Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-07T12:46:03Z No. of bitstreams: 1 Tatiana Barros Ferreira Lira.pdf: 440885 bytes, checksum: cdf11c6935644d329907c03c11cbdce8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-07T12:46:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiana Barros Ferreira Lira.pdf: 440885 bytes, checksum: cdf11c6935644d329907c03c11cbdce8 (MD5) Previous issue date: 2010-02-22 / Goat’s milk is the product derived from the complete milking, uninterrupted, in conditions of hygiene, goat healthy, well fed and rested. Casein is the major protein component of milk, constituting about 80% of the total fraction of milk proteins. The control of hydrolytic parameters of milk casein is an important step for obtaining products with high nutritional quality, desirable functional properties, organoleptic characteristics appropriate to the consumer. Casein is the first choice as a protein source in the preparation of protein hydrolysates, was obtained by isoelectric precipitation and enzymatic hydrolysis was performed using trypsin, pepsin and papain. The effect of pH, temperature, time and enzyme:substrate ratio on the hydrolysis degree was evaluated according to the results obtained in the factorial statistical design (24). Electrophoresis in SDS-PAGE was performed to monitor the hydrolysis products. The best values of degree hydrolysis obtained for the enzymes papain, trypsin and pepsin were 28,17%, 29,55% and 38,27%, respectively . It was possible to establish the conditions for hydrolysis of goat’s milk Moxotó casein using proteolytic enzymes, but the pepsin, showed the best hydrolysis degree and was detected by SDS-PAGE peptides just molecular weight below 14,4kDa. / O leite de cabra é o produto oriundo da ordenha completa, ininterrupta, em condições de higiene, de animais da espécie caprina sadios, bem alimentados e descansados. A caseína é o principal componente protéico do leite, constituindo aproximadamente 80% da fração total de proteínas do leite. O controle dos parâmetros hidrolíticos da caseína do leite é uma etapa importante para se obter produtos com qualidade nutricional elevada, propriedades funcionais desejáveis e características organolépticas agradáveis ao consumidor. A caseína foi escolhida como fonte protéica na preparação de hidrolisados enzimáticos, obtida por precipitação isoelétrica e submetida à hidrólise enzimática usando-se tripsina, pepsina e papaína. O efeito do pH, temperatura, tempo e relação enzima: substrato sobre o grau de hidrólise foi avaliado de acordo com os resultados obtidos no planejamento fatorial completo (24). A eletroforese em SDS-PAGE foi realizada para avaliação dos produtos de hidrólise. Os melhores valores de grau de hidrólise obtidos para as enzimas papaína, tripsina e pepsina foram 28,17%, 29,55% e 38,27%, respectivamente. Os resultados possibilitaram estabelecer as melhores condições de hidrólise da caseína do leite de cabra Moxotó, com as enzimas proteolíticas utilizadas, porém a pepsina apresentou melhor grau de hidrólise e foi possível detectar pela eletroforese SDSPAGE apenas peptídeos com peso molecular abaixo de 14,4kDa.

Os sistemas de liberação de fármacos são parte integrante da investigação farmacêutica. Grande ênfase tem sido dada à utilização de polímeros hidrofílicos naturais como carreadores devido às vantagens inerentes a seu baixo custo, biocompatibilidade e segurança de uso. Os objetivos principais deste trabalho foram a preparação e avaliação de sistemas microparticulados a base de pectina e caseína e o estudo da liberação in vitro do aciclovir contido nas micropartículas. Esses sistemas visam uma liberação prolongada do fármaco aumentando sua biodisponibilidade oral. O efeito de parâmetros como pH, força iônica, viscosidade, proporção e concentração total de polímeros foi avaliado. A melhor condição para ocorrência da coacervação foi determinada por mobilidade eletroforética, rendimento do coacervado e microscopia ótica. A pectina e a caseína podem interagir formando complexos insolúveis. A formação do complexo coacervado foi espontânea e ocorreu em condições brandas no intervalo de pH em que os polímeros encontram-se carregados com cargas opostas. As dispersões foram secas em Spray dryer, resultando em partículas bastante pequenas (6µm) e homogêneas. Através da microscopia ótica foi possível observar que o fármaco se encontrava no interior das micropartículas. O pH (4,0-5,0) do meio influenciou decididamente a formação dos complexos coacervados, e a melhor relação mássica para o par pectina/caseína foi 1:1. Proporções superiores ou inferiores reduziram significativamente a extensão da coacervação. O aumento no teor de sólidos totais (4-8% p/v) bem como a adição de sal (0-120 mMol) não suprimiu a formação ou a estabilidade do sistema. Foram preparadas matrizes hidrofílicas contendo as micropartículas encapsuladas com aciclovir. O estudo de dissolução in vitro demonstrou que a liberação do aciclovir foi mais lenta nos sistemas matriciais e microparticulados do que a do fármaco livre. Entretanto, as matrizes apresentaram perfis de liberação sustentada mais adequados do que os sistemas microparticulados. / Drug delivery systems became an integral part of pharmaceutical research. The use of natural hydrophilic polymers as drug carriers has received considerable attention in the last few years, especially from the viewpoint of cost, environmental concerns and safety. The main purpose of this study was to report and discuss the preparation of a microparticulate system by mixing the negatively charged pectin and the amphoteric casein and also the in vitro evaluation of polymeric microparticulate systems loaded with acyclovir. Such drug delivery system was conceived to prolong the therapeutic activity of acyclovir and increase its oral biovailability.The influence of pH, total biopolymers concentration, viscosity of dispersions, pectin/casein ratio and ionic strength were reported. Zeta potential measurements and dry coacervate yield were used to determine the optimal conditions for complex coacervation and were supplemented by optical microscopy. Pectin/casein in aqueous mixture may interact and form insoluble complexes. The complex formation was spontaneous and occurs under mild conditions. The phenomenon of complex coacervation mainly occurs at a pH range when both polyelectrolytes carry opposite charges. Microparticulate preparations were spray dried and results showed that the microparticles obtained were always quite small, the diameters of 80% of the particles did not exceed 6m, and physicochemical characterization showed that the drug was homogeneously dispersed inside the microparticles. Pectin/casein ratio and pH range were found to mainly affect the microparticles formation and encapsulation efficiency. The complex coacervation was dependent on pH (4,0-5,0) and the optimum pectin/casein ratio was 1:1. Superior or inferior proportion significantly decreased the coacervate yield. Increasing in total biopolymer concentration (4-8% w/v) and salt addition (0-120 mMol) did not inhibit the formation and stability of pectin/casein systems. Hydrophilic matrices containing acyclovir loaded microparticles were also prepared. The in vitro dissolution profile of acyclovir from the microparticulate systems and matrices were slower than that for the free drug. However, the sustained release characteristic was more prominent in matrices than in microparticles formulations

O objetivo do estudo foi determinar a composição e as características físico-químicas (pH, acidez, estabilidade ao álcool, sólidos totais, gordura, lactose, teor de extrato seco desengordurado e proteína total), contagem de células somáticas (CCS) e as frações de caseína (α-S1, α-S2, β e κ) dos leites identificados como leite instável não ácido (LINA) e de leites estáveis à prova de álcool a 78% (v/v). A amostragem contemplou todas as propriedades leiteiras fornecedoras de leite de um laticínio localizado no município de Casa Branca - Estado de São Paulo, nos meses de março, maio, julho e setembro de 2007. Considerou-se, como critério de identificação de LINA, a amostra de leite de conjunto de cada propriedade que apresentasse instabilidade à prova do álcool a 72% (v/v) e acidez inferior a 18ºD. Do total de amostras instáveis ao teste do álcool a 72% (v/v), 64,77% foram identificadas como LINA. A freqüência de amostras de LINA variou de acordo com o mês de amostragem, indicando uma possível influência sazonal sobre a ocorrência deste problema nos rebanhos analisados. No mês de julho, a incidência de LINA foi maior, coincidindo com o período seco, quando a disponibilidade e a qualidade das forragens são reduzidas. No mês de setembro, época de chuvas em que ocorre maior oferta de forragens de melhor qualidade, a incidência de LINA diminuiu. Em julho, houve um aumento significativo nos níveis de gordura, lactose e CCS, observando-se, porém, uma diminuição significativa nas concentrações de proteína bruta nas amostras. Neste mês, notou-se também uma menor concentração de κ-caseína no LINA, embora as diferenças entre as caseínas α-S1, α-S2, β e κ do LINA e do leite estável não tenham sido significativas nos meses de amostragem. Os resultados evidenciaram que a ocorrência de LINA é freqüente nos rebanhos leiteiros da região estudada, o que pode acarretar perdas significativas à indústria de laticínios e aos produtores devido ao descarte do leite. / The aim of this study was to determinate the composition and the physical-chemical characteristics (pH, acidity, alcohol stability, total solids, fat, lactose, non fat solids and total protein), somatic cells counts (SCC) and casein fractions (α-S1, α-S2, β and κ) of unstable non-acid and stable milks at the alcohol test at 78% (v/v). Samples were collected from all the dairy farms that provide milk to a dairy plant located in Casa Branca - São Paulo State. Sampling procedures were done on March, May, July and September 2007. Milk samples from each dairy farm presenting instability to alcohol test at 72% (v/v) and acidity less than 18ºD were considered as unstable non-acid milk. From the total of unstable samples to alcohol test at 72% (v/v), 64.77% were identified as unstable non-acid milk. The frequency of unstable non-acid milk samples varied according the month of sampling, hence indicating a possible seasonal influence on the occurrence of this problem in the dairy herds studied. On July, the incidence of unstable non-acid milk was higher, coinciding with the dry season, when the quality and availability of forage are reduced. On September, at rainfall season, when the availability and quality of forage are better, the incidence of unstable non-acid milk decreased. There was a significant increase in the levels of fat, lactose and SSC in samples collected on July, although a significant decrease was observed in the concentrations of total protein. In this month, a lower concentration of κ-casein was also noted in unstable non-acid milks. However, the differences between the α-S1, α-S2, β and κ casein of unstable non-acid milk and stable milk were not significant in all sampling months. Results showed that the occurrence of unstable non-acid milk is common in dairy herds in the studied area, which can cause significant losses to the dairy industry and dairy farms due to the discharging of milk.

O objetivo do estudo foi determinar a composição e as características físico-químicas (pH, acidez, estabilidade ao álcool, sólidos totais, gordura, lactose, teor de extrato seco desengordurado e proteína total), contagem de células somáticas (CCS) e as frações de caseína (α-S1, α-S2, β e κ) dos leites identificados como leite instável não ácido (LINA) e de leites estáveis à prova de álcool a 78% (v/v). A amostragem contemplou todas as propriedades leiteiras fornecedoras de leite de um laticínio localizado no município de Casa Branca - Estado de São Paulo, nos meses de março, maio, julho e setembro de 2007. Considerou-se, como critério de identificação de LINA, a amostra de leite de conjunto de cada propriedade que apresentasse instabilidade à prova do álcool a 72% (v/v) e acidez inferior a 18ºD. Do total de amostras instáveis ao teste do álcool a 72% (v/v), 64,77% foram identificadas como LINA. A freqüência de amostras de LINA variou de acordo com o mês de amostragem, indicando uma possível influência sazonal sobre a ocorrência deste problema nos rebanhos analisados. No mês de julho, a incidência de LINA foi maior, coincidindo com o período seco, quando a disponibilidade e a qualidade das forragens são reduzidas. No mês de setembro, época de chuvas em que ocorre maior oferta de forragens de melhor qualidade, a incidência de LINA diminuiu. Em julho, houve um aumento significativo nos níveis de gordura, lactose e CCS, observando-se, porém, uma diminuição significativa nas concentrações de proteína bruta nas amostras. Neste mês, notou-se também uma menor concentração de κ-caseína no LINA, embora as diferenças entre as caseínas α-S1, α-S2, β e κ do LINA e do leite estável não tenham sido significativas nos meses de amostragem. Os resultados evidenciaram que a ocorrência de LINA é freqüente nos rebanhos leiteiros da região estudada, o que pode acarretar perdas significativas à indústria de laticínios e aos produtores devido ao descarte do leite. / The aim of this study was to determinate the composition and the physical-chemical characteristics (pH, acidity, alcohol stability, total solids, fat, lactose, non fat solids and total protein), somatic cells counts (SCC) and casein fractions (α-S1, α-S2, β and κ) of unstable non-acid and stable milks at the alcohol test at 78% (v/v). Samples were collected from all the dairy farms that provide milk to a dairy plant located in Casa Branca - São Paulo State. Sampling procedures were done on March, May, July and September 2007. Milk samples from each dairy farm presenting instability to alcohol test at 72% (v/v) and acidity less than 18ºD were considered as unstable non-acid milk. From the total of unstable samples to alcohol test at 72% (v/v), 64.77% were identified as unstable non-acid milk. The frequency of unstable non-acid milk samples varied according the month of sampling, hence indicating a possible seasonal influence on the occurrence of this problem in the dairy herds studied. On July, the incidence of unstable non-acid milk was higher, coinciding with the dry season, when the quality and availability of forage are reduced. On September, at rainfall season, when the availability and quality of forage are better, the incidence of unstable non-acid milk decreased. There was a significant increase in the levels of fat, lactose and SSC in samples collected on July, although a significant decrease was observed in the concentrations of total protein. In this month, a lower concentration of κ-casein was also noted in unstable non-acid milks. However, the differences between the α-S1, α-S2, β and κ casein of unstable non-acid milk and stable milk were not significant in all sampling months. Results showed that the occurrence of unstable non-acid milk is common in dairy herds in the studied area, which can cause significant losses to the dairy industry and dairy farms due to the discharging of milk.

A doença de Alzheimer (DA) é uma desordem neurodegenerativa progressiva, caracterizada pela perda de neurônios corticais e subcorticais. Padrões patológicos da doença de Alzheimer incluem a presença de lesões neurofibrilares que consistem no acúmulo da proteína ?- amilóide e dos emaranhados neurofibrilares, decorrentes da hiperfosforilação da proteína Tau. Apenas dois grupos principais de fármacos são utilizados para o tratamento da DA, os inibidores colinesterásicos e antagonistas do receptor N-metil-D-aspartato. Entretanto, a fosforilação de proteínas pelas proteínas cinases constituem um dos principais mecanismos pelos quais as células se utilizam para regular seu metabolismo e demais funções e desequilíbrios nestas atividades estão relacionados a uma infinidade de doenças. O número elevado de isoformas de proteínas cinases 1 (CK1) encontradas na DA e sua associação em marcadores de lesões neurodegenerativas indicam sua participação nas etapas finais da degeneração, comum tanto à DA quanto a outras desordens neurodegenerativas. A abordagem da proteína CK1 como alvo terapêutico para a DA é promissora uma vez que os compostos usuais utilizados para diminuir a produção de ?-amilóide também bloqueiam a quebra de outras proteínas, causando graves efeitos colaterais. Cada vez mais as ferramentas de bioinformática vêm sendo utilizadas como auxílio na redução de custos e tempo para as pesquisas. Dentre estas técnicas destaca-se a triagem virtual, que reúne um conjunto de técnicas utilizadas de forma sequencial com o objetivo de selecionar compostos protótipos para os alvos desejados. Neste trabalho, foram utilizadas técnicas de triagem virtual baseada em ligantes e estrutura, a partir de uma base de 500 mil compostos, selecionando 35 compostos com perfil de atividade inibitória para a enzima CK1. Destes, os compostos 24, 25, 36, 39 41 e 42 apresentaram resultados significativos com relação ao potencial de inibição da enzima CK1?. Entre aqueles que já foram submetidos a ensaios de inibição enzimática, 25 apresentou seletividade para CK1?, com 40% de inibição. Para aqueles compostos com melhor potencial de inibição à concentração de 10 ?M será determinado o IC50 e uma extensa análise dos resultados será realizada futuramente. / Alzheimer\'s disease (AD) is a progressive neurodegenerative disorder characterized by loss of cortical and subcortical neurons. Pathological patterns of Alzheimer\'s disease include the presence of neurofibrillary lesions consisting of the accumulation of amyloid-? protein and the neurofibrillary tangles, resulting of hyperphosphorylated Tau protein. Only two major groups of drugs are used for treatment of AD, cholinesterase inhibitors and antagonists of Nmethyl- D-aspartate receptor. The phosphorylation of proteins by protein kinases constitute one of the major mechanisms which cells use to regulate their metabolism and imbalances in these activities are related to a series of diseases. The high number of isoforms of protein kinase 1 (CK1) found in AD and its association with neurodegenerative markers of indicate their participation in the final stages of degeneration, common to both AD and other neurodegenerative disorders. The approach of CK1 protein as a therapeutic target for AD is promising as the usual compounds used to reduce the production of amyloid-? also block the breakdown of other proteins, causing severe side effects. Increasingly, bioinformatics tools have been used as an aid in reducing costs and time to research. Among these techniques highlights the virtual screening, which includes a set of techniques used sequentially with the aim of select compounds prototypes for the desired target. Ligand and structure-based virtual screening techniches from a 500 thousand database resulted in 35 selected with inhibitory profile for CK1 enzyme were used in this study. The compounds 24, 25, 36, 39 41 and 42 had significan potential for CK1? enzyme inhibition. Among those submitted to enzyme inhibition assays, compound 25 showed selectivity for CK1? , with 40 % inhibition. For those compounds with the best inhibitory concentration at 10 mM and the IC50 will be given an extensive analysis of the results will be held in the future .

Os objetivos gerais do presente estudo foram avaliar o efeito do polimorfismo genético da kappa-caseína, da raça e da estação do ano sobre as características físico-químicas (acidez, pH e crioscopia), composição (gordura, lactose, sólidos totais, contagem de células somáticas, uréia, proteína bruta, proteína verdadeira, nitrogênio não protéico e nitrogênio não caseinoso) e estabilidade do leite. Foram selecionados 11 rebanhos leiteiros comerciais, sendo cinco deles da raça Holandesa e seis da raça Girolanda, dos quais foram amostradas em média 122 vacas em lactação por rebanho, totalizando 1350 vacas amostradas em três períodos: 2 no período seco e 1 no período chuvoso. As vacas selecionadas foram analisadas quanto a composição e propriedades físico-químicas do leite, assim como para a determinação do polimorfismo de kappa-caseína. O presente trabalho foi dividido em dois estudos, no primeiro avaliou-se os efeitos da raça e estação do ano sobre características físico-químicas, composição e estabilidade do leite. Foi observado efeito de raça sobre acidez titulável, pH, lactose, uréia e estabilidade do leite. O efeito de sazonalidade mostrou-se significativo sobre pH, crioscopia, teores de lactose, uréia, proteína bruta, sólidos totais, contagem de células somáticas, proteína verdadeira, caseína, nitrogênio não protéico e estabilidade térmica do leite. Em animais da raça Girolanda, foram observados no período seco maiores teores de sólido totais. O ponto crioscópico do leite sofreu efeito do período de coleta somente em animais da raça Holandesa, onde valores mais altos foram observados durante o período seco. Os teores de lactose apresentaram maiores médias no período seco em animais da raça Holandesa. Os teores de uréia sofreram efeito de raça e período de coleta estudado. A proteína bruta do leite sofreu efeito dos fatores raça e período de coleta, sendo que vacas da raça Holandesa e Girolanda apresentam maiores teores no período seco. A concentração de caseína do leite sofreu efeito significativo do período de coleta. A estabilidade térmica do leite sofreu influência da raça, pois o leite de vacas da raça Holandesa mostraram-se mais estáveis do que os da raça Girolanda. A sazonalidade é um fator determinante para a estabilidade do leite, pois o leite mostrou-se mais estável no período chuvoso que em período seco. No segundo estudo foram avaliados o polimorfismo genético da kappa-caseína em vacas Holandesas e Girolandas e o efeito deste sobre características físico-químicas, de composição e estabilidade térmica do leite. A freqüência do alelo A foi maior do que a do alelo B no que diz respeito ao gene da kappa-caseína. Com relação às características físico-químicas do leite, não houve efeito do polimorfismo do gene da kappa-caseína sobre teores de gordura, sólidos totais, lactose, contagem de células somáticas e uréia do leite. Não foram observados efeitos do polimorfismo genético do gene para kappa-caseína sobre a composição protéica do leite, sendo que teores de proteína bruta, nitrogênio não protéico, nitrogênio não caseinoso e proteína verdadeira não sofrem influência. A estabilidade do leite frente à prova do álcool não sofreu influencia do polimorfismo genético de kappa-caseína / The objective of this study were to determine the effects of kappa-casein gene polymorphisms, breed and season on physical-chemical properties (acidity, pH and cryoscopy), composition (fat, lactose, total solids, somatic cells count, urea, crude protein, true protein, non protein nitrogen and non casein nitrogen) and stability of milk. For this aim 11 dairy herds were selected, six of them composed of Girolando cows and five from Holstein cows, in average milk samples were taken of 112 cows from each herd, collected three times: twice in dry season and once on rainy season. Each cow were analyzed for milk composition, physico-chemical properties, and to determine its kappa-casein polymorphism. This study was divided in two, the first one analyzed possible breed and season effects over milk physico-chemical characteristics, composition and stability. Breed effect was observed over acidity, pH, lactose, urea and milk stability. Season effects was significant for pH, cryoscopy, lactose, urea, CP, total solids, SCC, TP, casein, EqNPN and heat milk stability. In cows Girolando it was observed highest total solids in dry season. Milk cryoscopy had season effects only on Holstein cows, with highest results in dry season. Lactose concentration was greatest in Holstein cow in dry season. Urea concentration showed breed and season effect on this study. Crude protein was affected by breed and season, in dry season the concentration were highest for Holstein and Girolanda. Casein milk concentration demonstrated season effect. Heat milk stability showed breed stability, milk from Holstein cow were more stable that milk from Girolanda cows. Season is a determinant factor for milk stability, milk showed more stable in rainy season than during dry period. The second study analyzed: kappa-casein gene polymorphisms in Holstein and Girolando cows and its effects over milk physico-chemical characteristics, milk composition and milk heat stability. Kappa-casein allele A had a higher frequency, than allele B, in Girolando and Holstein cows in comparison with other polymorphisms. No effect of kappa-casein polymorphism was observed on milk phisico-chemical characteristics and on milk fat, total solids, lactose, SCC, and milk urea. There were no difference for milk protein composition (EqNPN, NCNC, TP, casein and EqNCN) for kappa-casein polymorphism. Milk alcohol stability did not showed effect of gene polymorphism

A doença de Alzheimer (DA) é uma desordem neurodegenerativa progressiva, caracterizada pela perda de neurônios corticais e subcorticais. Padrões patológicos da doença de Alzheimer incluem a presença de lesões neurofibrilares que consistem no acúmulo da proteína ?- amilóide e dos emaranhados neurofibrilares, decorrentes da hiperfosforilação da proteína Tau. Apenas dois grupos principais de fármacos são utilizados para o tratamento da DA, os inibidores colinesterásicos e antagonistas do receptor N-metil-D-aspartato. Entretanto, a fosforilação de proteínas pelas proteínas cinases constituem um dos principais mecanismos pelos quais as células se utilizam para regular seu metabolismo e demais funções e desequilíbrios nestas atividades estão relacionados a uma infinidade de doenças. O número elevado de isoformas de proteínas cinases 1 (CK1) encontradas na DA e sua associação em marcadores de lesões neurodegenerativas indicam sua participação nas etapas finais da degeneração, comum tanto à DA quanto a outras desordens neurodegenerativas. A abordagem da proteína CK1 como alvo terapêutico para a DA é promissora uma vez que os compostos usuais utilizados para diminuir a produção de ?-amilóide também bloqueiam a quebra de outras proteínas, causando graves efeitos colaterais. Cada vez mais as ferramentas de bioinformática vêm sendo utilizadas como auxílio na redução de custos e tempo para as pesquisas. Dentre estas técnicas destaca-se a triagem virtual, que reúne um conjunto de técnicas utilizadas de forma sequencial com o objetivo de selecionar compostos protótipos para os alvos desejados. Neste trabalho, foram utilizadas técnicas de triagem virtual baseada em ligantes e estrutura, a partir de uma base de 500 mil compostos, selecionando 35 compostos com perfil de atividade inibitória para a enzima CK1. Destes, os compostos 24, 25, 36, 39 41 e 42 apresentaram resultados significativos com relação ao potencial de inibição da enzima CK1?. Entre aqueles que já foram submetidos a ensaios de inibição enzimática, 25 apresentou seletividade para CK1?, com 40% de inibição. Para aqueles compostos com melhor potencial de inibição à concentração de 10 ?M será determinado o IC50 e uma extensa análise dos resultados será realizada futuramente. / Alzheimer\'s disease (AD) is a progressive neurodegenerative disorder characterized by loss of cortical and subcortical neurons. Pathological patterns of Alzheimer\'s disease include the presence of neurofibrillary lesions consisting of the accumulation of amyloid-? protein and the neurofibrillary tangles, resulting of hyperphosphorylated Tau protein. Only two major groups of drugs are used for treatment of AD, cholinesterase inhibitors and antagonists of Nmethyl- D-aspartate receptor. The phosphorylation of proteins by protein kinases constitute one of the major mechanisms which cells use to regulate their metabolism and imbalances in these activities are related to a series of diseases. The high number of isoforms of protein kinase 1 (CK1) found in AD and its association with neurodegenerative markers of indicate their participation in the final stages of degeneration, common to both AD and other neurodegenerative disorders. The approach of CK1 protein as a therapeutic target for AD is promising as the usual compounds used to reduce the production of amyloid-? also block the breakdown of other proteins, causing severe side effects. Increasingly, bioinformatics tools have been used as an aid in reducing costs and time to research. Among these techniques highlights the virtual screening, which includes a set of techniques used sequentially with the aim of select compounds prototypes for the desired target. Ligand and structure-based virtual screening techniches from a 500 thousand database resulted in 35 selected with inhibitory profile for CK1 enzyme were used in this study. The compounds 24, 25, 36, 39 41 and 42 had significan potential for CK1? enzyme inhibition. Among those submitted to enzyme inhibition assays, compound 25 showed selectivity for CK1? , with 40 % inhibition. For those compounds with the best inhibitory concentration at 10 mM and the IC50 will be given an extensive analysis of the results will be held in the future .

Resumo: Objetivo: O objetivo do estudo foi comparar os efeitos de uma dose-única de caseína micelar (MCa) com a ingestão de caseína micelar associada à proteína do soro do leite (whey protein) (1:1) sobre a resposta aminoacidêmica e a via de sinalização do alvo da rapamicina (mTOR) em músculos esqueléticos de ratos durante a fase de inatividade (período de luz ambiente). Métodos: Após 10h de jejum durante a fase ativa, os ratos foram alimentados com MCa ou PB (5,6g proteína por kg de massa corporal) por gavagem e a água foi usada como veículo (grupo controle, PLA). Em 30 e 450 min após a suplementação das proteínas, os animais foram sacrificados e as amostras de sangue e do músculo gastrocnêmio foram coletadas para análises bioquímicas. Resultados: Os níveis plasmáticos dos aminoácidos de cadeia ramificada (BCAA) aumentaram após as suplementações de MCa (3 vezes) e PB (3,2 vezes). Ainda mais relevante, os níveis estimulatórios da fosforilação da mTOR e do seu alvo downstream p70S6K foram maiores 30 min após MCa (2,6 e 2,9 vezes, respectivamente) e PB (2,8 e 3,8 vezes, respectivamente) quando comparado com PLA. As concentrações plasmáticas de leucina forma correlacionadas com a ativação da mTOR (r = 0,60; p < 0,05) e p70S6K (r = 0,77; p < 0,05) em 30 min. Não existiu diferença para as concentrações plasmáticas de BCAA e a via de sinalização da mTOR em 450 min. Conclusão: Nós concluímos que a suplementação de MCa e PB resultaram em um efeito anabólico semelhante no músculo esquelético ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Objective: The aim of the study was to compare the effects of single-dose supplementation of a protein blend (PB) composed of micellar casein and whey protein (1:1) with isolated micellar casein (MCa) on aminoacidemic response and the mammalian target of the rapamycin (mTOR) signaling pathway 30 and 450 min after the beginning of the inactive phase in Wistar rats. Methods: After 10h of fasting during the active phase, rats were fed with MCa or PB (5.6g protein per kg of body mass) by gavage and water was used as the vehicle (PLA, placebo group). At 30 and 450 min after protein supplementation, the animals were euthanized and blood and gastrocnemius muscle samples were collected for biochemical and immunoblot analysis. Results: Plasma BCAA levels increased after MCa (3-fold) and PB (3.2-fold) supplementations. More importantly, the stimulatory phosphorylation levels of mTOR and its downstream target ribosomal protein S6 kinase (p70S6K) were higher 30 min after MCa (2.6 and 2.9-fold, respectively) and PB (2.8 and 3.8-fold, respectively) when compared with PLA. Plasma leucine levels were correlated with activation of mTOR (r = 0.60, p < 0.05) and p70S6K (r = 0.77; p < 0.05) at 30 min. There were no differences for plasma amino acids levels and the mTOR signaling pathway at 450 min. Conclusions: MCa and PB supplementations resulted in a similar anabolic milieu in rat skeletal muscle by inducing a transient increase in BCAA plasma levels and activation of the mTOR/p70S6K axis. / Mestre

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-03T13:27:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1067667 bytes, checksum: ba11e1394c7885389996f4b75de741f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-03T13:27:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1067667 bytes, checksum: ba11e1394c7885389996f4b75de741f0 (MD5) Previous issue date: 2015-11-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A cor é um atributo sensorial que influencia de forma decisiva o julgamento dos consumidores quanto a determinado tipo de alimento. Por esta razão, as indústrias alimentícias possuem uma frequente preocupação com a adição de corantes aos seus produtos, de forma a torna-los mais atrativos aos consumidores. Duas classes distintas de corantes estão disponíveis para uso em alimentos, os sintéticos e os naturais. Os corantes sintéticos são mais frequentemente utilizados em virtude de algumas vantagens apresentadas por estes em relação aos naturais, como maior estabilidade frente a diferentes fatores e maior solubilidade em soluções aquosas. Entretanto, estudos toxicológicos têm apontado estes corantes como potenciais causadores de problemas à saúde dos consumidores. Estes estudos, bem como a crescente preocupação dos consumidores com aspectos relacionados à saúde e também medidas legislativas têm motivado a substituição dos corantes sintéticos por aqueles obtidos a partir de fontes naturais, os quais apresentam menores evidências de danos à saúde dos consumidores. Por outro lado, a utilização de corantes naturais em formulações alimentícias ainda é bastante limitada devido principalmente à menor estabilidade e solubilidade destes na matriz alimentícia, por ser tratarem, em geral, de compostos lipofílicos. As proteínas do leite possuem um importante papel no transporte de moléculas hidrofóbicas, tais como corantes. Diante disso, objetivou-se estudar a interação a nível molecular entre o betacaroteno, um corante natural, e as proteínas lácteas albumina sérica bovina (em suas conformações nativa e desnaturada) e beta-caseína, através de técnicas sensíveis utilizadas em estudos de interações. Os resultados obtidos através da técnica espectroscopia de fluorescência mostraram que em pH 7,0 concentrações crescentes de betacaroteno reduziram a intensidade de fluorescência de ambas as proteínas, beta-caseína e albumina sérica bovina, e que o mecanismo de extinção de fluorescência foi principalmente estático. As constantes de interação associadas a formação do complexo entre o betacaroteno e as proteínas lácteas variaram com as temperaturas estudadas entre 8,43x104 e 4,20x107 L mol-1 para BSA nativa, 1,11x102 e 5,05x102 L mol-1 para BSA desnaturada e entre 3,34x101 e 2,457x103 L mol-1 para beta-caseína. A estequiometria de formação do complexo (betacaroteno:proteína) também variou entre as proteínas, sendo 1:1 para BSA nativa, 1:3 para BSA desnaturada e 1:2 para beta-caseína. Os valores da variação da energia livre de Gibbs padrão de formação do complexo variaram com a temperatura e foram negativos para todos os sistemas estudados. Entretanto, os valores deste parâmetro obtidos para a beta-caseína foram inferiores em relação aqueles obtidos para a BSA. A formação do complexo em todos os casos foi dirigida pela entropia do sistema. Resultados de fluorescência obtidos no pH 5,0 para a albumina sérica bovina mostraram que a interação entre esta proteína e o betacaroteno foi praticamente constante, provavelmente por questões relacionadas a conformação e distribuição de grupos carregados da proteína neste valor de pH. A estabilidade à luz do corante foi avaliada na presença e na ausência de albumina sérica bovina e beta-caseína e os resultados mostraram que ambas as proteínas protegeram o corante da degradação ocasionada pela luz. Os resultados gerais obtidos apontaram para a utilização eficiente das proteínas lácteas no transporte e estabilização do betacaroteno em sistemas alimentícios. / The color is a sensory attribute that influence decisively the judgment of consumers in certain type of food. For this reason, the food industries have a common concern with the addition of coloring to their products in order to make them more attractive to consumers. Two distinct classes of dyes are available for use in foods, synthetic and natural. Synthetic dyes are most often used due to certain advantages presented by these in relation to natural, such as increased stability due to different factors, solubility in aqueous solutions, providing a wide variety of colors and lower production costs. However, toxicological studies have pointed to these dyes as potential troublemakers to the health of consumers, ranging from allergies to cancer development. These studies as well as the growing consumer concern with health- related characteristics and also legislative measures have motivated the replacement of synthetic dyes by those obtained from natural sources, which, although also present drawbacks, have been used for many years with minor evidence of harm to the health of consumers. The use of natural colorants in food formulations is very limited due mainly to decreased stability and solubility thereof in the food matrix, to be treat in general, of lipophilic compounds. Milk proteins have an important role in the transport of hydrophobic molecules such as dyes. The research objective was to study the interaction at the molecular level between beta-carotene, a natural dye, bovine serum albumin and beta-casein, through sensitive techniques used in interaction studies. The results obtained by fluorescence spectroscopy technique showed that at pH 7.0 increasing concentrations of beta-carotene reduced the fluorescence intensity of both proteins, beta-casein and bovine serum albumin, and the fluorescence quenching mechanism is mainly static. Interaction constants associated with complex formation between the beta-carotene and dairy proteins with temperatures studied ranged between 8,43x104 and 4,20x107 L mol-1 for native, BSA, between 1,11x102 and 5,05x102 L mol-1 for denatured BSA and between 3,34x101 and 2,457x103 L mol-1 for beta-casein. The stoichiometry of the complex formation (beta-carotene:protein) also varied between proteins, being 1:1 to native BSA, 1:3 to denatured BSA and 1:2 for beta-casein. The values of variation of the standard Gibbs free energy of complex formation varied according to temperature and were negative for all systems studied. However, the values of this parameter obtained for beta casein were lower compared to those obtained for BSA. The formation of the complex in all cases was driven by the entropy of the system. Fluorescence results obtained in the pH 5.0 to bovine serum albumin showed that the interaction between this protein and beta-carotene was almost constant, probably issues the conformation and distribution of charged groups of the protein at this pH value. The dye light stability was assessed in the presence and absence of bovine serum albumin and beta-casein and the results showed that both proteins dye protected from degradation caused by light. The overall results obtained pointed to the efficient use of milk protein in the transport and stabilization of beta-carotene in food systems.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-12-07T14:01:39Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 763801 bytes, checksum: 25a52b6d6830299e1bceaed6425712ed (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-07T14:01:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 763801 bytes, checksum: 25a52b6d6830299e1bceaed6425712ed (MD5) Previous issue date: 2015-08-07 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Este trabalho teve como objetivos desenvolver um concentrado de proteínas lácteas em pó com alta concentração do fator de crescimento TGF-β e verificar como o processamento afeta a concentração do TGF-β, bem como analisar a interação que ocorre entre o TGF-β e as proteínas presentes no leite. Primeiramente, procedeu-se ao desenvolvimento do concentrado proteico, empregando técnicas de membrana (microfiltração) e dois tipos de tratamento térmico (pasteurização lenta e pasteurização rápida), e etapas de concentração a vácuo e secagem em spray dryer foram aplicadas. Foi utilizado no processamento leite cru integral proveniente de duas fontes distintas, sendo o primeiro deles obtido no estabulo da UFV e o segundo obtido no tanque de refrigeração do laticínios escola da UFV. A cada etapa do processamento foram retiradas amostras para verificar a composição centesimal e quantificar o TGF-β presente. Além disso, análise de calorimetria de titulação isotérmica (ITC) foi empregada para avaliar a interação que ocorre entre o TGF-β e as proteínas do soro e caseínas. A composição centesimal das amostras (proteínas, cinzas, extrato seco, gordura e lactose) estava dentro do previsto pelos regulamentos técnicos de identidade e qualidade (IN-62 e RTIQ – soro de leite). Os valores encontrados para o teor de TGF-β presente no leite cru está dentro do descrito na literatura, mas houve diferença na concentração do TGF-β nos leites crus empregados, sendo que o leite cru refrigerado (23,60 ng∙mL-1) apresentou valores maiores em relação ao leite cru recém ordenhado (17,43 ng∙mL-1), possivelmente pela ativação do TGF-β pela plasmina e enzimas proteolíticas presentes no leite. O TGF-β não é degradado pela pasteurização, no entanto a pasteurização rápida foi mais eficiente em recuperar esse componente em relação à pasteurização lenta, devido a maior degradação dos componentes que ocorrem nesta o que afeta a concentração do TGF-β. A pasteurização afeta a distribuição do TGF-β nas frações de proteínas do soro e caseína, o que pode ser observado na redução do teor de TGF-β2 no soro quando foi aplicado um tratamento térmico. Diferentemente de quando se aplicou a microfiltração e o TGF-β2 distribuiu-se igualmente entre a caseína e o soro. A concentração por evaporação a vácuo apresentou fator de concentração menor que 1 na concentração do TGF-β, pois observou-se maior concentração dos demais constituintes em relação ao TGF-β. Diferentemente da secagem em spray dryer que apresentou um fator de concentração maior que 1, mostrando que TGF-β2 é concentrado em maior quantidade que os demais constituintes sólidos das amostras. O uso das técnicas de membrana foi mais eficiente em concentrar o TGF-β2 tanto para o soro quanto para a caseína, quando comparado com as frações obtidas com o uso de tratamento térmico. A caseína micelar em pó (253,07 ng∙mL -1) foi o concentrado proteico que obteve maiores valores para a concentração do TGF-β2 nas condições estudadas, seguido pelo leite em pó (132,60 ng∙mL-1). TGF-β2 apresentou forte correlação (0,95) com o teor de proteína presente nas amostras. Na análise de ITC observou-se que a interação do TGF-β com as proteínas presentes no soro é exotérmica, além disso, TGF-β2 interagiu preferencialmente com as caseínas em relação as proteínas do soro, pois foi observado valores maiores de energia na primeira injeção. / This study aimed to develop a concentrated milk protein powder enriched with TGF-β growth factor and verify how processing affects the concentration of TGF-β, as well as analyzing the interaction that occurs between TGF-β and the proteins in milk. First, it proceeded to the development of the protein concentrate using membrane techniques (microfiltration) and two types of thermal treatment (slow pasteurization and pasteurization), and vacuum concentration and spray drying step were applied. It was used in processing raw milk from two distinct sources, the first obtained in the stables of UFV and the second obtained in the refrigeration tank dairy school UFV. Every step of processing samples was taken to check the chemical composition and quantify the TGF-β. Also, calorimetric isothermal titration was employed to evaluate the interaction that occurs between TGF-β and whey proteins and caseins. The chemical composition of the samples (protein, ash, dry matter, fat and lactose) was within the expected technical regulations for identity and quality (IN-62 and RTIQ – whey). The values found for TGF-β content present in the raw milk are described in the literature, but difference was observed in TGF-β concentration in raw milk employed, and the refrigerated raw milk (23.60 ng∙mL -1) showed higher values compared to raw milk recently milked (17.43 ng∙mL-1), possibly by TGF-β activation by plasmin and proteolytic enzymes present in milk. TGF-β is not degraded by pasteurization, however the pasteurization was more efficient in recovering this component in relation to slow pasteurization due to higher degradation of this component occurring which affects the concentration of TGF-β. Pasteurization affects the distribution of TGF-β in the whey proteins and casein fractions which can be observed in the reduction of TGF-β2 content in whey when a heat treatment was applied. Differently from when applied to microfiltration and TGF-β2 was equally distributed between the casein and whey. The concentration by vacuum evaporation presented lower ratio to 1 in the concentration of TGF-β, as there was higher concentration of other constituents in relation to the TGF-β. Differently form the spray drying showed that a ratio greater than 1, showing that TGF-β2 is concentrated in greater amounts that the other solid constituents of the sample. The use of membrane techniques was more effective to concentrate TGF-β2 for both, whey and casein, as compared with the fractions obtained with the use of heat treatment. The micellar casein powder (253.07 ng∙mL-1) was the protein concentrate that had higher values for the concentration of TGF-β2 under the conditions studied, followed by milk powder (132.60 ng∙mL-1). TGF-β2 showed a strong correlation (0.95) with the protein present in the samples. In ITC analysis showed that the interaction of TGF-β with the proteins present in whey is exothermic, furthermore, TGF-β2 preferably interacted with casein in relation to the whey proteins, it was observed higher energy values in the first injection.