O ICDAS (International Caries Detection and Assessment System) é um sistema de classificação de cárie atual que busca ser estandardizado e globalizado. No entanto este sistema ainda não abrange um alto número de pessoas envolvidas e enfrenta o desafio da ampliação da sua utilização. As ferramentas pedagógicas são importantes para conseguir divulgar eficazmente estes novos conceitos (Fejerskov O 2004). O objetivo desta dissertação foi a construção de um objeto educacional para capacitar cirurgiões-dentistas e estudantes de odontologia no uso do ICDAS para o diagnóstico de lesões de cárie em superfícies oclusais. O objeto foi desenvolvido usando o Projeto Homem Virtual e as tecnologias educacionais interativas relacionadas. Para exploração da percepção de dificuldade de alguns subtemas considerados importantes na elaboração e inclusão do objeto educacional, foram aplicadas 2 planilhas de conteúdos a alunos de graduação do diurno (n=36), noturno (n=31), alunos de pós-graduação (n=24) e, docentes da área (n=7). Os subtemas percebidos com maior grau de dificuldade para todos os grupos foram: Histopatologia da doença cárie e, detecção visual e tátil de lesões de cárie em superfícies proximais. O produto final produzido enfatizou nestes subtemas e pretende avaliar os conteúdos em termos de usabilidade e utilidade em uma etapa posterior. / The ICDAS (International Caries Detection and Assessment System) is a current caries classification system that seeks to be standardized and globalized. However the system still does not cover a large number of people involved and faces the challenge of expanding its use. The teaching tools are important then, to achieve effectively the dissemination of these new concepts (Fejerskov O, 2004). The aim of this project was the construction of a learning object to train dentists and dental students in the use of the ICDAS for the diagnosis of caries on occlusal surfaces. The object was developed using the Virtual Man Project and the related interactive educational technologies. To explore the perception on the difficulty of some subtopics considered as important in the development and inclusion of the learning object, two worksheets were applied to undergraduate students (n = 67), graduate students (n = 24) and teachers in the area (n = 7). The subthemes perceived with a greater degree of difficulty for all groups were: Histopathology of caries, and visual and tactile detection of caries on proximal surfaces. The final product here presented emphasized in those subtopics. In order to evaluate the usability and usefulness of the educational object a later estage of evaluation is under construction.

O ICDAS (International Caries Detection and Assessment System) é um sistema de classificação de cárie atual que busca ser estandardizado e globalizado. No entanto este sistema ainda não abrange um alto número de pessoas envolvidas e enfrenta o desafio da ampliação da sua utilização. As ferramentas pedagógicas são importantes para conseguir divulgar eficazmente estes novos conceitos (Fejerskov O 2004). O objetivo desta dissertação foi a construção de um objeto educacional para capacitar cirurgiões-dentistas e estudantes de odontologia no uso do ICDAS para o diagnóstico de lesões de cárie em superfícies oclusais. O objeto foi desenvolvido usando o Projeto Homem Virtual e as tecnologias educacionais interativas relacionadas. Para exploração da percepção de dificuldade de alguns subtemas considerados importantes na elaboração e inclusão do objeto educacional, foram aplicadas 2 planilhas de conteúdos a alunos de graduação do diurno (n=36), noturno (n=31), alunos de pós-graduação (n=24) e, docentes da área (n=7). Os subtemas percebidos com maior grau de dificuldade para todos os grupos foram: Histopatologia da doença cárie e, detecção visual e tátil de lesões de cárie em superfícies proximais. O produto final produzido enfatizou nestes subtemas e pretende avaliar os conteúdos em termos de usabilidade e utilidade em uma etapa posterior. / The ICDAS (International Caries Detection and Assessment System) is a current caries classification system that seeks to be standardized and globalized. However the system still does not cover a large number of people involved and faces the challenge of expanding its use. The teaching tools are important then, to achieve effectively the dissemination of these new concepts (Fejerskov O, 2004). The aim of this project was the construction of a learning object to train dentists and dental students in the use of the ICDAS for the diagnosis of caries on occlusal surfaces. The object was developed using the Virtual Man Project and the related interactive educational technologies. To explore the perception on the difficulty of some subtopics considered as important in the development and inclusion of the learning object, two worksheets were applied to undergraduate students (n = 67), graduate students (n = 24) and teachers in the area (n = 7). The subthemes perceived with a greater degree of difficulty for all groups were: Histopathology of caries, and visual and tactile detection of caries on proximal surfaces. The final product here presented emphasized in those subtopics. In order to evaluate the usability and usefulness of the educational object a later estage of evaluation is under construction.

Es presenta una breu síntesi dels resultats i les conclusions de cadascun dels treballs en què es divideix la tesi. 1. Quantitat de DNA. S'han aportat dades inèdites en 57 espècies i 133 poblacions del gènere Artemisia i gèneres afins i també s'ha cobert el 20% del gènere Tripleurospermum. Com a resultats remarcables, hi ha correlació positiva entre la quantitat de DNA, el nivell de ploïdia i el nombre de cromosomes i negativa entre la quantitat de DNA per genoma haploide i el nivell de ploïdia. En Artemisia aquest paràmetre varia significativament depenent del subgènere, essent el subgènere Tridentatae el que té una quantitat de DNA més elevada per genoma haploide i el subgènere Dracunculus el que la té més baixa. A més, l'heterogeneïtat en valors C dins d'un subgènere és reflex del suport que presenta en la filogènia. Es posa de manifest, doncs, el valor d'aquest paràmetre en l'avaluació d'espècies o grups d'emplaçament problemàtic. S'ha aprofundit l'estudi de quantitat de DNA en el subgènere Tridentatae, essent aquest el més ben cobert. Se n'ha analitzat la variació en un context filogenètic i considerant dades d'hàbitat, ecologia o morfologia. Es presenta la hipòtesi que les artemísies endèmiques nord-americanes mostren un contínuum d'una estratègia vital (tipus r, creixement ràpid, cicles vitals curts i elevada producció de llavors) a una altra (tipus K, creixement lent, cicles llargs i producció de llavors baixa), essent aquest procés acompanyat d'un augment considerable de la mida del genoma. 2. Cariologia i citogenètica clàssica. S'ha confirmat l'existència de dos nombres cromosòmics bàsics en Artemisia i s'ha vist que moltes de les espècies que poblen hàbitats extrems són poliploides, la qual cosa dóna suport a les hipòtesis que connecten tolerància ecològica amb poliploïdia. 3. Citogenètica molecular: hibridació in situ fluorescent (FISH) i bandatge amb fluorocroms en espècies del subgènere Tridentatae (Artemisia). El cariotip típic del grup consta de cromosomes metacèntrics i submetacèntrics, és molt simètric i homogeni i té tres loci positius per a cromomicina i per als dos tipus de DNA ribosòmic, 5S i 18S-5.8S-26S sempre en posicions telomèriques. S'ha demostrat que la seqüència telomèrica tipus Arabidopsis (TTTAGGG)n és present en aquest grup. Un dels resultats més interessants és la confirmació de la colocalització d'ambdues regions del DNA ribosòmic, que s'estén a tots els loci cromosòmics marcats; semblaria doncs que ambdós tipus de DNA ribosòmic no existeixen independentment en Artemisia, sinó que han evolucionat de manera concertada.4. Estudis de sistemàtica molecular en el subgènere Tridentatae d'Artemisia. Aquesta part del treball pretén aconseguir un marc filogenètic que reflecteixi la història evolutiva del grup. S'han seqüenciat quatre regions del DNA, dues de nuclears (ITS i ETS) i dues de cloroplàstiques (trnS-trnfM i trnC-trnS). Els arbres filogenètics generats a partir de l'ITS i l'ETS per una banda i d'ambdues regions cloroplàstiques per l'altra han produït filogènies incongruents. Les reconstruccions proporcionades per les regions nuclears estan d'acord amb els caràcters morfològics o altres estudis moleculars previs, mentre que la filogènia procedent de les regions cloroplàstiques no hi concorda. La regió ITS defineix clarament el que considerem el grup Tridentatae sensu stricto (97% provabilitat posterior). A més, l'ETS coincideix amb l'ITS a treure de Tridentatae s. s. espècies conflictives però clàssicament considerades com a membres d'aquest subgènere, com A. bigelovii, A. pygmaea, i A. rigida. Com a nou resultat, afegim que Sphaeromeria, gènere estretament relacionat amb el grup Tridentatae, queda immers dins del gènere Artemisia i és polifilètic i, per tant, un grup artificial. Les incongruències trobades fan pensar que la història evolutiva del grup Tridentatae és més semblant a una xarxa que no pas a un arbre filogenètic. Aquest treball il·lustra els problemes que poden aparèixer en intentar abordar la reconstrucció filogenètica de tàxons tan estretament relacionats i d'evolució relativament recent. / An approach to the study of the evolution and systematics in Artemisia and close genera in the scope of molecular cytogenetics and phylogeneticsBriefly, a synthesis of the main results and conclusions of this PhD thesis is presented:1. Genome size. New data for 57 species and 133 populations from genera Artemisia and allies is provided as well as for almost 20% of the genus Tripleurospermum. A positive relationship between genome size, ploidy level and chromosome number, and a negative one between monoploid genome size and ploidy have been found. In Artemisia, genome size varies significantly depending on the subgenus. The heterogeneity of C-value within a subgenus also reflects its support in the phylogeny. Additionally, genome sizes in the Tridentatae have been completely assessed, and its variation analyzed in a phylogenetic context, considering also habitat, ecological and morphological data. The North American endemic Artemisia seem to present a continuum from an "r" life strategy to a "K" life strategy, being this process accompanied by a considerable increase in genome size.2/3. Classical and molecular (FISH and chromosome banding) cytogenetics. The existence of two basic chromosome numbers is showed once more, as it is the prevalence of polyploidy. The typical Tridentatae karyotype consists of mostly metacentric and submetacentric chromosomes, with the same three positive loci for cromomycin and for both (5S and 18S-5.8S-26S) ribosomal DNA regions. The presence of the Arabidopsis-type telomeric repeat is reported for the first time in the genus. One of the most interesting outcomes is that both rDNA regions appear always co-localized; it would mean that concerted evolution has acted to homogenize this unusual rDNA repeat. 4. Molecular systematics in the Tridentatae. Four DNA regions (two nuclear, ITS and ETS, and two chloroplastic, trnS-trnfM and trnC-trnS) have been sequenced. The phylogenetic trees obtained from the nuclear data and from the chloroplast data produce inconsistent results. The phylogeny provided by the nuclear regions parallels to some extent results of previous works. ITS region clearly defines the Tridentatae sensu stricto, and coincides with ETS in placing out of this group some classically conflictual species. The genus Sphaeromeria, closely linked to the Tridentatae, appears as polyphyletic, hence artificial. The incongruousness found suggests that the relationships between these taxa are best explained as networks rather than as trees.

A saliva pode ser utilizada como fonte eficiente de DNA para tecnicas de identificacao humana, as quais sao aceitas como prova legal, sendo o parecer do profissional superlativo para a formulacao da sentenca. Esse material pode ser coletado de maneira indolor e nao-invasiva e utilizado mesmo quando armazenado em diferentes condicoes. Este trabalho objetiva avaliar a qualidade do DNA obtido de saliva humana armazenada e sua aplicabilidade da identificacao de pessoas. Foram analisadas amostras salivares de n=100 sujeitos da pesquisa, coletadas nas formas de saliva in natura e saliva coletada de swab. A saliva foi armazenada a -20ºC. Apos 7 dias, realizou-se a primeira etapa, quando o DNA foi extraido das 200 amostras de saliva utilizando-se a resina InstaGene (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) e, posteriormente, submetido a PCR e a eletroforese. Apos 180 dias de armazenamento da saliva, repetiu-se a mesma tecnica da primeira fase, porem em apenas 20 amostras, selecionadas aleatoriamente do total de 100 amostras de saliva coletadas por swab bucal. Os resultados da primeira etapa indicaram que o DNA foi extraido com sucesso em 96% das reacoes realizadas para as 200 amostras de saliva, fato observado tambem quando se analisou as amostras em separado, de saliva in natura (94%) e saliva advinda do swab (98%). Alem disso, nao houve diferencas estatisticamente significantes na extracao do DNA entre as duas formas de coleta de saliva utilizadas. Na segunda fase, foi possivel a deteccao do gene alvo nas 20 amostras analisadas (100%). Posteriormente, objetivando-se aprofundar a analise do DNA salivar de maneira mais proxima ao padrao exigido em um processo de identificacao, o gene SIX3-2 foi testado nas amostras e tambem foi feita a digestao do produto da PCR com a enzima de restricao MbO1 para avaliar polimorfismo do gene ADRA-2. Os resultados mostraram que a quantidade e a qualidade do DNA advindo de saliva do swab bucal, bem como as tecnicas empregadas estao adequadas a analise forense do DNA. Portanto, a saliva humana e bastante util como fonte de DNA e pode ser armazenada, em temperatura e condicoes ideais, para analise posterior. / The saliva can be used as efficient DNA source for human identification techniques in which they are accepted as forensic proof, being the superlative professionals opinion for the sentence formulation. This material can be collected in a painless and noninvasive way and it is used even when stored in different conditions. This paper aims at evaluating DNA quality obtained from stored human saliva and its applicability in people identification. Saliva samples from n=100 research subjects were analyzed. They were collected in two ways: in natura and swab. The saliva was stored at the temperature of -20°C. After 7 days, the first phase was performed, when the DNA was extracted from the 200 saliva samples using the InstaGene resin (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) and, subsequently, submitted to PCR and electrophoresis. After 180 days of the saliva storage, the same technique used in the first phase was repeated; however, in only 20 samples, selected at random from the total of 100 ones collected from mouth swab. The results of the first phase indicated that the DNA was successfully extracted in 96% of the reactions performed for the 200 saliva samples. This fact was also observed when the separate saliva samples in natura (94%) and swab (98%) were analyzed. In addition, there were no statistically significant differences in the extraction of the DNA between the two ways used for collecting saliva. In the second phase, the target gene detection was possible in the 20 samples analyzed (100%). Subsequently, the SIX3-2 gene was tested in the samples with the objective of deepening the salivary DNA analysis as close as the standard required in an identification process. Also, the digestion of the PCR product with the enzyme of MbO1 restriction was performed to evaluate the polymorphism of the ADRA- 2 gene. The results showed that the DNA quantity and quality from the mouth swab saliva, as well as the techniques applied are suitable for the forensic analysis of DNA. Therefore, the human saliva is very useful as DNA source and can be stored in ideal temperature and conditions for further analysis.

A saliva pode ser utilizada como fonte eficiente de DNA para tecnicas de identificacao humana, as quais sao aceitas como prova legal, sendo o parecer do profissional superlativo para a formulacao da sentenca. Esse material pode ser coletado de maneira indolor e nao-invasiva e utilizado mesmo quando armazenado em diferentes condicoes. Este trabalho objetiva avaliar a qualidade do DNA obtido de saliva humana armazenada e sua aplicabilidade da identificacao de pessoas. Foram analisadas amostras salivares de n=100 sujeitos da pesquisa, coletadas nas formas de saliva in natura e saliva coletada de swab. A saliva foi armazenada a -20ºC. Apos 7 dias, realizou-se a primeira etapa, quando o DNA foi extraido das 200 amostras de saliva utilizando-se a resina InstaGene (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) e, posteriormente, submetido a PCR e a eletroforese. Apos 180 dias de armazenamento da saliva, repetiu-se a mesma tecnica da primeira fase, porem em apenas 20 amostras, selecionadas aleatoriamente do total de 100 amostras de saliva coletadas por swab bucal. Os resultados da primeira etapa indicaram que o DNA foi extraido com sucesso em 96% das reacoes realizadas para as 200 amostras de saliva, fato observado tambem quando se analisou as amostras em separado, de saliva in natura (94%) e saliva advinda do swab (98%). Alem disso, nao houve diferencas estatisticamente significantes na extracao do DNA entre as duas formas de coleta de saliva utilizadas. Na segunda fase, foi possivel a deteccao do gene alvo nas 20 amostras analisadas (100%). Posteriormente, objetivando-se aprofundar a analise do DNA salivar de maneira mais proxima ao padrao exigido em um processo de identificacao, o gene SIX3-2 foi testado nas amostras e tambem foi feita a digestao do produto da PCR com a enzima de restricao MbO1 para avaliar polimorfismo do gene ADRA-2. Os resultados mostraram que a quantidade e a qualidade do DNA advindo de saliva do swab bucal, bem como as tecnicas empregadas estao adequadas a analise forense do DNA. Portanto, a saliva humana e bastante util como fonte de DNA e pode ser armazenada, em temperatura e condicoes ideais, para analise posterior. / The saliva can be used as efficient DNA source for human identification techniques in which they are accepted as forensic proof, being the superlative professionals opinion for the sentence formulation. This material can be collected in a painless and noninvasive way and it is used even when stored in different conditions. This paper aims at evaluating DNA quality obtained from stored human saliva and its applicability in people identification. Saliva samples from n=100 research subjects were analyzed. They were collected in two ways: in natura and swab. The saliva was stored at the temperature of -20°C. After 7 days, the first phase was performed, when the DNA was extracted from the 200 saliva samples using the InstaGene resin (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA) and, subsequently, submitted to PCR and electrophoresis. After 180 days of the saliva storage, the same technique used in the first phase was repeated; however, in only 20 samples, selected at random from the total of 100 ones collected from mouth swab. The results of the first phase indicated that the DNA was successfully extracted in 96% of the reactions performed for the 200 saliva samples. This fact was also observed when the separate saliva samples in natura (94%) and swab (98%) were analyzed. In addition, there were no statistically significant differences in the extraction of the DNA between the two ways used for collecting saliva. In the second phase, the target gene detection was possible in the 20 samples analyzed (100%). Subsequently, the SIX3-2 gene was tested in the samples with the objective of deepening the salivary DNA analysis as close as the standard required in an identification process. Also, the digestion of the PCR product with the enzyme of MbO1 restriction was performed to evaluate the polymorphism of the ADRA- 2 gene. The results showed that the DNA quantity and quality from the mouth swab saliva, as well as the techniques applied are suitable for the forensic analysis of DNA. Therefore, the human saliva is very useful as DNA source and can be stored in ideal temperature and conditions for further analysis.