Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-10-23T15:48:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 680444 bytes, checksum: 3ad59d2a4a04bcdc7a9e97242f50382d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-23T15:48:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 680444 bytes, checksum: 3ad59d2a4a04bcdc7a9e97242f50382d (MD5) Previous issue date: 2017-07-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Alguns alimentos e determinados nutrientes têm sido associados com o sucesso reprodutivo dos animais ao longo da história. Entre estes, a melancia (Citrullus lanatus), uma fruta pertencente à família Cucurbitaceae, destaca-se por conter importantes componentes fitoquímicos , como o licopeno e a citrulina, sendo que a L-citrulina é um aminoácido isolado da melancia e tem papel na reprodução. Neste trabalho buscou-se avaliar os efeitos da suplementação com extratos de melancia e o aminoácido L-citrulina, sobre os parâmetros testiculares, através de análises morfométricas, estereológicas e hormonal, utilizando-se camundongos albinos Swiss adultos como modelo experimental. Foi feita a extração alcóolica de cada parte da melancia em separado, sendo este extrato submetido à quantificação do aminoácido L-citrulina. Utilizamos 80 camundongos Swiss adultos, com 230 dias de idade, divididos em 8 grupos. O grupo (G1) recebeu água destilada; o grupo (G2) recebeu o aminoácido L-citrulina, na dose de 30 mg/kg de peso corporal; o grupo (G3) recebeu Citrato de Sildenafila, na dose equivalete a um humano de 70kg de peso corporal; o grupo (G4) recebeu extrato da casca/entrecasca com o equivalente de 30 mg/kg de L-citrulina; o grupo (G5) recebeu extrato da casca/entrecasca com o equivalente de 60 mg/kg de L-citrulina; o grupo (G6) recebeu extrato da polpa com o equivalente de 30 mg/kg de L-citrulina; o grupo (G7) recebeu extrato da polpa com o equivalente de 60 mg/kg de L-citrulina e o grupo (G8) recebeu 0,035 g de liofilizado do extrato da semente de melancia ressuspendido em água destilada. O volume diário que cada animal recebeu foi de 0,8mL, ministrados por gavagem, em dose única, durante 39 dias. Os grupos G4, G5, G6, G7, e G8 mostraram aumento no diâmetro do epitélio do túbulo seminífero em comparação com o grupo não tratado (G1) e também com os grupos G2 e G3. Foi observado em G7 aumento da altura do epitélio, sendo que nos demais grupos tratados as alturas do epitélio foram maiores, embora sem significância em relação ao grupo não tratado. O grupo G8 destacou-se dos demais na produção do hormônio testosterona. Os extratos promoveram aumento dos parâmetros como diâmetro de túbulo e altura do epitélio, bem como dos níveis de testosterona sérica. Houve ainda aumento das áreas tubular e epitelial, evidenciando incremento da espermatogênese. / Nutrition has been associated with the reproductive success of animals throughout history. The watermelon (Citrullus lanatus) is a fruit belonging to the family Cucurbitaceae, being one of the cultivars more produced in the world and of great economic importance. Among the main phytochemical components of watermelon are lycopene and citrulline. L-citrulline is an amino acid isolated from watermelon and has a role in reproduction. The aim of this study was to evaluate the effects of supplementation with watermelon extracts on testicular parameters through morphometric, stereological and hormonal analyzes using adult Swiss albino mice as an experimental model. The alcoholic extraction of each part of the watermelon was done separately, being this extract subjected to the quantification of the amino acid L-citrulina. Were used 80 adult Swiss mice, with 230 days of age, divided into 8 groups. Group (G1) received only distilled water; The G2 group received the amino acid L- citrulline at a dose of 30 mg / kg body weight; The group (G3) received Sildenafil citrate, the dose being calculated in equivalence to a human of 70 kg body weight; Group (G4) received bark / ribs extract with the equivalent of 30 mg of the amino acid L-citrulline per kg body weight; The group (G5) received bark / ribs extract with the equivalent of 60 mg of the amino acid L-citrulline per kg of body weight; Group (G6) received pulp extract with the equivalent of 30 mg of the amino acid L-citrulline per kg of body weight; (G7) received pulp extract with the equivalent of 60 mg of the amino acid L-citrulline per kg of body weight and group (G8) received 0.035 g of lyophilized extract of the watermelon seed resuspended in distilled water. The daily volume that each animal received was 0.8 mL, given by gavage in a single dose for 39 days. Groups G4, G5, G6, G7, and G8 showed an increase in the diameter of the seminiferous tubule epithelium compared to the untreated group (G1) and also to the G2 and G3 groups. G7 increased the height of the epithelium, and in the other treated groups the epithelium heights were higher, although not statistically significant in relation to the untreated group. The watermelon extract promoted increased parameters such as tubule diameter and height of the epithelium, as well as serum testosterone levels. There was also an increase in epithelial area signaling increasing spermatogenesis.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:24:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1342_1.pdf: 3095129 bytes, checksum: a6f54dc55c3273c97f85ff5e35b19a80 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introdução: A hipertensão porta encontrada na forma hepatoesplênica da esquistossomose mansônica traz repercussões sobre a mucosa do intestino delgado e, consequentemente, sobre a função dos enterócitos, que constituem a principal fonte de produção da citrulina circulante. Esse aminoácido é utilizado como marcador de função intestinal em algumas doenças que acometem o aparelho digestivo, podendo aplicá-lo em morbidades que levam à perda da integridade do epitélio do intestino delgado como a esquistossomose. Objetivos: Avaliar os níveis de citrulina no plasma de camundongos infectados com Schistosoma mansoni na forma hepatoesplênica, assim como investigar as repercussões morfológicas sobre a mucosa do intestino delgado, correlacionando os valores da citrulina com as alterações morfométricas da mucosa intestinal (área e altura de vilosidades e perímetro da superfície) e avaliar a influência da esplenectomia sobre os níveis plasmáticos desse aminoácido. Métodos: Foram estudados 46 camundongos, albino-Swiss, adultos, fêmeas, peso médio 40g. O estudo foi analítico, de intervenção, prospectivo. Foram selecionados dois grupos: controle - 23 animais sadios - e experimental - 23 animais infectados pelo Schistosoma mansoni, com a forma hepatoesplênica. Foram coletadas amostras de sangue para dosagem da citrulina antes e após a esplenectomia e ressecado segmento de jejuno para análise histológica e morfométrica. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal do Centro de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Pernambuco. Resultados: A média de peso corporal do grupo controle foi maior em relação ao experimental com significância estatística (p=0,00062). O valor médio da citrulina no grupo experimental, antes e após a esplenectomia, foi menor que o do grupo controle (p=0,000). Após a esplenectomia houve, no grupo experimental, diminuição significante nos valores da citrulina (p=0,004). A avaliação histológica do jejuno evidenciou ovos de Schistosoma mansoni, alguns degenerados, na serosa, submucosa e lâmina própria, envoltos por granulomas formados por neutrófilos e linfócitos. Na análise morfométrica do jejuno, o grupo experimental apresentou, em média, menor altura e área das vilosidades bem como menor perímetro da superfície mucosa (p=0,003; 0,000 e 0,001, respectivamente). No grupo experimental, observou-se correlação direta entre o valor médio da citrulina após a esplenectomia e a altura e área das vilosidades (p=0,003 e 0,04, respectivamente). Não foi evidenciado correlação entre a citrulina e o perímetro da superfície da mucosa jejunal (p>0,05). Conclusão: Os níveis de citrulina estão diminuídos no plasma de camundongos esquistossomóticos e apresentaram correlação direta com as alterações das vilosidades da mucosa jejunal. Além disso, após a esplenectomia, observou-se diminuição na concentração plasmática de citrulina no grupo experimental

Made available in DSpace on 2015-02-05T21:21:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 331103.pdf: 1619905 bytes, checksum: 083bd2d2e884edeec88e8b5cddb5e931 (MD5) Previous issue date: 2014 / A intensa busca por novos biomarcadores de doenças com intuito de melhorar o diagnóstico e acompanhar a evolução da doença tem feito os pesquisadores reavaliar compostos antes ignorados, como a citrulina. Este aminoácido não proteico que faz parte do ciclo da ureia ganhou destaque nos últimos anos como marcador da função intestinal, auxiliando na rejeição ao transplante. A citrulina quando associada com outros marcadores também tem sido utilizada para acompanhar o desenvolvimento de algumas doenças, dentre elas a sepse e falência renal. Apesar de bastante avaliada, não há uma padronização metodológica para análise desse aminoácido, havendo necessidade do desenvolvimento de metodologias que sejam simples, baratas e que possam ser implementadas em exames de rotina. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver e validar metodologias por cromatografia líquida e alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC), capazes de identificar e quantificar o aminoácido citrulina em plasma. Foi possível desenvolver métodos para quantificar a citrulina por CLAE e EC sem a utilização de agentes de derivatização. Ambas as metodologias atenderam os parâmetros de precisão, com coeficiente de variação inferior a 4%, e exatidão, respectivamente, de 75 e 95%. A faixa de linearidade obtida apresentou coeficientes de determinação de 0,9905 e 0,996, e limites de detecção de 4,07 e 2,25 µg.mL-1 e quantificação de 12,34 e 6,88 µg.mL-1, respectivamente, para CLAE e EC. A quantificação da citrulina por ambas as técnicas mostrou ser possível, porém, a EC apresentou resultados mais promissores.<br> / Abstract: The intense search for new biomarkers of disease with the aim of improving diagnosis and monitor disease progression has made researchers reevaluate compounds previously ignored, such as citrulline. This non-protein amino acid that is part of the urea cycle has gained prominence in recent years as a marker of intestinal function, aiding in transplant rejection. Citrulline when associated with other markers have also been used to monitor the development of some diseases such as sepsis and renal failure. Despite being fairly analyzed there is no standardization for the analysis of this amino acid, there is need to develop methodologies that are simple, cheap and can be implemented in routine analysis. This study aimed to develop and validate methodologies for HPLC and CE can identify and quantify citrulline in plasma. It was possible to develop methods for quantifying citrulline by HPLC and CE without the use of derivatizing agents. Both methodologies met the precision data with a coefficient of variation less than 4%, the accuracy found was 75 and 95%. The range of linearity obtained exhibited correlation coefficients of 0.9905 and 0.996 and detection limits 4.07 and 2.25 µg/mL and quantification of 12.34 and 6.88 mg/mL, respectively for HPLC and CE. The quantification of the citrulline showed to be possibleby both techniques, but CE was the technique that showed more promising results.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-09-01T12:21:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSETAÇAO_DEPOSITO.pdf: 1662534 bytes, checksum: 6bdb1ae293f1a65771c195438f64d3f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T12:21:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSETAÇAO_DEPOSITO.pdf: 1662534 bytes, checksum: 6bdb1ae293f1a65771c195438f64d3f0 (MD5) Previous issue date: 2016-03-09 / CAPEs / A artrite reumatóide (AR) é uma doença crônico-degenerativa, sistêmica, auto-imune. Atualmente, o anticorpo antipeptídeo citrulinado cíclico (Anti-PCC) é considerado o marcador mais importante para o diagnóstico preditivo e prognóstico da AR. Neste trabalho, desenvolveu-se um imunossensor eletroquímico para detecção do Anti-PCC, a partir da modificação da superfície de um eletrodo de carbono vítreo com nanocompósito de óxido de grafeno reduzido-polissulfona (Gor-PSF) o qual apresenta boas características de aumento da área eletrocatalítica e imobilização de moléculas biológicas. Foram realizados capturas de imagens micrográficas por microscopia eletrônica de varredura da superfície do eletrodo de trabalho antes e após sua modificação, pelas quais foi possível comprovar uma superfície lisa não modificada sem estruturas adsorvidas após limpeza física, e que a superfície modificada com Gor-PSF apresentou um recobrimento ideal de toda a superfície com a presença de uma estrutura esponjosa comprovando a modificação da área de trabalho. Para captura do Anti-PCC, antígenos citrulina (CCP-Ag) foram imobilizados sobre a superfície eletródica do nanocompósito por provável ligação covalente entre os grupos amino e carboxilícos presentes no CCP-Ag e no óxido de grafeno reduzido, respectivamente. A técnica de voltametria de onda quadrada (VOQ) foi empregada para detecção do Anti-PCC, produzindo um imunossensor livre de marcação. Observou-se que o GOR-PSF foi capaz de aumentar a corrente de pico anódico (Ipa) 2,2 vezes mais, comparado com o controle (sem GOR-PSF) demonstrando que o filme proporcionou melhor capacidade eletrocatalítica, sendo também estável (coeficiente de variação da corrente < 1 %) avaliado por submeter o eletrodo a 20 ciclos consecutivos de voltametria cíclica. O imunossensor proposto apresentou uma boa linearidade com r=0,983 (p<0.003; n = 5) e limite de detecção de 0,004 ng/mL de Anti-PCC. A plataforma sensora demonstrou propriedades desejáveis de estabilidade, sensibilidade e reprodutibilidade na detecção de Anti-PCC com perspectivas de desenvolvimento de dispositivos “point-of-care”. / Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic degenerative disease, systemic, autoimmune. Currently, the cyclic citrullinated peptide (anti-CCP) is considered the most important predictive marker for the diagnosis and prognosis of RA. In this work, we developed an electrochemical immunosensor for the detection of anti-CCP, from the surface modification of a glassy carbon electrode with nanocomposite reduced-polysulfone graphene oxide (GOr-PSU) which has good rise characteristics of electrocatalytic area and immobilization of biological molecules. of micrographic images catches were performed by scanning electron microscopy of the surface of the working electrode before and after modification, by which it was possible to establish a smooth unmodified without adsorbed structures after physical cleaning, and that the modified surface with GOr-PSU presented an ideal coating the entire surface with the presence of a spongy structure confirming the modification of the work area. For capture of anti-CCP, citrulline antigens (Ag-CCP) were immobilized on the electrode surface of the nanocomposite probably due to covalent bond between the amino and carboxylic groups present in the CCP-Ag and the reduced graphene oxide, respectively. Square wave voltammetry technique (VOQ) was used for detection of anti-CCP producing a marking-free immunosensor. It was observed that the GOR-PSU was capable of increasing the anodic peak current (IPA) 2.2 times as compared with the control (without GOr-PSU) demonstrating that the electrocatalytic film provided better capacity also being stable (coefficient the variation of the current <1%) evaluated by subjecting the electrode 20 consecutive cycles of cyclic voltammetry. The proposed immunosensor exhibited good linearity with r = 0.983 (p <0.003; n = 5) and a detection limit of 0.004 ng / ml anti-CCP. The sensing platform demonstrated desirable properties of stability, sensitivity and reproducibility in the Anti-CCP detection with prospects of development of devices "point-of-care."

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-02-13T14:07:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) tese completa corrigida_junho (2016).pdf: 2219391 bytes, checksum: 7ac2338dbd07d9a53a3344311f51b5ce (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T14:07:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) tese completa corrigida_junho (2016).pdf: 2219391 bytes, checksum: 7ac2338dbd07d9a53a3344311f51b5ce (MD5) Previous issue date: 2014-05-26 / A artrite reumatóide (AR), é uma doença crônica inflamatória, em cuja etiologia estão envolvidos fatores genéticos, ambientais e infecções. Dentre as infecções se destacam as virais cujas proteínas modificam a função dos sinoviócitos como ocorre com o Parvovírus B19 (PVB19). Estudos tem mostrado a participação das citocinas IL-6 e L-10 na fisiopatogenia da AR. O diagnóstico da AR se baseia em critérios clínicos, radiológicos e laboratoriais.Dentre os auto- anticorpos, o fator reumatóide (FR) apresenta alta sensibilidade e baixa especificidade. Por lado, o anticorpo antipeptídeo citrulinado cíclico (ACCP) é um importante marcador para o diagnóstico e tem valor preditivo de um pior prognóstico. Sua detecção pelo ELISA, têm mostrado excelente desempenho diagnóstico, embora seja oneroso e mais demorado. Visando diagnósticos mais rápidos e práticos, os biossensores são ideais para testes tipo “point-of-care” devido à sua portabilidade. Os objetivos desta tese foram: avaliar a correlação dos niveis séricos de IL-10, IL-6 e a frequência do anti-IgG PVB19 com atividade clínica da AR mediante os índices compostos de atividade de doença (ICADs).em diferentes tratamentos e desenvolver um imunossensor eletroquímico label free para ACCP.Foi desenvolvido um estudo transversal para estimar a frequencia de anti-IgG PVB19 e determinar os níveis séricos da IL6 e IL10 pelo método ELISA.O imunossensor constituído por eletrodos screen printed de ouro,foi baseado no uso da SAM formada pela deposição do àcido tioglicólico.Oa antígenos foram imobilizadosde modo orientado via grupos carboxílicos do TGA. Os resultados mostraram uma frequencia de 73% (60/83) de IgG anti-PVB19 e uma correlação significativa entre os níveis de IL-6 e as medidas de atividade de AR nos pacientes com maior atividade inflamatória pelo EULAR. O maior contigente de pacientes IgG anti-PVB19 positivos estava com moderada e alta atividade pelo EULAR.O imunossensor eletroquímico apresentou uma resposta linear na curva de calibração, bom coeficiente de correlação e limite de detecção menor do que o método ELISA. / Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic inflammatory disease, whose etiology is influenced by genetics, the environment, and infections. Among the various types of infections, the ones that stand out are the viral infections whose proteins alter the function of synoviocytes as occurs with Parvovirus B19 (PVB19). Studies have shown the involvement of the IL-6 and IL-10 cytokines in the physiopathogenesis of RA. Diagnosis of RA is based on clinical, radiological, and laboratory criteria. In the autoantibodies, the rheumatoid factor (RF) has high sensitivity and low specificity. The Anti-cyclic Citrullinated Peptide (anti-CCP) is an important marker for the diagnosis and as a predictive value of a worst-case prognosis.Its detection by ELISA has shown excellent diagnostic performance, but it is expensive and takes longer.Aiming for faster and more practical diagnostics, biosensors are ideal for point-of-care testing, due to their portability. The objectives of this thesis were to evaluate the correlation of the serum levels of IL-10 and IL-6and the frequency of anti-IgG PVB19,with the clinical activity of RA, via composite indices of disease activity, under different treatments, in order to develop a labelfree electrochemical immunosensor for anti-CCP. A cross-sectional study was developed to estimate the frequency of anti-IgGPVB19and to determine the serum levels of IL-6 and IL-10 by the ELISA method. The immunosensor consisting of screen-printed gold electrodes was based on the use of the self-assembled monolayer (sam) formed by deposition of thioglycolic acid. The antigens were immobilized, driven via carboxylic groups of the TGA. The results showed a frequency of 73% (60/83) of IgG anti-PVB19 and a significant correlation between the levels of IL-6 and the activity measures of AR in the patients with higher inflammatory activity according to the EULAR. Most of the IgG anti-PVB19 positive patients had moderate and high activity according to the EULAR. The electrochemical immunosensor showed a linear response in the calibration curve, a good correlation coefficient, and a detection limit lower than the ELISA method.

La cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) es sin dudas, una técnica madura, ampliamente usada en laboratorios analíticos, especialmente en el modo de fase inversa. Existe, no obstante, una demanda creciente de métodos rápidos de separación y cuantificación de analitos mediante HPLC, especialmente en laboratorios que deben implementar rutinas de análisis. La disminución en los tiempos de análisis puede lograrse usando columnas más cortas y trabajando a altos caudales, a expensas de la capacidad resolutiva del sistema. Para mantener una capacidad de resolución dada se reduce el tamaño de las partículas de relleno, lo cual limita la longitud de la columna y la velocidad lineal que es posible usar para mantener una caída de presión soportable por un sistema de bomba típico de un equipo HPLC. Estas limitaciones han dado lugar a numerosas investigaciones que permitieron mejoras instrumentales y el desarrollo de nuevos materiales. Entre las mejoras instrumentales se destaca la aparición de una nueva generación de equipos que poseen bombas capaces de proveer fase móvil a caudales razonables y a presiones de más de 1000 atm. Estos instrumentos, que se conocen como U-HPLC o UPLC por “ultra-high pressure liquid chromatography” poseen un costo sumamente elevado, convirtiéndose en poco accesibles en muchos laboratorios. Los estudios y desarrollos de diferentes materiales han dado lugar a las columnas monolíticas en las que una sola pieza altamente porosa (monolito) de material silíceo o polimérico constituye la matriz de la fase estacionaria en reemplazo de las típicas partículas porosas empleadas para desarrollar fases estacionarias. La estructura de este monolito posee una porosidad superior al 80% (en comparación al 60-65% de porosidad total de las columnas basadas en partículas porosas), lo que implica mayores permeabilidades del lecho y, en consecuencia, que se pueda aumentar la velocidad de fase móvil sin que se produzcan grandes caídas de presión. Por otra parte, su estructura macroporosa permite el flujo convectivo de solvente, por lo que el transporte de material hasta la superficie estacionaria resulta más eficiente que el mecanismo difusivo, produciendo menores resistencias a la transferencia de material, esto es, la pérdida de eficiencia a altos caudales no es tan significativa. Otro tipo de material particulado recientemente desarrollado consiste en esferas de sílice compacta (no porosa) de menos de 2 micras cubiertas de una superficie porosa de un espesor de aproximadamente 0,5 micras. Las partículas poseen un diámetro total de algo más de 2,5 micrones. Este material constituye el relleno de la columna cromatográfica, teniendo la ventaja de que la resistencia que ejerce a la aplicación de caudales normales es mucho menor que la de partículas menores a 2 micras. Por otra parte, el hecho de que el intercambio entre las fases ocurra sólo en la “cáscara” porosa, disminuye sensiblemente la resistencia a la transferencia de materia, por lo que las eficiencias serían similares a las de partículas de tamaños inferiores a 2 micrones. Una estrategia diferente en relación con la posibilidad de reducir tiempos de análisis empleando instrumentos convencionales consiste en emplear partículas de sílice de diámetro reducido y simultáneamente aumentar la temperatura de la columna. La consecuencia hidrodinámica es una disminución en la viscosidad del eluyente, con la consecuente disminución en la caída de presión desarrollada, y el aumento en los coeficientes de difusión de los analitos, lo que implica mejoras en la transferencia de materia en fase móvil. Esta estrategia ha sido estudiada en relación con columnas rellenas con material particulado y también con columnas monolíticas a base de sílice. Un objetivo de este trabajo ha sido el de avanzar hacia el desarrollo de metodologías cromatográficas que tiendan a la miniaturización, esto es, métodos de cromatografía de líquidos en los que se reduzcan significativamente los volúmenes de solventes y de muestra a inyectar, y al aumento de la velocidad de análisis, esto es, a reducir tiempos de análisis por muestra, pero empleando instrumentos de cromatografía convencionales con mínimas modificaciones. Entendemos que la disponibilidad de instrumentos de UPLC para lograr estos objetivos no es frecuente en la mayoría de los laboratorios, por lo que es nuestro interés la búsqueda de alternativas más accesibles al desarrollo de métodos rápidos y en escala de micro-LC. En relación con la aplicación de estas metodologías a muestras reales se estudió la separación y análisis de aminoácidos derivatizados con cloruro de FMOC (cloroformiato de 9-fluorenilmetilo), con el fin de tener un método robusto y de bajo costo de análisis de los aminoácidos citrulina, arginina, prolina, glutamina, ácido glutámico y ornitina en fluido plasmático. La posible transferencia del método a laboratorios de rutina implica que los métodos a desarrollar sean robustos y generales, esto es, que el derivado pueda detectarse por uv-visible y por fluorescencia, que el proceso pueda automatizarse, y que se empleen reactivos fácilmente manipulables. Importancia de medir la concentración de citrulina en plasma. En el intestino delgado se produce la absorción de nutrientes y las transformaciones metabólicas en las que el epitelio intestinal cumple un papel fundamental. Entre ellas ocurre la transformación de glutamina en citrulina, la cual es adsorbida hacia el plasma. Los niveles de citrulina circulantes dependen principalmente de la capacidad del intestino en producirla a partir de sus precursores, por lo que se ha propuesto emplear a esta sustancia como un indicador de la funcionalidad enterocitaria. Distintas condiciones que alteren la fisiología de la mucosa intestinal serían potencialmente reflejadas en alteraciones en los niveles de citrulina plasmática. Se ha propuesto en la literatura evaluar los niveles de citrulina plasmática como marcador específico de disfunción intestinal (al igual que se usa creatinina como marcador de disfunción renal o las enzimas TGO/TGP para anomalías a nivel hepático). Sin embargo, hasta el momento no existe acuerdo al respecto dado los resultados informados del dosaje de citrulina en distintas patologías en las que se compromete el tejido intestinal. La determinación de citrulina en plasma desproteinizado se puede realizar por CEC, CE, mediante HPLC, empleando columnas de fase inversa y derivatización pre- o post-columna del grupo amino para su detección. Muchos de estos métodos, poseen procedimientos experimentales complejos. Como reactivos derivatizantes se pueden emplear diversos compuestos, siendo el o-ftaldehído en combinación con 2-mercaptoetanol el descripto con mayor frecuencia. Si bien esta reacción de derivatización es rápida, los derivados formados no son estables, lo que convierte al método en poco robusto. En este trabajo se propuso estudiar la derivatización con FMOC-Cl. El uso de este agente derivatizante permite llevar a cabo reacciones rápidas de condensación con el grupo amino para dar el correspondiente carbamato, a temperatura ambiente; y los derivados obtenidos son estables. Por fluorescencia pueden detectarse niveles de analito de fmol y también, aunque con mayores límites de detección, pueden cuantificarse por absorción UV.