El oocito de mamífero está rodeado por una matriz denominada zona pelúcida (ZP). Esta envoltura participa en procesos tales como la inducción de la reacción acrosómica, la unión de espermatozoides y también puede estar implicada en la especiación. Estudios recientes han demostrado que la matriz de ZP de ovocitos en varias especies se compone de cuatro glicoproteínas, denominadas ZP1, ZP2, ZP3 y ZP4, en lugar de las tres descritas en el ratón, cerdo y vaca. En la gata (Felis catus), esta matriz se compone de al menos tres glicoproteínas denominadas ZP2, ZP3 y ZP4. Sin embargo, la presencia de cuatro proteínas en varios mamíferos, sugiere que necesita una reevaluación de la ZP en la gata. Además, en esta tesis, se realizaron investigaciones para determinar la expresión de una cuarta glicoproteína en la ZP de conejo (Oryctolagus cuniculis). Los objetivos de esta investigación fueron analizar la composición de proteínas de ZP gato por medio de análisis proteómico y en el conejo se amplificó ZP1 mediante la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR). En la ZP aislada de ovarios y ovocitos de gato, se detectaron varios péptidos correspondientes a cuatro proteínas, teniendo una cobertura del 33,17%, 71,50%, 50,23% y 49,64% para ZP1, ZP2, ZP3 y ZP4, respectivamente. Por otra parte, se confirmó por análisis molecular la expresión de los cuatro genes de ZP a partir de ARN total aislado de ovarios de gato, las ZPs de gato fueron parcialmente amplificadas por RT-PCR. En el conejo la ZP1 incluye un marco de lectura abierto de 1825 nucleótidos que codifican un polipéptido de 608 residuos de aminoácidos. La secuencia de aminoácidos deducida de ZP1 de conejo mostró una alta identidad con otras especies: 70% de identidad con ZP1 humana y caballo y 67% de identidad con la ZP1 de ratón y rata. A nivel proteómico, fueron detectados por espectrometría de masas péptidos correspondientes a las cuatro proteínas ZP. Además, mediante un análisis filogenético molecular de ZP1 mostró que este gen presenta una pseudogenización de por lo menos cuatro veces durante la evolución de los mamíferos. Los datos presentados en esta tesis proporcionan evidencia, por primera vez, que la ZP de conejo y la ZP de gato se compone de cuatro glicoproteínas. 2 / The mammalian oocyte is surrounded by a matrix called the zona pellucida (ZP). This envelope participates in processes such as acrosome reaction induction, sperm binding, and may be involved in speciation. Recent studies have shown that the ZP matrix of oocytes in several species is composed of four glycoproteins, designated ZP1, ZP2, ZP3 and ZP4, rather than the three described in mouse, pig and cow. In cat (Felis catus), this matrix is composed of at least three glycoproteins called ZP2, ZP3 and ZP4. However, the presence of a fourth protein in several mammals, meaning that a reevaluation of cat ZP is needed. Additionally, in this thesis, investigations were carried out to unveil a fourth glycoprotein in the rabbit (Oryctolagus cuniculis) ZP. The objectives of this research was to analyse of the protein composition of cat ZP by means of proteomic analysis and rabbit ZP1 was amplified by reverse transcribed polymerase chain reaction (RT-PCR). Using ZP from ovaries and oocytes of cat, several peptides corresponding to four proteins were detected, yielding a coverage of 33.17%, 71.50%, 50.23% and 49.64% for ZP1, ZP2, ZP3 and ZP4, respectively. Moreover, the expression of four genes was confirmed by molecular analysis. Using total RNA isolated from cat ovaries, the complementary deoxyribonucleic acids (cDNAs) encoding cat ZPs were partially amplified by RT-PCR. In the rabbit the ZP1 cDNA contains an open reading frame of 1825 nucleotides encoding a polypeptide of 608 amino acid residues. The deduced amino acid sequence of rabbit ZP1 showed high identity with other species: 70% identity with human and horse ZP1, and 67% identity with mouse and rat ZP1. At the proteomic level, peptides corresponding to the four proteins were detected by mass spectrometry. In addition, a molecular phylogenetic analysis of ZP1 showed that pseudogenization of this gene has occurred at least four times during the evolution of mammals. The data presented in this thesis provide evidence, for the first time, that the rabbit and cat ZP is composed of four glycoproteins.

Objetivo: Comprobar la seguridad y valorar la eficacia del uso del constructo formado por células mesenquimales de médula ósea humana (MSC) sembradas y cultivadas sobre matriz po-rosa de fosfato tricálcico (FTC) asociadas a matriz ósea desmineralizada (MOD) implantada en en ratones inmunodeprimidos NOD/SCID. Objetivos específicos: Estudiar la toxicidad aguda y crónica del implante (FTC+MSC+MOD) en modelo murino NOD/SCID. Estudiar la biodistribución del constructo (FTC+MSC+MOD) implantado en modelo murino NOD/SCID. Valorar si hay formación de tejido óseo en el lugar del implante en el ratón NOD/SCID del constructo (FTC+MSC+MOD). Valorar a partir de que momento se observa formación ósea en el lugar del implante en el ratón NOD/SCID del constructo (FTC+MSC+MOD). Metodología: Estudio prospectivo analítico con 30 ratones NOD/SCID divididos en 2 grupos de ensayo. El grupo experimental, de 25 ratones, se implanta subcutánea e intramuscularmente un constructo formado por células madre mesenquimales humanas sembradas en fosfato tricálcico mezcladas con matriz ósea desmineralizada (MSC+FTC+MOD). En el segundo grupo, control, de 5 ratones se implanta de forma análoga el constructo formado por suero salino fisiológico al 0,9%, fosfato tricálcico y matriz ósea desmineralizada (SSF 0,9%+FTC+MOD). Los ratones del primer grupo fueron sacrificados por parejas de macho y hembra a las 24h, a las 48h, a la semana, a las 2, 5, 7 y 9 semanas tras la cirugía. Los ratones del se-gundo grupo y los 11 ratones restantes del primer grupo se sacrificaron a las 12 semanas. Se ha evaluado la toxicidad aguda, a las 24 y 48 horas tras la cirugía, mediante el control del peso, el índice de bienestar animal, análisis sanguíneo, bioquímico y estudios histológicos de los órganos: hígado, pulmón, bazo, cerebro, riñón, corazón, gónadas, médula ósea y hueso. La toxicidad crónica fue evaluada mediante los mismos estudios que en fase aguda sacrificando 2 ratones en la 1ª, 2ª, 5ª, 7ª, 9ª semana, once ratones en la 12ª semana y los 5 ratones del 2º grupo. Para evaluar la biodistribución del constructo se realizó análisis PCR-RT de 2 proteínas, la Actina y la β2microglobulina a hígado, pulmón, bazo, cerebro, riñón, corazón, gónadas, médula ósea y de la sangre periférica de cada ratón sacrificado. Para valorar la eficacia se realizaron estudios histológicos del constructo implantado con hematoxilina-eosina, tricrómico de Masson y estudios inmunohistoquímicos cualitativos y cuantitativos con anticuerpos anti-osteocalcina. Resultados o Conclusiones El implante subcutáneo o intramuscular del constructo FTC+MSC+MOD no ha mostrado signos de toxicidad aguda o crónica en el modelo murino NOD/SCID. Tras la implantación del constructo FTC+MSC+MOD implantado de forma subcutánea o intramuscular en el modelo murino NOD/SCID no han sido halladas células mesenquima-les humanas en ningún órgano. Permaneciendo las células en el lugar del implante. No se han observado diferencias estadísticamente significativas entre el poder osteogéni-co del constructo FTC+MSC+MOD. Aunque si existen entre el poder osteogénico del im-plante subcutáneo e intramuscular. La formación de tejido óseo estructurado se ha observado a partir de la semana 7 en la zona de implante subcutánea y a partir de la semana 9 en la zona de implante intramus-cular. / To check the security and assess the effectiveness, of the use of mesenchymal cells of human bone marrow (MSC) seeded and cultured on tricalcium phosphate porous matrix (FTC) associated with demineralized bone matrix (MOD) implanted in immunosuppressed mice NOD/SCID. Specific objectives: To study the acute and chronic toxicity of the implant (FTC+MSC+MOD) construct in muri-ne NOD/SCID model. To study the biodistribution of the implant (FTC+MSC+MOD) construct in murine NOD/SCID model. To evaluate the formation of bone tissue at the site of the (FTC+MSC+MOD) construct im-plant. To evaluate the cronology of bone tissue formation at the site of the (FTC+MSC+MOD) construct implant. Methodology Analytical prospective study with 30 NOD/SCID mice divided into 2 treatment groups was performed. In the first group of 25 mice, a construct of mesenchymal stem cells seeded and cultured on tricalcium phosphate porous matrix and associated with demineralized bone matrix (MSC+FTC+MOD) was implanted subcutaneously and intramuscularly In the second group of 5 mice, a construction of 0,9% saline, matrix porous tricalcium phosphate associated with demineralized bone matrix (SSF0,9%+FTC+MOD) was im-planted also subcutaneously and intramuscularly Male and female mice pairs of the first group were - sacrificed at 24 h, 48 h, 1 week and then 2,5,7 and 9 weeks after surgery. The second group of mice and the 11 remaining mice of the first group were sacrificed at 12 weeks. Acute toxicity was evaluated by the assessment of - weight, the animal welfare score, blood and biochemical analysis and histological studies of organs: liver, lung, spleen, brain, kidney, heart, gonads, bone marrow and bone of each mouse sacrificed in the first 48h after surgery. Chronic toxicity was evaluated by the same studies sacrificing 2 mice in the 1st, 2nd, 5th, 7th and 9th week, eleven mice in the 12 th week, and the remaining 5 of the second group. Biodistribution of the construct was analysed by RT-PCR test of 2 proteins, actin and the β2microglobulin of liver, lung, spleen, brain, kidney, heart, gonads, bone marrow and pe-ripheral blood from each mouse sacrificed. Effectiveness was evaluated at implanted site by qualitative and quantitative studies Im-munohistochemistry with anti-osteocalcin antibodies and histological studies with hema-toxylin-eosin, Masson's trichrome were performed. Conclusions Construct (FTC+MSC+MOD) implanted via subcutaneous or intramuscular has not pre-sented any signs of acute or chronic toxicity in the mouse model NOD / SCID. Human mesenchymal stem cells have not been found in any organ analyzed at murine model of Construct (FTC+MSC+MOD) implanted subcutaneously or intramuscularly . These have remained at the implant site. No statistically significant differences were observed between the osteogenic power of the construct MSC + FTC + MOD. However, it has definetely been found between subcutane-ous and intramuscular implant. Structured bone formation is observed from week 7 in the subcutaneous implant and from week 9 in the intramuscular implant.

En las sociedades occidentales, el aumento de la esperanza de vida y el fenómeno de inversión demográfica, están generando un incremento en los sectores de mayor edad. Es por tanto prioritaria, la investigación de nuevas fórmulas que atenúen los padecimientos propios del envejecimiento, que pueden limitar la calidad de vida, como son la fatiga y el deterioro cognitivo. El objetivo de este trabajo es analizar el efecto de la L-Carnitina en la fatiga y en las funciones cognitivas, en un grupo de ancianos institucionalizados. Para ello seleccionamos treinta y tres residentes de una institución geriátrica, que fueron distribuidos en dos grupos homogéneos a recibir placebo o L-Carnitina, a dosis de dos g al día, durante cuatro meses. Realizamos tres valoraciones, al inicio, al segundo mes y al cuarto mes. Se determinaron los valores plasmáticos de L-Carnitina, Total y Libre, y se aplicaron los siguientes cuestionarios de valoración: el cuestionario de la naturaleza de la fatiga de Wessely-Powell, el cuestionario de severidad de la fatiga de Krupp, así como el cuestionario de Pfeiffer para la situación cognitiva. Además decidimos incluir el índice de Katz para la valoración funcional y un test de cribado ultracorto de depresión geriátrica. Encontramos que la deficiencia de L-Carnitina estaba presente casi en un tercio de nuestra población. Los valores plasmáticos finales de L-Carnitina Libre solamente se incrementaron en los varones del grupo experimental, de forma significativa con respecto a los varones del grupo placebo. Los valores de L-Carnitina Total, también se encontraban aumentados en los varones del grupo experimental así como en mujeres del grupo placebo. En relación a la fatiga, las mujeres del grupo de la L-Carnitina fueron las únicas que disminuyeron, de forma no significativa, la naturaleza de la fatiga, y que mantuvieron los valores en la de severidad de la fatiga, a diferencia del resto de grupos que empeoró. Se evidenció una tendencia a la mejoría en las funciones cognitivas en el grupo de la L-Carnitina, frente a un claro empeoramiento significativo en el caso de las mujeres del grupo placebo. La valoración funcional se mantuvo invariable en todos los grupos a lo largo del estudio y el cribado de depresión ultracorto evidenció un empeoramiento significativo en el grupo placebo, con una ligera mejora en los varones del grupo experimental. Concluimos que la deficiencia de L-Carnitina es una situación prevalente en los ancianos, que su administración oral es muy bien tolerada y que ésta podría disminuir, tanto el grado de fatiga, como sucedió con las mujeres, como el deterioro cognitivo. / In Western societies, the increase in life expectancy and the phenomenon of demographic investment are generating an increase in older sectors. It is therefore a priority to research new ways of mitigating the suffering of elderly people, which can limit the quality of life through fatigue and cognitive impairment, amongst others. The aim of this paper is to analyze the effect of L-Carnitine on fatigue and cognitive function in a group of institutionalized elderly. We selected thirty-three elderly in a geriatric institution, which were distributed in two homogeneous groups, to receive placebo or L-Carnitine at a dose of two grams per day for four months. We performed three evaluations: at the beginning, the second month and the fourth month. Plasma levels of L-Carnitine (total and free) were determined, and the following assessment questionnaires were applied: the Wessely-Powell questionnaire on the nature of fatigue, the Krupp questionnaire on fatigue severity and the Pfeiffer questionnaire on cognitive status. In addition, we decided to include the Katz index for functional assessment and a short test for geriatric depression screening. We found that L-Carnitine deficiency was present almost a third of our population. The final free L-Carnitine plasma levels only increased significantly in males in the experimental group, with respect to men in the placebo group. The total L-Carnitine values were also increased in the male experimental group as well as female placebo group. With regard to fatigue, the L-carnitine group women were the only ones that reduced the nature of fatigue, (but not statistically significant), and that maintained values in the severity of fatigue, whilst the other groups worsened. A trend towards improved cognitive functions was observed in in the L-Carnitine group, against a clear significant worsening in the case of the placebo group women. Functional assessment remained unchanged in all groups throughout the study, and depression screening showed a significant worsening in the placebo group, with a slight improvement in the male experimental group. We conclude that carnitine deficiency is a prevalent situation in the elderly, oral administration is well tolerated and that it could reduce both the degree of fatigue, as happened with women, such as cognitive impairment

Tesis por compendio de publicaciones / El objetivo principal de este trabajo fue el estudio y rentabilidad de la aplicación de la inseminación post-cervical en granja así como el estudio de la influencia de distintas poblaciones espermáticas con diferentes características en su selección en el útero de la cerda; para ello se analizaron los espermatozoides que fueron expulsados en el reflujo tras la inseminación y aquellos que llegaron a la unión útero-tubárica. Los resultados se reflejan en la publicación de cuatro artículos. En el artículo I, los resultados mostraron que la aplicación de inseminación post-cervical tiene unos rendimientos reproductivos similares o superiores que la inseminación cervical, siendo los rendimientos mayores cuando se inseminan cerdas con 2-3 o ≥6partos.Al mismo tiempo se realizó un estudio económico detallado de la aplicación de la inseminación post-cervical en granja, siendo éste sustancialmente beneficioso al aplicar dicha técnica en comparación con la inseminación tradicional. Además, se pudo observar que tanto el volumen (%) como el número de espermatozoides (%) en el reflujo eran superiores cuando se utilizaba la inseminación cervical en relación a la post-cervical. Por otro lado, la calidad espermática se encontraba reducida en aquellos espermatozoides recogidos en el reflujo comparados con la dosis seminal inicial. En el artículo II, se evaluó la influencia de diferentes niveles de motilidad espermática en la dosis de inseminación sobre el % de cerdas con reflujo, el volumen (%), concentración espermática (%) y tipo de espermatozoides (%) (basados en sus características mótiles) recolectados en el reflujo a diferentes tiempos tras la inseminación post-cervical. Los resultados mostraron que no había diferencias en el % de cerdas que presentaban reflujo independientemente de la dosis de inseminación recibida (motilidad baja, media o alta). De la misma manera no se observaron diferencias en relación al volumen (%) y número de espermatozoides (%) entre los diferentes grupos experimentales a los distintos tiempos de recogida. Sin embargo, el % de espermatozoides de media o baja motilidad recolectados en el reflujo eran mayores que si presentaban una motilidad alta. Este hecho se observó a partir de los 16 minutos tras la inseminación, indicando un proceso de expulsión de espermatozoides aleatorio en los primeros momentos tras la inseminación (0-15 min) mientras que entre los 16-60 minutos, la eliminación espermática se correspondía a un proceso selectivo descartando en mayor medida espermatozoides con una capacidad mótil disminuida. En el artículo III, se evaluó la diferencia morfométrica entre los espermatozoides recolectados en el reflujo y en los que se encontraron en la unión útero-tubárica con aquellos que conformaban la dosis seminal de inseminación. Los resultados mostraron que el reflujo está formado por poblaciones espermáticas con una determinada dimensión y forma, siendo los de un tamaño de cabeza y longitud del flagelo menor los que tienden a ser encontrados en el reflujo. Además se comprobó que ni el fluido uterino, ni la alteración de acrosomas ni la osmolaridad estaban implicados en los cambios morfométricos. Por otro lado, se observó que el lugar de deposición espermático influía en el tamaño del espermatozoide que se recolectaba en el reflujo. Además, los datos obtenidos muestran que los espermatozoides que alcanzan la unión útero-tubárica presentan la misma longitud del flagelo que aquellos presentes en la dosis inicial de inseminación. En el artículo IV, barajamos la hipótesis de que los espermatozoides con morfoanomalías podían ser descartados o modificados por el ambiente uterino tras la deposición en el tracto genital de la hembra. Los resultados mostraron un mayor % de espermatozoides con morfoanomalías en el reflujo que en la dosis seminal y prácticamente la totalidad de la población espermática que colonizaba la unión útero-tubárica presentaban una morfología normal. Por otro lado, se observó que el fluido uterino no tenía ninguna influencia en cambios morfológicos de los espermatozoides eyaculados, sin embargo, cuando el fluido uterino se incubó con espermatozoides epididimarios se produjo una drástica reducción de las morfoanomalías. En conclusión, la presente tesis doctoral muestra que la inseminación artificial post-cervical es una técnica viable para su uso en las granjas. De hecho las ventajas obtenidas tanto a nivel reproductivo como económico son claras, siendo su implementación y aplicación a nivel de campo unarealidad. Por otro lado, se ha comprobado que los eyaculados son poblaciones heterogéneas con diversas características de motilidad, morfología y morfometría, y que estas particularidades propias de cada espermatozoide, influyen en su interacción con el tracto genital de la hembra una vez que son depositados. La mayor parte de los espermatozoides son eliminados en su trayecto hacia el lugar de fecundación, y esa discriminación parece ser un proceso selectivo o debido a modificaciones de algunas de las características propias del espermatozoide que sufren en su interacción con el útero. / The main objective of this work was to study the viability of applying post-cervical insemination on the farm, as well as to the study the influence of different spermatozoa populations - with different characteristics - on the selection that takes place in the sow uterus; for this we analyzed spermatozoa which were expelled in the reflux after insemination and those which did reach the utero-tubal junction. In article I, the results showed that the use of post-cervical insemination produces a very similar or even higher reproductive yield than cervical insemination, the yield being much higher when inseminating sows with 2-3 or ≥6 births. At the same time, a detailed economic study of post-cervical insemination on the farm showed that this method produced substantially greater benefits than traditional insemination. Moreover, we were able to observe that the volume (%) as well as the number of spermatozoa (%) in the reflux was higher when using cervical insemination compared to post-cervical. On the other hand, the sperm quality was lower in those spermatozoa collected from the reflux compared to the initial insemination quality. In article II, we evaluated the influence of different levels of sperm motility in the insemination dose on the percentage of sows with reflux, the volume (%), sperm concentration (%), and type of spermatozoa (%) (based on the motility characteristics) collected from the reflux at different times after post-cervical insemination. The results showed that there were no differences in the % of sows which had reflux, regardless of the insemination dose received (low, medium or high motility). In the same way, there were no observable differences as regards the volume (%) and number of spermatozoa (%) between the different experimental groups at different times of collection. However, the % of spermatozoa of medium or low motility collected in the reflux was higher than those of higher motility. This observation was made 16 minutes after insemination, indicating the expulsion of random spermatozoa in the first moments following insemination (0-15 min), while at 16-60 minutes sperm elimination was a selective process, whereby spermatozoa with a low motility were expelled. In article III, we evaluated the morphometric differences between spermatozoa collected in the reflux and utero-tubal junction and those that formed the initial insemination dose. The results showed that the reflux was formed of sperm populations with a certain size and shape, mainly those with a small head and flagellum. It was also demonstrated that the uterine fluid, acrosome alteration and osmorality were not involved in these morphometric changes. On the other hand, we observed that the sperm deposition place was related with the size of the spermatozoa collected during reflux. Moreover, the data obtained showed that spermatozoa which reached the utero-tubal junction had the same length as those in the initial insemination dose. In article IV, we considered the hypothesis that the spermatozoa with morphoanomalies could be eliminated or modified by the uterine environment after deposition in the female genital tract. The results showed a higher % of spermatozoa with morphoanomalies in the reflux than in the seminal dose, while practically the whole spermatozoa population which colonized the utero-tubal junction had a normal morphology. Moreover, it was seen that the uterine fluid had no effect on the morphological changes that occurred in the ejaculated spermatozoa, although when the uterine fluid was incubated with epididymal spermatozoa, there was a drastic decrease in the number morphoanomalies. In conclusion, this PhD thesis shows that post cervical artificial insemination is a viable technique for use in farms, where the advantages are clear from both reproductive and economic points of view. Indeed, its implementation and application on farms is firmly established. Furthermore, we demonstrate that ejaculations are heterogeneous populations with a diverse motility, morphology and morphometry, and that these particularities - characteristics of each spermatozoon - influence any interaction with the genital tract of the female once deposited. Most spermatozoa are eliminated during their journey to the site of fecundation in what seems to be a selective process of discrimination or due to modifications in some of the characteristics of each individual spermatozoon as it interacts with the uterus.

Introducción. Aunque la ecocardiografía es la técnica de elección para evaluar el grado de severidad de la estenosis aórtica, en determinados pacientes tiene sus limitaciones. De ahí surge el interés por determinar otros parámetros, como el fragmento terminal del péptido natriurético tipo B (NT-proBNP) y la calcificación valvular aórtica, que se relacionen de forma adecuada con la severidad de la estenosis. En relación al pronóstico de los pacientes con estenosis aórtica grave, éste es excelente mientras los pacientes permanecen asintomáticos. Sin embargo, empeora de forma significativa una vez que los síntomas aparecen. Como no siempre es posible una rápida asistencia al paciente que desarrolla síntomas, predecir qué pacientes asintomáticos con estenosis aórtica moderada-grave tienen un mayor riesgo de evolución adversa, es objeto permanente de investigación. Por lo tanto, los objetivos del presente estudio fueron analizar la relación existente entre los niveles de NT-proBNP y de calcificación valvular aórtica, y los parámetros ecocardiográficos de severidad de la estenosis en pacientes con estenosis aórtica calcificada moderada-grave asintomática; determinar el pronóstico a 24 meses de seguimiento de los pacientes asintomáticos con estenosis aórtica moderada-grave, en su actual contexto epidemiológico; y evaluar el valor pronóstico de parámetros clínicos, ecocardiográficos, electrocardiográficos, analíticos, y de calcificación valvular aórtica a 24 meses de seguimiento en estos pacientes. Método. Se realizó un estudio de cohortes prospectivo unicéntrico en el que se reclutaron durante un período de dos años todos los pacientes valorados mediante ecocardiografía-Doppler en la Unidad de Evaluación no invasiva del Complejo Hospitalario Universitario de Cartagena, en los que se observó la existencia de una estenosis aórtica calcificada moderada-grave asintomática (velocidad pico de flujo a nivel de la válvula aórtica (Vmax Ao) ≥ 3,5 m/s). Los pacientes fueron sometidos a un seguimiento clínico durante 24 meses, en el que se valoró la aparición de eventos adversos, considerándose tales la indicación de reemplazo valvular aórtico (RVA) por aparición de síntomas o la muerte cardíaca. Resultados y Conclusiones. Se reclutaron 63 pacientes, en los que en el 30,2% se indicó cirugía de RVA por aparición de síntomas, no hubo ninguna muerte cardíaca durante el seguimiento, el 6,3% fallecieron por causa no cardíaca y el 1,6% de pacientes se intervino de cirugía valvular aórtica de forma electiva. Los pacientes restantes completaron el seguimiento, no alcanzando ningún evento de interés. Los niveles de NT-proBNP y de calcificación valvular aórtica se presentan como una herramienta modesta en la evaluación del grado de severidad de la estenosis aórtica moderada-grave asintomática. Un punto de corte de calcificación valvular aórtica de 3148 unidades arbitrarias presenta una sensibilidad del 52%, una especificidad del 100%, un valor predictivo positivo del 100% y un valor predictivo negativo del 33%, para el diagnóstico de severidad de la estenosis aórtica. Los análisis de supervivencia univariados mostraron que una Vmax Ao ≤ 4,4 m/s, un ∆Pmed < 50 mmHg, un IMV < 170 g/m2, la ausencia de criterios electrocardiográficos de hipertrofia ventricular izquierda de Romhilt y Estes, y un valor de NT-proBNP ≤ 700 pg/ml en el momento del reclutamiento, se asociaron a una mayor supervivencia libre de eventos adversos durante el seguimiento. El análisis multivariado mostró que la presencia de Vmax Ao > 4,4 m/s, índice de comorbilidad de Charlson > 1 y NT-proBNP > 700 pg/ml en el momento del reclutamiento fueron predictores independientes de eventos adversos a los 24 meses de seguimiento. / Introduction. Although echocardiography is the gold standard technique to evaluate the severity or aortic stenosis, it presents limitations in some patients. Hence the interest to determine other parameters such as N-terminal fragment of B-type natriuretic peptide (NT-proBNP) and aortic valve calcification, that relate appropriately to the severity of the stenosis. Regarding the prognosis of patients with severe aortic stenosis, it is excellent while patients remain asymptomatic. However, it gets worse significantly once symptoms appear. Quick assistance is not always possible for patients who develop symptoms. Therefore, predicting which asymptomatic patients with moderate to severe aortic stenosis have a higher risk of adverse outcomes is permanently under investigation. Therefore, the aims of the present study were: to analyze the relationship between levels of NT-proBNP and levels of aortic valve calcification, and echocardiographic parameters of severity in asymptomatic patients with calcific moderate to severe aortic stenosis; to determine the prognosis within 24 months of follow-up of asymptomatic patients with moderate to severe aortic stenosis, in the current epidemiological context; and to evaluate the prognostic value of clinical, echocardiographic, analytical and aortic valve calcification parameters within 24 months of follow-up in these patients. Method. A single-center prospective cohort study was performed. During two years, all asymptomatic patients with moderate to severe calcific aortic stenosis (peak aortic-jet velocity (Vmax Ao) ≥ 3,5 m/s), assessed by Doppler echocardiography, were recruited. Patients underwent clinical follow-up for 24 months. Predefined end points for assessing outcome were the occurrence within 24 months of cardiac death or aortic valve replacement necessitated by symptoms. Results and Conclusions. 63 patients were recruited: 30,2% of them underwent aortic valve replacement due to symptoms, there was no cardiac death during follow-up, 6,3% died of non-cardiac causes, and 1,6% patients underwent elective aortic valve replacement. The remaining patients completed the follow-up, not reaching any event of interest. Levels of NT-proBNP and aortic valve calcification are modest tools to assess the severity of moderate-severe asymptomatic aortic stenosis. A threshold of 3148 arbitrary units provided 52% sensitivity, 100% specificity, 100% positive-predictive value and 33% negative-predictive value for the diagnosis of aortic valve stenosis. Univariate analysis showed that Vmax Ao ≤ 4,4 m/s, transaortic mean pressure gradient <50 mmHg, left ventricular mass index < 170 g/m2, the absence of Romhilt-Estes criteria for left ventricular hypertrophy, and level of NT-proBNP ≤ 700 pg/ml at baseline, were associated with greater adverse event-free survival during the follow-up. According to multivariable analysis: Vmax Ao > 4,4 m/s, Charlson comorbidity index > 1, and NT-proBNP > 700 pg/ml at baseline, were independent predictors of outcome.

Desde su origen el ser humano pensó en el mundo en que vivía y en sí mismo, tratando de explicarlo a través de la tradición Divina-Mitológica, que proporcionaba esclarecimiento y fundamento a las normas sociales, creencias y costumbres de las sociedades y de los hombres. A partir de esta perspectiva hemos estudiado los diversos momentos de la Historia del Pensamiento Filosófico, Ético y Jurídico, para, de este modo, contextualizar a la disciplina Bioética: su epistemología y su institucionalización. Con todo, hemos profundizado en la dimensión epistemológica e histórico- pedagógico de la Bioética y su relación con los Comités de Ética Asistencial en el último cuarto del siglo XX y comienzos del XXI, en España. En este estudio se explica la realidad de estos Comités desde su implantación, su estructura, sus reglamentaciones, sus prioridades y sus necesidades, y cómo se adecuan a las exigencias normativas y a las necesidades de las personas. / Ever since they originated, human beings have always thought about the world they were living in as well as about themselves. They tried to explain their world by means of the Divine-Mythological tradition, which provided clarification and foundation to social norms, beliefs and customs of people and societies. From this perspective, we have studied different moments in the History of the Philosophical, Ethical, and Legal Thinking in order to contextualize the so-called Bioethical discipline: its epistemology and its institutionalization. Taking all of this into account, we have analyzed the epistemological and historical-pedagogical dimensions of the Bioethics, and its relationship with the Committees for Ethics of Assistance during the last quarter of the 20th and the beginning of the 21st centuries in Spain. This study explains the reality of these Committees since they were created, their structure, regulations, priorities and needs, and how these committees have adapted themselves to the regulatory requirements and peoples’ needs.

Tesis por compendio de publicaciones / La preselección del sexo de la descendencia mediante el uso espermatozoides portadores del cromosoma X o del Y separados por citometría de flujo es hoy en día una realidad. Sin embargo, mientras el semen separado está disponible comercialmente en bovino, en otras especies domesticas, incluyendo la especie porcina, la técnica está todavía a nivel experimental. La finalidad principal de esta tesis fue desarrollar un protocolo para la aplicación eficiente de los espermatozoides de verraco separados mediante citometría de flujo. Para ello, se han desarrollado los siguientes estudios. En el primer estudio, se evaluó la capacidad de los espermatozoides procedentes de eyaculados de diferentes verracos para resistir el procedimiento de separación espermática. Para ello, eyaculados de verraco fueron fueron sometidos a diferentes tratamientos: conservación en estado líquido, congelación estándar, separación espermática mediante citometría de flujo y separación y congelación. Los parámetros evaludados fueron: motilidad, viabilidad, oxidación lipídica de la membrana plasmática y fragmentación del ADN. El segundo estudio tuvo como objetivo la optimización los protocolos para la criopreservación de los espermatozoides separados de verraco. Para ello fueron evaluados los efectos de la congelación estándar (3% glicerol) sobre las características in vitro de los espermatozoides separados y congelados a una baja concentración espermática. Así como los efectos de diferentes concentraciones de glicerol sobre la calidad espermática de los espermatozoides separados y congelados a bajas concentraciones. El objetivo del tercer estudio fue diseñar un protocolo adecuado para la manipulación de los espermatozoides de verraco durante y después del proceso de separación con el fin de obtener espermatozoides separados con una óptima capacidad fecundante. Para este proposito, diferentes aspectos de la separación espermática fueron evaluados. Se evaluó el efecto de la alta dilución, el medio de recolección usado y la composición del fluido recirculante sobre la calidad (motilidad y viabilidad) y la funcionalidad (capacidad fecundante in vitro) de espermatozoides separados. El objetivo del cuarto estudio fue desarrollar un procedimiento útil de inseminación laparoscópica utilizando un número muy bajo de espermatozoides separados por citomería de flujo que permita obtener óptimos resultados de fertilidad a nivel de granja. Se evaluó el efecto de una inseminación laparoscópica simple (oviductos) y doble (oviductos y cuernos uterinos) con espermatozoides separados, sobre los parámetros reproductivos de las cerdas inseminadas. Tras los resultados de estos estudios, podemos concluir que: Existe una variabilidad individual entre verracos respecto a su capacidad para resistir el proceso de separación espermática por citometría de flujo. Además la respuesta de los espermatozoides de un verraco a una determinada biotecnología espermática no predice la respuesta de los mismos a otros procedimientos. La congelación de espermatozoides a bajas concentraciones en combinación con el uso de concentraciones finales de glicerol de 0.5–1% podría ser un método apropiado para la criopreservación de espermatozoides de verraco separados por citometría de flujo. La adición de EDTA en el fluido envolvente y de yema de huevo en el medio de recogida mejora la capacidad fecundante in vitro de los espermatozoides de verraco separados y ambos agentes deberían ser incluidos como componentes esenciales en los medios utilizados en los procedimientos de separación espermática por citometría de flujo en porcino. El procedimiento de inseminación laparoscópica descrito en el presente estudio es un método efectivo y aplicable en condiciones de granja para la obtención de descendencia de sexo deseado en ganado porcino. El protocolo de doble inseminación laparoscópica, usando entre 3 y 6 millones de espermatozoides separados por cerda permite obtener unos adecuados parámetros reproductivos a nivel de granja, haciendo que la tecnología de separación espermática por citometría de flujo sea potencialmente aplicable en núcleos de selección genética en ganado porcino. / Sex pre-selection of the offspring by using X or Y chromosome bearing spermatozoa sorted by flow cytometry is nowadays a reality. However, while sexed spermatozoa are commercially available for bovine, in other domestic species including the pig the technique is still at experimental level. The main objective of this thesis was to develop a protocol to efficiently apply flow cytometric sex-sorting procedure on boar spermatozoa. To achieve this objective, the following studies were developed. In the first study, the ability of ejaculated spermatozoa from individual boars to withstand flow cytometric sex-sorting procedure was evaluated. Sperm-rich ejaculate samples were split into three aliquots. The aliquots were (1) diluted and stored, (2) frozen-thawed using standard protocols, or (3) sex-sorted with subsequent liquid storage or frozen-thawed. The sperm quality was evaluated based on total sperm motility, viability, lipid peroxidation and DNA fragmentation. The objective of the second study was to optimize protocols for cryopreservation of sex-sorted boar spermatozoa. We evaluated the effects of a standard boar sperm cryopreservation procedure on the in vitro characteristics of sex-sorted sperm frozen at low sperm concentrations and the effects of different final glycerol concentrations on post-thaw quality. The objective of the third experimental study was to design and adequate protocol for boar sperm handling during and after sperm sex sorting for obtaining sex sorted boar sperm with an optimal in vitro fertilizing ability. For this purpose, different aspects of the sorting procedure were examined. The effects of the high dilution rates, type of collection medium used, and sheath fluid composition on sorted boar sperm quality and function were evaluated. Sperm quality was assessed by motility and viability tests, whereas sperm function was evaluated by an in vitro fertilization assay which determined the penetration and polyspermy rates as well as the mean number of sperm penetrating each oocyte. The objective of the fourth study was to develop a useful procedure for laparoscopic inseminations with sex-sorted spermatozoa that allows obtaining optimal fertility results at a farm level. We evaluated the effects of single (oviducts) and double (oviducts and tips of the uterine horns) laparoscopic insemination with sex-sorted sperm on the reproductive performance of sows. The results achieved in these four studies have generated the following conclusions: There is an individual variability among boars to withstand the sorting procedure by flow cytometry. The response of spermatozoa to a specific semen-processing technique does not predict the response of spermatozoa from the same boar to other semen-processing techniques. Freezing at low sperm concentration in combination with the use of a final glycerol concentrations of 0.5–1% could be a suitable method for the cryopreservation of sex-sorted boar sperm. The addition of EDTA to sheath fluid and EY to collection medium improved the in vitro fertilizing ability of sex-sorted sperm, and both agents should be included as essential media components for flow cytometric sperm sex sorting in swine. The laparoscopic insemination procedure described in the present study is an effective method for obtaining offspring of the desired sex in swine at a farm level. The double laparoscopic insemination procedure, using between 3 and 6 millions of sex-sorted sperm per sow produces adequate results for reproductive parameters, making sperm-sexing technology potentially applicable in elite breeding units.

Tesis por compendio de publicaciones / La transferencia de embriones debería jugar un crítico papel en los sistemas actuales de producción porcina ya que posibilita el movimiento nacional e internacional de material genético. El objetivo principal de esta tesis fue desarrollar un procedimiento práctico y efectivo de transferencia intrauterina profunda de embriones frescos. En el primer trabajo estudiamos el efecto de dos dosis de eCG para inducir una respuesta superovulatoria en donantes y el rendimiento reproductivo de las receptoras después de la transferencia intrauterina profunda de embriones. En el segundo estudiamos el efecto de la sincronía del ciclo estral en el rendimiento reproductivo de las receptoras. Las transferencias se realizaron en receptoras que salieron en celo 24 h antes o 0 h, 24 h o 48 h después de las donantes. Finalmente, en el tercer estudio se evaluó la transferencia intrauterina profunda no quirúrgica con mórulas producidas in vivo y cultivadas durante 24 h en un medio líquido. En el experimento 1, se estudiaron dos temperaturas y dos medios. En el experimento 2, las mórulas obtenidas se cultivaron en el medio definido a 37 ºC y los blastocistos resultantes de ese se transfirieron a las receptoras. Los resultados de demuestran que el número de donantes para transferir 30 embriones por receptora por vía no quirúrgica se puede reducir mediante los tratamientos de superovulación. Concretamente, una dosis de 1000 UI de eCG es suficiente para obtener unos resultados reproductivos satisfactorios en las receptoras. Los embriones porcinos toleran mejor un ambiente uterino más temprano del que les corresponde cuando son transferidos por vía no quirúrgica en la profundidad de un cuerno uterino. El medio TL-PVA es un medio químicamente definido capaz de mantener una elevada viabilidad in vitro de mórulas porcinas cultivadas a 37 ºC durante 24 h. El rendimiento reproductivo de las receptoras tras la transferencia no quirúrgica en la profundidad de un cuerno uterino reportados en estos estudios representa un avance muy importante para la difusión y comercialización de esta tecnología por la industria porcina. Palabras clave: transferencia de embriones, no-quirúrgica / The use of porcine embryo transfer should play a critical role in pig production because it allows the movement of genetic resources. The main objective of this thesis was to develop an efficient and practical procedure for nonsurgical deep-uterine embryo transfer with fresh embryos. In the first study we evaluated the effect of two doses of eCG to induce superovulation in donor sows and evaluate the reproductive performance of recipients after nonsurgical deep-uterine embryo transfer. In the second study we studied the effect of recipient-donor estrous cycle synchrony on the reproductive performance of recipients. The transfers were conducted in recipients sows that started estrus 24 h before or 0 h, 24 h or 48 h after the donors. Finally, in the third experimental study we evaluated the potential application of non-surgical deep uterine transfers with in vivo-derived morulae cultured for 24 h. In Experiment 1, two temperatures and two media were assessed. In Experiment 2, morulae were cultured in the defined medium at 37 ºC for 24 h, and the resulting blastocysts were transferred to the recipients. The results achieved in these three studies demonstrate that the number of donors needed to nonsurgically transfer 30 embryos per recipient can be decreased and that a dosage of 1000 IU eCG is enough to obtain a satisfactory reproductive performance of the recipients. Porcine embryos tolerate better a less advanced uterine environment if they are nonsurgically transferred deep into a uterine horn. The TL-PVA medium provided a chemically defined medium capable of maintaining a high in vitro viability of porcine morula cultured at 37ºC for 24 h. The excellent reproductive performance of the recipients following NsDU–ETs reported in these three studies represents an important advance for the widespread commercial use of ET by the pig industry.

Las propiedades beneficiosas del té (Camelia sinensis) son ampliamente conocidas. El té posee una gran capacidad antioxidante debida la presencia de polifenoles denominados catequinas. Estas catequinas poseen diversas propiedades que le permiten ejercer ciertos efectos de protección contra agentes oxidantes más allá de su capacidad antioxidante. Existen pocos estudios realizados a largo plazo y que, además, sean realizados con dosis similares a las que se ingieren normalmente en la sociedad. El factor de trascripción NRF2, se encuentra en el citoplasma unido a un represor (KEAP1) del cual se separa en condiciones de estrés oxidativo y penetra en el núcleo activando una serie de genes de respuesta antioxidante (respuesta ARE) entre los que se incluyen diversas enzimas antioxidantes y detoxificantes. Existen estudios que sugieren que algunas catequinas podrían activar esta respuesta. La adriamicina es un antibiótico de la familia de las antraciclinas, aislado de Streptomices peucetis hace más de 50 años. Posee la capacidad de detener la división celular, y por ello es utilizado contra una gran variedad de canceres y tumores. También tiene una gran capacidad de generar radicales libres in vivo. Los pacientes tratados con esta sustancia sufren daños en todos los órganos, en especial en el corazón debido a que esta molécula tiene gran afinidad con la cardiolipina. Se han realizados numerosos estudios para intentar neutralizar los efectos secundarios de este fármaco, con el fin de aumentar la supervivencia de los pacientes e incrementar la calidad del tratamiento. Objetivos: Por ello se pretende estudiar los efectos de la ingesta de té, así como la capacidad que posee el mismo para proteger a los tejidos de una situación de estrés oxidativo agudo. Materiales y método: Para ello, realizaremos primero un estudio en ratas de la raza Sprague Dawley en jaulas metabólicas que analice las posibles interferencias con la dieta de una ingesta continuada de té blanco. Posteriormente, comenzaremos con un tratamiento con diferentes dosis de té blanco (0, 15 y 45 mg de extracto de té blanco/kg de peso corporal al día que equivalen a 0, 4 y 12 mg de polifenoles /kg de peso corporal al día) en el agua de bebida. Tras 12 meses de tratamiento se administran a todas las ratas (excepto a la mitad de los animales control a los cuales se les inyecta solución salina) una inyección intraperitoneal de adriamicina (10mg /kg de peso corporal). Tras 48 horas se anestesian los animales se sacrifican obteniéndose muestras de sangre y tejidos (hígado, corazón, cerebro y riñón). Se obtuvo la fracción microsomal de algunos de ellos (hígado, corazón y cerebro) y el plasma. Se realizaron diferentes análisis: como la medición de la actividad antioxidante, los grupos carbonilo e hidroperóxidos. Además, se realizó un análisis de expresión génica en hígado y riñón de genes relacionados con el NRF2 y enzimas detoxificantes y antioxidantes. Se midieron también la actividad de las enzimas antioxidantes. Se realizaron también análisis en los perfiles de ácidos grasos del corazón y el hígado. Resultados y discusión: El té no interfiere en la eficiencia alimentaria de las ratas estudiadas, solo se encontró una ligera disminución en la absorción del Fe. Por otro lado, los resultados indicaron que la ingesta a largo plazo de té blanco protegió contra los efectos oxidantes de la adriamicina en todos los tejidos y órganos analizados activando además la repuesta ARE vía NRF2 en el hígado y no siendo necesaria la activación de la misma en el riñón. Estudios adicionales son necesarios para comprender todos los mecanismos implicados en la respuesta frente a un agente como la adriamicina. No se encontraron diferencias en los perfiles de ácidos grasos. / The beneficial properties of tea (Camellia sinensis) are widely known. The tea has a high antioxidant activity due the presence of polyphenols called catechins. Catechins have various properties that allow you to exert some protective effects against oxidizing agents beyond their antioxidant capacity. There are few long-term studies and also are made with doses similar to those normally consumed in society. The transcription factor Nrf2 is located in the cytoplasm bound to a repressor (KEAP1). This union is separated in conditions of oxidative stress and NRF2 enters the core by activating a series of antioxidant response genes (ARE) between those included various antioxidant and detoxifying enzymes. Studies suggest that some catechins could activate this response. Adriamycin is an antibiotic of the anthracycline family, isolated from Streptomyces peucetis over 50 years. It has the ability to stop cell division and therefore is used against a variety of cancers and tumors. It also has a great ability to generate free radicals in vivo. Patients treated with this substance suffer damage in all organs, especially the heart because adriamycin has great affinity with cardiolipin. Numerous studies have been undertaken to try to counteract the side effects of this drug, in order to increase patient survival and increase quality of treatment. Objectives: The aim of the present thesis is to study the different effects of white tea intake, and the ability to possess the same to protect tissues from a situation of acute oxidative stress. Matherials and method: With this purpose, we studied Sprague Dawley in metabolic cages to analyze the potential interference with an ongoing dietary intake of white tea. Later, we began a treatment with different doses of white tea (0, 15 and 45 mg of extract of white / kg body weight tea a day, equivalent to 0, 4 and 12 mg of polyphenols / kg of body weight per day) in the drinking water. After 12 months of treatment all rats was administered (except to half of control animals which are injected with saline) with an intraperitoneal injection of adriamycin (10mg / kg body weight). After 48 hours the animals are anesthetized and sacrificed, obtaining samples of blood and tissues (liver, heart, brain and kidney). The microsomal fraction of some organs (liver, heart and brain) and plasma was obtained. Different analyzes were realized: as antioxidant activity, hydroperoxides and carbonyl groups. Furthermore, gene expression in liver and kidney related NRF2 and detoxifying enzymes and antioxidant genes was measured. The activity of antioxidant enzymes was also analyzed. The fatty acid profiles of the heart and liver were measured. Results and discussion: Tea not interferes with the feed efficiency of the rats studied; we only found a slight decrease in the Fe absorption. Moreover, the results indicated that the long term intake of white tea protected against oxidative effects of adriamycin in all tissues and organs analyzed further activating ARE via NRF2 response in the liver and not activating it being necessary kidney. Additional studies are needed to understand all the mechanisms involved in the response to an agent such as adriamycin. No differences in fatty acid profiles were found.

Objetivo general. Conocer y hacer visibles las vivencias personales y profesionales de un grupo de matronas que ejercieron en Murcia durante el período comprendido entre 1940 y 1977 desde una perspectiva integral y de género. Objetivos específicos. 1. Determinar la influencia familiar en la formación de las matronas. 2. Identificar la formación académica de las matronas indagando en los itinerarios y requisitos formativos, los contenidos y manuales para su formación y su vida cotidiana durante esta etapa. 3. Definir las estrategias desarrolladas por las matronas para conciliar trabajo y familia. 4. Conocer e interpretar el cambio en el trabajo de las matronas del contexto domiciliario al hospitalario. METODOLOGÍA Desde las propuestas de la Hermenéutica a través de un enfoque cualitativo hemos escogido el método etnográfico. Realizamos 13 relatos biográficos a matronas formadas durante 1940-1977 y que ejercieron en Murcia durante este periodo además de 6 entrevistas semiestructuradas en profundidad para la triangulación de datos y ampliación de la información. RESULTADOS Tras la transcripción y fragmentación de las entrevistas mediante análisis temático del contenido surgieron tres categorías: la formación de las matronas, el trabajo de las matronas en el contexto del parto domiciliario y por último, el trabajo de las matronas en el contexto del parto hospitalario y la vivencia del cambio. Para las entrevistadas la etapa de formación fue dura pero gratificante. Durante ella recibirían a través del discurso médico un mensaje de obediencia concibiendo la figura de la matrona como profesional auxiliar. Elaboraron diferentes estrategias para conciliar su vida familiar y laboral, siendo sus madres u otras mujeres un recurso esencial para ello. El trabajo de las matronas en el ámbito domiciliario estuvo condicionado por el complicado contexto de la posguerra, no obstante este entorno íntimo facilitaría una atención individualizada. La escasez de recursos y la política sanitaria puesta en marcha llevaría a las matronas a integrarse en los hospitales en busca de los beneficios que estas instituciones les brindaban a ellas y a las mujeres que atendían. Sin embargo, el cambio cultural del modelo tradicional del nacimiento ligado al domicilio generaría un rechazo inicial por parte de las futuras madres que siempre habían visto nacer a sus criaturas en el propio hogar. La atención al parto en los hospitales se alejó de la concepción de proceso fisiológico y distintas prácticas comenzaron a perpetuarse rutinariamente en el trabajo de las matronas, sintiendo gradualmente una mayor intervención médica y menor autonomía. Las instituciones fueron un espacio de encuentro y reivindicación para el propio colectivo de matronas donde se unieron y lucharon para la obtención de mejoras. CONCLUSIONES Los roles de género serán un factor determinante en cuanto a las oportunidades brindadas a hombres y mujeres en el contexto cultural de la época. Las matronas fueron partícipes y precursoras del cambio social por el que las mujeres se incorporarían como profesionales al mundo laboral compatibilizando su actividad en el ámbito público con el rol de madres y esposas asignado tradicionalmente a las mujeres. Tras conocer y estudiar a este grupo de matronas murcianas no podemos más que reconocerlas como mujeres pioneras que trascendieron los límites culturales de género impuestos. Como mujeres profesionales formadas y capacitadas reivindicaron su autonomía y espacio de trabajo junto a las mujeres y sus familias. / General objective To explore and present the personal and professional experiences of a group of midwives who practised in Murcia between 1940 and 1977, both comprehensively and from a gender perspective. Specific objectives 1. Determining the influence of family on the training of midwives. 2. Identifying the academic training of the midwives; investigating the training requirements and programs, the contents and manuals for their training and their everyday life during this period. 3. Defining the strategies developed by midwives to maintain a balance between work and family life. 4. Uncovering and interpreting the change in the work of midwives as their role has changed from home birthing to a hospital context. METHODOLOGY An ethnographic method was chosen, making use of a qualitative approach to Hermeneutic proposals. Thirteen biographical stories were collected from midwives who trained between 1940 and 1977 and who practised in Murcia during this period. Furthermore, six deeper semi-structured interviews were made for data triangulation and information expansion. RESULTS After transcription and fragmentation of the interviews by means of thematic analysis of the content, three categories emerged: midwives’ training, midwives’ work in the context of home birthing and, finally, midwives’ work in a hospital birthing context and their experiences of this change. For the women interviewed, the training period was hard but gratifying. During this period, the midwife represented a figure of an auxiliary professional and, accordingly, the medical discourse of the day presented them with a message of obedience. They developed different strategies to find and maintain a balance between their family and work, with their mothers or other women presenting an essential resource in this task. However, the work of midwives in the home context was conditioned by the complex context of the post-war era and this intimate environment made individualised care easier. A shortage of resources and the shift in health policy lead to the integration of midwives into the hospital environment, in pursuit of the benefits offered by these establishments to them and to the women in their care. Nevertheless, the cultural shift from the traditional home birth was at first rejected by a generation of expectant mothers who had always seen their children born in their own house. Maternity care in hospitals is distant from the physiological process of conception and different practices started to perpetuate in a routine way in the midwives’ work, with perception of gradually increasing levels of medical intervention and less autonomy. The hospital centres were a meeting and recognition point for the midwives’ collective itself, and became the place where they joined together and struggled for improvements. CONCLUSIONS Gender roles were a determining factor regarding the opportunities given to men and women in the cultural context of that period. Midwives played a key role in the social change by which women would were enabled to join the professional world, juggling their work with their activity in the public sphere as mothers and wives, roles traditionally designated to women. After meeting and studying this group of Murcian midwives, we can only recognize them as pioneering women who transcended the imposed cultural limitations of gender. As professional, trained, prepared women, they defended their autonomy and work place near women and their families.