Resumo: O mapeamento cromossômico de seqüências repetitivas de DNA tem se mostrado uma eficiente ferramenta nos estudos comparativos e evolutivos em diversos organismos. Estudos cromossômicos com besouros da subfamília Scarabaeinae têm revelado ampla variabilidade, entretanto a análise da organização cromossômica de DNAs repetitivos neste grupo é escassa e direcionada unicamente ao mapeamento do DNA ribossomal (DNAr) 18S. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar cromossomicamente DNAs repetitivos em espécies de Scarabaeinae, utilizando bandeamentos cromossômicos e mapeamento físico cromossômico de seqüências repetitivas, incluindo famílias multigênicas de RNAr 18S, RNAr 5S e histona H3 e a fração de DNA C0t-1. Ampla variabilidade foi observada relacionada ao número/localização dos sítios de DNAr 18S, aparentemente associada a diversificação da heterocromatina. Por outro lado, os genes de RNAr 5S e histona H3, mostraram-se amplamente conservados e co-localizados em um par cromossômico, com aparente intercalação. Análises em representantes de Dichotomius revelaram conservação dos blocos de heterocromatina, entretanto com aparente compartimentalização dos mesmos. O uso da fração DNA C0t-1 confirmou o enriquecimento em DNAs repetitivos da heterocromatina, que se apresentou diversificada entre as espécies, utilizando como referência D. geminatus. Por outro lado, regiões terminais dos cromossomos apresentaram-se amplamente conservadas entre as seis espécies. Além disso, a análise da fração de DNAs repetitivos em D. geminatus indicou origem intraespecífica do cromossomo B desta espécie que possivelmente pode estar sofrendo homogeneização com seqüências encontradas no complemento A. Os resultados indicam distintos padrões de diversificação para o DNA repetitivo nos representantes de Scarabaeinae, sugerindo extensiva reorganizaçãomicrogenômica ao longo / Abstract: The chromosomal mapping of repeated DNAs has been used as an efficient tool in comparative and evolutionary studies in some organism. The chromosomal studies in beetles belonging to the subfamily Scarabaeinae have revealed wide variability, although the analysis of chromosomal organization of repeated DNAs in this group is scarce and directed solely for 18S rDNA mapping. The present study aimed in chromosomal characterization of repeated DNAs in Scarabaeinae species using chromosomal banding and physical chromosome mapping of repeated sequences, including the multigene families for 18S and 5S rRNAs and H3 histone genes and the C0t-1 DNA fraction. Wide variability was observed concerning the number and location of 18S rDNA sites, apparently associated to the heterochromatin diversification. On the other hand, the 5S rRNA and H3 histone genes were widely conserved and co-located in one chromosomal pair, showing apparently interspersion. Analysis in Dichotomius representatives revealed conservation for heterochromatic blocks, although an apparent compartmentalization was observed. The use of C0t-1 DNA fraction confirmed the heterochromatin repeated DNAs enrichment, which is diversified among the species, using as reference D. geminatus. On the other hand, the terminal regions of the chromosomes were highly conserved among the six species. Moreover, the analysis of repeated DNA fraction from D. geminatus indicated intraspecific origin of a B chromosome in this species that possibly could be suffering homogenization with A complement sequences. The results indicate distinct diversification patterns for repeated DNAs in Scarabaeinae representatives, suggesting extensive microgenomic reorganization along the cladogenesis of the group / Orientador: Cesar Martins / Coorientador: Rita de Cássia de Moura / Banca: Marcelo dos Santos Guerra / Banca: Orlando Moreira Filho / Banca: Sanae Kasahara / Banca: Maria Cristina de Almeida / Doutor

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:32:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:08:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 03362.pdf: 1393147 bytes, checksum: 01489b7356e00847fe76c389e08056f8 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Submitted by FLAVIA MARCORIN DE OLIVEIRA null (flaviamarcorindeoliveira@gmail.com) on 2016-06-30T18:11:11Z No. of bitstreams: 1 Flávia Marcorin versão final.pdf: 2914788 bytes, checksum: da4eb36add8e9d52d25649b86df175e1 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-07-04T18:08:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliveira_fm_me_rcla.pdf: 2914788 bytes, checksum: da4eb36add8e9d52d25649b86df175e1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-04T18:08:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliveira_fm_me_rcla.pdf: 2914788 bytes, checksum: da4eb36add8e9d52d25649b86df175e1 (MD5) Previous issue date: 2016-06-16 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A família Loricariidae é uma das mais diversificadas da ordem Siluriformes, com espécies distribuídas entre sete subfamílias: Hypoptopomatinae, Loricariinae, Hypostominae, Neoplecostominae, Lithogeninae, Delturinae e Ancistrinae. As espécies do gênero Ancistrus Kner, 1854, pertencem à subfamília Ancistrinae, têm mostrado grande variação cariotípica, além de características interessantes do ponto de vista citogenético como a presença de cromossomos sexuais e polimorfismos cromossômicos. Desta forma o objetivo do presente trabalho foi caracterizar os cromossomos de quatro espécies do gênero Ancistrus (Ancistrus sp. 1 “cupim”, Ancistrus sp. 2 “cupim”, Ancistrus sp. “mutuca” e Ancistrus sp. “soberbo”) pertencentes à bacia do Paraguai utilizando técnicas de citogenética clássica e molecular para melhor compreensão da evolução cariotípica dessas espécies. As espécies estudadas apresentaram número diploide variando de 2n=42 a 2n=54, NOR localizadas em regiões pericentroméricas e terminais, além de heteromorfismo de tamanho dessas regiões (NOR) em um dos homólogos nas quatro espécies estudadas. O bandamento C mostrou presença de pouca heterocromatina com exceção das espécies Ancistrus sp. 2 “cupim” e Ancistrus sp. “soberbo” que apresentaram dois blocos grandes de heterocromatina em um par de cromossomos, tanto nos machos quanto nas fêmeas. Um exemplar fêmea da espécie Ancistrus sp. 1 “cupim” também apresentou um bloco grande de heterocromatina em um dos homólogos do par 7, sendo esses resultados indicativos de provável relação entre esses blocos de heterocromatina e a diferenciação de cromossomos sexuais. Os resultados obtidos pela técnica de FISH utilizando sondas de DNAr 18S e 5S mostraram que o DNAr 18S está localizado na mesma região da NOR, o DNAr 5S está distribuído em quatro e cinco pares cromossômicos e o double FISH não mostrou co-localização desses genes. No entanto as espécies Ancistrus sp. 2 “cupim” e Ancistrus sp. “soberbo” mostraram variação nos resultados com marcações de DNAr em blocos de heterocromatina. O uso de sonda telomérica mostrou marcações nos telômeros dos cromossomos das quatro espécies estudadas e marcação pericentromérica em um par de cromossomos da espécie Ancistrus sp. 2 “cupim”. Nossos resultados evidenciam possíveis rearranjos cromossômicos do tipo fusão cêntrica, contribuindo com a redução do número diploide e inversões pericêntricas e paracêntricas resultando na localização dos sítios de DNAr. / The Loricariidae family is one of the most diversified of the Siluriformes order, with species distributed in seven subfamilies: Hypoptopomatinae, Loricariinae, Hypostominae, Neoplecostominae, Lithogeninae, Delturinae and Ancistrinae. The species of the genus Ancistrus Kner, 1854, belong to the subfamily Ancistrinae, have shown great karyotype variation, and interesting features of the cytogenetic point of view as the presence of sex chromosomes and chromosome polymorphisms. Thus the aim of this study was to characterize the chromosomes of four species of Ancistrus genus (Ancistrus sp. 1 "cupim", Ancistrus sp. 2 "cupim", Ancistrus sp. "mutuca" and Ancistrus sp. "soberbo") belonging to Paraguay basin using techniques of classical and molecular cytogenetics to better understand the karyotype evolution of these species. The species showed diploid number ranging from 2n = 42 to 2n = 54, NOR located in pericentomeric and terminal regions, and these regions size heteromorphism (NOR) in one of the homologous in the four species. The C-banding showed the presence of few heterochromatin with the exception of species Ancistrus sp. 2 "cupim" and Ancistrus sp. "soberbo" that had two large blocks of heterochromatin in a pair of chromosomes in both males and females. An exemplary female of the species Ancistrus sp. 1 "cupim" also presented a large block of heterochromatin in one of the pair of 7 homologous, and these results indicating probable relationship between these heterochromatin blocks and differentiation of sex chromosomes. The results obtained by FISH technique using probes 18S rDNA and 5S showed that the 18S rDNA is located in the same region of NOR, the 5S rDNA is distributed in four and five chromosome pairs and double FISH showed colocalization of these genes. However of Ancistrus species sp. 2 "cupim" and Ancistrus sp. "soberbo" showed variation in results with rDNA markings in heterochromatin blocks. The use of telomeric probe showed markings on the telomeres of the chromosomes of four species studied and pericentromeric marking on a pair of chromosomes of the species Ancistrus sp. 2 "cupim". Our results indicate possible chromosomal rearrangements type fusion centric, contributing to the reduction of the diploid number and pericentric inversions and paracentric resulting in the location of rDNA sites. / FAPESP: 2015/05993-3

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-06T19:44:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-KleisonMerlo.pdf: 1387071 bytes, checksum: 3ebe03b22eb3efc7773006a1a48f6b26 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T19:44:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-KleisonMerlo.pdf: 1387071 bytes, checksum: 3ebe03b22eb3efc7773006a1a48f6b26 (MD5) Previous issue date: 2012 / O formocresol, principal droga utilizada em pulpotomias, tem um longo e bem sucedido histórico de uso clínico. Contudo, sua segurança tem sido questionada devido a possíveis efeitos genotóxicos, mutagênicos e carcinogênicos, relacionados à presença do formaldeído em sua composição. Resultados de estudos sobre a genotoxicidade do formocresol são bastante inconsistentes, logo, uma avaliação mais aprofundada sobre seu potencial genotóxico se faz relevante, uma vez que é uma droga mundialmente utilizada. Nesse trabalho foram investigados os potenciais efeitos genotóxicos do formocresol através de ensaios citogenéticos in vitro e in vivo (teste de metáfase). Nos ensaios in vitro, as preparações cromossômicas foram obtidas de cultura de linfócitos, onde após 24 horas de incubação, 50 µl das diluições do formocresol (1:50, 1:100, 1:200, 1:500, 1:1000) foram adicionados, sendo as preparações citológicas realizadas após 48 e 72 horas. Para o controle negativo foram realizadas culturas sem adição de qualquer droga. Nos ensaios in vivo, camundongos Swiss webster foram inoculados com as mesmas diluições na proporção de 0,1 ml/10 g, sendo utilizado como controle positivo a ciclofosfamida (25 mg/kg) e como negativo a glicerina/água (1:1). Para análise estatística foi aplicado o teste do qui-quadrado ao nível de 5%. Em culturas de 48 e 72 horas, comparando-se as dosagens de 1:50 e 1:100 com o controle negativo foi constatado haver diferença significativa, o que não observou-se para as outras diluições. Ao comparar-se a diluição de 1:50 em machos e a diluição de 1:200 em fêmeas com o controle negativo houve diferença significativa, o que não foi observado para as outras diluições. Sob as condições experimentais empregadas nesse estudo, o formocresol revelou-se genotóxico nas diluições mais concentradas, contrariando alguns trabalhos que apontam para sua não genotoxicidade. Entretanto, a dose final de formaldeído presente nessas diluições parece ser superior àquela geralmente empregada em pulpotomias. Isso demonstra que o uso displicente do formocresol parece ser o principal responsável pelos efeitos genotóxicos relatados na literatura. / Formocresol, the main substance used in pulpotomies, has a long and successful historical of clinical use. Although, its safety has been questioned because of possible genotoxic, mutagenic and carcinogenic effects, related to the presence of formaldehyde on its composition. Results from studies about formocresol genotoxicity are quite inconsistent, so a deep evaluation about its genotoxic potential is important, once this medicament is widely used. The potential genotoxic effects of formocresol were investigated employing in vitro and in vivo cytogenetic assays (chromosomal aberration test). On in vitro assays chromosomal preparations were provided from lymphocyte cultures, where after 24 hours of incubation, 50 µl from formocresol dilutions (1:50, 1:100, 1:200, 1:500, 1:1000) were added, with the cytological preparations done after 48 and 72 hours. The negative control cultures were done without adding any drug. On in vivo assays Swiss webster mice were inoculated with the same dilutions using the proportion of 0,1 ml/10 g body weight, and for positive control was used cyclophosphamide (25 mg/kg) and as negative control glycerine/water (1:1). The statistical analysis was performed using chi-square test at 5% level. On 48 and 72 hours culture comparing the 1:50 and 1:100 dosages with the negative control was observed significant difference, the same was not observed with the other dilutions. Comparing 1:50 dilution of male and 1:200 dilution of female with the negative control any significant difference was observed, the same did not happen with the other dilutions. Under the experimental conditions employed in this study, formocresol revealed its genotoxicity in the more concentrated dilutions, confronting some studies that point to its non-genotoxicity. However, the final dosage of formaldehyde present in these dilutions seems to be higher than those generally used in pulpotomies. It shows that the incorrect use of formocresol is the main responsible for the genotoxic effects reported in the literature.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-10T16:55:55Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-TyagoEufrásioSouza.pdf: 1735075 bytes, checksum: 71d298cc88578885aa679bda01ec12e1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T16:55:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-TyagoEufrásioSouza.pdf: 1735075 bytes, checksum: 71d298cc88578885aa679bda01ec12e1 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / As espécies de gafanhotos Ommexecha virens(Ommexechidae),Xyleus discoideus angulatus,Tropidacris collaris(Romaleidae) eSchistocerca pallens(Acrididae)ocorrem na região do Nordeste do Brasil. Apresentam seus cariótipos simétricos com número cromossômico, 2n=23 (X0, machos) e 2n=24 (XX, fêmeas), porém T. collaris, S.pallense X.d.angulatus apresentam os cromossomos com morfologia acrocêntrica, enquanto que O. virens apresenta o par cromossômico G1submetacêntrico. Variaçõesrítmicasnocomportamentoapresentadaspordiversosorganismossão pertencentes ao ciclo circadiano.Com o uso da técnica de Hibridização in situ Permanente (PISH), foi mapeada a posição do gene de cópia única Per, um dos genes do relógio circadiano,em cromossomos meióticos das espécies O. virens,X.d.angulatus,T. collariseS.pallens.Os cromossomos meióticos destas espécies foram obtidos através da técnica clássica de esmagamento de folículos testiculares. As sondas utilizadas foram obtidas de plasmídeos carregando fragmentos do gene Per originários do genoma do drosofilídioZaprionus indianus. Após a hibridizaçãoin situ, o material foi fotografado usando contraste de fase. Nasquatroespéciesde gafanhotos citadas anteriormente, o gene Perfoi mapeado no maior par autossômico, G1.Analisados conjuntamente os resultados de mapeamento do genePer nestasespéciescom a localização de outros genes de cópia única e de cópia repetitiva, observa-se uma localização preferencial dos genes decópia única nos pares autossômicos grandes e, genes de cópia repetitiva, nos pares médios e pequenos. Estesresultadostambémapontam paraumaconservação molecular deste gene nos Orthoptera, como observado em Dípterae Lepdoptera; possívelmente a conservaçãona localização cromossômicasejaum reflexodaconservaçãomolecular.Localizações cromossômicas dediversosgenes constitutivos em representantes das famílias Ommexechidae, Romaleidae e Acrididaesão informações relevantes para o entendimento das relações evolutivas entre estesgafanhotos, além disso,fornecemmarcadores para o sequenciamento do genoma destas espécies. / The species of grasshoppers Ommexecha virens(Ommexechidae) Xyleus discoideus angulatus, Tropidacris collaris(Romaleidae) and Schistocerca pallens(Acrididae) occur in the Northeast region of Brazil. Present theirsymmetricalkaryotypeswithchromosome numbers, 2n = 23 (X0, males) and 2n = 24 (XX, females), butT. collaris, S. pallensand X. d. angulatuspresent the acrocentric chromosome morphology, while O. virensshows the submetacentric L1chromosome pair.Rhythmic variationsin behaviorpresented byvarious organimsare belongingto the circadian cycle.Using the technique of Permanent insituhybridization (PISH), has mapped the position of thesingle-copy genePer, one of the clock genes, in meiotic chromosomes of the species O. virens, T. collaris, S. pallensand X. d. angulatus. The meiotic chromosomes of these species were obtained by the classical technique of crushing testicular follicles. The probe used was obtained from plasmids carrying the gene Perfragments originating from the genome of drosofilid Zaprionusindianus. After in situ hybridization, the material was photographed using phase contrast. In thegrasshoppersspecies mentioned above, the Pergene was mapped in largest autosomal pair, L1. Taken together the results of Pergene mapping in these species with the location of other single-copy genes and repetitive copy, there is a preferential localization of single copy genes in large autosomal pairs and copy repetitive genes, the couplepairsand small. These results also point to a molecular conservation of this gene in the Orthoptera, as observed in Diptera and Lepdoptera, possible conservation in chromosomal location is a reflection of molecular conservation. Chromosomal locations of severalconstituentgenes in representatives of the families constituting Ommexechidae, RomaleidaeandAcrididae are relevant information for understanding the evolutionary relationships in the locusts, and provides markers for mapping the genome of these species.

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T00:23:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amstalden_LucilaGobby_M.pdf: 4346952 bytes, checksum: 99d5f1ab2aae2aeb65d633016bc318a8 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A Anemia de Fanconi (AF) é uma doença caracterizada por múltiplas anomalias congênitas, progressiva falha da medula óssea e alto risco para desenvolvimento de câncer. E denominada também de Síndrome da Instabilidade Cromossômica devido ao fato de suas células apresentarem hipersensibilidade a agentes indutores de quebras cromossômicas. A mais importante das características clínicas é a manifestação hematológica. A incidência da anemia aplástíca, Síndrome Mieloplásica e Leucemia Mielóide Aguda é a maior resposável pela morbidade e mortalidade na AF A incidência da AF em todo o mundo é de. aproximadamente, 3 por milhão. No Brasil não há dados sobre a prevalência da doença. Foram descobertos 12 grupos de complementação e descobertos, até o momento. 11 genes relacionados ao distúrbio. São eles: FANCA. B, C, Dl, D2, E. F G, I, J, L e M. O trabalho teve como objetivo geral a análise das mutações principais (IVS8+2A>G, IVS11+lOC, IVS3+1G>C e 1794J803dellO) do gene FANCG em pacientes com quadro clínico compatível com AF. Foram analisados 38 indivíduos por meio da técnica de PCR associada à digestão e triagem por SSCP e subseqüente seqüenciamento. Nós encontramos um homozigoto para a mutação IVS8+2A>G e uma variante neutra (H482H). Concluímos com nosso estudo que, há uma heterogeneidade molecular em nosso meio; o DEB teste não é 100% eficaz na detecção de indivíduos com AF; o Teste de Complementação deve ser introduzido o quanto antes em nosso país para auxiliar no direcionamento da pesquisa para um determinado gene e minimizar os casos em que não há a confirmação de diagnóstico e, por último, há a necessidade de um Registro Brasileiro para AF com o objetivo de recolher informações clinicas e genéticas de indivíduos com o distúrbio. / Abstract: Fanconi anaemia (FA) is an autosomal recessive disease characterised by congenital abnormalities, progressive bone marrow failure and high risk of developing cancer. It's called Chromosomal Instability Syndrome due to the fact of cells presents hipersensibility to DNA cross-linking agents like mitomycin C and diepoxybutane. The most important clinical feature is hematologic. The incidence of aplastic anemia, myelodysplastic syndrome and acute myeloide leukaemia is the most important cause of morbidity and mortality in FA. The incidence of FA is approximately three per million and the heterozygote frequency is estimated at 1 in 300 in Europe and United States. In Brazil there's not data about prevalence of FA. It was discovered at least 12 complementation groups and eleven gene have been cloned: FANCA, B, C, DJ, D2, E, F, G, I, J, L eM. The study had as general objective the analysis of the main mutation (IVS8-2A>G, TVSll+lOC, IVS3+1G>C e 1794J803dell0) of FANCG gene in patients with clinical features of FA. It was analysed 38 patients through the test polymerase chain reaction (PCR) associated with digestion and mutation screening by SSCP with posterior sequencing. Molecular analysis found a homozygote to rVS8+2A>G and a neutral variant (H482H). We concluded that there's a molecular heterogeneity in our region; it's necessary to introduce the use of complementary tests in Brazil, in order to address the molecular analysis and at last, it's necessary a Brazilian Fanconi Anemia Registry (BFAR) to receive clinical and genetics information of AF patients. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:32:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:08:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 03362.pdf: 1393147 bytes, checksum: 01489b7356e00847fe76c389e08056f8 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Nos Ãltimos anos, o uso de pesticidas na agricultura tem aumentado e associaÃÃes entre a exposiÃÃo a produtos quÃmicos agrÃcolas e danos ao DNA e cÃncer tem sido relatados. O Brasil à um dos lÃderes mundiais na utilizaÃÃo de pesticidas, no entanto, estudos que avaliem o impacto da exposiÃÃo ocupacional a pesticidas sobre a incidÃncia e mortalidade por cÃncer ainda sÃo escassos na populaÃÃo brasileira. O teste do cometa alcalino e a anÃlise de aberraÃÃes cromossÃmicas (AC) foram utilizados para avaliar danos primÃrios ao DNA em linfÃcitos do sangue perifÃrico de trabalhadores expostos a uma mistura complexa de pesticidas em duas pequenas comunidades rurais nos municÃpios de Tianguà e Ubajara, localizados no oeste do Estado do Cearà (Nordeste do Brasil). Estes MunicÃpios estÃo entre as maiores Ãreas agrÃcolas do Estado. O teste do cometa mostrou que o Ãndice e freqÃÃncia de danos observados nos grupos expostos foram significativamente maiores em relaÃÃo aos grupos controle (P <0,05). Por outro lado, nÃo foram detectadas diferenÃas significativas em relaÃÃo a AC estruturais e numÃricas nas comunidades avaliadas. AlÃm disso, os nÃveis observados de quebras da fita de DNA e freqÃÃncias de AC, estratificadas por tempo de exposiÃÃo, nÃo foram estatisticamente diferentes nos agricultores de ambas comunidades rurais. Os resultados sugerem que os danos causados por pesticidas na Ãrea de estudo nÃo foram significativos o suficiente para induzir mutaÃÃes permanentes ou interferir na formaÃÃo do aparelho mitÃtico. Danos mÃnimos causados pelos pesticidas podem ter sido submetidos a reparo celular, explicando a ausÃncia de AC estruturais e numÃricas. As anÃlises da Ãgua do reservatÃrio que serve de fonte para irrigaÃÃo das plantaÃÃes e abastece os municÃpios da regiÃo nÃo detectou contaminaÃÃo por resÃduos de pesticidas. / In recent years, the use of pesticides in agriculture has been steadily increasing, and associations between exposure to agricultural chemicals and DNA damage and cancer have been reported. Brazil is one of the world leaders in pesticide use; however, studies that evaluate the impact of pesticide exposure on cancer incidence and mortality are very scarce in the Brazilian population. The alkaline comet assay and the chromosome aberration (CA) test were used to evaluate primary DNA damage in the peripheral blood lymphocytes of workers exposed to a complex mixture of pesticides in two small rural communities in the municipalities of Tianguà and Ubajara, located in the western part of Cearà State (Northeast Brazil), which are among the largest agricultural areas of the state. The comet assay showed that the damage index and damage frequency observed in the exposed groups were significantly higher in relation to the controls (P < 0.05). On the other hand, no differences were detected regarding structural and numerical CAs in the communities evaluated. Additionally, the observed levels of DNA strand breaks and frequencies of CAs, stratified for exposure time, were not statistically different for individuals of either rural community. Our results suggest that the damages caused by pesticides in our study area were not great enough to induce permanent mutations or to interfere with mitotic apparatus formation; minimal pesticide damages could have undergone cellular repair, explaining the absence of structural and numerical CAs. Analyses of water from the reservoir that serves as a source for irrigation of crops and supplies the cities of the region did not detect contamination by pesticides.

Orientador: Carmen Silvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T11:46:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_ClaudiaEstela_M.pdf: 1883480 bytes, checksum: 5c9ad07b778588f38de1f644ecd18847 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A Anemia de Fanconi (AF) é uma doença que apresenta herança autossômica recessiva. É caracterizada por múltiplas anomalias congênitas, progressiva falha da medula óssea e alto risco para desenvolvimento de câncer. A mais importante das características clínicas é a manifestação hematológica, responsável pelo grande número de morbidade e mortalidade em portadores de AF. Também é chamada de síndrome da instabilidade cromossômica por apresentar hipersensibilidade a agentes clastogênicos como a mitomicina C e diepoxibutano. A incidência da AF em todo o mundo é de aproximadamente, três por milhão e a frequência de heterozigotos é estimada em um para 300 na Europa e Estados Unidos. No Brasil não há dados sobre a prevalência da doença. Foram descobertos até o momento 13 grupos de complementação (FANCA, B, C, D1, D2, E, F, G, I, J, L, M e N), e os 13 genes foram clonados e pelo menos 11 genes estão relacionados ao distúrbio. O presente estudo teve como objetivo a análise das principais mutações (IVS4+4A>T, Q13X, W22X, DG322, R185X, L496R, L554P, e R548X) do gene FANCC em pacientes com quadro clínico de AF. Foram analisados 121 indivíduos com clínica compatível à AF e com DEB teste positivo. Na amostra encontramos 14% de indivíduos heterozigotos e 4% de indivíduos homozigotos para as mutações mais freqüentes do gene FANCC. As mutações mais prevalentes foram: IVS4+4A>T com 6,6% dos alelos analisados, com freqüência similar à encontrada na literatura, W22X com 2.47% dos cromossomos analisados e Q13X com 1.23% dos cromossomos analisados. Na triagem de mutações pela técnica de SSCP, encontramos alterações nos éxons 1, 4 e 6. / Abstract: Fanconi anaemia (FA) is an autosomal recessive disease characterized by congenital abnormalities, progressive bone marrow failure and high risk of developing cancer. The most important of the clinic feature is hematologic, and too the most important cause of morbidity and mortality in FA. It's also called Chromosomal Instability Syndrome to the fact of cells presents hipersensibility to DNA cross-linking agents like mitomycin C and diepoxybutane. The incidence of FA is approximately three per million and the heterozygote frequency is estimated at 1 in 300 in Europe and United States. In Brazil there's no data about prevalence of FA. It was discovered at least 13 complementation groups (FANCA, B, C, D1, D2, E, F, G, I, J, L, M e N), and 13 genes have been cloned and there are at least 11 that are related to the disease. The study had as general objective the analysis of the main mutations (IVS4+4A>T, Q13X, W22X, DG322, R185X, L496R, L554P, and R548X) of FANCC gene in patients with clinic compatible of FA. We analyzed 121 patients with compatible clinic and positive DEB test. In the sample we found 14% of individuals heterozygous and homozygous individuals of 4% for the most frequent mutations of the gene FANCC. Mutations were more prevalent: IVS4 4 A> T with 6.6% of alleles tested, often similar to that found in the literature, W22X with 2.47% of chromosomes analyzed and Q13X with 1.23% of chromosomes analyzed. In screening for mutations by the technique of SSCP, we found changes in exons 1, 4 and 6. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Gene regulatory networks are dynamic and continuously remodelled in response to internal and external stimuli. To understand how these networks alter cellular phenotype in response towards specific challenges, my first project sought to develop a methodology to explore how the strength of genetic interactions changes according to environmental context. Defined as sensitivity-based epistasis, the results obtained using this methodology were compared to those generated under the conventional fitness-based approach. By integrating this information with gene expression profiles and physical interaction datasets, we demonstrate that sensitivity-based epistasis specifically highlights genetic interactions with a dynamic component. Having investigated how an external stimulus regulates network dynamics, we next sought to understand of how genome positioning impacts transcription kinetics. This feat was accomplished by cloning two gene-reporter constructs, representing contrasting promoter architectures, across 128 loci along chromosome III in S.Cerevisiae. By comparing expression and noise measurements for promoters with “covered” and “open” chromatin structures against a stochastic model for eukaryotic gene expression, we demonstrate that while promoter structure regulates burst frequency (the rate of promoter activation), positional effects in turn appear to primarily modulate burst size (the number of mRNA produced per gene activation event). By integrating these datasets with information describing global chromatin structure, we suggest that the acetylation state of chromatin regulates burst size across the genome. Interestingly, this hypothesis is further supported by nicotinamide-mediated inhibition of Sir2 which would appear to modulate burst size globally across the genome.