Submitted by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-05-07T17:39:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertaçao Bonfim,l.pdf: 1231590 bytes, checksum: 86a9fb61f83eb8bcd872767ed2f2b3f1 (MD5) / Approved for entry into archive by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-05-07T17:45:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertaçao Bonfim,l.pdf: 1231590 bytes, checksum: 86a9fb61f83eb8bcd872767ed2f2b3f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-07T17:45:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertaçao Bonfim,l.pdf: 1231590 bytes, checksum: 86a9fb61f83eb8bcd872767ed2f2b3f1 (MD5) Previous issue date: 2018-03-01 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O paracetamol, a dipirona sódica e o ibuprofeno estão entre os principais medicamentos isentos de prescrição médica disponíveis nas farmácias. Entre estes fármacos, a dipirona sódica tem se destacado na literatura como um dos medicamentos mais utilizados. Apesar de seu amplo uso, nosso grupo de pesquisa tem demostrado que a dipirona sódica apresenta efeitos genotóxicos e citotóxicos. Desta forma, são de grande importância estudos com medicamentos que proporcionem proteção ou que amenizem os eventuais danos causados por esta droga. O composto homeopático Canova® (CA) parece ser um bom candidato para esse fim, uma vez que ameniza os efeitos colaterais de medicamentos a ele associado. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o possível efeito citoprotetor do CA em linhagem celular de rim de macaco verde africano (VERO) exposta ao fármaco dipirona sódica utilizando os ensaios do cometa, apoptose e imunocitoquímica. Nossos resultados demonstaram através do teste do cometa que a dipirona sódica induziu um aumento no índice de dano (ID) ao DNA da linhagem VERO. No entanto, quando estas células foram co-tratadas com CA nas três concentrações estudadas, observou-se uma redução significativa no ID, o que indica um possível efeito antigenotóxico do CA. Quanto ao ensaio de apoptose e necrose observamos que a dipirona induziu um aumento na percentagem de apoptose tanto em 24 quanto em 48 h. Entretanto, quando este fármaco foi associado ao CA, foi observada uma redução significativa neste efeito nas três concetrações de CA + dipirona. No que diz respeito aos resultados de imunocitoquímica, foi demonstrado um aumento na expressão de caspase 8 e citocromo C quando as células foram expostas à dipirona; em contrapartida, o co-tratamento reduziu significativamente este efeito. Quanto à expressão de caspase 9, observamos que a dipirona induziu um aumento nesta atividade, porém o co-tratamento não apresentou a capacidade de reduzir tal efeito. Desta forma, desmonstrou-se, em nossas condições experimentais, que CA age como citoprotetor conta os danos causados pela dipirona. / Paracetamol, sodium dipyrone and ibuprofen are among the main medicines exempt from medical prescription available in pharmacies in Brazil. Sodium dipyrone is highlighted in the literature as one of the most commonly used drugs. Despite its wide use, our research group demonstrated that sodium dipyrone exerts genotoxic and cytotoxic effects. Therefore, studies with medicines that may provide protection or that ameliorate the possible damages caused by sodium dipyrone are very important. The homeopathic compound Canova® (CA) seems to be a good candidate for such purpose, since in combination with other drugs it seems to soften the side effects of such drugs. Therefore, the present work aims to evaluate the possible cytoprotective effect of CA on African green monkey kidney cell line (VERO) exposed to the drug sodium dipyrone using the comet, micronucleus, apoptosis and immunocytochemistry assays. Results obtained by the comet test showed that sodium dipyrone induces an increase in DNA damage index of the VERO line. However, when such cells were co-treated with CA at the three concentrations studied, a significant reduction in the ID was observed, indicating a possible antigenotoxic effect of CA. We observed in the apoptosis and necrosis assays that dipyrone induced an increase in the percentage of apoptosis in both 24 hours and 48 hours. However when the drug was associated with CA, a significant reduction in this effect was observed in the three concentrations of CA + dipyrone. Results on immunocytochemistry showed an increase in the expression of caspase 8 and cytochrome C when cells were exposed to dipyrone. On the other hand, co-treatment significantly reduced such effect. Expression of caspase 9 was also observed after dipyrone tratament, however, co-treatment did not reduce such effect. Therefore, in our experimental conditions CA acted as a cytoprotect agent against the damages induced by dipyrone.

Baixas doses de agentes desmetilantes do DNA (DNMTi) tem efeitos antitumorais por induzirem parada do ciclo celular e aumentarem a imunogenicidade se tornando mais visível para o sistema imune. Crescentes evidências sugerem que o tratamento com DNMTis podem aumentar a sinalização imune nas células tumorais por meio do mecanismo de mimetismo viral bem como aumento da expressão de antígenos associados ao tumor, destacando assim, o seu potencial clínico na combinação com outras terapias. Enquanto os efeitos dos DNMTis têm sido na maior parte investigados nas células tumorais, os efeitos sobre o sistema imune ainda permanecem desconhecido, especialmente sobre baixas doses. Assim sendo, nosso objetivo foi investigar os efeitos da administração de agentes desmetilantes do DNA sobre a função efetora dos linfócitos T CD8 e seu papel frente a resposta antitumoral. Para isso, injetamos células tumorais CT26 na concentração de 5x105 por animal no dia 0. Cada grupo de animais foi tratado ou não com 5-AZA-CdR (0,5 mg/kg). Os camundongos foram tratados diariamente intraperitonealmente do dia 5 ao dia 9. Como controle adicional, em um grupo de animais, foi utilizado anticorpo neutralizante para depletar células T CD8. O tratamento diminuiu o tamanho tumoral, aumentou o infiltrado de células T CD8 e aumentou a capacidade de produção de citocinas por essas células. Em adição, todos esses efeitos foram abolidos na ausência das células T CD8. Em nossos ensaios de estimulação ex vivo e de imunização com adenovírus, o tratamento gerou aumento da ativação celular, aumento da produção de citocinas, diminuição da proliferação e aumento de morte celular. Por fim em nossos ensaios de citotoxicidade, o tratamento aumentou a capacidade citotóxica dessas células. Nossos resultados mostram que o tratamento in vivo com DNMTis em tumores de camundongos levou ao aumento da infiltração de células T CD8 e que a diminuição do tamanho tumoral é dependente da ação das células T CD8. Uma vez que observamos a capacidade efetoras das células T CD8, o tratamento levou ao aumento da produção de citocinas e aumento da indução de morte celular de células alvo. Em resumo, nossos resultados demonstram que o tratamento com DNMTis aumenta a resposta antitumoral e aumentam o potencial citotóxico das células T CD8. / Low doses of the DNA methylation inhibitor (DNMTis) on cancer cells has durable antitumorigenic effects by inducing cell cycle arrest and immune-modulatory properties that increases their visibility by the immune system. Growing evidence suggest that DNMTis can upregulate immune signaling in cancer cells through viral mimicry and upregulation of tumour associated antigens, highlighting clinical potential to combine with immunotherapy. While the effects of DNMTis have been mostly studied in cancer cells, their effects on the immune system remains vastly unknown specially at clinically relevant low doses. Therefore, we aimed to investigate the effect of in vivo administration of DNA demethylating inhibitor on the effector function of CD8+ T cells and antitumor immune response. We injected 5x105 CT26 cells at day 0 in three group of mice (n=5 mice per group). Each group of mice were either mock treated or treated with Decitabine (5-AZA-CdR or DAC, at a dosage of 0,5 mg/kg). The mice were treated intraperitoneally daily from days 5 to 9. As a control, in one group of mice, it was used neutralizing antibody to deplete CD8+ T cells. The treatment significantly decreased tumor burden and in the absence of CD8+ T cells this effect was abolished. The treatment led to increase in CD8+ T cells infiltration into the tumor microenvironment and enhance secretion of effector cytokines. In addition, all these effects were abolished in the lack of CD8 T cells. Furthermore, using ex vivo and adenovirus immunization, the treatment led to enhance of cellular activation, decrease of proliferation and enhance of cell death. In addition, using cytotoxic assays, the treatment enhanced the killing capability of these cells. to characterize the CD8 T cells, we used ex vivo stimulation protocols. Remarkably, our results show that treatment in vivo with DNMTi in established murine tumors model led to increase CD8+ T cell infiltration and the decrease in tumor burden is dependent of CD8 T cells. Once the effector capacities of these CD8+ T cells were assessed, DNMTi treatment increased their effector cytokine production and increased killing of target cells. Altogether, our results show that treatment of CD8+ T cells enhance antitumor immune response and their cytolytic potential.

Objetivo: Evaluar in vitro el efecto antibacteriano y citotóxico del extracto metanólico del café peruano y colombiano frente a cepas de Streptococcus mutans (ATCC® 25175) y Streptococcus sanguinis (ATCC® 10556). Métodos: El extracto metanólico de café peruano y colombiano fue preparado utilizando una proporción 1:2 (P/V). Para determinar las propiedades antibacterianas de cada extracto se utilizó el método de difusión en pozo y la concentración mínima inhibitoria (CMI) se determinó mediante el método de microdilución. Como control positivo se utilizo la clorhexidina al 2%. La viabilidad celular y la citotoxicidad de los extractos fueron realizados utilizando el ensayo de reducción de MTT en la línea celular MDCK. Resultados: El extracto metanólico del café colombiano (Coffea) tuvo un mayor efecto antibacteriano (18.9 ± 2.8 mm) en comparación al café peruano (15+2.54mm), mientras que para el grupo de Streptoccocus mutans y para el grupo de Streptoccocus sanguinis el café colombiano y peruano mostraron halos de 18.8 ± 2.77 mm y 14.7± 3.8 mm, respectivamente. La concentración mínima inhibitoria (CMI) para los extractos del café colombiano y peruano fue de 3.1 μg/ml y 1.6 μg/ml para Streptoccocu mutans y 6.3 μg/ml para Streptoccocu sanguinis, respectivamente. El ensayo de MTT muestras que ambos extractos no fueron citotóxicos a altas concentraciones. Conclusiones: Los hallazgos que se encontraron en este estudio muestran que los extractos del colombiano y peruano (Coffea) tienen propiedades antibacterianas efectivas contra cepas de Streptococcus mutans y Streptococcus sanguinis. / Objective: To evaluate in vitro the antibacterial and cytotoxic effect of the methanolic extract of peruvian and colombian coffee against strains of Streptococcus mutans (ATCC® 25175) and Streptococcus sanguinis (ATCC® 10556). Methods: An extract was prepared for each type of coffee, carrying out nine tests independently, chlorhexidine 2% was used as a positive control. The well diffusion method was performed to determine the antibacterial properties of each extract. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined by the microdilusion method and the cytotoxicity was analyzed by the MTT reduction test using a MDCK cell line. Results: The methanolic extract of colombian coffee (Coffea) had a greater antibacterial effect (18.9 ± 2.8 mm) compared to peruvian coffee (15 + 2.54mm) for the group of Streptoccocus mutans and for the group of Streptoccocus sanguinis, colombian coffee and peruvian obtained 18.8 ± 2.77 mm and 14.7 ± 3.8 mm, respectively. The minimum inhibitory concentration (MIC) for colombian and peruvian coffee extracts was 3.1 μg / ml and 1.6 μg / ml for S. mutans and 6.3 μg / ml for S. sanguinis, respectively. These extracts were not cytotoxic at high concentrations. Conclusions: The findings found in this study show that colombian and peruvian extracts (Coffea) have effective antibacterial properties against Streptococcus Mutans and Sanguinis strains. Further study with Coffea is recommended as there is very little research on this. / Tesis

La naturaleza es una fuente inagotable de metabolitos secundarios, muchos de los cuales llegan a ser verdaderas herramientas farmacológicas, que pueden tanto tener una utilidad terapéutica como ayudar a comprender el funcionamiento de diversos procesos metabólicos. Las propiedades biológicas de estos compuestos son muy diversas: antitumoral, antibiótica, citostática, inmunomodular, antifúngica, antioxidante, insecticida o antiinflamatoria. Principalmente se obtienen a partir de plantas superiores, organismos marinos, hongos microscópicos y bacterias. La variedad de estructuras carbonadas, las diferentes actividades terapéuticas mostradas y la elucidación de rutas biosintéticas hacen que el aislamiento, identificación, síntesis química y ensayo de nuevas sustancias naturales siga teniendo un enorme interés. En este sentido, nuestro grupo de investigación trabaja desde hace años en el aislamiento, elucidación, transformación química y síntesis de diversos compuestos de origen natural, procedentes de extractos fúngicos terrestres que han destacado por poseer actividad insecticida, fungicida, bactericida, antioxidante y citotóxica. Continuando con la metodología de trabajo del Centro de Ecología Química Agrícola (CEQA) en la Universitat Politècnica de València, en la presente tesis se han estudiado los extractos orgánicos de diversos micro hongos: Aspergillus ochraceus Wilhelm, Penicillium cluniae Quintanilla y Penicillium coalescens Quintanilla como materia prima de biometabolitos con posibles aplicaciones farmacológicas o insecticidas. A partir del extracto del caldo de A. ochraceus, que mostró actividad citostática, se han aislado cuatro compuestos: stephacidin A, circumdatin E, circumdatin H y flavacol, siendo el primero de ellos el responsable de dicha actividad. Todas estas moléculas habían sido aisladas previamente en esta misma especie, con excepción de circumdatin H que es la primera vez que se describe en la naturaleza. A partir del extracto del caldo de P. c / López Gresa, MP. (2006). Aislamiento, purificación y caracterización estructural de nuevos principios bioactivos a partir de extractos fúngicos [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/1823