Este estudo teve por objetivos: i) caracterizar o influxo leucocitário induzido pelo veneno de Bothrops insularis (VBi); ii) avaliar a liberação de PGD2 e PGE2, TXA2 e LTB4 e das quimiocinas MCP-1 e KC induzida pelo VBi; iii) analisar a ação do VBi quanto a expressão protéica das enzimas ciclooxigenases (COX -1 e -2) e iv) avaliar a participação dos metabólitos das COX-1 e -2 e 5-LO no influxo leucocitário. O VBi causou aumento de leucócitos circulantes e do influxo de leucócitos PMN e MN para o local de sua injeção. Ainda, veneno induziu a liberação de PGD2, PGE2, TXA2 e LTB4, da MCP-1, mas não da KC, além da expressão protéica de COX-2. O tratamento dos animais com indometacina, etoricoxibe ou zileuton inibiu o influxo de leucócitos induzido pelo VBi na 12ª h. Em conclusão, o VBi tem capacidade de induzir influxo de leucócitos e liberação de mediadores inflamatórios para o local de sua injeção. O influxo leucocitário relaciona-se aos metabólitos das COX -1 e -2, 5-LO, da MCP-1 e do aumento de leucócitos circulantes / In this study the effects of Bothrops insularis venom (BiV) on the leukocyte influx, on the circulating leukocyte numbers and release of mediators, such as PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 and KC into the local of its injection. Moreover, the role of eicosanoids in the BiV- induced leukocyte influx was assessed by selected pharmacological treatments. PMN were accumulated from 6 up to 24 h and MN cells from 3 up to 72 h when injected into the peritoneal cavity of mice. Moreover, BiV increased blood leukocyte at 3 h after injection and incresed the levels of PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 at distinct periods of time. In addition, BiV induced the protein expression of COX-2 from 1 up to 12 h and the BiV-induced leukocyte influx was reduced by indomethacin or etoricoxib or zileuton at 12 h after injection. In conclusion, BiV is able to induce leukocyte influx and increase of blood leukocyte numbers. Moreover, the ability of BiV to induce expression of COX-2 and release of inflammatory mediators is relevant for the leukocytes influx into the local of its injection

A ação de fosfolipases A2 (FLA2s): miotoxinas (MTs) ?II e III, isoladas de Bothrops asper (VBa) e CB2, de Crotalus durissus terrificus (VCdt) e os venenos brutos, sobre a expressão de ciclooxigenases (COXs) e síntese de prostaglandina (PG) E2 e PGD2 foi avaliada. As MTs e VBa mas não CB2 e nem VCdt induziram a expressão de COX-2 por leucócitos. Em estudos in vitro ocorreram a liberação de PGs e expressão de COX-2, após a incubação de macrófagos (M?s) com FLA22s e, de neutrófilos (N?s) e M?s, com VBa. A CB2 induziu somente a liberação de PGs. A inibição de FLA2 citosólica (cFLA2), diminuiu os níveis de PG induzidos pelas MTs, mas não pela CB2, e não afetou a expressão de COX-2 induzida pelas MTs. O envolvimento do NF-?kB na expressão de COX-2 foi mostrado com inibidores. Em conclusão, MTs, CB2 e VBa estimulam a síntese de PGs in vivo e in vitro e MTs e VBa, mas não CB2, induzem a expressão de COX-2. O VCdt não afeta estes parâmetros. O efeito das MTs sobre a expressão de COX-2 e PGs é mediado pelo NF-kB e pela cFLA2, respectivamente. Os efeitos de CB2 na produção de PGs são independentes de cFLA2s e COX-2. O fato da MT-II ser destituída de atividade enzimática sugere que a atividade catalítica per se, não seja relevante para os efeitos observados. / Action of the phospholipase A2 (PLA22): myotoxins (MTs) -II and -III, from Bothrops asper (BaV) and CB2, from Crotalus durissus terrificus (CdtV) and these venoms on cyclooxygenases (COXs) and synthesis of prostaglandins (PGs) E2 and D2 were studied in vivo and in vitro. Intraperitoneal injection of sPLA22s and BaV but not CdtV released PGD2 and PGE2. MTs and BaV but neither CB2 nor CdtV induced expression of COX-2 by leukocytes. Release of PGs and expression of COX-2 occurred in vitro after incubation of macrophages (M?s) with PLA2 and neutrophils (N?) and M?s with BaV. CB2 induced only PGs release. Inhibition of cytosolic PLA2 (cPLA2), reduced PG levels caused by MTs, but not by CB2 while did not affect MTs-induced COX-2 expression. Involvement of NF-kB in COX-2 was showed using with inhibitors. In conclusion MTs, CB2 and BaV stimulate the synthesis of PGs in vivo and in vitro and MTs and BaV, but not CB2, induce COX-2 expression. VCdt does not affect these parameters. Effect of MTs on COX-2 is mediated by NF-kB, and on PGs by cPLA2. Effects of CB2 on PGs are independent of cPLA2 and OX-2. Since MT-II lacks catalytic activity the PLA2 activity per se is not relevant for activation of this cascade.

A ação de fosfolipases A2 (FLA2s): miotoxinas (MTs) ?II e III, isoladas de Bothrops asper (VBa) e CB2, de Crotalus durissus terrificus (VCdt) e os venenos brutos, sobre a expressão de ciclooxigenases (COXs) e síntese de prostaglandina (PG) E2 e PGD2 foi avaliada. As MTs e VBa mas não CB2 e nem VCdt induziram a expressão de COX-2 por leucócitos. Em estudos in vitro ocorreram a liberação de PGs e expressão de COX-2, após a incubação de macrófagos (M?s) com FLA22s e, de neutrófilos (N?s) e M?s, com VBa. A CB2 induziu somente a liberação de PGs. A inibição de FLA2 citosólica (cFLA2), diminuiu os níveis de PG induzidos pelas MTs, mas não pela CB2, e não afetou a expressão de COX-2 induzida pelas MTs. O envolvimento do NF-?kB na expressão de COX-2 foi mostrado com inibidores. Em conclusão, MTs, CB2 e VBa estimulam a síntese de PGs in vivo e in vitro e MTs e VBa, mas não CB2, induzem a expressão de COX-2. O VCdt não afeta estes parâmetros. O efeito das MTs sobre a expressão de COX-2 e PGs é mediado pelo NF-kB e pela cFLA2, respectivamente. Os efeitos de CB2 na produção de PGs são independentes de cFLA2s e COX-2. O fato da MT-II ser destituída de atividade enzimática sugere que a atividade catalítica per se, não seja relevante para os efeitos observados. / Action of the phospholipase A2 (PLA22): myotoxins (MTs) -II and -III, from Bothrops asper (BaV) and CB2, from Crotalus durissus terrificus (CdtV) and these venoms on cyclooxygenases (COXs) and synthesis of prostaglandins (PGs) E2 and D2 were studied in vivo and in vitro. Intraperitoneal injection of sPLA22s and BaV but not CdtV released PGD2 and PGE2. MTs and BaV but neither CB2 nor CdtV induced expression of COX-2 by leukocytes. Release of PGs and expression of COX-2 occurred in vitro after incubation of macrophages (M?s) with PLA2 and neutrophils (N?) and M?s with BaV. CB2 induced only PGs release. Inhibition of cytosolic PLA2 (cPLA2), reduced PG levels caused by MTs, but not by CB2 while did not affect MTs-induced COX-2 expression. Involvement of NF-kB in COX-2 was showed using with inhibitors. In conclusion MTs, CB2 and BaV stimulate the synthesis of PGs in vivo and in vitro and MTs and BaV, but not CB2, induce COX-2 expression. VCdt does not affect these parameters. Effect of MTs on COX-2 is mediated by NF-kB, and on PGs by cPLA2. Effects of CB2 on PGs are independent of cPLA2 and OX-2. Since MT-II lacks catalytic activity the PLA2 activity per se is not relevant for activation of this cascade.

Este estudo teve por objetivos: i) caracterizar o influxo leucocitário induzido pelo veneno de Bothrops insularis (VBi); ii) avaliar a liberação de PGD2 e PGE2, TXA2 e LTB4 e das quimiocinas MCP-1 e KC induzida pelo VBi; iii) analisar a ação do VBi quanto a expressão protéica das enzimas ciclooxigenases (COX -1 e -2) e iv) avaliar a participação dos metabólitos das COX-1 e -2 e 5-LO no influxo leucocitário. O VBi causou aumento de leucócitos circulantes e do influxo de leucócitos PMN e MN para o local de sua injeção. Ainda, veneno induziu a liberação de PGD2, PGE2, TXA2 e LTB4, da MCP-1, mas não da KC, além da expressão protéica de COX-2. O tratamento dos animais com indometacina, etoricoxibe ou zileuton inibiu o influxo de leucócitos induzido pelo VBi na 12ª h. Em conclusão, o VBi tem capacidade de induzir influxo de leucócitos e liberação de mediadores inflamatórios para o local de sua injeção. O influxo leucocitário relaciona-se aos metabólitos das COX -1 e -2, 5-LO, da MCP-1 e do aumento de leucócitos circulantes / In this study the effects of Bothrops insularis venom (BiV) on the leukocyte influx, on the circulating leukocyte numbers and release of mediators, such as PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 and KC into the local of its injection. Moreover, the role of eicosanoids in the BiV- induced leukocyte influx was assessed by selected pharmacological treatments. PMN were accumulated from 6 up to 24 h and MN cells from 3 up to 72 h when injected into the peritoneal cavity of mice. Moreover, BiV increased blood leukocyte at 3 h after injection and incresed the levels of PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 at distinct periods of time. In addition, BiV induced the protein expression of COX-2 from 1 up to 12 h and the BiV-induced leukocyte influx was reduced by indomethacin or etoricoxib or zileuton at 12 h after injection. In conclusion, BiV is able to induce leukocyte influx and increase of blood leukocyte numbers. Moreover, the ability of BiV to induce expression of COX-2 and release of inflammatory mediators is relevant for the leukocytes influx into the local of its injection

O Glioblastoma (GBM) é um astrocitoma grau IV, representando o glioma de maior malignidade e o tumor cerebral primário mais frequente em humanos. A terapia indicada para o GBM é a ressecção cirúrgica, quimioterapia e radioterapia, todas com baixíssima eficiência devido a agressividade e as características do GBM. Consequentemente, a sobrevida dos pacientes indicados aos tratamentos convencionais é pouco mais de um ano. A inflamação é, sabidamente, uma das características que participa de modo decisivo do desenvolvimento tumoral, incluindo do GBM, e as relações entre mediadores inflamatórios e câncer são alvos de pesquisa nos últimos anos. Diversos estudos apontam um papel da via dos eicosanoides na modulação de processos patológicos envolvidos na inflamação e no câncer. Os eicosanoides são mediadores lipídicos bioativos, envolvidos em diversos processos fisiológicos e patológicos, em especial os associados à resposta inflamatória. As principais vias de produção de eicosanoides (ciclooxigenases, lipoxigenases, e citocromo P450), assim como seus produtos, são frequentemente alterados em diversos tipos de tumor, associados ao crescimento e a progressão tumoral. Contudo, o perfil dessas vias é consideravelmente pouco compreendido em GBM. O objetivo deste estudo foi analisar in vitro o perfil e o papel das três vias de eicosanoides e seus produtos (eicosanoides ou não) nas linhagens de GBM (U251-MG, U87-MG, A172, T98G e U138-MG), modulando a atividade de enzimas chaves com drogas especificas para, então, analisar parâmetros de proliferação, migração e morte celular. Nossos resultados mostram, em todas as linhagens analisadas, um perfil heterogêneo das enzimas e receptores chaves das três vias. O perfil lipídico evidencia a produção de 13-HODE, produto de 15-lipoxigenase-1 em todas as linhagens, bem como ausência de leucotrienos e 5-HETE do eixo de 5-lipoxigenase. Os inibidores farmacológicos para 15-LOX e 12-LOX/15-LOX foram capazes de reduzir o crescimento, modular o ciclo celular e a migração celular das linhagens U251-MG, U87-MG e A172. O mesmo é visto com a inibição de mPGES-1. A inibição de 5-LOX por outro lado não afetou nenhum parâmetro nas mesmas linhagens. Todos os resultados apontam, portanto, para um papel do eixo de 15-LOX e COX no crescimento e na migração das células de GBM humano. / Glioblastoma (GBM) is a grade IV astrocytoma, the most malignant and the most frequent primary brain tumour in humans. Standard therapies for treating GBM are surgical resection, chemotherapy and radiotherapy, all with low efficiency due to GBM aggressiveness and characteristics. Therefore, patient survival after conventional treatments is about one year. Inflammation is one of the main characteristics that plays a decisive role in tumour development, including in GBM. The relationships between inflammatory mediators and cancer have been the subject of research in recent years. Several studies point to the eicosanoid pathways as modulators of pathological processes between inflammation and cancer. Eicosanoids are bioactive lipid mediators, involved in various physiological and pathological processes, especially those associated with the inflammatory response. The major eicosanoid pathways (cyclooxygenases, lipoxygenases, and cytochrome P450) as well as their products, are frequently altered in several tumours, associated with tumour growth and progression. However, the profile of these pathways is poorly understood in GBM. The objective of this study was to analyse, in vitro, the profile and role of eicosanoid pathways and their products (eicosanoids or not) in GBM cell lines (U251-MG, U87-MG, A172, T98G and U138-MG), modulating the key enzymes with inhibitors, analysing proliferation, migration and cell death. Our results show, in all analysed cell lines, a heterogeneous profile for the key enzymes and receptors of the three pathways. The lipid profile shows the production of 13-HODE, a product of 15-lipoxygenase-1, as well the absence of leukotrienes and 5-HETE of the 5-lipoxygenase axis. The pharmacological inhibitors for 15-LOX and 12-LOX / 15-LOX led to changes in cell cycle, reduced growth, reduced migration of U251-MG, U87-MG and A172 cell lines. The same was seen with the inhibition of mPGES-1. Inhibition of 5-LOX, on the other hand, did not affect any of these parameters in the same cell lines. All results, therefore, point to an important role of 15-LOX and COX pathways in the growth and migration of human GBM cells.