Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-29T15:20:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) dissertaçao1.2novaantimicrobiana1final1.2.pdf: 1493025 bytes, checksum: 3516ce495abc1dca6a61ef9a8cbe8786 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-29T15:20:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) dissertaçao1.2novaantimicrobiana1final1.2.pdf: 1493025 bytes, checksum: 3516ce495abc1dca6a61ef9a8cbe8786 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / FACEPE / Propriedades farmacológicas de plantas são reconhecidas, empiricamente, há séculos. Neste aspecto, o interesse por vegetais deve-se, sobretudo, à aptidão destes em produzir compostos biologicamente ativos. As samambaias, apreciadas pelo uso ornamental, são utilizadas para a cura de doenças. Além da atividade antimicrobiana, várias outras, tais como antioxidante, antinociceptiva, antitumoral, anti-inflamatória, citotóxica são relatadas como propriedades biológicas destes vegetais. Com a ascensão das doenças crônicas não transmissíveis, especialmente das doenças do aparelho circulatório e das neoplasias, e a persistência das doenças infecciosas e parasitárias, marcadas pela resistência microbiana a antibióticos, a busca por novos fármacos com ação antimicrobiana e citotóxica torna-se imprescindível. Diante deste contexto, este estudo objetivou avaliar a atividade antimicrobiana e citotóxica dos extratos de Asplenium serratum L. e Marsilea minuta L., samambaias ocorrentes no Brasil, e descritas na terapêutica popular. Os extratos metanólico de A. serratum e etanólico de M. minuta foram obtidos, respectivamente, por esgotamento a frio e maceração. A análise fitoquímica foi feita por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) para os padrões quercetina e cafeína. Na atividade antimicrobiana foram utilizadas bactérias padrão, Escherichia coli, Shigela flexneri, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus MSSA, e a Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi determinada pelo método de microdiluição, com concentrações variando de 5mg/mL a 0,005mg/mL. O sinergismo, testado contra E. coli e S. aureus MSSA, foi realizado pelo método checkerboard. A citotoxicidade foi verificada através do método MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio), frente a células tumorais humanas NCI-H29, HEp-2, MCF-7 e HL-60. A quercetina e cafeína foram sugeridas como constituintes de M. minuta. Os extratos apresentaram CIM de 5,0 mg/mL frente à S. aureus MSSA e S. typhimurium, e de 2,5 mg/mL contra E. coli e S. flexneri. Em sinergismo, perante S. aureus MSSA, apresentaram atividade bactericida em concentrações ≥ 2,56 mg/mL (A. serratum) e ≥ 0,33 mg/mL (M. minuta). No caso de E. coli, a ação bactericida foi ≥ 1,31 mg/mL (A. serratum) e ≥ 2,62 mg/mL (M. minuta). Os extratos foram considerados inativos frente às células tumorais testadas, com percentuais de inibição inferiores a 50 % para concentração de 50 μg/ mL. Portanto, foi possível concluir que os extratos das espécies em estudo possuem potencial antimicrobiano e exibem efeito sinérgico, além de apresentarem metabólitos, ainda a serem identificados. / Pharmacological properties of plants are recognized, empirically, for centuries. In this aspect, interest in plants is mainly because their ability to produce biologically active compounds. Ferns, appreciated by their ornamental use, are utilized to cure diseases. Besides antimicrobial activity, several others properties such as antioxidant, anti-nociceptive, antitumor, anti-inflammatory, cytotoxic and biological are reported for these plants. With the rise of non-communicable chronic diseases, especially circulatory diseases and neoplasms, and the persistence of infectious and parasitic diseases, marked by microbial resistance to antibiotics, the search for new drugs with antimicrobial and cytotoxic action becomes imperative. In front of this context, this study aimed to evaluate antimicrobial and cytotoxic activity of extracts from Asplenium serratum L. and Marsilea minuta L., occurring ferns in Brazil, described in popular therapy. Extracts, methanolic of A. serratum and ethanolic of M.minuta, were obtained, respectively, by cold exhaustion and maceration. Phytochemical analysis was performed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) for standards of quercetin and caffeine. Default bacteria Escherichia coli, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus MSSA, were used in antimicrobial activity. The Minimal Inhibitory Concentration (MIC) was determined by the microdilution method, with concentrations ranging from 5mg / mL to 0.005 mg / mL. Synergism tested against E. coli and S. aureus MSSA was executed by checkerboard method. Cytotoxicity was assessed by MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) against human tumor cells, NCI-H29, HEp-2, MCF-7 and HL -60. Quercetin and caffeine have been suggested as constituents of M. minuta. The extracts showed MIC of 5.0 mg / mL against S. aureus MSSA and S. typhimurium, and 2.5 mg / mL against E. coli and S. flexneri. In synergism, against S. aureus MSSA, fern extracts showed bactericidal activity at concentrations ≥ 2.56 mg / mL (A. serratum) and ≥ 0.33 mg / mL (M. minuta). In the case of E. Coli, the bactericidal action was ≥ 1.31 mg / mL (A. serratum) and ≥ 2.62 mg / mL (M. minuta). The extracts were considered inactive in front of the tumor cells tested, with percentages lower than 50% inhibition at concentration of 50 μg / ml. Therefore, the extracts of studied species have antimicrobial potential and exhibits synergistic effect, besides having metabolites, yet to be identified.

Made available in DSpace on 2018-06-27T18:56:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Katia Nascimento.pdf: 1068792 bytes, checksum: 21eda0227fa806a032831389e9702cbc (MD5) Katia Nascimento.pdf.jpg: 3573 bytes, checksum: 0598575e3e40c135c5f6a495204e1f7e (MD5) Previous issue date: 2013-08-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The toxicological sciences cover several areas including the toxicology, which studies the toxicity of nanoparticles (NPs) for use in the biological contact. NPs depending on how they interact with the cells can generate a series of imbalances, may be both cell membrane or in genetic material. This study evaluated the cytotoxicity and oxidative stress of nanocapsules (NCs) of meloxicam in cultured splenocytes of mice in vitro. We used mice of Balb/ c spleens were removed for the experiments. Cytotoxicity assays were performed as the 3 - (4,5) dimetiltialzolil -2,5 diphenyltetrazolium (MTT) and PicoGreen®, and also oxidative stress through the levels of thiobarbituric acid reactive species (TBARS), catalase activity and the levels of non-protein thiols (NPSH). The results showed that both NCs meloxicam (MN) NCs white (NB) and free meloxicam (ML) were cytotoxic to splenocytes. MF increased lipid peroxidation, but did not change antioxidant defenses, while MN did not alter the oxidative stress parameters. The NC constituents were isolated and it was performed cytotoxicity assays in splenocytes of mice. We demonstrated that all components (PCL, Tween 80, Span 60 and oil - medium chain triglyceride) caused cytotoxicity and only the PCL and Tween 80 caused damage to the nuclear membrane. Therefore, we can conclude that NC, NB and MF caused cytotoxicity, but only NB and MF produced oxidative stress. Moreover, cytotoxic effects of NCs constituents isolated did not intense. In this context, this study revealed that the NC components act synergistically to cause toxicity. / As ciências toxicológicas abrangem várias áreas entre elas, a nanotoxicologia, a qual estuda a toxicidade de nanopartículas (NPs) destinadas ao contato biológico. As NPs dependendo da maneira como interagem com as células, podem gerar uma série de desequilíbrios, podendo ser tanto a nível de membrana celular ou ainda, no material genético. Neste estudo foram avaliados a citotoxicidade e o estresse oxidativo de nanocápsulas (NCs) de meloxicam em cultura de esplenócitos de camundongos in vitro. Foram utilizados camundongos da linhagem Balb/c e os baços foram removidos para a realização dos experimentos. Foram realizados ensaios de citotoxicidade como do 3-(4,5) dimetiltialzolil (4,5) dimetiltialzolil (4,5) dimetiltialzolil (4,5) dimetiltialzolil (4,5) dimetiltialzolil (4,5) dimetiltialzolil (4,5) dimetiltialzolil (4,5) dimetiltialzolil (4,5) dimetiltialzolil (4,5) dimetiltialzolil -2,5 difeniltetrazólio 2,5 difeniltetrazólio 2,5 difeniltetrazólio 2,5 difeniltetrazólio2,5 difeniltetrazólio2,5 difeniltetrazólio 2,5 difeniltetrazólio2,5 difeniltetrazólio 2,5 difeniltetrazólio (MTT) e PicoGreen®, e ainda, de estresse oxidativo através dos níveis de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), atividade da catalase e os níveis de tióis não-proteicos (NPSH). Os resultados demonstraram que as tanto as NCs de meloxicam (MN), NCs brancas (NB) e meloxicam livre (ML) foram citotóxicas aos esplenócitos. A NB causou um aumento nos níveis de TBARS, indicando uma peroxidação lipídica na membrana celular, e um aumento na atividade da catalase. ML causou somente um aumento na peroxidação lipídica sem alterar as defesas antioxidantes, enquanto MN não causou alteração nos parâmetros de estresse oxidativo avaliados. Os constituintes da NC foram isolados e realizados ensaios de citotoxicidade. Como resultados, foi observado que todos os componentes (PCL, Tween 80, Span 60 e óleo triglicerídeo de cadeia média) causaram citotoxicidade e apenas o PCL e Tween 80 lesaram a membrana nuclear. Portanto, pode-se concluir que tanto MN, NB e ML causaram uma citotoxicidade, porém somente as NB e o ML causaram estresse oxidativo. Além disso, o efeito citotóxico dos componentes das NCs isoladamente não foi tão intenso, portanto este estudo revelou que os componentes das NCs atuam sinergicamente para desencadear a toxicidade.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T19:45:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_BetinaMuller.pdf: 2340597 bytes, checksum: 9b2e7abafe20d9c76ebb8713b0789f07 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T19:45:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_BetinaMuller.pdf: 2340597 bytes, checksum: 9b2e7abafe20d9c76ebb8713b0789f07 (MD5) Previous issue date: 2015-03-23 / Carbon nanotubes (CNT) have unique properties that are of great interest to the biotechnology area. The idea of using CNTs as carriers of drugs, adjuvants for vaccines and biosensors, is attracting great interest from the scientific community. However, the biocompatibility and toxicity in vitro and in vivo of these structures need to be investigated. Thus, the aim of this study was to investigate the cytotoxicity caused by carbon nanotubes multi-walled (MWCNT) in peritoneal macrophages isolated from C57BL/6 mice and the secondary line RAW 264.7. To perform the in vitro test, cultured cells were treated with concentrations of 1 mg/mL and 5mg/mL MWCNT and 1μg/mL of lipopolysaccharide (LPS). The control group of cells with culture medium were cultured in DMEM medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and the negative control at 100 mϻ hydrogen peroxide. The cells remained in treatments for periods of 24 and 48 hours. Then was determined cell viability through the exclusion method using trypan blue, which remained around 70%. After the biochemical cytotoxicity tests were conducted using the release of lactate dehydrogenase (LDH) in the cell supernatant, allowing to note that the concentrations of MWCNT were unable to cause any damage to the cell membrane, as well as any cytotoxic effect. These results confirm the microscopic images, which do not show cell death caused by MWCNT at these concentrations. The citotoxicity caused by MWCNT was evaluated by the measurement of nitric oxide (NO) and the gene expression of TNF-α and IL-1β. In these tests it was revealed that the toxicity was present in cells treated with the secondary line MWCNT, which did not have an increase in NO production and gene expression of cytokines analyzed. / Os nanotubos de carbono (NTC) apresentam propriedades exclusivas que são de grande interesse para a área de biotecnologia. A idéia de se utilizar NTCs como carreadores de fármacos, adjuvantes para vacinas e biosensores, vem despertando grande interesse da comunidade científica. No entanto, a biocompatibilidade e toxicidade in vitro e in vivo dessas estruturas precisam ser investigadas. Com isso, o objetivo desse trabalho foi investigar a citotoxicidade causada pelos nanotubos de carbono de paredes múltipla (NTCPM) em macrófagos peritoneais isolados de camundongos C57BL/6, e macrófagos da linhagem secundária RAW 264.7. Para a realização dos testes in vitro, as células tratadas foram cultivadas com as concentrações de 1mg/mL e 5mg/mL de NTCPM, e 1μg/mL de lipopolissacarídeo (LPS). As células do grupo controle com meio de cultura foram cultivadas com meio de cultura DMEM suplementado a 10% de soro bovino fetal (SBF), e o controle negativo com 100 mϻ de peróxido de hidrogênio. As células permaneceram em tratamentos pelos períodos de 24 e 48 horas. Em seguida foi determinado a viabilidade celular, através do método de exclusão pelo azul tripan, a qual permaneceu em torno de 70%. Após foram conduzidos os testes bioquímicos de citotoxicidade através da liberação da enzima lactato desidrogenase (LDH) no sobrenadante celular, o que possibilitou observar que as concentrações dos NTCPM utilizadas não foram capazes de causar nenhum dano na membrana celular, assim como nenhum efeito citotóxico. Estes resultados confirmam as imagens microscópicas, as quais não mostram a morte celular causada pelos NTCPM nestas concentrações. A toxicidade causada pelos NTCPM foi avaliada através da dosagem do óxido nítrico (NO) e pela expressão gênica das citocinas TNF-α e IL-1β. Nesses testes foi possível perceber que a citotoxicidade não se fez presente nas células da linhagem secundária tratadas com NTCPM, as quais não tiveram um aumento da produção de NO e na expressão gênica das citocinas analisadas.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-17T11:45:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Patrick_Flores_Menezes.pdf: 781861 bytes, checksum: d5a63e27019895c5d076c24d47faf78b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-17T11:45:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Patrick_Flores_Menezes.pdf: 781861 bytes, checksum: d5a63e27019895c5d076c24d47faf78b (MD5) Previous issue date: 2016-08-29 / Carbon nanotubes (CNT) are structures of a few centimeters in length, and with a nanometer radius. The application of CNT has been diverse, from nanosensors to drug carriers, and therefore its toxicological evaluation is of great importance. Among the various properties of CNT, the most worrying in toxicological terms is its great insolubility. The insolubility in aqueous medium is one of the factors that decrease the biocompatibility, reducing cell viability in vitro. Functionalization techniques of nanostructures can be used to increase the solubility of CNT, thus increasing their biological compatibility. The objective of this work was to investigate the cytotoxicity caused by nonfunctionalized and functionalized multiple-walled carbon nanotubes (MWCNT) through a chemical method and subsequent purification. For the in vitro tests, the treated cells (RAW 264.7 and VERO cells) were cultured with various concentrations of CNT described in the literature for comparison (5, 10, 25, 50 and 100 μg / ml). Cells from the control group with culture medium were cultured with DMEM culture medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), and the positive control for cell damage with 100 mM of hydrogen peroxide. Cells remained in treatments for the 24 hour periods. Cell viability was then determined by the tripan blue exclusion method, which remained around 70%. Biochemical tests for cytotoxicity were carried out by the release of the enzyme lactate dehydrogenase (LDH) in the cell supernatant, nitric oxide in the macrophages, MTT, and a cell count of the supernatant after treatment. The results showed no significant difference in cytotoxicity of the samples, so the experiment was repeated using a VERO cell line, and concentrations were increased (100, 250, 500, 1000 and 5000 μg / ml). The MTT, LDH, neutral red and tripan blue counts were again performed. This second result demonstrated that functionalization decreases the cytotoxic effect of the MWCNT used. The methodology used was easy to apply and could be used for future analyzes of cytotoxicity using these nanomaterials. / Nanotubos de carbono (NTC) são estruturas de comprimento de poucos centímetros, e com um raio nanométrico. A aplicação dos NTC tem sido diversa, de nanosensores a carreadores de fármacos, e por isso sua avaliação toxicológica é de grande importância. Entre as diversas propriedades dos NTC, a mais preocupante em termos toxicológicos é a sua grande insolubilidade. A insolubilidade em meio aquoso é um dos fatores determinantes que diminuem a biocompatibilidade, diminuindo a viabilidade celular in vitro. Técnicas de funcionalização de nanoestruturas podem ser utilizadas, para aumentar a solubilidade dos NTC, aumentando assim sua compatibilidade biológica. Com isso, o objetivo desse trabalho foi investigar a citotoxicidade causada pelos nanotubos de carbono de paredes múltipla (NTCPM) não funcionalizados e funcionalizados, através de um método químico e posterior purificação. Para a realização dos testes in vitro, as células tratadas (RAW 264.7 e Células VERO) foram cultivadas com diversas concentrações de NTC descritas na literatura a fim de comparação (5, 10, 25, 50 e 100 μg/ml). As células do grupo controle com meio de cultura foram cultivadas com meio de cultura DMEM suplementado a 10% de soro bovino fetal (SBF), e o controle positivo para dano celular com 100 mM de peróxido de hidrogênio. As células permaneceram em tratamentos pelos períodos de 24 horas. Em seguida foi determinado a viabilidade celular, através do método de exclusão pelo azul tripan, a qual permaneceu em torno de 70%. Em seguida foram conduzidos os testes bioquímicos de citotoxicidade através da liberação da enzima lactato desidrogenase (LDH) no sobrenadante celular, óxido nítrico na linhagem de macrófagos, MTT e uma contagem celular do sobrenadante celular após tratamento. Os resultados não demonstraram diferença significativa na citotoxicidade das amostras, sendo assim, o experimento foi repetido utilizando uma linhagem celular de células VERO, e as concentrações foram aumentadas (100, 250, 500, 1000 e 5000 μg/ml). Foram realizados novamente os ensaios do MTT, LDH, vermelho neutro e a contagem com azul tripan. Este segundo resultado demonstrou que a funcionalização diminui o efeito citotóxico dos NTCPM utilizados. A metodologia utilizada, mostrou-se de fácil aplicabilidade e passível de ser utilizada para futuras análises de citotoxicidade utilizando estes nanomateriais.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-21T13:55:51Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao_AltevirRossatoViana.pdf: 1076277 bytes, checksum: e699ace63c5cd785e56e303606eb4dd2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-21T13:55:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_AltevirRossatoViana.pdf: 1076277 bytes, checksum: e699ace63c5cd785e56e303606eb4dd2 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-02-20 / Cancer is the second largest cause of death in the world, only behind cardiovascular disease. This pathology is able to circumvent mechanisms of proliferative suppression, growing and surviving in hostile environments. Melanoma is a type of malignant tumor, has high metastatic potential and may be resistant to conventional anticancer agents. Although it does not correspond to the most frequent type of neoplasia, it represents a high mortality rate because of its capacity of metastases and as untreated difficulties. Due to these factors, the search for alternatives is highly encouraged. Many of the anticancer medicaments have their origin from natural, semi-synthetic and synthetic products. In Brazil, due to the richness of the national flora and the lack of knowledge about its bioactive products, the projects that seek this knowledge are important. The objective of the present study was to verify the antitumor activity in vitro and in vivo of a plant of the family Solanaceae, present in Rio Grande do Sul. Vassobia breviflora is known for its antitumor potential, mainly due to the presence of vitanolides, Withaferin A (WA). However, the studies found with the Brazilian plant are scarce. The vegetal species used in the work was extracted from a private property in the region of Boca do Monte, in the municipality of Santa Maria, RS. It was cataloged by the herbarium of the Federal University of Santa Maria and its aqueous extract was prepared with the dried leaves, extracted at room temperature. Controls were made using the commercially acquired WA active principle and the standard chemotherapy for melanoma, Temozolomide. Verification of the amount of WA was conducted by high performance liquid chromatography (HPLC). The tests for the detection of antioxidant compounds in the extract were made from the analysis of total phenols, diammonium salt - 2,20-azino-bis (acid 3-ethylbenzthiazoline-6-sulfônico) (ABTS) e 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil (DPPH). The cytotoxic potential was investigated from the (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) (MTT), in B16F10 cells. In vivo tests were conducted in the C57BL/6 line of isogenic mice, inoculated subcutaneously with the B16F10 line melanoma and treated for 30 days orally with the different treatments. The project was approved by the institution's animal ethics committee. During the treatment period, the weights of the animals were checked weekly with the aid of an analytical balance. The volume of the tumor by the measurement of the tumor mass, with a digital caliper and the survival time by the Kaplan Meyer curve. After the euthanasia of the animals, they had the tumors removed and weighed. In addition, other organs, such as spleen, lymph node, liver, lung, brain and kidney were removed and fixed for later histopathological analysis, and properly conditioned and frozen for biochemical and gene analyzes. The statistic of the results was performed by the statistical package for the social (SPSS) version 23.0. To compare the treatments, one-way analysis of variance (ANOVA) was performed, followed by the Tukey post hoc test. The results demonstrated a presence of WA in the aqueous extract of Brazilian Vassobia breviflora, as well as its antioxidant potential. The MTT assay in the B16F10 cell line showed cytotoxic ability of treatment with the aqueous extract of Vassobia breviflora, when compared to the controls. In the in vivo model the survival of the animals treated with the combination between the aqueous extract in the highest concentration and the chemotherapeutic Temozolomide was better in relation to the other treatments, compared to the control. The weight and volume of the tumors in the different treatments used did not vary significantly in relation to the control group. It is concluded that from the in vitro results, the plant species studied has a cytotoxic potential. However, for the in vivo assays, it is believed that the aqueous extract does not have a significant potential in the control of melanoma development, requiring models with the use of the ethanolic extract and other fractions of the constituents of the vegetal species for the best evaluation. As well as the use of melanoma induction by other routes of inoculation. Ex vivo tests will be needed to better elucidate the activity of the plant against this model of melanoma. / O câncer corresponde a segunda maior causa de mortes no mundo, atrás apenas das doenças cardiovasculares. Essa patologia faz com que as células adquiram a capacidade de driblar os mecanismos de supressão proliferativa, crescendo indefinidamente e sobrevivendo em ambientes hostis. O melanoma é um tipo de tumor maligno, apresenta alto potencial metastático e pode ser resistente a agentes anticancerígenos convencionais. Apesar de não corresponder ao tipo mais frequente de neoplasia, ele representa alta taxa de mortalidade, devido a sua capacidade de metástases e as dificuldades no tratamento. Por esses motivos, a busca por terapias preventivas e/ou adjuvantes é bastante incentivada. Muitos dos medicamentos anticancerígenos tiveram a sua origem a partir de produtos naturais, semissintéticos e sintéticos. No Brasil, devido a riqueza da flora nacional e o pouco conhecimento sobre os produtos bioativos da mesma, os projetos que buscam esse conhecimento são importantes. O objetivo do presente estudo foi o de verificar a atividade antitumoral in vitro e in vivo de uma planta da família Solanaceae, presente no Rio Grande do Sul. Vassobia breviflora é conhecida pelo seu potencial antitumoral, devido principalmente à presença de vitanolídeos, sendo o principal deles a Vitaferina A (VA). No entanto, os estudos encontrados com a planta brasileira são escassos. A espécie vegetal utilizada no trabalho foi extraída de uma propriedade privada na região de Boca do Monte, no município de Santa Maria, RS. Ela foi catalogada pelo herbário da Universidade Federal de Santa Maria e o seu extrato aquoso foi preparado com as folhas secas, extraídas a temperatura ambiente. Os controles foram feitos com a utilização do princípio ativo VA, adquirido comercialmente e do quimioterápico padrão para o melanoma, a Temozolomida. A verificação da quantidade de VA foi conduzida por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Os ensaios para a detecção de compostos antioxidantes no extrato foram feitos a partir da análise de fenóis totais, sal de diamônio 2,2'-Azino-bis (3-etilbenzotiazolina-6-sulfônico) (ABTS) e 2,2-Difenil-1- Picrilidrazilo (DPPH). O potencial citotóxico foi investigado a partir do ensaio de (3 (4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio brometo) (MTT), em células B16F10. Os testes in vivo foram conduzidos na linhagem C57BL/6, de camundongos isogênicos, inoculados pela via subcutânea, com a linhagem de melanoma B16F10 e tratados por um período de 30 dias, por via oral, com os diferentes tratamentos. O projeto teve aprovação do comitê de ética no uso de animais da Instituição. Durante o período de tratamento foram verificados os pesos dos animais, semanalmente, com o auxílio de balança analítica. O volume do tumor, pela medida do diâmetro da massa tumoral, com paquímetro digital e o tempo de sobrevida pela curva de Kaplan Meyer. Após a eutanásia dos animais, eles tiveram os tumores removidos e pesados. Além disso, outros órgãos como baço, linfonodo, fígado, pulmão, cérebro e rim foram retirados e fixados para posterior análise histopatológica, e devidamente acondicionados e congelados para as análises bioquímica e de expressão gênica. A estatística dos resultados foi realizada pelo statistical package for the social (SPSS) versão 23.0. Para comparar os tratamentos, foram utilizadas análises de variância (ANOVA) de uma via, seguido do teste post hoc de Tukey. Os resultados demonstraram a presença da VA no extrato aquoso da Vassobia breviflora brasileira, assim como o seu potencial antioxidante. O ensaio de MTT na linhagem celular B16F10 mostrou capacidade citotóxica do tratamento com o extrato aquoso de Vassobia breviflora, quando comparado aos controles. No modelo in vivo a sobrevida dos animais tratados com a associação entre o extrato aquoso na maior concentração e o quimioterápico Temozolomida foi melhor em relação aos demais tratamentos, comparados ao controle. O peso e o volume dos tumores, nos diferentes tratamentos utilizados, não variou significativamente em relação ao grupo controle. Conclui-se a partir dos resultados in vitro, que a espécie vegetal estudada apresenta um potencial citotóxico. No entanto, para os ensaios in vivo acredita-se que o extrato aquoso não tenha um potencial significativo no controle do desenvolvimento do melanoma, necessitando de modelos com a utilização do extrato etanólico e demais frações dos constituintes da espécie vegetal para a melhor avaliação. Bem como a utilização de indução do melanoma por outras vias de inoculação. Testes ex vivo serão necessários para a melhor elucidação da atividade da planta frente a esse modelo de melanoma.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-22T18:10:08Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_IsabelRoggia_parcial.pdf: 2275089 bytes, checksum: 85859128d6658714abfc7173f2587948 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-22T18:10:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_IsabelRoggia_parcial.pdf: 2275089 bytes, checksum: 85859128d6658714abfc7173f2587948 (MD5) Previous issue date: 2018-03-26 / The Paullinia cupana var. sorbilis, popularly known as guarana, is one of the most promising compounds in Brazilian flora. The presence of methylxanthines (caffeine, theophylline and theobromine) and tannins (caffeine and catechin) in its composition make it a potent therapeutic compound. Stimulant, antifungal, antimicrobial, antiparasitic activities, among others, are described in the literature as potentiality of this compound. On the other hand, when the product is exposed to high temperatures, in the presence of moisture, oxygen and in direct contact with light or, when stored in inadequate packaging, the integrity of the active ingredient may be impaired and consequently, the decrease and/or loss of activity and onset of toxicity can be observed. With the intent of obtaining a more stable, effective and safe product, the objective of this work was to prepare and characterize a liposomal system containing guarana powder and to evaluate its safety "in vitro" through a study of cytotoxicity and genotoxicity. First, analytical methods for the quantification of markers present in guarana were developed and validated by ultraviolet derivative (UVD), for caffeine and catechin, and by high performance liquid chromatography (HPLC), for quantification of caffeine, theophylline, theobromine, catechin and epicatechin in samples of guarana powder and liposomes. The methods developed proved to be linear, specific, precise, accurate and robust for the simultaneous determination of the different markers in the guarana powder sample and in the liposomes. Through the forced degradation study it can be observed, in general, a reduction of polyphenols content (catechin and epicatechin), compared to basic (0.1 M NaOH) and photolytic (fluorescence UVC) conditions, both for the standards and for guarana and for liposomes. For the latter, a reduction in the content of active compounds was also observed against oxidative conditions (3% H2O2). It is believed that this change is related to the process of epimerization and photostability, already described for polyphenols when in contact with basic and photolytic solutions, respectively. After conducting a preformulation study it was observed that liposomes containing 1 mg.mL-1 guarana powder, prepared by the reverse phase evaporation method and the ethanol injection method presented adequate characteristics and remained more stable in relation to the formulations containing 10 and 5 mg.ml-1. After the physical-chemical characterization and stability study of these formulations, the reverse phase evaporation method was chosen as the best method for encapsulation of guarana. These systems remained stable under 10 refrigeration without significantly modifying their characteristics for 60 days. A toxicological evaluation of liposomes in different cell cultures (3T3, HaCaT, A549, HepG2 and THP1) and in different concentrations (3.91-500 μg.mL-1) showed that, in general, the liposomes do not present significant toxicity up to a concentration of 125 μg.mL-1 when analyzed by the neutral red technique (NRU). By the (3-(4,5- Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) technique (MTT), the viability reduction was observed from the concentration of 31.25 μg.mL-1 for the 3T3 and HepG2 cells and 62.5 μg.mL-1 for the A549 cell. Hemolysis, photohaemolysis, and hemoglobin oxidation tests showed that the liposomes, in the absence of guarana, caused damage to the eritrocytes and that guarana can reverse and/or protect the cells against this damage. It was also observed that this damage is possibly related to the presence of polysorbate 80 present in the formulations. When chlorpromazine was added to the experiments, it was observed that the guarana containing liposomes were able to protect the cells from the damage caused by that compound. Through the genotoxicity study it was possible to observe that guarana and liposomes did not cause DNA damage. The evaluation of the antioxidant activity by the DPPH technique proved the antioxidant effect, already described for guarana and, it was verified that this activity was maintained after the incorporation of guarana in the liposomes. This activity observed for all treatments was dose dependent of the concentration of guarana in the formulation. In this way, we can conclude that it was possible to develop a liposome system through the reverse phase evaporation method containing 1 mg.mL-1 of guarana powder, remaining stable for 60 days and showing safety against the different cell types tested. It is also worth noting the importance of new experiments, mainly the performance of the spray drying to improve the stability of the active ingredients and the characterization of these new systems formed, as well as additional tests regarding the safety profile. / A Paullinia cupana var. sorbilis, popularmente conhecida por guaraná é um dos compostos mais promissores da flora brasileira. A presença de metilxantinas (cafeína, teofilina e teobromina) e taninos (cafeína e catequina) em sua composição, fazem deste, um potente composto terapêutico. Atividades estimulante, antifúngica, antimicrobiana, antiparasitária, dentre outras, estão descritas na literatura como potencialidade deste composto. Em contra partida, quando o produto encontra-se exposto a temperaturas elevadas, na presença de umidade, oxigênio e em contato direto com a luz ou ainda, quando conservado em embalagens inadequadas, a integridade dos ativos pode ser prejudicada e consequentemente a diminuição e/ou perda da atividade e surgimento de toxicidade podem ser observadas. Com a proposta de obter um produto mais estável, eficaz e seguro, o objetivo deste trabalho foi preparar e caracterizar um sistema lipossomal contendo pó de guaraná, além de avaliar a sua segurança “in vitro” através de estudo de citotoxicidade e genotoxicidade. Primeiramente, métodos analíticos para quantificação dos marcadores presentes no guaraná foram desenvolvidos e validados por espectrofotometria ultravioleta derivada (UVD), para a cafeína e a catequina e por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para quantificação de cafeína, teofilina, teobromina, catequina e epicatequina em amostras de pó de guaraná e nos lipossomas. Os métodos desenvolvidos demostraram-se lineares, específicos, precisos, exatos e robustos para determinação simultânea dos diferentes marcadores em amostra de pó de guaraná e nos lipossomas. Através do estudo de degradação forçada pode-se observar, de forma geral, redução no teor dos polifenóis (catequina e epicatequina), frente a condições básicas (NaOH 0,1 M) e fotolíticas (UVC fluorescentes), tanto para os padrões, como para o guaraná e para os lipossomas. Para esse último, observou-se também redução no teor dos compostos ativo frente a condições oxidativas (H2O2 3%). Acredita-se que essa alteração esteja relacionada ao processo de epimerização e fotoinstabilidade, já descrito para os polifenóis quando em contato com soluções básicas e fotolíticas, respectivamente. Após a realização de um estudo de pré-formulação observou-se que os lipossomas contendo 1 mg/mL de pó de guaraná, preparados pelo método de evaporação em fase reversa e pelo método de injeção de etanol apresentaram características adequadas e mantiveram-se mais estáveis em relação as formulações contendo 10 e 5 mg/mL. Posteriormente a caracterização físico-química e o estudo de estabilidade destas formulações, o método de evaporação em fase reversa foi escolhido 8 como o melhor método para encapsulação do guaraná. Esses sistemas mantiveram-se estáveis sobre refrigeração, sem modificar de forma significativa, das suas características por 60 dias. A avaliação toxicológica dos lipossomas frente á diferentes culturas celulares (3T3, HaCaT, A549, HepG2 e THP1) em diferentes concentrações (3,91 – 500 μg/mL), mostrou que, de forma geral, os lipossomas não apresentam toxicidade significativa até a concentração de 125 μg/mL quando analisados pela técnica de vermelho neutro (NRU). Já pela técnica de brometo de 3-(4,5-dimetil-2- tiazolil)-2, 5-difenil-2H-tetrazólio (MTT) a redução da viabilidade foi observada a partir da concentração de 31,25 μg/mL para as células 3T3 e HepG2 e 62,5 μg/mL para a célula A549. Os testes de hemólise, fotohemólise e oxidação da hemoglobina mostraram que os lipossomas sem a presença do guaraná apresentaram dano aos eritrócitos e que o guaraná consegue reverter e/ou proteger as células contra esse dano. Observou-se também que esse dano, possivelmente esteja relacionado à presença do polissorbato 80 presente nas formulações. Quando foi adicionado a clorpromazina aos experimentos, observou-se que os lipossomas contendo guaraná conseguiram proteger as células do dado provocado por esse composto. Pelo estudo de genotoxicidade foi possível observar que o guaraná e os lipossomas contendo guaraná não ocasionaram dano ao DNA. A avaliação da atividade antioxidante pela técnica de DPPH comprovou o efeito antioxidante, já descrito para o guaraná, e ainda, verificou-se que essa atividade foi mantida após a incorporação do guaraná nos lipossomas. Essa atividade observada para todos os tratamentos foi dose dependente da concentração de guaraná na formulação. Desta forma, podemos concluir que foi possível desenvolver um sistema lipossomal através do método de evaporação em fase reversa contendo 1 mg/mL de pó de guaraná, mantendo-se estável por 60 dias e mostrando-se seguro frente os diferentes tipos celulares testados. Resalta-se ainda, a importância de novos experimentos, principalmente a realização da secagem por aspersão para melhorar a estabilidade dos ativos e a caracterização destes novos sistemas formados, além de testes adicionais quanto ao perfil de segurança.

Orientadores: José Francisco Hofling, Marta Cristina Teixeira Duarte / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T21:24:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Peixoto_IzaTeixeiraAlves_D.pdf: 4732148 bytes, checksum: cd8cbf98531ac28e12f9feba2f8edd34 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar a ação antimicrobiana de óleos essenciais e frações de diferentes acessos de Mentha spp. contra Candida spp., identificando seus compostos e verificando sua citotoxicidade. Os 64 óleos essenciais de diferentes acessos de Mentha spp. foram extraidos utilizando as partes aéreas da planta fresca, por hidrodestilaçãoo em sistema tipo Clevenger. Os óleos foram testados contra isolados clínicos e de referência de Candida albicans (CBS 562) e Candida dubliniensis (CBS 7987). A CIM foi determinada por meio do método de microdiluição (CLSI, 2002). Os melhores acessos testados em células planctônicas foram fracionados em 5 partes em cromatografia de coluna seca e testados posteriormente contra biofilme de C. albicans (SC 5314). Com o inoculo padronizado em meio RPMI-1640, os biofilmes foram produzidos em placas esterilizadas de polietileno de 96 pocos, para testes dos óleos e frações em biofilme maduro e biofilme em formação, sendo quantificados com solução de XTT e analisados através de microscopia óptica e confocal a laser. Os compostos dos melhores óleos e frações foram identificados por cromatografia em camada delgada e cromatografia a gas com detector de massas. A citotoxicidade também foi provada em painel de diferentes linhagens celulares células epiteliais, por meio da avaliação da atividade antiproliferativa, in vitro, utilizando-se o ensaio de sulforrodamina B para avaliação do crescimento celular. O melhor rendimento em óleo essencial (base seca) foi observado para o acesso de M. rotundifolia CM 31 (1,5 %). Quatro óleos se destacaram, apresentando forte atividade com amplo espectro, sendo M. canadensis (CM 05) - (<0,007 a 0,500 mg/mL); M. spicata (CM 30) (0,062 mg/mL a 0,500 mg/mL); M. arvensis CM 36 (<0,007 mg/mL a 1 mg/mL) e M. suaveolens x spicata (CM 52) - (0,062 mg/mL a 0,500 mg/mL). As frações F2 e F3 de M. suaveolens x spicata CM 52 demonstraram a melhor atividade dentre os óleos e frações testadas, apresentando 49 % e 38 % de inibição na concentração de 0,5 mg/mL para biofilme maduro e 70 % de inibição (a 0,062 mg/mL) e 61 % de inibição (a 0,125 mg/mL), respectivamente, para inibição de biofilme em formação. Esses resultados foram confirmados pelas analises microscópicas. Os compostos majoritários do óleo de M. canadensis CM 05 foram carvona (74,84 %) e linalol (4,84 %);de M. spicata CM 30 oxido de piperitenona (28,05 %), beta-E-farneseno (18,58 %) e gama-muuroleno (17,38 %); M. arvensis CM 36 Linalol (33,24 %), acetato de linalol (21,97 %) e alfaterpineol (11,77 %); de M. suaveolens x spicata CM 52 pulegona (52,20 %), piperitenona (29,51 %) e gama-muuroleno (4,44 %). Os óleos essenciais de Mentha spp. apresentam atividade antimicrobiana contra células planctônicas de Candida spp. (de moderada a fraca), exceto os óleos originados dos acessos de M. canadensis CM 05, M. spicata CM 30, M. arvensis CM 36 e M. suaveolens x spicata CM 52. As fracoes F2 e F3 de Mentha suaveolens x spicata CM 52 demonstram efeito antimicrobiano inibitório sobre biofilme em formação e sobre biofilme maduro, alem de ausência de citotoxicidade para células testadas / Abstract: The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of essential oils and fractions of different accessions of Mentha spp. against Candida spp., identifying compounds and verifying its cytotoxicity.The essential oils of 64 different accessions of Mentha spp. were extracted using the fresh aerial parts of the plant by hydrodistillation cleavenger type system Then, The the oils were tested against clinical isolates and reference strains Candida albicans (CBS 562) and Candida dubliniensis (CBS 7987). The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined by microdilution method, using the CLSI protocol. The best accessions tested on planktonic cells were separated into 5 parts by dry column, and oils and fractions were subsequently tested against biofilms of C. albicans (SC 5314). With standardized inoculum in RPMI-1640, the biofilms were produced in sterile polyethylene plates with 96 wells, for to evaluate the oils and fractions in preformed biofilm and inhibition biofilm formation. After the biofilm was quantified with XTT solution and analyzed by optical and confocal microscopy. The compounds were further identified by thin layer chromatography (TLC) and gas chromatography mass spectrometry (GC-MS). The cytotoxicity was also tested in epithelial cells as well as antitumor activity, by evaluating the antiproliferative activity in different cell lines using the test sulforrodamina B (SBR) for evaluation of cell growth.The best yield in essential oil (dry basis) was observed for the accessions M. rotundifolia CM 31 (1.5% dry basis). Among the 64 oils, four stood out, showed strong activity with broad spectrum, inhibiting all strains tested, and these, M. canadensis (CM 05) - (<0.007 to 0.187 mg/mLto 0.500 mg/ml), M. spicata (CM 30) - (0.062 mg/mL to 0.500 mg/ml), M. arvensis CM 36 (<0.007 mg/mL to 1 mg/mL) and M. spicata x suaveolens (CM 52) - (0.062 mg/mL to 0.500 mg/mL). Fractions F2, F3 M. spicata x suaveolens CM 52 showed the best activity among the tested oils and fractions, showing 49% and 38% inhibition at 0.5 mg/mL for preformed biofilm and 70% inhibition (at 0.062 mg/mL) and 61% inhibition (at 0.125 mg/mL), respectively, for inhibitory biofilm formation. These results were confirmed by microscopic analysis. The mainly oil M. canadensis 05 CM were carvone (74.84%), linalool (4.84 %); M. spicata CM piperitenone oxide were 30 (28.05%), beta-E-farnesene (18.58%) and gamma-muuroleno (17.38%); M. arvensis CM 36 were Linalool (33.24%), acetate, linalool (21.97%) and alphaterpineol (11.77%); M. spicata x suaveolens CM 52 were pulegone (52.20 %), piperitenone (29.51 %) and gamma-muurolene (4.44 %). Fractions F2 and F3 showed antiproliferative activity for most strains, showing lack of cytotoxicity in epithelial cells tested.The essential oils of Mentha spp. exhibit antimicrobial activity against planktonic cells of Candida spp. (moderate to weak), except oils originating from accessions of M. canadensis CM 05, M. spicata CM 30, M. arvensis CM 36 and M. suaveolens x spicata CM 52. The fractions F2 and F3 of Mentha spicata x suaveolens CM 52 shows antimicrobial effect on preformed biofilm and inhibition biofilm, and absence of cytotoxicity to mammalian cells / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Orientador: Patricia da Silva Melo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T14:49:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Correa_DanielHenriquedoAmaral_M.pdf: 1457648 bytes, checksum: 6adbe0feca89d1798ac2084d68454c69 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A droga desidrocrotonina (DHC), isolada da planta Croton cajucara, é conhecida pelas suas atividades biológicas, entretanto apresenta uma vasta e conhecida toxicidade. Neste trabalho foram preparadas formulações contendo DHC associada a polímeros (PLGA) ou ciclodextrinas (beta, metil-beta e hidroxipropil-beta) para obter nanopartículas poliméricas e complexos de inclusão, respectivamente. Objetivamos neste trabalho a preparação das formulações de veiculação de DHC, sua caracterização e avaliação de parâmetros de toxicidade in vitro visando o estudo comparativo dos efeitos da DHC livre e veiculada. Células V79 e hepatócitos de ratos, sistemas celulares bem estabelecidos, permitiram avaliar alvos celulares como lisossomos, mitocôndrias e ácidos nucléicos frente aos possíveis danos tóxicos causados pela DHC. Nos hepatócitos, além dos parâmetros citados acima, também foi avaliada a quantidade de GSH existente nessas células, bem como a quantificação da peroxidação lipídica através da formação de TBARS e a atividade enzimática de enzimas do sistema de metabolização de drogas após tratamento com DHC livre e veiculada nos sistemas de liberação controlada ¿ nanoesferas de PLGA e complexos de inclusão com ciclodextrinas. Nossos estudos em forma geral, indicam que os polímeros ou complexos de inclusão são estruturas que conferem estabilidade à DHC, provocam liberação controlada e diminuição dos efeitos tóxicos da DHC / Abstract: The drug dehydrocrotonin (DHC), isolated from Croton cajucara plant, is known for its biological activities, however presenting a well-known toxicity. In this work, we produced complexes containing DHC associated with polymers (PLGA) or with cyclodextrins (beta, methyl-beta and hydroxypropyl-beta) to obtain polymeric nanoparticles and inclusion complexes respectively. We aimed in this work to produce DHC-loaded formulations, to characterize these formulations and to evaluate the in vitro toxicity parameters through the comparative study of the effects of the free DHC and DHC-loaded. V79 cells and rat hepatocytes, well-established cellular systems, had allowed us to evaluate cellular targets as the lysosomes, mitochondrias and nucleic acids against the possible toxic effects caused by DHC. In hepatocytes, beyond the above-listed parameters, the amount of GSH in these cells was also evaluated, as well as the quantification of lipid peroxidation through the formation of TBARS and the enzymatic activity of the enzymes from the drug metabolization system after treatment with DHC in its free state and associated with controlled release systems ¿ nanospheres of PLGA and cyclodextrins inclusion complexes.Our studies indicates that the polymers or inclusion complexes are structures that confer stability to DHC, causing controlled release and reduction of the toxic effects of DHC / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Intracanal dressings are substances used during endodontic treatment and requiring biocompatible with periradicular tissues, not causing tissue damage or interfere in repair process. This study aimed to assess the cytotoxicity of endodontic dressing when in contact with L929 mouse fibroblast cells, after different periods. To assess the cytotoxicity of three intracanal dressings and three vehicles were divided into seven groups, namely: calcium hydroxide/camphorated paramonochlorophenol/ glycerin (CPG); iodoform/ glycerin (IG); calcium hydroxide/iodoform/distilled water (CIW); iodoform/distilled water (IW); calcium hydroxide/distilled water (CW); Otosporin® (OT); and control group. The eluates of the medications were prepared and placed in contact with the cells (1 x 105 cells/well) during periods of 24, 48, 72hours, 5 and 7 days. After each evaluation time, a colorimetric assay was conducted using methyl tetrazolium reagent (MTT) and the reading of the plates was performed in a spectrophotometer with optical density of 570 nm. Data were tabulated and subjected to statistical analysis by ANOVA-Tukey test with a significance level of 5%. At 24hours, IG and OT (P <0.001) showed greater cytotoxicity, as also observed by the OT group (P <0.001) when analyzed in 48hours. In 72 hours, it could be observed that the CW and OT groups were more cytotoxic compared to the control group. These data were also demonstrated in groups CPG, IW, CW and OT in 5 days. Within 7 days all drugs showed cytotoxicity, but OT group showed the most cytotoxic (P <0.001). With respect to experimental time factor was observed in all groups significant differences between 24hours and 7 days. It is concluded that all medications showed cytotoxicity at some point in the research being Otosporin ® the most cytotoxic and that time influenced the cytotoxicity of all medications analyzed intracanal medication. / As medicações intracanais são substâncias utilizadas no tratamento endodôntico que necessitam apresentar biocompatibilidade com os tecidos perirradiculares, de modo a não causar danos teciduais e nem interferir no processo de reparo. O estudo objetivou avaliar a citotoxicidade de medicamentos de uso endodôntico, quando em contato com células fibroblásticas de murinos L929, em diferentes períodos de observação. Para avaliar a citotoxicidade, foram utilizadas três medicamentos e três veículos, divididos em sete grupos experimentais, a saber: hidróxido de cálcio-paramonoclorofenol canforado-glicerina (HPG); iodofórmio-glicerina (IG); hidróxido de cálcio-iodofórmio-água destilada (HCI); iodofórmio-água destilada (IA); hidróxido de cálcio-água destilada (HC); Otosporin® (OT) e grupo controle - composto por células e meio de cultura. Foram preparados os eluatos das medicações sendo estes colocados em contato com as células (1 x 105 células/poço) por períodos de 24h, 48h, 72h, 5 e 7 dias. Após cada tempo experimental, foi executado o ensaio colorimétrico, utilizando o reagente metiltetrazólio (MTT) e a leitura das placas foi realizada no espectrofotômetro utilizando a densidade óptica de 570nm. Os dados foram tabulados e submetidos a análise por meio da ANOVA-Tukey, com um nível de significância de 5%. Em 24h, IG e OT (P<0,001) demonstraram maior citotoxicidade, fato este também observado pelo grupo OT (P<0,001) quando analisado em 48h. Em 72h, pôde-se observar que os grupos HC e OT foram mais citotóxicos quando comparados ao grupo controle. Estes resultados também foram demonstrados nos grupos HPG, IA, HC e OT em 5 dias. Em 7 dias todas as medicações apresentaram citotoxicidade, porém o grupo OT mostrou-se mais citotóxico (P<0,001). Com relação ao fator tempo experimental, foi observado em todos os grupos diferença significativa entre 24h e 7 dias. Conclui-se que todas as medicações apresentaram citotoxicidade em algum momento da pesquisa sendo o Otosporin® a medicação intracanal mais citotóxica e, que o tempo influenciou na citotoxicidade de todas medicações analisadas.

Orientador: Maria Luiza Silveira Mello / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T07:52:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barberio_Agnes_D.pdf: 1536569 bytes, checksum: b0e9b0bcd32d35ac2c8d2729b86b741b (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Uma das principais fontes de poluição dos ecossistemas de água doce se refere aos resíduos de efluentes industriais e urbanos. Os esgotos não tratados e excrementos humanos são considerados causa importante na deterioração da qualidade da água de países em desenvolvimento. Os poluentes ambientais têm causado uma diminuição da qualidade da água, induzindo efeitos deletérios nos organismos que estão em contato direto ou indireto com os mesmos. O efeito da exposição dos organismos a qualquer substância potencialmente tóxica, depende de sua concentração e do tempo de exposição. Um dos efeitos, freqüentemente observado pelos agentes ambientais é a alteração química do DNA. Tais modificações são prejudiciais às células, uma vez que podem afetar processos vitais, como a duplicação e a transcrição do DNA, a regulação gênica e a divisão celular, e levar ao desenvolvimento de processos patogênicos e/ou à morte celular. Nesse contexto, testes biológicos de toxicidade e genotoxicidade são indispensáveis para a avaliação das reações dos organismos vivos à poluição ambiental, como também para a identificação dos efeitos sinérgicos potenciais de vários poluentes. O rio Paraíba do Sul é um dos integrantes da bacia do rio Paraíba do Sul, de importância para a região sudeste do Brasil, pois serve ao abastecimento urbano, à irrigação, à geração de energia, e à assimilação de despejos urbanos, industriais e agrícolas nessa região. No presente trabalho foram pesquisados efeitos citotóxicos e genotóxicos em raízes de Allium cepa expostas a amostras de água do rio Paraíba do Sul, coletadas em agosto de 2005, 2006 e 2007, em pontos localizados nas cidades de Tremembé e Aparecida (SP). Foram utilizados para investigação parâmetros anátomo-morfológicos (crescimento das raízes), índices mitóticos (IM), índices de fases da divisão celular (IF), freqüência de micronúcleos (MN) e anomalias cromossômicas (AC). O comprimento das raízes de cada bulbo foi acompanhado, diariamente, ao longo de 24 a 120 h. Somente as raízes tratadas com amostras de água coletadas em 2005, na cidade de Tremembé, apresentaram um decréscimo em taxa de crescimento. Entretanto, nesse mesmo ano, houve redução no IM das raízes tratadas com água coletada em Tremembé e Aparecida. Considerando-se os dados de crescimento de raiz e especialmente os valores de IM, admite-se que em 2005 a água do rio Paraíba do Sul nas regiões de Tremembé e Aparecida tenha tido potencial citotóxico. Por outro lado, ainda nesse mesmo ano, a freqüência de MN não se mostrou alterada, o que indica que a água do rio, nos pontos mencionados, não apresentaria potencial genotóxico. Em 2007 não houve diferença no crescimento das raízes assim como os valores de IM nas raízes tratadas com água de ambos os pontos de coleta não diferiram dos valores do controle negativo. As freqüências das fases da mitose (IF) diferiram de modo significativo dos respectivos controles; as freqüências de prófase e anáfase das raízes tratadas com as águas coletadas em Tremembé e em Aparecida foram maiores e a freqüência de telófases menor do que as dos controles negativos. As freqüências de metáfase foram maiores para as raízes tratadas por água coletada em Aparecida. Foram constatados aumentos significativos de MN e de AC em raízes tratadas com água das duas regiões de coleta. A freqüência de c-mitose foi significantemente maior após tratamento com a água proveniente de Tremembé, enquanto a freqüência de pontes cromossômicas foi maior para as raízes tratadas por água coletada em Aparecida. Considerando-se a freqüência de MN, AC e IF, admite-se efeito citotóxico e genotóxico para A. cepa tratada com as amostras de água do rio Paraíba do Sul das regiões de Tremembé e Aparecida, no ano de 2007. O teste Allium mostrou ser uma ferramenta sensível na detecção de citotoxicidade e genotoxicidade promovidas pela água do rio Paraíba do Sul nos pontos nomeados. / Abstract: One of the main sources of pollution of fresh water ecosystems refers to the discharge of industrial and urban wastes. Untreated sewage is considered an important cause to the deterioration of water quality in developing countries. Environmental pollutants have caused a decrease in water quality, inducing harmful effects in organisms which are in direct or indirect contact with them. The effect of exposure of organisms to any potentially toxic substance depends on its concentration as well as exposure time. One of the effects frequently observed by environmental agents is the chemical alteration of the DNA affecting vital processes, like DNA duplication and transcription, gene regulation and cell division, and leading cells to pathologic processes and/or cell death. In this context, toxicity and genotoxicity biological tests are mandatory for the evaluation of reactions of living organisms to environmental pollution, as well as for the identification of potential synergetic effects of several pollutants. The Paraíba do Sul river is one of the components of the Paraíba do Sul basin, of importance to the southeast region of Brazil, as it serves for urban supply, irrigation, generation of energy, and assimilation of urban, industrial and agricultural discharges in the mentioned region. This work aimed at researching cytotoxic and genotoxic effects in Allium cepa roots exposed to water samples collected from the Paraíba do Sul river in August 2005, 2006 and 2007, at sites located in the cities of Tremembé and Aparecida. Anatomo-morphologic parameters (root growth), mitotic indices (MI), cell division phase indices (PI), frequency of micronuclei (MN) and chromosome anomalies (CA) were investigated. Root lengths from each bulb were evaluated daily along 24 to 120 h. Only in the roots treated with the water samples collected at Tremembé in 2005, a decrease in root growth rate was found. However, in the same year, there was reduction in the MI of the roots treated with water collected at Tremembé and Aparecida. Considering the root growth data and especially the MI values, it is assumed that the water of the Paraíba do Sul river in the regions of Tremembé and Aparecida had a cytotoxic potential in 2005. On the other hand, still in the same year, no change in MN frequency was detected, which indicates that the water at the mentioned river points had probably no genotoxic potential. In 2007, there was no difference in root growth, as the MI values for roots treated with the water collected at both sites did not differ from the values of the negative control. The frequencies of the mitosis phases differed significantly from the respective controls; the frequencies of prophases and anaphases for roots treated with water collected at Tremembé and Aparecida were higher and the frequency of telophases were lower than those of the negative controls. Frequencies of metaphases were higher for roots treated with water collected in Aparecida. A significant increase in MN and CA was found for the roots treated with water collected from both sites. The frequency of c-mitosis significantly increased after treatment with the river water collected at Tremembé, whereas the frequency of chromosome bridges increased for roots treated with water collected at Aparecida. By considering the frequencies of MN, CA and PI, a cytotoxic and genotoxic effect is supposed for A. cepa treated with the water collected from the river Paraíba do Sul at sites of Tremembé and Aparecida, in 2007. The Allium test has proved to be a sensitive tool for detecting cytotoxicity and genotoxicity effects promoted by the Paraíba do Sul water in the mentioned sites. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural