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Prostate cancer is the fourth most frequent cause of cancer-related deaths in men worldwide. One of current successful approaches to treat prostate cancer is radical prostatectomy followed by radiotherapy. However, this treatment is not 100% successful, as 53% patients develop secondary tumors. Our hypothesis is, that ionizing radiation itself contributes to the development of metastases by inducing changes in cell phenotype, particularly in terms of epithelial-to-mesenchymal transition and stemness. To test this hypothesis, we irradiated the cells of metastatic prostate cancer cell line DU145 by fractionated radiation 2 x 10 Gy and we compared the expression of selected epithelial, mesenchymal and stem-cell markers prior to and after irradiation. Besides we focused on a subpopulation of so called floating cells which arise during irradiation. These cells can survive the radiation treatment and after some time they are able to reattach and give rise to readherent population. We wanted to asses what is the cell cycle profile of these cells and whether and how fast they proliferate. In this thesis we have shown that radiation causes only minor changes in epithelial/mesenchymal and stem-like character of adherent fraction of the DU145 cell line. However, we have also described that small population of...

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Le suppresseur de tumeur p53 permet à la cellule de se défendre contre différentes formes de stress. Il joue un rôle de barrière s'opposant à la tumorigenèse: en effet la perte de p53 chez la souris prédispose grandement ces animaux à développer des tumeurs; de même le locus p53 est inactivé dans près de 50% des tumeurs humaines.<p>p53 constitue un facteur de transcription qui se lie à des séquences particulières de l'ADN et active l'expression des gènes adjacents. L'expression orchestrée de ces gènes conduit, directement ou indirectement et suivant le contexte cellulaire, soit à la mort de la cellule soit à l'inhibition de la division cellulaire.<p>Les mécanismes moléculaires médiant ces deux activités biologiques essentielles de p53, de même que les mécanismes influençant le choix de la réponse cellulaire, sont encore mal compris. L'importance de p53 dans ce choix reste également à démontrer.<p>Afin de contribuer à la compréhension de ces mécanismes, le modèle murin déficient pour Mdm4, un régulateur négatif de l'activité de p53, a été choisi. L'inactivation de Mdm4 chez la souris conduit en effet à l'activation ectopique de p53 in vivo et l'induction de deux types de réponse: apoptose dans le neuroépithélium et arrêt de la prolifération cellulaire dans les tissus non neuronaux. Le profil d'expression des gènes dans les tissus neuronaux et non neuronaux a donc été comparé entre embryons de souris sauvage et mdm4-/- par la technique d'hybridation de biopuces à ADN. Les résultats obtenus suggèrent que le type de réponse dépend du type cellulaire et non de p53 lui-même. En effet les profils d'expression des gènes dans les tissus neuronaux (conditions d'apoptose) et non neuronaux (conditions d'arrêt de la prolifération cellulaire) chez l'embryon de souris mdm4-/- sont comparables.<p><p>Nous nous sommes ensuite particulièrement intéressés à deux nouveaux gènes dont l'expression est augmentée dans les embryons mdm4-/-. Dans un premier temps, leur induction transcriptionnelle chez l'embryon de souris mdm4-/- a été confirmée par différentes techniques et il a été vérifié qu'ils constituaient tous deux des cibles directes de p53 induites suite à un stress génotoxique.<p>Le premier gène code Dapk1, une protéine suppresseur de tumeur pro-apoptotique présentant une activité de type sérine/thréonine kinase. Ce travail a permis d'établir que Dapk1 participait à une boucle de rétroaction du contrôle de l'activité de p53.<p>Le deuxième gène identifié code la protéine Ptprv, un récepteur transmembranaire présentant une activité de type tyrosine phosphatase. En vue d'étudier la signification physiologique de l'induction transcriptionnelle de ptprv suite à l'activation de p53, des expériences effectuées à partir de matériel biologique issu de souris déficientes pour Ptprv ont été réalisées. Ces expériences confirment le rôle essentiel de Ptprv comme médiateur de l'arrêt du cycle cellulaire en phase G1 induit par p53 suite à un stress génotoxique, à la fois in vitro et in vivo. Par contre, Ptprv ne semble pas influencer l'apoptose induite suite à l'activation de p53. Ce travail a également permis d'établir le rôle essentiel de Ptprv dans la suppression de tumeurs induites chez la souris par activation constitutive de l'oncogène Ras.<p> / Doctorat en sciences, Spécialisation biologie moléculaire / info:eu-repo/semantics/nonPublished

A biodiversidade de plantas brasileiras é uma fonte muito rica de moléculas bioativas, dentro da proposta da busca por novas drogas antitumorais, avaliamos neste estudo o potencial antiproliferativo do composto 7-epi-clusianona. Foram utilizadas duas linhagens celulares derivadas de tumor de mama humana, Hs 578T e MCF-7, cultivadas em monocamada e como esferoides. O IC50 após 48 horas de tratamento das células é de 20 &mu;M para Hs 578T e 6 &mu;M para MCF-7. A análise do ciclo celular mostrou que o composto é capaz de reter as células em fase G1/G0 em ambas as linhagens em 2D, mas não em 3D. O composto é capaz de induzir as células a senescência celular, como mostrado pelo ensaio de detecção de &beta;-galactosidase. Esses dados indicam que o composto 7-epi-clusianona é uma molécula promissora, que demonstrou potencial antitumoral em células de tumor de mama. A cultura tridimensional se mostrou mais resistente ao tratamento com 7-epi-clusianona, portanto estudos mais abrangentes são necessários para melhor entendimento dos efeitos do composto sobre esse tipo de cultura. / Brazilian flora is considered one of the most diverse in the world and natural products are some of the important sources of new antitumoral compounds. The aim of this study was to evaluate the antiproliferative potential of 7-epi-clusianone. Two cell lines derived from human breast tumor were used, Hs 578T and MCF-7, cultured in monolayer and as spheroids. The IC50 after 48 hours of treatment is 20 &mu;M to Hs 578T cells and 6 &mu;M to MCF-7 cells. Cell cycle analysis showed induction of cell cycle arrest in G1/S phase in cells cultured in monolayers, but not in spheroids. The amount of cells in senescence after the treatment with 7-epi-clusianone is higher than the control group, as seen by the senescence &beta;-galactosidase staining assay. These data suggest that 7-epi-clusianone is a promising molecule against breast cancer cells. We show that 3D culture was more resistant to treatment than 2D culture, therefore more comprehensive studies are needed to better understand the effects of 7-epi-clusianone on this kind of culture.

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A biodiversidade de plantas brasileiras é uma fonte muito rica de moléculas bioativas, dentro da proposta da busca por novas drogas antitumorais, avaliamos neste estudo o potencial antiproliferativo do composto 7-epi-clusianona. Foram utilizadas duas linhagens celulares derivadas de tumor de mama humana, Hs 578T e MCF-7, cultivadas em monocamada e como esferoides. O IC50 após 48 horas de tratamento das células é de 20 &mu;M para Hs 578T e 6 &mu;M para MCF-7. A análise do ciclo celular mostrou que o composto é capaz de reter as células em fase G1/G0 em ambas as linhagens em 2D, mas não em 3D. O composto é capaz de induzir as células a senescência celular, como mostrado pelo ensaio de detecção de &beta;-galactosidase. Esses dados indicam que o composto 7-epi-clusianona é uma molécula promissora, que demonstrou potencial antitumoral em células de tumor de mama. A cultura tridimensional se mostrou mais resistente ao tratamento com 7-epi-clusianona, portanto estudos mais abrangentes são necessários para melhor entendimento dos efeitos do composto sobre esse tipo de cultura. / Brazilian flora is considered one of the most diverse in the world and natural products are some of the important sources of new antitumoral compounds. The aim of this study was to evaluate the antiproliferative potential of 7-epi-clusianone. Two cell lines derived from human breast tumor were used, Hs 578T and MCF-7, cultured in monolayer and as spheroids. The IC50 after 48 hours of treatment is 20 &mu;M to Hs 578T cells and 6 &mu;M to MCF-7 cells. Cell cycle analysis showed induction of cell cycle arrest in G1/S phase in cells cultured in monolayers, but not in spheroids. The amount of cells in senescence after the treatment with 7-epi-clusianone is higher than the control group, as seen by the senescence &beta;-galactosidase staining assay. These data suggest that 7-epi-clusianone is a promising molecule against breast cancer cells. We show that 3D culture was more resistant to treatment than 2D culture, therefore more comprehensive studies are needed to better understand the effects of 7-epi-clusianone on this kind of culture.