Orientador: André Gonzaga dos Santos / Coorientador: Christiane Pienna Soares / Banca: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Denise Crispim Tavares / Resumo: Produtos derivados de fontes vegetais tem demonstrado seu potencial no combate a diversas doenças, inclusive o câncer, à exemplo dos alcaloides derivados de Catharantus roseus (L.)G. Don, vincristina e vimblastina. A diversidade estrutural das moléculas encontradas em espécies vegetais concebem perspectivas de uso in natura bem como servem de inspiração para o desenvolvimento de outras entidades químicas que serão destinadas ao combate de doenças. O material de estudo pertence a espécie Baccharis trimera (Less.) DC, popularmente conhecida como carqueja e com amplo uso tradicional, principalmente para o alívio de afecções digestivas. O estudo teve por objetivo o fracionamento cromatográfico de derivados vegetais de partes aéreas de B. trimera e a avaliação da citotoxicidade e estudo de morte em linhagens de células humanas normal e tumorais tratadas com o OE, suas frações e componentes, além da flavona eupatorina isolada do extrato acetato de etila. O potencial citotóxico foi avaliado através do método da sulforrodamina B e os estudos de morte através de ensaios de Anexina-V, Hoechst/iodeto de propídeo e ativação de caspase-3. As linhagens celulares humanas utilizadas foram de câncer de mama (MCF-7), hepatocarcinoma (HepG2) e a linhagem de mama normal (MCF-10). As amostras avaliadas foram o óleo essencial, suas frações e componentes (α-humuleno, trans-cariofileno e óxido de cariofileno), além da eupatorina. Os constituintes majoritários do óleo essencial identificados por CG-E... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Natural products diversity is an important source to find potential treatments against various diseases, including cancer. Vincristine and vimblastine, alkaloids derived from Catharantus roseus (L.) L. Don, are some of the examples. The structural diversity of molecules from plant species allow the in natura usage and also the development of other chemical entities that will be used to diseases control. Baccharis trimera (Less.) DC., popularly known as carqueja, has an extensive traditional use, especially for digestive disorders. The aims of this study were the chromatographic fractionation of aerial parts from carqueja, in vitro evaluation of the cytotoxic potential through sulforhodamine B assay and cellular death by Annexin-V assay, Hoechst/propidium iodide method and caspase-3 activation, in normal and tumor cell lines treated with essential oil, its fractions and components, and the flavone eupatorin isolated from ethyl acetate extract. The cell lines used were human breast cancer (MCF-7), hepatocellular carcinoma (HepG2) and normal breast line (MCF-10a). The evaluated samples were: essential oil, its fractions and components (α-humulene, β- caryophyllene and caryophyllene oxide) and eupatorin. The major constituents of the essential oil identified by GC-MS were: β-caryophyllene (18.9%), bicyclogermacrene (15.6%), germacrene D (10.5%), δ-cadinene (6.6%). Other components of the essential oil, such as α-humulene (2.3%) and caryophyllene oxide (2.9%) were also identified.... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Banca: Edson Luis Maistro / Banca: Carlos Renato Corso / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Banca: Bruna de Campos Ventura Camargo / Resumo: Segundo a Agência Internacional para Pesquisa do Câncer (IARC), estudos utilizando ensaios in vitro e in vivo (populações humanas expostas) demonstraram que algumas tinturas de cabelo e muitos produtos químicos utilizados no processo de tingimento capilar podem ser considerados mutagênicos e carcinogênicos. Estudos epidemiológicos em pessoas expostas ocupacionalmente a tinturas de cabelo indicaram uma associação com risco de câncer de bexiga e neoplasias linfoides. Da mesma forma, o uso pessoal de corantes capilares permanentes foi associado com câncer de bexiga. Cerca do 33% das mulheres, com mais de 18 anos de idade e 10% dos homens com mais de 40 anos, usam algum tipo de corante de cabelo. A tintura capilar preta é uma coloração semipermanente, que é composta por uma mistura de vários corantes, incluindo dois corantes puros (Basic red 51 e Basic brown 17), ambos azo corantes (- N=N-) e uma mistura, denominada Arianor Ebony, composta por cinco corantes, dentre eles azo corantes e antroquinonas (Basic blue 99, Basic brown 16, Acid violet 43, Basic red 76, and Basic yellow 57). Os azo corantes são considerados substâncias perigosas, pois a sua degradação gera produtos como aminas aromáticas que podem ser mais tóxicas que os compostos originais. Os corantes de antraquinona são amplamente utilizado para a coloração de plásticos e tintas industriais conhecidos por serem mutagênicos, carcinogênicos e tóxicos por via oral. Este projeto de pesquisa teve como objetivo geral avaliar a citotoxicidade (teste do Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide- MTT), genotoxicidade (ensaios de Cometa e Micronúcleos) de todos os corantes que compõem a tintura capilar preta, por meio de ensaios realizados com cultura de células de hepatoma humano (HepG2), assim como também avaliar a mutagênicidade da mistura (teste de Ames), pelo teste com Salmonella typhimurium nas linagens TA98 e TA100. Também foi avaliada a expressão de 7 diferentes... / Abstract: According to the International Agency for Research on Cancer (IARC), in vitro and in vivo assays (human populations exposed) have demonstrated that some dyes used in the coloring process can be considered as mutagenic and carcinogenic. Epidemiological studies in occupationally exposed people indicated an association with risk of bladder cancer and lymphoid malignancy. As well, the personal use of hair dyes has been associated to bladder cancer. Almost 33% of women, over 18 years and 10% of men, with more than 40 years, use some kind of hair dye. The black dye is a semipermanent colorant composed by mixture of several tinctures that include two pure colorants (Basic Red 51 and Basic Brown 17), both of these are azo-dyes (-N=N-), and a mixture known as Arianor Ebony, composed by other five dyes, among the are the azo-corants and anthraquinones (Basic blue 99, Basic brown 16, Acid violet 43, Basic red 76, and Basic yellow 57). The azo-corants are considered hazardous substances, due to production of aromatic amines on their degradation; these amines can be more toxic than the original compounds. The anthraquinones dyes are widely used for plastics staining and are known for their mutagenic, carcinogenic and toxic effects if ingested. The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide test-MTT), genotoxicity (Comet assay and Micronucleus) of all corants that compose the black capillary dye, through tests performed with cellular cultures of human hepatome (HepG2), as well as the evaluation of mutagenic properties of the mixture (Ames test), using Salmonella typhimurium. Also, was evaluated the expression of 7 different apoptose genes. The results obtained in this study has demonstrated that the Basic Red 51 (BR51), Basic Brown 17 (BB17), Arianor Ebony and the capillary mixture of dyes induced genotoxic effects on the exposed cells, including the DNA fragmentation and the formation of the MN. The ... / Doutor

Orientadora: Daniela Micheline dos Santos / Coorientador: Marcelo Coelho Goiato / Banca: Marcela Fillié Haddad / Banca: Sandra Helena Penha de Oliveira / Resumo: A prótese bucomaxilofacial implantorretida pode ser suportada por pele ou por mucosa. Subprodutos dos materiais utilizados na confecção destas próteses podem atuar como irritantes ou causadores de reações alérgicas a tais tecidos. A proposta do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade de primers e adesivo utilizados na confecção de próteses maxilofaciais retidas por implantes, por meio da análise da proliferação celular e da produção de citocinas pró-inflamatórias e de proteínas de matriz extracelular por queratinócitos humanos. Foram confeccionadas 28 amostras de resina e silicone, em forma de discos (10 x 1 mm), unidas ou não pela aplicação de primer e/ou adesivo. Estas amostras foram distribuídas em 7 grupos: Resina (R), Silicone (S), Resina + Silastic Medhical Adhesive Type A + Silicone (RAS), Resina + DC 1205 primer + Silicone (RDCpS), Resina + Sofreliner primer + Silicone (RSpS), Resina + DC 1205 primer + Silastic Medhical Adhesive Type A + Silicone (RDCpAS) e Resina + Sofreliner primer + Silastic Medhical Adhesive Type A + Silicone (RSpAS). Os extratos dos materiais testados foram preparados colocando-se quatro amostras de cada grupo experimental em tubos de ensaio contendo 9 mL de meio de cultura DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's) e incubados a 37°C por 24 horas. Após o período de incubação, a citotoxicidade dos extratos foi avaliada pelo ensaio de MTT em cultura de queratinócitos humanos (HaCaT). Foi avaliada, também, a produção das citocinas IL-1, IL-6 e TNF-α e a quimiocina MIP-1α por meio do ensaio ELISA (Ensaio Imunoabsorbente de Ligação Enzimática). Também foi avaliada a expressão de RNAm para MMP-9, TGF-β e COL-IV por meio da técnica de RT-PCR em tempo real (Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real). Os dados obtidos foram submetidos à Análise de Variância (ANOVA), seguido... / Abstract: The implant-retained maxillofacial prosthesis can be supported by skin and mucosa. The sub-products produced by the materials used to fabricate these prostheses may act as an irritant factor and cause allergy in these tissues. The aim of this study was to evaluate the cytotoxic effect of primers and adhesive used to bond the acrylic resin and the facial silicone during implant-retained maxillofacial prosthesis fabrication, through the analysis of the cell proliferation, and the production of proinflammatory cytokines and extracellular matrix proteins by keratinocytes. A total of 28 round shape samples (10 x 1 mm) made of resin and silicone bonded or not with primer and adhesive was fabricated. Samples were divided into 7 groups: Resin (R), Silicone (S), Resin + Silastic Medical Adhesive Type A + Silicone (RAS), Resin + DC 1205 primer + Silicone (RDCpS), Resin + Sofreliner primer + Silicone (RSpS), Resin + DC 1205 primer + Silastic Medical Adhesive Type A + Silicone (RDCpAS), and Resin + Sofreliner primer + Silastic Medical Adhesive Type A + Silicone (RSpAS). Extracts of tested materials were prepared setting four samples of each experimental group in Falcon tube with 9mL of medium (Bulbecco's Modified Eagle's) and incubated at 37°C for 24 hours. After incubation period, the extract cytotoxicity was evaluated by an assay of cell survival/proliferation (MTT test) in cultures of human keratinocytes (HaCaT). The levels of IL-1, IL-6 and TNF-α and the chemokine MIP-1α were evaluated by ELISA (Enzyme-Linked Immunoabsorbent Assay). The mRNA expression for MMP-9, TGF-β and collagen type IV were analyzed by the RT-PCR (Real time polymerase chain reaction). Data were submitted to the analysis of variance with Bonferroni post-tests (p<0.05). The results showed increased cell proliferation for the RAS group. The RDCpS group showed the highest... / Mestre

Orientador: Lucia Regina Ribeiro / Co-orientador: Mário Sérgio Mantovani / Banca: Daniel Araki Ribeiro / Banca: Maria Izabel Camargo Mathias / Trabalho apresenta abstract, resultados e discussão em inglês / Resumo: Cânceres intestinais são correlacionados com a dieta. Assim, a determinação e compreensão das interações nutriente-genoma é importante. O presente trabalho avaliou a ação do selênio oligoelemento na citotoxicidade de proliferação celular, e na indução de apoptose in situ e na expressão dos genes CASP9, BCL-XL e APC em células de adenocarcinoma intestinal (HT29). Células HT29 foram cultivadas e tratadas com selênio nas concentrações de 5, 50 e 500 ng/mL, com ou sem o agente indutor de danos doxorrubicina. Essas células foram então avaliadas por meio do ensaio de citotoxicidade (MTT), proliferação celular e na indução de apoptose in situ. Para avaliar a expressão gênica, apenas as células tratadas com 500 ng/mL de selênio foram utilizadas. O RNA foi extraído a partir dessas células, e as expressões de CASP9, BCL-XL e APC foram analisadas pelo método de RTPCR. O gene GAPDH foi utilizado como gene de referência. O MTT mostrou que o selênio não foi tóxico em qualquer uma das concentrações testadas. O ensaio de proliferação celular mostrou que o selênio não interfere com a proliferação celular nas três concentrações testadas. Em contraste, quando as três concentrações foram combinadas com a doxorrubicina, uma diminuição significativa na taxa de proliferação celular foi observada. A taxa de apoptose foi significativamente maior no selênio (500 ng/mL) e doxorrubicina. A expressão CASP9 foi aumentada e expressão BCL-XL diminuiu no selênio (500 ng/mL) e o grupo de doxorrubicina. A expressão do gene APC foi significativamente maior no grupo selênio sozinho. Estes resultados mostram que a apoptose selênio aumenta, especialmente quando está associado com um agente de indução de danos. Além disso, o selênio tem um papel importante na expressão do gene APC, que está relacionada com a regulação do ciclo celular / Abstract: Intestinal cancers are correlated with diet. Thus, determining and understanding nutrient-genome interactions is important. The present work assessed the action of the oligoelement selenium on cell proliferation, cytotoxicity, and in situ apoptosis induction and on the expression CASP9, BCL-XL and APC genes in intestinal adenocarcinoma cells (HT29). HT29 cells were cultured and treated with selenium at concentrations of 5, 50 and 500 ng/mL with or without the damage-inducing agent doxorubicin. These cells were then evaluated for cytotoxicity (MTT), cell proliferation and in situ apoptosis induction. To evaluate gene expression, only the cells treated with 500 ng/mL of selenium were used. RNA was extracted from these cells, and the expressions of CASP9, BCL-XL and APC were analyzed by the RT-PCR method. The GAPDH gene was used as a reference gene. The MTT assay showed that selenium was not cytotoxic at any of the concentrations tested. The cell proliferation assay showed that selenium did not interfere with cell proliferation at the three concentrations tested. In contrast, when the three concentrations were combined with doxorubicin, a significant decrease in the proliferation rate was observed. The apoptosis rate was significantly increased in the selenium (500 ng/mL) and doxorubicin group. CASP9 expression was increased and BCL-XL expression decreased in the selenium (500 ng/mL) and doxorubicin group. APC was significantly increased in the selenium group alone. These results show that selenium increases apoptosis, especially when it is associated with a damage-inducing agent. Also, selenium has an important role in the expression of the APC gene, which is related to cell cycle regulation / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Banca: Silvia Tamie Matsumoto / Banca: Maria Izabel Souza Camargo / Banca: Grasiela de C. S. Aguiar / Banca: Mario Sergio Palma / Resumo: A exposição do homem às substâncias danosas, sejam estas substâncias de origem natural ou sintética, vem crescendo durante as últimas décadas. Esta exposição é capaz de induzir diversos efeitos deletérios nos organismos expostos, provocando diversas doenças e até mesmo a morte. Da mesma forma que aumenta a quantidade de substâncias promotoras de impactos ambientais, também crescem as pesquisas que buscam por novas substâncias que sejam capazes de proteger os organismos destes efeitos deletérios. Esse trabalho tem como objetivo avaliar a atividade citotóxica, genotóxica e antigenotóxica, mutagênica e antimutagênica de venenos de Hymenoptera (especificamente da abelha Apis mellifera e da vespa Polybia paulista), em diferentes concentrações, utilizando para essa avaliação o sistema teste de HepG2. Foi utilizado o ensaio do MTT para se avaliar a citotoxicidade tanto do veneno de A. mellifera como de P. paulista. As concentrações consideradas não citotóxicas (1, 5 e 10μg/mL de veneno de vespa e 0,1, 0,05 e 0,01 μg/mL do veneno de abelha) foram utilizadas para se avaliar o potencial genotóxico (ensaio do cometa) e mutagênico (teste do micronúcleo). Estas concentrações não citotóxicas mostraram-se genotóxicas e mutagênicas para o sistema teste utilizado. Foram utilizadas outras concentrações, mais baixas que as utilizadas nos testes de genotoxicidade e mutagenicidade (1ng/mL, 100pg/mL e 10pg/mL de veneno de vespa e 10pg/mL, 1pg/mL e 0,1pg/mL para o veneno de abelha), para a realização dos testes de antigenotoxicidade e antimutagenicidade com células HepG2. As concentrações utilizadas nesses ensaios mostraram que ambos os venenos, ao invés de inibirem e/ou diminuirem o efeito genotóxico e mutagênico da substância metilmetano sulfonato, aumentaram ainda mais os danos causados por esta substância... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Human exposure to harmful substances, natural or synthetic, is increasing in the last decades. This exposure is able to induce several deleterious effects on the exposed organisms, causing several diseases and even death. As the amount of substances that promote environmental impacts increases, researches seeking for new substances that are able to protect the organisms against these deleterious effects have also increased. This study aimed to evaluate the cytotoxic, genotoxic and antigenotoxic, mutagenic and antimutagenic of Hymenoptera venoms (specifically of the bee Apis mellifera and the wasp Polybia paulista), in different concentrations, using for this evaluation the HepG2 test system. The MTT assay was used to assess the cytotoxicity the venom of A. mellifera and P. paulista. The concentrations considered non cytotoxic (1, 5 and 10μg/mL of the wasp venom and 0.1, 0.05 and 0.01 μg/mL of the bee venom) were used to evaluate the genotoxic (comet assay) and mutagenic potential (micronucleus test). These non cytotoxic concentrations were genotoxic for the test system used. Other concentrations were used, lower than the ones used in the genotoxicity and mutagenicity tests (1ng/mL, 100pg/mL and 10pg/mL of the wasp venom and 10pg/mL, 1pg/mL and 0,1pg/mL for the bee venom), in order to perform the antigenotoxicity and antimutagenicity tests with HepG2 cells. The concentrations used in these assays showed that both venoms, instead of inhibiting and/or decreasing the gentoxic and mutagenic effects of the substance methylmethane sulfonate, increased even more the damages caused by this substance. In order to verify which would be the compound responsible for the effects registered for the venoms, it was also evaluated the effect of phospholipase A2 (PLA2 from A. mellifera)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Lúcia Regina Ribeiro / Coorientador: Mário Sérgio Mantovani / Banca: Maria Izabel Camargo Mathias / Banca: Lusânia Maria Greggi Antunes / Banca: Verônica Elisa Pimenta Vicentini / Banca: Silvana Pedroso de Goes Favoni / Resumo: Atualmente, principalmente devido aos avanços na área de Nutrigenômica, sabe-se que a dieta tem grande influência na saúde e bem estar das pessoas. Uma dieta adequada pode contribuir para a prevenção de diversas doenças crônicas, dentre elas, o câncer. Estudos epidemiológicos apontam que as populações de países asiáticos sofrem menos com estas doenças, e o alto consumo de soja (e suas isoflavonas daidzeína e genisteína) está associado a este fato. As isoflavonas da soja daidzeína e genisteína possuem grande potencial de prevenção do câncer, uma vez que muitos estudos já demonstraram que elas interferem em diversos estágios do processo de carcinogênese. A modulação da proliferação e morte celular é um dos efeitos quimiopreventivos das isoflavonas mais investigados, porém a maioria dos estudos utiliza-se de concentrações fisiologicamente irrelevantes, ou seja, concentrações que não são encontradas no organismo humano. Portanto, o objetivo do nosso estudo foi analisar os efeitos da máxima concentração fisiologicamente relevante dessas isoflavonas em células humanas in vitro. Três linhagens celulares foram utilizadas: MCF-7 (tumoral de mama), HB4a (não tumoral de mama) e OVCAR-3 (tumoral de ovário). O efeito citotóxico, a expressão gênica (CASP-3, CASP-7, BAX, BCL-xL e COX-2) e a indução de apoptose foram investigadas nas três linhagens celulares. Além disso, foi estudado o efeito das isoflavonas sobre o ciclo celular das linhagens MCF-7 e HB4a. Somente uma concentração alta de genisteína (100 μM) após 72h de tratamento induziu citotoxicidade na linhagem OVCAR-3. Ambas as isoflavonas em concentração de 10 μM não induziram apoptose nesta linhagem, e a expressão dos genes analisados não mudou significativamente frente ao tratamento com daidzeína ou genisteína. O tratamento das... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nowadays, mainly because of Nutrigenomics advances, it is known that diet has a major influence on health and welfare of people. A proper diet can contribute to the prevention of several chronic diseases, including cancer. Epidemiological studies indicate that Asian populations suffer less from these diseases, and high intake of soy (and its isoflavones daidzein and genistein) is associated with this fact. The soy isoflavones daidzein and genistein have great potential for cancer prevention, since many studies have shown that they interfere with several stages of carcinogenesis. Modulation of cellular proliferation and death is one of the most investigated chemopreventive effects of isoflavones, but in most of the studies, physiological irrelevant concentrations are used, i.e., concentrations that are not found in human body. The objective of our study was to analyze the effects of maximal physiological relevant concentration of these isoflavones in in vitro human cell lines. Three cell lineages were used: MCF-7 (from breast carcinoma), HB4a (breast non-tumoral cell) and OVCAR-3 (from ovarian carcinoma). Cytotoxic effect, gene expression (CASP-3, CASP-7, BAX, BCL-xL and COX-2) and induction of apoptosis were investigated in all cell lines. In addition, it was studied the effect of the isoflavones on the cell cycle of MCF-7 and HB4a. Only the highest concentration of genistein (100 μM) was cytotoxic to OVCAR-3 after 72 hours of treatment of the cells. Both isoflavones at 10 μM did not induce apoptosis in this cell line and expression of the studied genes did not change in front of daidzein or genistein treatment. Daidzein treatment of HB4a cells was not cytotoxic in none of the experimental conditions. Daidzein 10 or 25 μM also was not able to induce apoptosis or to arrest cell cycle of nontumoral HB4a. Also in this lineage, concentration of 10... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Lúcia Regina Ribeiro / Coorientador: Mário Sérgio Mantovani / Banca: Maria Izabel Camargo Mathias / Banca: Edson Luis Maistro / Banca: Veronica Elisa Pimenta Vicentini / Banca: Denise Crispim Tavares / Resumo: Há um interesse crescente na investigação de substâncias de origem natural como os flavonóides, devido ao grande número de evidências dos benefícios que eles proporcionam para a saúde, principalmente reduzindo o desenvolvimento de doenças crônicas. Nesse contexto, a rutina é um flavonóide que tem sido bem caracterizado na literatura por apresentar uma variedade de atividades farmacológicas incluindo propriedades antiinflamatória, antialérgica, antimutagênica, imunomoduladora e hepatoprotetora. Estes efeitos protetores atribuídos a rutina estão relacionados, em grande parte, à sua propriedade antioxidante direta, no entanto, as vias moleculares e os mecanismos de ação desses processos são pouco conhecidos. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi investigar os efeitos citotóxicos, genotóxicos e protetores do flavonóide rutina em concentrações fisiológicas relevantes in vtiro. Para isso, foram utilizadas quatro linhagens de células tumorais: HTC (hepatoma de Rattus norvegicus); HepG2 (hepatoma humano); HT-29 (adenocarcinoma de cólon humano) e 786-O (carcinoma renal humano). Os resultados obtidos com as células HTC mostraram que a concentração de 810 uM de rutina não foi citóxica, apresentou efeito genotóxico e não alterou a expressão dos genes GSTa2 e p38, relacionados ao metabolismo de drogas e controle do ciclo celular, respectivamente. Além disso, a análise dos espectros de Ressonância Magnética Nuclear (RMN H1) dos metábolitos das células expostas a concentração genotóxica da rutina (810uM), revelou menores níveis de fosfocolina, glicerofosfocolina, creatina, lactato, acetato e glutationa. A análise dos resultados das linhagens HepG2 e HT-29 revelou que 100 μM de rutina foi citotóxica e reduziu a expressão e a atividade das principais enzimas antioxidantes endógenas: superóxido dismutase... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: There is growing interest in the investigation of naturally occurring substances such as flavonoids, due to the large volume of evidence of the benefits they provide for health, mainly by reducing the development of chronic diseases. In this context, rutin is a flavonoid that has been well characterized in the literature by presenting a variety of pharmacological activities including antiinflammatory, antiallergic, antimutagenic, immunomodulating and hepatoprotective. These protective effects attributed to rutin are related in large part to their direct antioxidant properties, however, the molecular pathways and mechanisms of action of these processes are poorly understood. Thus, the objective of this study was to investigate the cytotoxic, genotoxic and protective flavonoid rutin in the relevant physiological concentrations in vtiro. Therefore, it was using four different strains: HTC (Rattus norvegicus hepatocellular); HepG2 (Human carcinoma), HT-29 (human colon adenocarcinoma) and 786- O (human kidney carcinoma). The results obtained with HTC cells showed that the concentration of 810 UM genotoxic effect of rutin showed no changes in gene expression GSTa2 and p38, related to drug metabolism and cell cycle control, respectively. In addition, NMR analysis of cells exposed to the genotoxic concentration rutin (810 UM) revealed lower levels of phosphocholine, glicerphosphocholine, creatine, lactate, acetate and glutathione. The results of the lines HepG2 and HT-29 revealed that 100 UM of rutin was cytotoxic and reduced the expression and activity of the major endogenous antioxidant enzymes: superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx) and glutathione reductase (Gr). On the other hand, 10 UM of rutin did not alter the viability and kinetics of cell proliferation, significantly increased the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Banca: Grasiela Dias de Campos Severi-Aguiar / Banca: Elaine Cristina Mathias da Silva Zacarin / Resumo: O uso de plantas medicinais é uma prática muito antiga e utilizada pela maioria dos povos em todo o mundo. Lupinus albus (L. albus), conhecido popularmente como tremoço branco, vem sendo usado na medicina popular, em forma de sementes cruas, como regulador de níveis de glicemia e colesterol. Embora descrito na literatura que suas proteínas e alcaloides isolados têm potencial para isto, não se tem qualquer informação científica em relação à eficiência de suas sementes cruas. O objetivo deste trabalho foi avaliar os possíveis efeitos, citotóxicos, genotóxicos e antigenotóxicos, mutagênicos e antimutagênicos, carcinogênicos e anticarcinogênicos e também o potencial imunomodulador do extrato aquoso de sementes cruas de L. albus, por meio de ensaios de micronúcleo em medula óssea, Focos de criptas aberrantes em cólon, contagem diferencial de leucócitos, níveis de glicemia e colesterol do soro de camundongos da espécie Mus musculus, bem como determinar e quantificar, por meio de cromatografia gasosa, alcaloides e ácidos graxos desse extrato. Foi avaliado nos camundongos seus efeitos nas concentrações equivalente a 3 sementes/dia (como utilizado na medicina popular) e 9 sementes/dia. A análise fitoquímica do extrato revelou a presença do alcaloide lupanina, dos ácidos graxos oleico, linoleico, palmítico e esteárico. Porém não foi possível observar, por meio de ensaios bioquímicos, os efeitos hipoglicêmicos de L. albus em ambos os protocolos seguidos. Foi observado que os níveis de colesterol apresentaram melhora, para o protocolo com administração da DMH. No ensaio de MN em medula óssea, não foi observado efeito citotóxico, porém foi possível observar efeito genotóxico e mutagênico para o extrato testado na concentração maior no tratamento sub-crônico. Foram também observados efeitos antigenotóxico e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The use of medicinal plants is a very old practice, used by most of the people around the world. Lupinus albus (L. albus), popularly known as white lupine, has been used in popular medicine in form of raw seeds, as a regulator of blood glucose and cholesterol. Although literature describes that their isolated proteins have the this potential, there is no scientific information regarding the efficiency of their raw seeds. The aim of this study was to evaluate the possible genotoxic, antigenotoxic, mutagenic, antimutagenic, anticarcinogenic and carcinogenic effects, and also the immune modulatory potential of aqueous extract of raw seeds of L. albus, by means of bone marrow micronucleus, aberrant crypt foci in colon, leukocyte counting, blood glucose and serum cholesterol levels of mice Mus musculus, as well as to determine and quantify alkaloids and fatty acids of these extracts, by gas chromatography. The effects of concentrations equivalent to 3 seeds/day (as used in popular medicine) and 9 seeds/day were evaluated in mice. Chemical analysis of the extract showed the presence of the alkaloid lupanine and oleic, linoleic, palmitic and stearic fatty acids. However, according to biochemical assays, it was not possible to observe hypoglycemic effects of L. albus in both followed protocols. It was observed that cholesterol levels showed an improvement in the protocol using DMH. No cytotoxic effects were observed in the MN assay in bone marrow, but genotoxic and mutagenic effects were recorded in highest concentration of the tested extract. Antigenotoxic and antimutagenic effects were also observed, demonstrating a preventive action for the two concentrations tested due to the promotion of harm reduction for pre-extract treatment. When the extract of L. albus was administered simultaneously with DMH, a reduction in damage was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Marcelo Antonio Amaro Pinheiro / Banca: Marcus Emanuel Barroncas Fernandes / Banca: Roberto Munehisa Shimizu / Banca: Camilo Dias Seabra Pereira / Banca: Milton Cezar Ribeiro / Resumo: O presente estudo avaliou o grau de contaminação da água, sedimento, vegetação arbórea (Rhizophora mangle) e do caranguejo-uçá (Ucides cordatus) por metais, em seis manguezais paulistas, bem como o impacto geno e citotóxico sobre as populações deste crustáceo, com base na frequência de hemócitos (hialinócitos) micronucleados e tempo de retenção do vermelho neutro pelos lisossomos. Os manguezais são áreas de preservação permanente (APPs) e berçários de diversas espécies animais, incluindo o caranguejo-uçá, que é amplamente comercializado e consumido pelo homem em regiões litorâneas. Seis áreas de manguezal do Estado de São Paulo (Cananéia, Iguape, Juréia, Cubatão, São Vicente e Bertioga) foram avaliadas, sendo cada uma representada por três subáreas de amostragem. Amostras de sedimento, folhas da vegetação arbórea (R. mangle), estruturas corpóreas do caranguejo-uçá (U. cordatus) e água da galeria deste crustáceo foram coletadas para a quantificação de seis metais totais (Cd, Cu, Pb, Cr, Mn e Hg), por espectrometria de absorção atômica. As dosagens de metais obtidas foram submetidas à ANOVA, com as médias comparadas por Tukey (5%). Os resultados obtidos quanto ao comportamento dos seis metais totais se coadunam com a literatura especializada, já que o Cd, Pb, Cr e Hg se acumularam mais no sedimento do que nos demais compartimentos abiótico-bióticos analisados, enquanto o Cu e Mn apresentaram maiores concentrações nas estruturas corpóreas de U. cordatus e nas folhas de R. mangle, respectivamente. Considerando a disponibilidade de metais associados à água, sedimento e folhas de R. mangle, os resultados evidenciam que cada área de manguezal (localidade) possui um ou mais metais em maiores proporções relativas, a saber: Cubatão e Bertioga: Pb e Cd; São Vicente: Hg; Juréia: Cr; Iguape: Cu, Mn e Hg; e Cananéia: Mn (em menor escala). Em relação ao acúmulo de metais nas amostras de... / Abstract: This study evaluated the metals contamination level of water, sediment, woody vegetation (Rhizophora mangle) and the "uçá"-crab (Ucides cordatus) in six mangrove areas located in São Paulo State, as well as the geno cytotoxic impact on the populations of this crustacean, based on micronucleated hemocytes (hyalinocytes) frequency and the retention time of neutral red in their lysosomes. Mangroves are permanent preservation areas (PPAs) and nurseries to several animal species, including the "uçá"-crab, which is widely traded and consumed by humans at coastlands. Six mangrove areas located in São Paulo State (Cananéia, Iguape Juréia, Cubatão, São Vicente and Bertioga) were evaluated, each of them were represented by three replicas. Samples from sediment, leaves of woody vegetation (R. mangle), body structures from "uçá"-crab (U. cordatus) and water from burrows of this crustacean were collected to dosage of six total metals (Cd, Cu, Pb, Cr, Mn and Hg) by atomic absorption spectrophotometer. The metals concentrations were compared by ANOVA and their means by Tukey (at 5%). The results regarding the tendencies of accumulation of six metals are in accordance with the literature, since the Cd, Pb, Cr and Hg have accumulated more in sediment than in others biotic-abiotic compartments analyzed, whereas Cu and Mn have showed higher concentrations in U. cordatus body structures and R. mangle leaves, respectively. At São Paulo mangroves, taking into account the availability of metals associated with their presence in water, sediment and leaves of R. mangle, the results suggest that each area (locality) has one or more metals in larger relative proportions, namely: Cubatão and Bertioga: Pb and Cd; São Vicente: Hg; Juréia: Cr; Iguape: Cu, Mn and Hg; and Cananéia: Mn (smaller scale). About the "uçá"-crab metals accumulation by mangrove area, it were found an association of Cu and Mn in animals from São Vicente and... / Doutor

Orientador: Leila Aparecida Chiavacci / Coorientador: Bruno Leonardo Caetano / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Léo Ricardo Bedore dos Santos / Resumo: O avanço no desenvolvimento de novos sistemas carreadores de fármacos tem contribuído na melhoria da qualidade de vida no que diz respeito a diminuir os efeitos colaterais dos fármacos e aumentar a sobrevida dos pacientes. Visando superar as limitações dos carreadores já explorados pela literatura, busca-se desenvolver novos materiais carreadores que apresentem maior capacidade de encapsulamento de fármaco. Entre esses novos materiais existem as redes metalo- orgânicas (MOFs), que são constituídas por ligantes orgânicos e centros metálicos que se unem formando redes cristalinas e altamente porosas. Assim, o foco desse trabalho foi sintetizar e caracterizar as MOFs a base de ciclodextrina, e diferentes metais como potássio (γ-KCD), sódio (γ-NaCD) e ferro (γ-FeCD), além de avaliar a capacidade de liberação de fármaco dessas materiais. As MOFs foram sintetizadas seguindo uma metodologia descrita na literatura, com algumas modificações: a ciclodextrina e o sal de metal foram solubilizados em água e em seguida colocados em difusão em metanol, após a formação dos cristais, os mesmos foram ativados com diclorometano. Os difratogramas de raios- X (DRX) mostraram a cristalinidade do material e a presença de picos característicos das MOFs a base de ciclodextrina, relatado na literatura. As análises térmicas (TG e DSC) confirmam a formação das redes através da ligação entre a ciclodextrina e o metal. As micrografias da microscopia eletrônica de varredura (MEV) mostram que as diferentes geometrias das estruturas formadas, como cúbicas para γ-KCD e γ-NaCD e forma de bastões para γ-FeCD, além de que após a ativação é possível evidenciar a presença de poros. O fármaco modelo, diclofenaco de sódio, foi incorporado nas MOFs, o que foi confirmado através da espectroscopia vibracional no infravermelho (IV), e os resultados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The development of new drug carrier systems has contributed to improving the quality of life with respect to lessen the side effects of drugs and increase patient survival. Aiming to overcome the limitations of carriers already explored in the literature, we seek to develop new carrier materials that have higher drug encapsulation capacity. Among these new materials are the organic metallo networks (MOFs), which are formed by organic ligands and metal centers that combine to form crystalline and highly porous network. Thus, the focus of this work was to synthesize and characterize MOFs cyclodextrin basis, different metals such as potassium (γ-KCD), sodium (γ-NACD) and iron (γ-FECD), and to evaluate the release capacity of these drug materials. The MOFs were synthesized following a method described in the literature with some modifications: the cyclodextrin and the metal salt were solubilized in water and then placed in methanol diffusion after formation of the crystals, they were activated with dichloromethane. The -ray diffraction (XRD) showed the crystallinity and the presence of characteristic peaks of MOFs cyclodextrin base, reported in the literature. The thermal analysis (TG and DSC) confirmed the formation of networks by linking the cyclodextrin and the metal. The micrographs of scanning electron microscopy (SEM) show that different geometries of structures formed as cubical for γ-KCD and γ-NACD and form of sticks for γ-FECD, and that after activation is possible to demonstrate the presence of pores. The model drug, sodium diclofenac, was incorporated in MOFs, which was confirmed by vibrational infrared spectroscopy (IR), and the results show that the material has a high encapsulation efficiency greater than 60%. The obtained release profiles showed a drug release control effect in PBS, suggesting that drug release occurs due... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre