangue periférico foram utilizadas como controle. Resultados: Para o gene RASSF1A, 50% (21 de 42) das amostras de tecidos tumorais analisadas foram metiladas, enquanto para o MGMT, das 37 amostras de tecidos tumorais analisadas, 17 (46%) apresentaram metilação. A análise estatística entre os pares de amostras tumorais e controles (tecido adjacente ao tumor e sangue periférico) mostrou diferença significante quanto à presença de metilação para o gene RASSF1A (P=0,027, teste de Qui-quadrado) e para o gene MGMT (P=0,002, teste de Qui-quadrado). A avaliação da presença de metilação entre subgrupos de tecido tumoral e tecido adjacente não mostrou diferença significante para os genes RASSF1A (P=1,0) e MGMT (P=0,38). Para o subgrupo de tecido tumoral e sangue periférico o resultado estatístico foi significante para os genes RASSF1A (P=0,005) e MGMT (P=0,002). A análise da presença de metilação nos tumores em relação aos tecidos não tumorais (tecidos adjacentes ou sangue periférico) nos diferentes sítios anatômicos de ocorrência primária mostrou que, em cavidade oral e faringe não houve diferença estatística significante para o gene RASSF1A (P=0,233) em relação às amostras não tumorais; para gene MGMT o resultado estatístico foi significante (P=0,033). Em laringe, o resultado estatístico foi significante para o gene RASSF1A (P=0,04) em relação às amostras não tumorais, enquanto para o gene MGMT, o resultado estatístico não foi significante (P=0,998). A presença de metilação no gene MGMT bem como em ambos os genes concomitantemente, RASSF1A e MGMT, foi associada com a categoria N (P=0,045 e P=0,035, respectivamente). Para o gene RASSF1A não foi observada tal associação (P=0,093). A análise por meio da regressão logística múltipla da influência dos fatores epidemiológicos (gênero e idade), dos fatores de risco (tabagismo e etilismo) e parâmetros clínicos do tumor quanto à presença de metilação não mostrou associação significante para essas variáveis. Conclusões: A presença de metilação nas regiões promotoras dos genes RASSF1A e MGMT apenas no tecido tumoral da maioria dos pares de amostras (tecido tumoral e não tumoral) sugere o envolvimento desses genes no processo neoplásico de cabeça e pescoço, em especial do gene MGMT em tumores da cavidade oral e faringe e do gene RASSF1A na laringe. Não há associação entre metilação dos genes RASSF1A e MGMT e a idade, o gênero, os hábitos tabagista e etilista e os parâmetros clínicos do tumor.

Resumo: O líquen plano (LP) é caracterizado como uma doença crônica de cunho autoimune que apresenta prevalência estimada de 2% na população em geral. Há grande controvérsia quanto à classificação da Organização Mundial de Saúde de que este seria uma desordem potencialmente maligna. O presente trabalho tem como proposição avaliar a expressão das proteínas p53, MDM2 e SUMO-1 em lesões de LP bucal e comparar a expressão destas proteínas com a observada em displasia epitelial (DE) bucal e carcinoma de células escamosas (CCE) bucal. A amostra por interesse foi constituída por cinco grupos de lesões em mucosa jugal. O primeiro grupo foi constituído por amostras de mucosa com aspecto clínico de normalidade (MN), o segundo por hiperplasia fibrosa inflamatória (HFI), o terceiro por LP, o quarto por DE e o quinto grupo por CCE. Estas amostras teciduais foram submetidas a exame histoquímico pela técnica da hematoxilina-eosina e exame imunoistoquímico para anticorpo anti-p53, anti-MDM2 e anti-SUMO-1. Os dados foram tabulados e tratados pelos testes de Kolmogorov-Smirnov e exato de Fisher. Os resultados do presente estudo mostraram que não houve diferença estatisticamente significante da expressão de p53 quando comparado LP com DE (p=0.2042) e com CCE (p=0.0656), esta diferença estava presente quando o LP foi comparado a HFI (p=0.00001) e a MN (p=0.0007). A diferença na expressão da MDM2 não foi estatisticamente significante quando comparado LP com DE (p=1.0) e com CCE (p=0.9972), mas não estava presente quando o LP foi comparado a HFI (p=0.0005) e a MN (p=0.0052). Em relação à proteína SUMO-1, houve diferença estatisticamente significante quando comparado LP com DE (p=0.0492) e com CCE (p=0.0001), na comparação de LP com HFI (p=1.0) e com MN (p=0.8302) não houve diferença estatisticamente significante. Conclui-se pela necessidade de estudos para esclarecer... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Lichen planus (LP) is a chronic autoimmune disease with an estimated prevalence of 2% in the general population. Controversy exists regarding the World Health Organization classification of LP as a potentially malignant disease. The objective of this study was to investigate the expression of proteins p53, MDM2 and SUMO-1 in oral LP lesions and to compare the expression of these proteins between LP and oral epithelial dysplasia (OED) and oral squamous cell carcinoma (OSCC). The sample consisted of the following five groups of cheek mucosa lesions was studied: normal oral mucosa (NM), inflammatory fibrous hyperplasia (IFH), LP, OED, and OSCC. The tissue samples were stained with hematoxylineosin for histochemical analysis and submitted to immunohistochemistry using anti-p53, anti-MDM2 and anti-SUMO-1 antibodies. The results were analyzed by the Kolmogorov-Smirnov test and Fisher's exact test. No significant difference in the expression of p53 was observed between LP and OED (p=0.2042) or OSCC (p=0.0656). However, there was a significant difference when LP lesions were compared to IFH (p=0.00001) and NM (p=0.0007). Expression of MDM2 differed significantly between LP and IFH (p=0.0005) and NM (p=0.0052), but not between LP and OED (p=1.0) or OSCC (p=0.9972). A significant difference in the expression of SUMO-1 was observed between LP lesions and OED (p=0.0492) and OSCC (p=0.0001), but not between LP and IFH (p=1.0) or NM (p=0.8302). Further studies are needed to determine the role of inflammation as a possible malignant transformation in cases of LP. / Orientador: Janete Dias Almeida / Coorientador: Fabio Daumas Nunes / Banca: Adriana Aigotti Haberbeck Brandão / Mestre

Orientador: Eder Ricardo Biazolla / Coorientador: Airton Abrahão Martin / Banca: Herculano da Silva Martinho / Banca: Glauco Issamu Miyahara / Banca: Eurípedes de Oliveira Marinho / Banca: Luiz Paulo Kowalski / Resumo: O câncer é uma das doenças mais sérias que têm ameaçado a saúde e a vida e sua influência tem aumentado. Dentre os cânceres, o de boca constitui-se um grave problema de saúde pública em várias regiões do mundo, inclusive em países desenvolvidos, estando entre os 10 tipos mais comuns. A espectroscopia FT-Raman é uma ferramenta analítica moderna cujo uso no diagnóstico do câncer poderá apresentar inúmeras vantagens para os pacientes, resultados mais rápidos com o mínimo de invasibilidade. Neste estudo, foram analisados espectros FT-Raman de 81 amostras de tecido neoplásico e 48 de mucosa bucal normal, de 26 e 18 pacientes, respectivamente. Um laser Nd:YAG à 1064nm foi utilizado como fonte de excitação no FT-Raman, RFS 100/S Espectrômetro, BrukerÒ, Alemão. As biópsias foram divididas em dois fragmentos, um seguiu a rotina de procedimentos para diagnóstico. O outro foi imediatamente armazenado em tubo criogênico de 1,2 ml Nalgene® e congelado em galão de nitrogênio líquido, numa temperatura de 196ºC negativos, para preservação e manutenção de todas as estruturas teciduais. Os espectros FT-Raman obtidos foram analisados através da Análise dos Componentes Principais (PCA). A análise foi executada comparando o tecido normal com o CEC. A PCA foi usada para verificar as diferenças estatísticas na amostra. A técnica de PCA provou ser eficiente para análise, mostrando que a Espectroscopia FT-Raman apresentou resultados significativos. / Abstract: Cancer is one of the most serious diseases threatening human health and life, and the influence of this disease becomes increasing. Among the cancers, oral cancer is constituted in a serious health problem in several areas of the world even in developed countries. Globally oral cancer is one among the 10 most common cancers. FT-Raman spectroscopy is a modern analytical tool and it is believed that its use for cancer diagnosis will lead to several advantages for patients, faster results and a minimization of invasivity. In this study, were analyzed FT-Raman spectra of 81 sample of malignant human oral lesions, Squamous Cell Carcinoma (SCC) and 48 of non-diseased, of 26 and 18 patient, respectively. A Nd: YAG laser at 1064nm was used as the excitation source in the FT-Raman, RFS 100/S Spectrometer, BrukerÒ, Germany. The biopsies were divided in two fragments, one followed the routine of procedures for diagnosis. The other was stored immediately in cryogenic tube of 1,2 ml Nalgene® and frozen in gallon of liquid nitrogen, in a temperature of 196ºC negative, for preservation and maintenance of all the tissues structures. Principal Components Analysis (PCA) was applied to FT-Raman spectra of non-diseased and SCC. PCA was used to verify the statistical differences in the sample. The technique of PCA proved to be efficient for analysis, showing that FT-Raman Spectroscopy showed significant results. / Doutor

Orientador: Ana Sueli Rodrigues Cavalcante / Banca: Marília Trierveiler Martins / Banca: Janete Dias Almeida / Resumo: A queilite actínica (QA) é uma lesão multifocal do vermelhão do lábio com potencial de malignização para carcinoma epidermóide (CE). O principal fator etiológico envolvido nestas doenças é a exposição excessiva ou em longo prazo à radiação ultravioleta (UV) do sol. Além dos danos diretos aos tecidos do lábio, a radiação UV induz mastócitos (MCs) a liberarem substâncias que participam do processo de imunossupressão permitindo o desenvolvimento neoplásico. Estas células também são associadas a um pior prognóstico e favorecimento a metástase de diversas neoplasias. O objetivo deste trabalho foi analisar a densidade de MCs a fim de melhorar o entendimento da patogenia da QA e o possível mecanismo de sua progressão para o CE. Estudou-se 66 casos de QA, com diferentes graus de atipia epitelial, 57 de CE e 28 casos de mucosa de lábio com lesão benigna não relacionada à exposição solar (grupo controle), diagnosticados clínica e histologicamente, no Departamento de Biociências e Diagnóstico Bucal da FOSJC-UNESP. A amostra foi corada histoquimicamente com hematoxilina-eosina e azul de toluidina e imunoistoquimicamente com anticorpo anti-triptase. Em todos os casos a contagem de MCs foi realizada em microscópio de luz, com aumento final de 400x, em três campos com área de 0,04 mm2 cada. A densidade de MCs no CE, QA e grupo controle foi de 36,91 ± 17,43; 22,17 ± 11,49; 8,86 ± 3,98 ( triptase) e 22,71 ± 11,48; 13,30 ± 6,08; 7,29 ± 3,22 ( azul de toluidina) cells/mm2 , respectivamente. Os dados foram analisados estatisticamente pelos testes de Kruskal-wallis, Wilcoxon e Dunn, adotando-se nível de significância de 5%. Houve diferença estatisticamente significante na densidade de MCs entre os três grupos estudados (p=0,0001). Concluiu-se que os MCs participam das alterações que ocorrem na matriz extra-celular da QA, o que pode ser um indício do favorecimento à malignização da QA para CE. / Abstract: Actinic cheilitis (AC) is a multifocal lesion of lip vermillion with malignant potential to squamous cell carcinoma (SCC). The main etiology involved in this disease is excessive or long exposure to ultraviolet radiation (UV) of sunlight. UV radiation damages lip tissues, furthermore it is able to activate mast cells (MCs) that participate of immunossupression process, contributing to tumour development. These cells are associated with a worst prognosis and contribute to tumour metastasis. The aim of this study was perform an assessment of MCs density which can improve the knowledge of AC pathogenesis and the possible mechanism of its progression to SCC. Sixty six cases of AC with different levels of epithelial atypia, fifty seven cases of SCC and twenty eight cases of lip mucosa with benign lesion non related to sunlight exposure (Control group) were studied in Department of Biosciences and Oral Diagnosis of São Paulo State University/UNESP. Samples were stained by histochemistry with hematoxylin/eosin, toluidine blue and, by immunohistochemistry with antitryptase. Quantitative analysis was done in all cases by light microscopy (magnification x400), in three fields with 0,04 mm2 each one. Mast cell density in SCC, AC and control group was 36,91 ± 17,43; 22,17 ± 11,49; 8,86 ± 3,98 cells/mm2 (triptase) and 22,71 ± 11,48; 13,30 ± 6,08; 7,29 ± 3,22 cells/mm2 (toluidine blue), respectively. Data was analyzed by Kruskal-wallis, Wilcoxon and Dunn's tests, p-values of < 0,05. There was statistically significant difference in mast cell density between the experimental and control groups (p=0,0001). This study concluded that mast cells contribute to changes in extracelular matrix in AC and may be used as indicators for disease progression in lip carcinogenesis. / Mestre

Orientador: Paula Rahal / Banca: Laura Sichero / Banca: João Manuel Grisi Candeias / Banca: Paola Jocelan Scarin Provazzi / Banca: Fátima Pereira de Souza / Resumo: O carcinoma de pênis (CEP) é um tumor epitelial invasivo raro com alta morbidade decorrente da própria doença e/ou de seu tratamento. O perfil socioeconômico e cultural dos pacientes dificulta o diagnóstico precoce, tratament o e seguimento dos enfermos. Pacientes sem tratamento geralmente morrem dentro de dois anos após diagnóstico devido à proliferação celular regional ou a metástases distantes. Não há padrão nos sistemas de estadiamento e nas condutas clínicas, resultando em dificuldades na abordagem terapêutica. Comparado ao câncer cervical, poucos estudos moleculares em CEP foram realizados. O presente projeto teve como objetivo geral identificar genes diferencialmente expressos em tecidos penianos tumorais e normais e o possível papel do vírus do papiloma humano (HPV) no desenvolvimento de CEP. Diferenças na expressão gênica entre tecidos tumorais e normais foram verificadas pela metodologia de RaSH (rapid subctration hybridization), que selecionou 5 genes possivelmente rel acionados à carcinogênese ( KIAA1033, NAMPT, RPL6, CDKN2A e ANXA1) com expressão alterada em tecidos tumorais. A validação das alterações de expressão destes genes foi realizada por polymerase chain reaction (reação em cadeia da polimerase, PCR) em tempo real. Tanto os genes como as proteínas de ANXA1 como CDKN2A apresentaram aumento de expressão em pacientes com presença de HPV de alto risco em comparação com tecidos negativos para HPV. Por imunohistoquímica foi possível estabelecer correlação entre alterações na expressão da proteína anexina A1 e a presença de HPV de alto risco. Pacientes portadores de CEP provenientes de duas regiões (São Paulo e Pará) foram avaliados para a presença de HPV por PCR convencional. Amostras positivas foram genotipadas por hib ridização... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Penile carcinoma is a rare epithelial tumor with high morbidity due to own disease and/or treatment. The socio -economic and cultural profile of the patients hampers early diagnosis, treatment and follow-up. Without treat ment patients usually dies within two years after first diagnosis due to regional cellular proliferation or distant metastasis. There is no standard in staging systems or in clinical procedures, resulting in difficulties in the therapeutic approach. Compar ed to cervical cancer, there are few molecular studies about this tumor. The present work aimed to identify differentially expressed genes in tumor and normal penile tissues and the role of human papillomavirus (HPV) in the development of this tumor. Differences in gene expression between tumoral and normal tissues were accessed by RaSH (rapid subctration hybridization) methodology, which selected five possibly carcinogenesis related genes (KIAA1033, NAMPT, RPL6, CDKN2A and ANXA1) with altered expression in tumor tissues. The validation of gene expression changes was performed by real time polymerase chain reaction (PCR). The ANXA1 and CDKN2A, both genes and proteins, showed superexpression in patients with high-risk HPV compared to HPV negative tissues. Immunohistochemical assays established a correlation between alterations in the superexpression of annexin A1 and the presence of high risk HPV. Penile cancer harboring patients from two regions (São Paulo and Pará) was assessed for HPV presence by conventional PCR. Positive samples were genotyped by reverse hybridization-based line probe assay (INNO -LiPA). The overall HPV prevalence in single or multiple infections was significantly greater in Pará (81.67%) than in São Paulo (64.10%). A wilder range of genotypes were found in Pará, suggesting that the genotypes circulating in the population of Pará... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ana Elizabete Silva / Coorientador: Eny Maria Goloni Bertollo / Banca: Patricia Pintor dos Reis / Banca: Cristiane Damas Gil / Resumo: Alterações nos níveis de expressão de moduladores da resposta inflamatória, como a Anexina-A1 (AnxA1/ANXA1) e a Galectina-1 (Gal-1/LGALS1) têm sido observadas em diversos tipos de câncer. O câncer colorretal, um dos modelos da associação inflamação-câncer progride, na sequência, do epitélio normal para adenoma (AD) e adenocarcinoma (ADC). Objetivos: Avaliar a expressão gênica e proteica da AnxA1 e Gal-1 e o índice de proliferação celular (IP) em amostras de AD, ADC esporádico e das mucosas normais adjacentes, assim como investigar a ocorrência de correlação entre os níveis de expressão de ambos os mRNA e de associação com fatores de risco (idade, gênero, tabagismo e etilismo) e sítio anatômico de origem da lesão. Materiais e Métodos: As análises foram realizadas pelas técnicas de PCR quantitativa em tempo real (qPCR), para quantificar os níveis de mRNA de ANXA1 e LGALS1 em 70 biópsias de lesão (27AD e 43ADC) e 58 de mucosa normal adjacente (19 e 39 respectivamente), e de imuno-histoquímica, para caracterizar a expressão proteica da AnxA1 e Gal-1 em 25 biópsias de lesão (10AD e 15ADC) e 16 de mucosa normal adjacente (6 e 10 respectivamente), como também investigar o IP pela detecção do antígeno Ki-67 em 44 biópsias de lesão (19AD e 25ADC) e 16 de mucosa normal adjacente (8 em ambas). Resultados: A expressão relativa de ANXA1 apresentou-se elevada em comparação à mucosa normal tanto no AD (RQ=1,11; P=0,040), como no ADC (RQ=2,33; P<0,001). Contudo, LGALS1 apresentou expressão relativa aumentada apenas no ADC em comparação à mucosa normal (RQ=1,85; P<0,001), enquanto no grupo AD foi observada expressão basal (RQ=0,90; P=0,319). A comparação entre as lesões mostrou que ambos os genes apresentam-se significantemente mais expressos no ADC em comparação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Changes in expression levels of inflammatory response modulators, such as Annexin-A1 (AnxA1/ANXA1) and Galectin-1 (Gal-1/LGALS1) have been observed in several types of cancer. Colorectal cancer, one of the models of inflammation-cancer association, progresses, in sequence, from normal epithelium to adenoma (AD) and adenocarcinoma (ADC). Objectives: To evaluate the gene and protein expression of AnxA1 and Gal-1 and the cell proliferation index (IP) in samples of AD, sporadic ADC and adjacent normal mucosa, as well as to investigate the occurrence of correlation between the mRNA expression levels and association with risk factors (age, gender, smoking and drinking habits) and anatomic site of lesion origin. Materials and Methods: The analyzes were performed by quantitative real-time PCR (qPCR) technique to quantify the levels of ANXA1 and LGALS1 mRNA in 70 biopsies of lesions (27AD and 43ADC) and 58 adjacent normal mucosa (19 and 39 respectively), and immunohistochemistry technique to characterize the protein expression of AnxA1 and Gal-1 in 25 biopsies of lesions (10AD and 15ADC) and 16 adjacent normal mucosa (6 and 10 respectively), and also to investigate the IP by detection of Ki-67 antigen in 44 biopsies of lesions (19AD and 25ADC) and 16 adjacent normal mucosa (8 in both). Results: The relative expression of ANXA1 showed higher compared to adjacent normal mucosa in both AD (RQ=1.11; P=0.040) and ADC (RQ=2.33; P<0.001). However, LGALS1 mRNA showed overexpression only in ADC compared to normal mucosa (RQ=1.85; P<0.001), while in AD group it was observed basal expression (RQ=0.90; P=0.319). The comparison between lesions showed that both genes were significantly more expressed in ADC compared to AD (ANXA1: P=0.039; LGALS1: P=0.019). In both lesion groups it was observed positive correlation between the mRNA expression of these genes... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O carcinoma adenóide cístico e o carcinoma epidermóide são neoplasmas de origem epitelial que afetam a cavidade oral. O carcinoma adenóide cístico pode apresentar-se em glândulas salivares maiores e menores, possue alta propensão de invasão perineural e o padrão de infiltracão: sólido, tubular e cribriforme. O carcinoma epidermóide foi descrito como um processo multifatorial envolvendo agentes físicos, químicos e virais, capazes de afetar o metabolismo celular e induzir a proliferação neoplásica. As proteínas c-jun e junB são membros da familia JUN, capazes de homodimerizar ou heterodimerizar com c-fos ou com outras proteinas bzip. Evidências das funções específicas das subunidades do AP-1 foram mostradas por c-jun e junB, que podem atuar antagonicamente ou não no controle da transformação celular, diferenciação e expressão do AP-1 dependente do gene alvo. Mas a função de ambos é complexa e pode depender do tipo celular. A cJun N Terminal quinase (JNK) é um importante regulador positivo e/ou negativo do AP1. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão das proteínas c-jun, pcjun, junB e JNK em carcinoma adenóide cístico de glândula salivar e no carcinoma epidermóide da cavidade oral, através das técnicas de imunohistoquímica, imunofluorescência e western-blotting, em biopsias de tecido e linhagens celulares provenientes destas lesões. Os resultados evidenciaram a expressão da proteina cjun no carcinoma adenoide cistico e de cjun e junB no carcinoma epidermóide. Nao foi detectada a expressao de JNK nas neoplasias estudadas. A expressão destas proteínas no carcinoma adenóide cístico e no carcinoma epidermoide sugere que estas participam na progressão tumoral e/ou tumorigênese destas neoplasias compartilhando uma via em comum. / Adenoid cystic carcinoma and squamous cell carcinoma are epithelial neoplasms that occur in the oral cavity. Adenoid cystic carcinoma can appear in minor and major salivary glands and it presents a high propensity to invade perineural areas and can show different patterns of growth: solid, tubular and cribiform. Squamous cell carcinoma was described as a multifactorial process involving chemical, physical and viral agents which are able to affect the celular metabolism and induce neoplasic proliferation The proteins cjun and junB are members of the JUN family able to homodimerizes or heterodimerizes with cfos and other bzip proteins. Evidence of specific functions of AP1 subunits was shown for cjun and junB that can act anthagonically or not on the control of celular transformation, differentiation and expression of AP1 depending on the target gene. But the way both of them function is complex and may depend on the cellular type. cJun N terminal quianse (JNK) is an important positive or negative regulator of AP1 The aim of this study is to evaluate the expressions of cjun, pcjun junB and JNK in the adenoid cystic carcinoma of salivary glands and squamous cell carcinoma from the oral cavity through inmunohistotochemistry, inmunofluorescence and western blot techniques in tissue biopsy and cell lines from both tumors. The results will show the expression of cjun protein in the adenoid cyctic carcinoma and cjun and junB expression in the squamous cell carcinoma. JNK expression was not detected in the studied tumors. The expression of these proteins in adenoid cystic and squamous cell carcinoma suggests that they participate on the tumor progression and tumorigenesis of these neoplasms, that can share a common pathway