Orientador: Antonio Carlos Paes / Banca: Marcio Garcia Ribeiro / Banca: Hélio Langoni / Banca: Christian Hirsch / Banca: Osimar de Carvalho Sanches / Resumo: O estudo objetivou identificar efeitos do tratamento com ribavirina, prednisona e DMSO na cinomose; identificar a presença viral no sangue, medula óssea e líquor antes e após o tratamento, os efeitos colaterais dos fármacos experimentais e associações. Foram utilizados 60 cães apresentando sinais neurológicos da cinomose com evolução de dez dias. Animais foram internados para tratamento de suporte; avaliados diariamente e submetidos ao hemograma e dosagens bioquímicas. Os grupos 1 e 2 foram tratados com ribavirina associada ao DMSO; os grupos 3 e 4 foram tratados com DMSO e prednisona e os grupos 5 e 6 foram tratados com ribavirina e prednisona, ribavirina, prednisona e DMSO. Os animais foram anestesiados e colhidos líquor, medula óssea e sangue, antes e após o tratamento e realizada a RTPCR das amostras; as negativas foram analisadas pela técnica de hn-PCR. O vírus foi encontrado em 95% das amostras de sangue, 90% de medula óssea e 53,3% de líquor pré-tratamento. O efeito adverso da ribavirina quando associada com a prednisona foi anemia. A prednisona na dose imunossupressora causou aumento da dosagem de proteína e diminuição da celularidade liquórica, leucocitose. Já a dose antinflamatória causou diminuição de proteína no líquor. Baseado nos índices de sobrevida e melhora clínica, o tratamento mais efetivo foi o G2 (80%); seguido do G1, G5 e G3 (70%); o G6 (60%); o G4 com o pior índice (30%). Pós-tratamento, a frequência viral foi 97,7% no sangue, 86,4% na medula óssea e 27,3% no líquor / Abstract: The present study aims at the identification of ribavirin, prednisone and DMSO's treatment effects in dogs with canine distemper, at the identification of the viral presence in the blood, bone marrow and cerebrospinal fluid (CSF) before and after the treatment and also at the identification of side effects of the experimental drugs and its combinations. Sixty dogs presenting canine distemper with neurological signs about ten days evolution were observed. The animals were hospitalized for the support treatment, assessed on daily basis and subjected to blood cells count and biochemical analysis. Groups 1 and 2 were treated with ribavirin and its combination with DMSO; Groups 3 and 4 treated with prednisone and DMSO, Group 5 treated with ribavirin and prednisone, while Group 6 with ribavirin, prednisone and DMSO. The animals were anesthetized for the cerebrospinal fluid, bone marrow and blood samples collection before and after the treatment, then the RT-PCR of the samples was proceeded. The negative were analysed according to the hn-PCR technique. The canine distemper virus were found in 95% of blood samples, 90% of bone marrow and 53,3% of CSF before the treatment. The adverse effect of ribavirin and its association with prednisone was anemia. Prednisone, at its immunosuppressive dose, led to the increase of protein and decrease of cellularity in CSF, and increase of leukocytes blood count. The antiinflammatory dose led to the CSF protein concentration's decrease. Considering the survival and clinical improvement rates, the most successful treatment was the one applied to the G2 (80%); followed by G1 (70%); G5 (70%) and G3 (70%); G6 (60%); and the lowest rate G4 (30%). After the treatment, the virus frequency was 97,7% in the blood, 86,4% in the bone marrow and 27,3% in the CSF / Doutor

Orientador: Antonio Carlos Paes / Banca: Marcio Garcia Ribeiro / Banca: Osimar de Carvalho Sanches / Resumo: A cinomose é uma doença infecto-contagiosa viral, sistêmica e letal causada pelo Morbilivírus que acomete cães de todas as idades e apresenta sinais clínicos respiratórios, gastrintestinais, dermatológicos, oftálmicos e neurológicos, que podem ocorrer sequencialmente ou isoladamente. Este estudo teve como objetivo comparar lesões encefálicas utilizando a histopatologia e avaliar a quantidade de vírus pela imunoistoquímica em cães tratados com Ribavirina na dose de 30mg/Kg por via oral uma vez ao dia por 15 dias e animais não tratados com esse fármaco, e que devido a evolução desfavorável da doença foram eutanasiados. Os animais foram atendidos e tratados durante a rotina do Setor de Enfermidades Infecciosas dos Animais Domésticos- FMVZ- UNESP/ Botucatu, SP. A análise histopatológica constituiu na avaliação de córtex cerebral, cerebelo, tálamo, tronco encefálico, hipocampo e visualização de manguitos perivasculares em meninges. A partir dessas regiões foi possível identificar e classificar lesões como: desmielinização; presença de manguitos perivasculares, edema, necrose neuronal, alterações vasculares (congestão, hemorragia e trombose) e alterações inflamatórias (meningite, meningoencefalite e meningoencefalomielite). Foi observado que a desmielinização se manteve altamente presente nos dois grupos, e que quando comparados estatisticamente não existe diferença significante entre os grupos, assim como na formação de manguitos perivasculares. Houve diminuição considerável do edema em todas as estruturas avaliadas, e a ribavirina® se mostrou eficaz na redução da inflamação encefálica, assim como a necrose neuronal foi menor em quase todas as estruturas avaliadas no grupo tratado, com exceção do tálamo. A análise estatística comparativa da marcação viral entre os grupos se mostrou significante somente para o cerebelo, tálamo e tronco encefálico / Abstract: Distemper is a viral infectious disease, caused by systemic and lethal morbillivirus that affects dogs of all ages and clinical signs respiratory, gastrointestinal, dermatological, ophthalmic and neurological disorders, which may occur sequentially or separately. This study aimed to compare brain lesions using histopathology and assess the amount of virus by immunohistochemistry in dogs treated with Ribavirin at a dose of 30mg/Kg orally once daily for 15 days and animals not treated with this drug, and that due to the unfavorable development of the disease were euthanized. The animals were treated and handled during routine Division of Infectious Diseases of Domestic Animals-FMVZ-UNESP / Botucatu, SP. Histopathologic analysis was to evaluate the cerebral cortex, cerebellum, thalamus, brainstem, hippocampus and viewing perivascular cuffs in the meninges. From these regions it was possible to identify and classify lesions such as demyelination, the presence of perivascular cuffing, edema, neuronal necrosis, vascular changes (congestion, hemorrhage and thrombosis) and inflammatory changes (meningitis, meningoencephalitis and meningo-encephalomyelitis). It was observed that the demyelination remained strongly present in both groups, and compared statistically no significant difference between groups, as well as the formation of perivascular cuffs. There was a considerable decrease of the edema measured in all structures, and ribavirin ® was effective in reducing brain inflammation, and neuronal necrosis was lower in almost all structures evaluated in the group treated with the exception of the thalamus. The comparative statistical analysis of the viral marking between groups was significant only for the cerebellum, thalamus and brainstem / Mestre

A conservação dos animais selvagens de vida livre é ameaçada pela fragmentação de habitat, caça, diminuição de presas e, em menor escala pela ocorrência de doenças infecciosas. Reconhecendo a importância das doenças para a conservação, e considerando que o crescimento da população humana no entorno de áreas protegidas propicia o aumento do contato de animais domésticos e selvagens, o presente estudo teve como objetivo pesquisar a exposição de carnívoros selvagens de vida livre e cães domésticos da região do Parque Nacional das Emas (PNE), Goiás à cinomose, parvovirose, brucelose e brucelose canina. Entre as espécies de carnívoros selvagens amostradas estão o lobo-guará, cachorro-do-mato, raposinha-do-campo, onça-parda, jaguatirica, gato-palheiro, gatomourisco, jaratataca e quati. Foram realizados os testes de soroneutralização, inibição de hemaglutinação, imunodifusão em gel ágar e PCR, para cinomose, parvovirose, brucelose canina e brucelose, respectivamente. Lobos-guará (12,7%, n=9), cachorros-do-mato (11,6%, n=7), jaguatiricas (18,2%, n=2) e cães domésticos (71,4%, n=25) foram expostos à cinomose. Todas as espécies de carnívoros selvagens amostradas, com exceção do quati, sendo 40,4% (n=65) dos indivíduos, e 37,1% (n=13) dos cães domésticos foram expostos à parvovirose. Apenas o lobo-guará (1,67%, n=2) foi exposto à brucelose canina e a raposinha-do-campo à Brucella spp. (1,47%, n=1). Este é o primeiro relato da exposição de gato-palheiro, gatomourisco e jaratataca ao parvovírus, e de lobo-guará à Brucella canis. A cinomose e a parvovirose merecem atenção no PNE pela possibilidade de envolvimento de cães domésticos na sua transmissão, embora não possa ser comprovada no presente estudo. A brucelose, no momento, parece não ser uma ameaça sanitária para as populações de carnívoros do PNE. / The conservation of free ranging wildlife is threatened by habitat fragmentation, hunting, decrease of prey and, to a lesser extent by the occurrence of infectious diseases. Recognizing the diseases importance for conservation, and considering that the increase of human population around protected areas provides increased contact with domestic and wild animals, the present study aimed to investigate the exposure of free ranging wild carnivores and domestic dogs in the region of Emas National Park (ENP), Goiás, Brazil for canine distemper virus (CDV), parvovirus, brucellosis and canine brucellosis. Among the species of wild carnivores sampled are the maned wolf, crab-eating fox, hoary fox, puma, ocelot, pampas cat, jaguarondi, skunk and coati. The tests performed for CDV, parvovirus, canine brucellosis and brucellosis tests were the serum neutralization test, hemagglutination inhibition, agar gel immunodiffusion and PCR, respectively. Maned wolves (12.7%, n = 9), crab-eating foxes (11.6%, n = 7), ocelots (18.2%, n = 2) and domestic dogs (71.4%, n = 25) were exposed to CDV. All species of wild carnivores sampled, except coatis, being 40.4% (n = 65) of individuals, and 37.1% (n = 13) of domestic dogs were exposed to parvovirus. Only maned wolves (1.67%, n = 2) were exposed to canine brucellosis and hoary fox to Brucella spp. (1.47%, n = 1). This is the first report of pampas cat, jaguarondi and skunk exposure to parvovirus, and of maned wolf to Brucella canis. CDV and parvovirus deserve attention in ENP by the possibility of involvement of domestic dogs in its transmission, although it can not be proven in this study. At the moment, brucellosis doesn\'t seem to be a sanitary threat for carnivores population at ENP.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-20Bitstream added on 2014-08-13T18:00:36Z : No. of bitstreams: 1 000757985.pdf: 8633106 bytes, checksum: 56d56656e351ac98948717891006f4dd (MD5) / A cinomose é uma enfermidade infectocontagiosa e multissistêmica de ocorrência mundial com alta morbidade e mortalidade. Quando acomete o sistema neurológico, os animais apresentam sinais clínicos severos que se tornam sequelas, quando recomenda-se comumente a eutanásia pela escassez de métodos de tratamento eficazes. O objetivo deste estudo prospectivo foi avaliar os efeitos da acupuntura no tratamento de sequelas neurológicas em cães, com diagnóstico definitivo de cinomose. Os 24 pacientes selecionados apresentavam RT-PCR positivo para cinomose, sinais neurológicos estáveis e hemograma normal 15 dias antes do início do tratamento com acupuntura associada à eletroacupuntura. Semanalmente realizou-se exame neurológico e graduação do acometimento dos sinais neurológicos de acordo com escala desenvolvida para o estudo. Para análise estatística utilizaram-se os testes de McNemar e Wilcoxon, para comparar respectivamente as proporções e medianas das alterações neurológicas antes e após o tratamento, Fisher, para comparar a porcentagem de animais com acometimento de cada par de nervos cranianos e localização da lesão e as curvas de Kaplan-Meier para avaliar a porcentagem de reversão de cada sinal neurológico ao longo do tratamento. Definiu-se se significância estatística quando P<0.05. Antes do tratamento todos os animais apresentavam alteração de deambulação (de III a V), que retornou a deambulação funcional, escore I ou II, em 79,2% e 8,3% dos animais respectivamente. A mioclonia presente em 50% dos animais, apresentou redução da severidade em todos e cura em 25% dos animais. As alterações encefálicas (18 de 24 animais), de nervos cranianos (18 de 24 animais) e de micção (5 de 24 animais) foram revertidas em todos os animais. Concluiu-se que a acupuntura associada à eletroacupuntura é eficaz no tratamento das sequelas neurológicas da cinomose e atualmente é a melhor opção terapêutica disponível ... / Canine distemper is worldwide infectious and multisystemic disease, with high morbidity and mortality. When the neurological system is affected, the animals usually show severe clinical signs and sequels. As no treatment is available, euthanasia is commonly recommended under these circumstances. This study evaluated the effects of acupuncture in the treatment of neurological sequels in dogs with clinical and laboratory diagnosis of distemper. The 24 selected patients were RT-PCR positive for canine distemper, the neurological signs were stable and the CBC was normal 15 days before the treatment with acupuncture combined to electroacupuncture. All animals underwent weekly neurological examination and clinical signs were classified by degree according to a scale developed for the study. Statistical analysis was performed using McNemar's and Wilcoxon’s test to compare the proportions and medians of neurological changes before and after treatment respectively. Fisher test compared the percentage of animals showing cranial nerve changes and localization of the lesions and Kaplan- Meier curves evaluated the percentage of reversion of each clinical sign along treatment. Differences were considered significant when p < 0.05. Grades from III to V abnormal ambulation before treatment progressed to grades I or II in 79.2% and 12.4% respectively. The myoclonus which was present in 50% of the animals (12 of 24), reduced in all animals and was cured in 25% of the animals after treatment (3 of 12). Brain (18 of 24 animals), cranial nerve (18 of 24 animals) and urination (5 of 24 animals) changes were reversed in all cases. It was concluded that acupuncture combined to electroacupuncture is effective to treat neurological sequels of distemper and is currently the best therapeutic option available due to the high cure rate provided

Submitted by Juliana Bornhausen Cardoso de Araujo null (jubsaraujo@gmail.com) on 2017-12-11T01:42:29Z No. of bitstreams: 1 defesa cest fini 10.12 c alteracoes v2.pdf: 1290180 bytes, checksum: eaea0777a91ea4b787d719a382f3dade (MD5) / Submitted by Juliana Bornhausen Cardoso de Araujo null (jubsaraujo@gmail.com) on 2017-12-11T18:47:11Z No. of bitstreams: 1 defesa cest fini 10.12 c alteracoes v2.pdf: 1290180 bytes, checksum: eaea0777a91ea4b787d719a382f3dade (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2017-12-12T12:42:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 araujo_jbc_me_bot.pdf: 1238650 bytes, checksum: 89edb88921e475bb18deb582a11ed4dd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-12T12:42:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 araujo_jbc_me_bot.pdf: 1238650 bytes, checksum: 89edb88921e475bb18deb582a11ed4dd (MD5) Previous issue date: 2017-11-09 / A cinomose é uma relevante doença infectocontagiosa no Brasil e possui um crescente número de mortes em sua decorrência. É comprovado que esta doença causa importantes alterações histopatológicas cardíacas, porém seus efeitos sobre o sistema cardiovascular foram pouco descritos. O presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade do vírus no coração por meio da ecocardiografia, da eletrocardiografia e da monitorização eletrocardiográfica ambulatorial, mais conhecida como método Holter. / Distemper is an important infectious disease in Brazil that unfortunately has a crescent death toll. It has been proven that the virus has important histopathologic effects over the cardiovascular system although that has been scarcely researched. The present study has the objective of evaluating the virus’s activity on the heart with the help of echocardiography, electrocardiography and Holter. The ambulatory electrocardiographic monitoring, also known as Holter exam, is an effective way of detecting cardiac arrhythmias and sometimes can help with early detection of cardiac lesions.

O vírus da cinomose canina (CDV) é classificado no gênero Morbillivirus da família Paramyxoviridae e é o agente etiológico de uma das mais importantes doenças virais de canídeos domésticos. A cinomose ocorre em todo o mundo e produz alta mortalidade em populações imunologicamente naïve. Apesar de encontrar-se bem controlada pela vacinação, casos de cinomose ocorrem esporadicamente tanto em cães vacinados quanto em não vacinados. Uma das causas suspeitas desta falha vacinal é a grande variabilidade genética entre cepas de CDV. O objetivo deste trabalho foi detectar e analisar a variabilidade genética do CDV circulante no País. Foram coletados 386 suabes retais de cães em diversas regiões do Brasil, dos quais se detectaram 155 positivos através de uma RT-nested-PCR de um fragmento do gene do nucleocapsídeo. Destes, 23 foram selecionados para amplificação parcial do gene da hemaglutinina, sequenciamento e análise filogenética. A grande maioria das sequências obtidas agrupou no genótipo América do Sul-I, que inclui isolados da Argentina e do Uruguai, com exceção de uma amostra similar à cepa vacinal Rockborn. A análise filogenética sugere a presença de pelo menos sete subgenótipos do genótipo América do Sul-I circulando neste continente. O grupo América do Sul-II é formado somente por isolados da Argentina. Além disso, propõe-se que este grupo e os clados Rockborn-like e Europa Selvagem sejam denominados subgenótipos dentro de um genótipo único. / Canine distemper virus (CDV) is classified in the genus Morbillivirus within the family Paramyxoviridae and is the etiologic agent of one of the most important viral diseases of domestic Canidea. It occurs worldwide and produces high mortality in immunologically naïve populations. Despite being well controlled by vaccination, cases of canine distemper occur sporadically in vaccinated and unvaccinated dogs. One of the suspected causes of this vaccine failure is the great genetic variability between strains of CDV. The objective of this study was to detect and analyze the genetic variability of CDV circulating in our country. Rectal swabs were collected from 386 dogs in various regions of Brazil, of which 155 were found positive by a nested RT-PCR of a fragment of the nucleocapsid gene. Of these, 23 were selected for partial amplification of the hemagglutinin gene, sequencing and phylogenetic analysis. The vast majority of sequences obtained grouped in genotype South America-I, which includes isolates from Argentina and Uruguay, with the exception of a sample similar to the vaccine strain Rockborn. Phylogenetic analysis suggests the presence of at least seven subgenotypes belonging to South America-I genotype, circulating in this continent. The group South America-II consists only of isolates from Argentina. Furthermore, it is proposed that this group and clades Rockborn-like and Europe Wildlife are denominated subgenotypes within a single genotype.

A cinomose canina é uma doença viral e afeta principalmente os sistemas respiratório, gastrintestinal e nervoso. O presente trabalho analisou 54 cães com cinomose de um total de 760 cães necropsiados no período de julho de 2006 a outubro de 2007. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por secreção ocular e nasal mucopurulentas, hiperqueratose dos coxins digitais, pulmões de coloração avermelhada e não colabados, atrofia do timo, conteúdo intestinal diarréico e evidenciação das placas de Peyer. Os achados microscópicos caracterizavam-se principalmente por pneumonia intersticial, rarefação linfóide, desmielinização da substância branca, manguitos perivasculares e corpúsculos de inclusão viral na mucosa do estômago, epitélios da bexiga, brônquios e bronquíolos, pelve renal, coxins digitais, pálpebra e orelha, no sistema nervoso central (principalmente em astrócitos) e em células mononucleares dos linfonodos, baço e tonsilas. O teste de imunoistoquímica foi positivo em 94,4% dos casos analisados. Os tecidos foram marcados pela técnica imunoistoquímica utilizando o anticorpo monoclonal anti-cinomose canina (VMRD) na diluição de 1:400. O coxim digital se apresentou como o órgão com o maior número de casos marcados positivamente (67,4%), seguido pelo estômago com 62,7%. A utilização da imunoistoquímica auxiliou na identificação do antígeno viral em diferentes tecidos e foi importante como diagnóstico complementar da cinomose canina. / Canine distemper is a viral disease that affects mainly, respiratory, gastrointestinal and nervous system. The present study analyzed 54 dogs with canine distemper from total of 760 necropsies done in dogs between July 2006 to October 2007. The macroscopic lesion were characterized by mucopurulent oculonasal discharge, hyperkeratosis of footpads, red and not collapsed lungs, thymic atrophy, watery intestinal, hyperemia and Peyer’s patches enlarged. The microscopic findings were characterized by interstitial pneumonia, lymphoid depletion, white matter demylization, perivascular cuffs and viral inclusion bodies located in stomach mucosa, bladder, bronchial, renal pelvis, footpads, eyelid, skin of the ear epithelium, central nervosus system (mainly in astrocytes) and mononuclear infiltrates in lymph nodes, spleen, and tonsils. The immunohistochemistry test was positive in 94,4% of analyzed cases. Tissues were strained by an immunohistochemical procedure with mouse monoclonal anti-cinomose (VMRD) diluted 1:400. The footpads was the best tissue with majority of positive marked cases (67,4%), followed by stomach with 62,7%. This observation suggests that the immunohistochemistry technique aided to identify distemper virus antigens in different tissue making it an important test for complementary diagnostic of canine distemper.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-16Bitstream added on 2014-06-13T19:02:07Z : No. of bitstreams: 1 mangia_sh_dr_botfmvz.pdf: 2850666 bytes, checksum: 528a2aed184daa57fac613045bf43182 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O estudo objetivou identificar efeitos do tratamento com ribavirina, prednisona e DMSO na cinomose; identificar a presença viral no sangue, medula óssea e líquor antes e após o tratamento, os efeitos colaterais dos fármacos experimentais e associações. Foram utilizados 60 cães apresentando sinais neurológicos da cinomose com evolução de dez dias. Animais foram internados para tratamento de suporte; avaliados diariamente e submetidos ao hemograma e dosagens bioquímicas. Os grupos 1 e 2 foram tratados com ribavirina associada ao DMSO; os grupos 3 e 4 foram tratados com DMSO e prednisona e os grupos 5 e 6 foram tratados com ribavirina e prednisona, ribavirina, prednisona e DMSO. Os animais foram anestesiados e colhidos líquor, medula óssea e sangue, antes e após o tratamento e realizada a RTPCR das amostras; as negativas foram analisadas pela técnica de hn-PCR. O vírus foi encontrado em 95% das amostras de sangue, 90% de medula óssea e 53,3% de líquor pré-tratamento. O efeito adverso da ribavirina quando associada com a prednisona foi anemia. A prednisona na dose imunossupressora causou aumento da dosagem de proteína e diminuição da celularidade liquórica, leucocitose. Já a dose antinflamatória causou diminuição de proteína no líquor. Baseado nos índices de sobrevida e melhora clínica, o tratamento mais efetivo foi o G2 (80%); seguido do G1, G5 e G3 (70%); o G6 (60%); o G4 com o pior índice (30%). Pós-tratamento, a frequência viral foi 97,7% no sangue, 86,4% na medula óssea e 27,3% no líquor / The present study aims at the identification of ribavirin, prednisone and DMSO’s treatment effects in dogs with canine distemper, at the identification of the viral presence in the blood, bone marrow and cerebrospinal fluid (CSF) before and after the treatment and also at the identification of side effects of the experimental drugs and its combinations. Sixty dogs presenting canine distemper with neurological signs about ten days evolution were observed. The animals were hospitalized for the support treatment, assessed on daily basis and subjected to blood cells count and biochemical analysis. Groups 1 and 2 were treated with ribavirin and its combination with DMSO; Groups 3 and 4 treated with prednisone and DMSO, Group 5 treated with ribavirin and prednisone, while Group 6 with ribavirin, prednisone and DMSO. The animals were anesthetized for the cerebrospinal fluid, bone marrow and blood samples collection before and after the treatment, then the RT-PCR of the samples was proceeded. The negative were analysed according to the hn-PCR technique. The canine distemper virus were found in 95% of blood samples, 90% of bone marrow and 53,3% of CSF before the treatment. The adverse effect of ribavirin and its association with prednisone was anemia. Prednisone, at its immunosuppressive dose, led to the increase of protein and decrease of cellularity in CSF, and increase of leukocytes blood count. The antiinflammatory dose led to the CSF protein concentration’s decrease. Considering the survival and clinical improvement rates, the most successful treatment was the one applied to the G2 (80%); followed by G1 (70%); G5 (70%) and G3 (70%); G6 (60%); and the lowest rate G4 (30%). After the treatment, the virus frequency was 97,7% in the blood, 86,4% in the bone marrow and 27,3% in the CSF

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-29Bitstream added on 2015-05-14T16:58:45Z : No. of bitstreams: 1 000828932.pdf: 760604 bytes, checksum: c30674cef7dfc0506331193c0c9efe70 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Devido às diversas formas de apresentação clínica e aos sinais clínicos comuns com outras afecções, o diagnóstico laboratorial do CDV (Canine distemper virus) se torna necessário. A RT-PCR seguida da NESTED com amostras de urina é atualmente a técnica mais recomendada para o diagnóstico do CDV. No Capítulo 2, foi desenvolvida a técnica de One-Step-RT-qPCR utilizando o sistema de detecção Syber Green I. Foram testados e comparados três kits comerciais (Sigma®, Promega® e Qiagen®). Foi determinada a sensibilidade analítica de dois sistemas de detecção (Sistema A e Sistema B) utilizando uma curva padrão de RNA sintético. Os três kits comerciais testados detectaram o vírus em 100% das urinas provenientes de animais sintomáticos e o kit da Qiagen® mostrou melhores resultados de reação. O Sistema A detectou aproximadamente 10 cópias de RNA por microlitro e no Sistema B detectou 100 cópias de RNA por microlitro na RT-qPCR e 10 cópias por microlitro quando seguida da NESTED-qPCR. No Capítulo 3 foram desenvolvidos três imunoconjugados de microesferas de poliestireno (MP) utilizando anticorpos policlonais hiperimunes anti-CDV (IgY, IgG e Proteína A+IgG) para o preparo de RNA e aplicação na RT-qPCR. A aplicação dos conjugados foi comparada ao método convencional de extração de RNA por kit comercial. Os conjugados foram padronizados e a sensibilidade analítica foi determinada através de curva padrão de RNA sintético. A sensibilidade diagnóstica foi determinada utilizando-se conjugado com IgY, MP sem anticorpos conjugados e urina adsorvida diretamente nos tubos de qPCR / The diagnosis of canine distemper is usually based on clinical suspicion of the disease. However, due to the different clinical forms of the disease and other disorders common to clinical signs, the laboratory diagnosis is necessary. The RT-PCR followed by NESTED is currently the method used to diagnosis of CDV (Canine Distemper Virus). The Chapter 2 aimed to standardized the technique of One-Step RT-qPCR-using Syber Green I system. Three commercial kits (Sigma®, Promega® and Qiagen®) were tested and compared. Analytical sensitivity of two detection systems (System A and System B) was determined using a standard curve. The three commercial kits tested detected the virus in 100% of samples from symptomatic dogs and the kit of Qiagen® showed better results. The System A detected approximately 10 RNA copies/μL and System B detected approximately 100 RNA copies/ μL in RT-qPCR and 10 RNA copies/ μL when followed by NESTED-qPCR. In Chapter 3 three immunoconjugates were developed with polystyrene microspheres (PM) using polyclonal hyperimmune anti-CDV antibody (IgY, IgG and protein A+IgG) to prepare RNA to canine distemper molecular diagnosis and comparison with the conventional method of RNA extraction by commercial kit. Conjugates were standardized and the analytical sensitivity was determined by standard curve. The diagnostic sensitivity was determined using IgY-conjugated, PM without conjugated antibodies and urine adsorption directly qPCR in tubes / FAPESP: 2011/50889-9

A cinomose canina é uma doença viral e afeta principalmente os sistemas respiratório, gastrintestinal e nervoso. O presente trabalho analisou 54 cães com cinomose de um total de 760 cães necropsiados no período de julho de 2006 a outubro de 2007. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por secreção ocular e nasal mucopurulentas, hiperqueratose dos coxins digitais, pulmões de coloração avermelhada e não colabados, atrofia do timo, conteúdo intestinal diarréico e evidenciação das placas de Peyer. Os achados microscópicos caracterizavam-se principalmente por pneumonia intersticial, rarefação linfóide, desmielinização da substância branca, manguitos perivasculares e corpúsculos de inclusão viral na mucosa do estômago, epitélios da bexiga, brônquios e bronquíolos, pelve renal, coxins digitais, pálpebra e orelha, no sistema nervoso central (principalmente em astrócitos) e em células mononucleares dos linfonodos, baço e tonsilas. O teste de imunoistoquímica foi positivo em 94,4% dos casos analisados. Os tecidos foram marcados pela técnica imunoistoquímica utilizando o anticorpo monoclonal anti-cinomose canina (VMRD) na diluição de 1:400. O coxim digital se apresentou como o órgão com o maior número de casos marcados positivamente (67,4%), seguido pelo estômago com 62,7%. A utilização da imunoistoquímica auxiliou na identificação do antígeno viral em diferentes tecidos e foi importante como diagnóstico complementar da cinomose canina. / Canine distemper is a viral disease that affects mainly, respiratory, gastrointestinal and nervous system. The present study analyzed 54 dogs with canine distemper from total of 760 necropsies done in dogs between July 2006 to October 2007. The macroscopic lesion were characterized by mucopurulent oculonasal discharge, hyperkeratosis of footpads, red and not collapsed lungs, thymic atrophy, watery intestinal, hyperemia and Peyer’s patches enlarged. The microscopic findings were characterized by interstitial pneumonia, lymphoid depletion, white matter demylization, perivascular cuffs and viral inclusion bodies located in stomach mucosa, bladder, bronchial, renal pelvis, footpads, eyelid, skin of the ear epithelium, central nervosus system (mainly in astrocytes) and mononuclear infiltrates in lymph nodes, spleen, and tonsils. The immunohistochemistry test was positive in 94,4% of analyzed cases. Tissues were strained by an immunohistochemical procedure with mouse monoclonal anti-cinomose (VMRD) diluted 1:400. The footpads was the best tissue with majority of positive marked cases (67,4%), followed by stomach with 62,7%. This observation suggests that the immunohistochemistry technique aided to identify distemper virus antigens in different tissue making it an important test for complementary diagnostic of canine distemper.