Orientador: Eduardo Dias de Andrade / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-16T01:45:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Junqueira_SolangeMariaDieterichRabelo_D.pdf: 1791510 bytes, checksum: b127d431200713a1ccca1ec01cfb01c3 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos da betametasona, empregada na forma de duas preparações farmacêuticas distintas, sobre alguns valores de auto-hemostasia. Para tanto,foram utilizados 30 ratos Wistar,machos,divididos em 3 grupos experimentais,tratados (via 1M) com solução de NaCI a 0,9% (Grupo Controle), fosfato dissódico de betametasona ou com a associação deste mesmo sal ao acetato de betametasona, que possibilita uma ação farmacológica de maior duração do glucocorticóide. Nos tempos de .1, 24, 48 e 168 horas após o tratamento, foram obtidas amostras de sangue e avaliado o tempo de coagulação sangüínea e o número de plaquetas circulantes. Os resultados obtidos demonstraram que o fosfato dissódico de betametasona, na dose única de 0,1mg/kg, não alterou os parâmetros de auto-hemostasia estudados. Quando a mesma dose da preparação farmacêutica de depósito de Betametasona foi empregada, observou-se apenas um Discreto aumento do Tempo de coagulação e uma pequena diminuição da contagem respectivamente nos tempos de 168 e 24 horas. de plaquetas , Apesar destas alterações serem estatisticamente significantes (p < 0,05), os valores encontrados situaram-se dentro das faixas de normalidade biológica do tempo de coagulação sangüínea e contagem de plaquetas, em ratos / Abstract: The aim of this paper was to study the effeets of two distinet pharmaceutieal preparations of betamethasone, values of auto-hemostasis. To do so, 30 male Wistar rats were used, divided in 3 upon the experimental groups, dissodium phosphate betametasone acetate. Treated with normal saline, betametasone or with this salt associated with After 1, 24, 48 and 168 hours of these distinct treatments, blood samples were obtained and avaliated the clotting time and platelet count.The results showed no interference of the betamethasone Dissodium phosphate (0,1 mg / kg) , In the values of the auto-hemostasis parameters studied. In the animals treated with the depot preparati ns of betamethasone, there was a discret increase of the c clotting time and a little decrease of the platelet count, in the times of 168 and 24 hours, respectively. In spite of this alterations are statisticaly significant (p < 0,05), these values are situated in biological normal ranges for the clotting time and platelet count, in rats / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Ciências

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MONTE, M. F. L. Perfil clínico e epidemiológico de pacientes hemofílicos atendidos no centro de hematologia e hemoterapia do Piauí-HEMOPI. 2016. 68 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-06-09T12:52:01Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_mflmonte.pdf: 1685122 bytes, checksum: 0c43d2f5838c00399b2adbd040942824 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-06-09T12:52:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_mflmonte.pdf: 1685122 bytes, checksum: 0c43d2f5838c00399b2adbd040942824 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-09T12:52:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_mflmonte.pdf: 1685122 bytes, checksum: 0c43d2f5838c00399b2adbd040942824 (MD5) Previous issue date: 2016-01-27 / Hemophilia A or B is a recessive disease linked to the X chromosome that results from deficiency of blood coagulation factors VIII or IX, respectively, resulting of acquired or hereditary factors. This disease is characterized by causing spontaneous mucocutaneous bleeding, as well as the joints, we muscles, system gastrointestinal and central nervous system, leading to high morbidity and mortality. Like other chronic diseases, the treatment of hemophilia is costly, especially when patients are treated prophylactically. Because it is a disease whose treatment is very expensive, in addition to adverse effects and related complications, especially when patients develop inhibitors against factors which they are administered. In view of its many complications and the clinical significance of the disease, tis thought to classify hemophiliacs about the disease type (A or B) get social demographics of this population in terms of race, age, sex and region of origin. For this, the medical records of 180 patients treated at Hemopi were analyzed, the period from January 2011 to July 2014. The results of this study show that most of the patients studied were mulatto (42%), distributed in hemophilia A (161) and B (19). The degree of severity prevalent in each group were mild (53%) and severe (53%) for hemophilia A and B, respectively. The patients are mostly resided of the Mid-North macro-region of Piauí State (56%). Among the studied hemophiliacs, only 17 had some type of joint involvement, with blood type O + as found (29%). The positivity for the inhibitor against factor VIII (23 patients) showed up mostly in severe hemophilia A. The viral coinfection appeared in 3 of the 13 positive individuals’ viral infections, namely HBV and HCV (15%) and HCV and HIV (8%). Thus, it is concluded that hemophiliacs treated at HEMOPI system are characterized (in dominance by category) by individuals of mixed ethnicity, pardos blood type O +, with the disease classification mild hemophilia A, aged between 20 and 30 years, living mostly in the macro-region Mid-North State. / A hemofilia A ou B é uma doença recessiva ligada ao cromossomo X que resulta da deficiência dos fatores de coagulação de sangue VIII ou IX, respectivamente, podendo decorrer de fatores adquiridos ou hereditários. Esta doença se caracteriza por provocar sangramentos mucocutâneos espontâneos, bem como nas articulações, os músculos, sistema gastrintestinal e no sistema nervoso central, levando a grande morbidade e mortalidade. Assim como outras doenças de caráter crônico, o tratamento da hemofilia é de alto custo, especialmente quando os pacientes são tratados de forma profilática. Por tratar-se de uma doença com tratamento muito dispendioso, além dos efeitos adversos e complicações relacionadas, principalmente quando os pacientes desenvolvem inibidores contra os fatores que lhes são administrados. Em vista das suas inúmeras complicações e pela importância clínica da doença, tem-se como objetivo classificar os hemofílicos quanto ao tipo da doença (A ou B), obter dados sócio demográficos desta população quanto à raça, idade, sexo e região de origem. Para isso, foram analisados os prontuários de 180 pacientes atendidos no Hemopi, no período de janeiro de 2011 a julho de 2014. Os resultados deste estudo mostram que a maioria dos pacientes estudados eram de cor parda (42%), distribuídos em hemofílicos A (161) e B (19). O grau de severidade prevalente em cada grupo foi de leve (53%) e grave (53%) para hemofilia A e B, respectivamente. A maioria residia na macrorregião Meio-Norte do Estado do Piauí (56%). Dentre os hemofílicos estudados, apenas 17 apresentaram algum tipo de comprometimento articular, sendo o tipo sanguíneo O+ o mais encontrado (29%). A positividade para o inibidor contra o fator VIII (23 indivíduos) apresentou-se em sua maioria, nos hemofílicos A graves. A co-infecção viral apresentou-se em 3 dos 13 indivíduos positivos para infecções virais, sendo eles HBV e HCV (15%) e HCV e HIV (8%). Desta forma, conclui-se que os hemofílicos atendidos no sistema ambulatorial do HEMOPI se caracterizam (em predomínio por categoria) por indivíduos de cor parda, tipo sanguíneo O+, com classificação da doença hemofilia A leve e idade entre 20 e 30 anos, residentes em sua maioria na macro-região Meio-Norte do Estado.

A deficiência parcial ou total ou defeitos funcionais no fator VIII (FVIII) resultam na doença hereditária hemofilia A (HA), geralmente causada por mutações heterogêneas no gene do FVIII (F8). Embora mais de 1200 mutações no gene do F8 tenham sido descritas, dados sobre o espectro dessas mutações na população do Sul do Brasil são insuficientes e o estudo das mesmas possibilita uma melhor compreensão da genética molecular da doença nessa população. Além disso, ao estimar o efeito que uma mutação exerce em uma proteína, obtem-se subsídios para uma melhor avaliação de sua função, bem como das interações entre ela e estruturas afins. Os objetivos desse estudo foram identificar as mutações gênicas em pacientes com HA leve ou moderada do Rio Grande do Sul e posterior análise do papel dessas mutações na determinação da doença e presença de inibidores. Um total de 76 pacientes não-relacionados do sexo masculino, com HA leve (n=55) ou moderada (n=21) foram incluídos no estudo. Todos os 26 éxons do F8, as regiões 5’não-traduzida e 3’não-traduzida, as junções éxon-intron e a região promotora foram amplificadas por PCR e analisadas por sequenciamento direto. Foram examinados também 100 cromossomos normais de doadores de banco de sangue para excluir mudanças polimórficas como causadoras da doença. Todas as sequências do F8 dos pacientes foram comparadas com a sequência referência (NCBI: NG_005114.1), utilizando o software CodonCode Aligner implementado no Mega 5.04. As mutações encontradas foram comparadas com as do banco de dados The Haemophilia A Mutation, Structure, Test and Resource Site (HAMSTeRS) e a conservação dos aminoácidos mutados também foi verificada. A detecção de mutações em sítios de processamento foi realizada pelo programa de predição de sítios de processamento (Berkeley Drosophila Genome Project) e para a análise do efeito das mutações de sentido trocado foram utilizados três preditores: PolyPhen-2 (Polymorphism Phenotyping), Site Direct Mutator (SDM) e Have yOur Protein Explained (HOPE). A localização das mutações na estrutura do FVIII foi realizada no programa PyMol e para a visualização da superfície eletrostática dos domínios A foi utilizado o programa GRASP2. Quando nenhuma mutação foi encontrada, foi executada a análise de Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA). Quanto às mutações recorrentes, a análise de haplótipos foi feita a fim de investigar se elas surgiram nessa população através de vários eventos mutacionais distintos ou através de efeito fundador. Foi identificada a mutação causadora da doença em 69 (91%) pacientes, que apresentaram 33 mutações diferentes: 27 de sentido trocado, uma pequena deleção, duas pequenas duplicações e três mudanças em sítios de processamento. Sete mutações de sentido trocado e duas em sítios de processamento não tinham sido previamente descritas no HAMSTeRS e não foram identificadas na literatura. Todas as últimas foram consideradas patogênicas; a mutação p.Val266Met, muito próxima a um sítio de ligação ao cobre, pode diminuir a interação entre os domínios A2 e A3 do FVIII; a mutação p. Met567Lys pode afetar um sítio de ligação ao fator IX; as mutações p.Arg1764Gly, p.Tyr1786Phe e p.Tyr1792Cys podem afetar a ligação ao fator IX e ao Fator von Willebrand. Nove mutações recorrentes foram encontradas, uma delas nunca descrita anteriormente (p.Tyr1786Phe). A análise de haplótipos sugere que essa mutação tenha se originado na população brasileira como um único evento em um ancestral comum. Um dos indivíduos desenvolveu inibidores. Foi feita, também, uma avaliação geral sobre o papel das mutações no F8 na formação de inibidores em pacientes graves estudados em investigação anterior, verificando-se associações significativas tanto no que se refere aos domínios em que as mutações ocorreram, quanto aos tipos de mutações encontrados. Os dados desses estudos são úteis no diagnóstico e prevenção precoce de inibidores na hemofilia A, bem como na detecção de mulheres heterozigotas na população do sul do Brasil. Espera-se oferecer um melhor manejo aos pacientes, fornecer aconselhamento genético e suporte psicológico/emocional para as famílias dos afetados. / Factor VIII (FVIII) partial or total deficiency, or functional defects, result in the hereditary disease haemophilia A (HA), generally caused by heterogeneous mutations in the FVIII gene (F8). Although more than 1200 F8 mutations have been reported, data regarding these mutations are insufficient in southern Brazilian populations and their study provides a better understanding of the molecular genetics of the disease in this population. Furthermore, after evaluating the effect that a mutation has on a protein, we can do a better assessment of its function, as well as of the interactions between the mutated protein and related structures. The objectives of this study were to identify gene mutations in patients with mild and moderate HA living in the southern Brazilian state of Rio Grande do Sul and to analyze the role of these mutations in disease determination and presence of inhibitors. A total of 76 unrelated male patients with mild (n = 55) or moderate (n = 21) HA were included in the study. All F8 26 exons, the 5 'UTR and 3' UTR, intron-exon junctions and the promoter region were amplified by PCR and analyzed by direct sequencing. We also examined 100 blood bank donors’ normal chromosomes to exlude polymorphic changes as causal to the disease. F8 patients’ sequences were compared with the reference sequence (NCBI: NG_005114.1) using the CodonCode Aligner software implemented in Mega 5.04. The mutations found were compared with those present in The Haemophilia A Mutation, Structure, Test and Resource Site (HAMSTeRS) database and the conservation of the mutated amino acids was also verified. Splice site mutations were detected using the Berkeley Drosophila Genome Project splice site prediction program, and for the analysis of missense mutation effects three predictors were used: PolyPhen-2 (Polymorphism Phenotyping), Site Direct Mutator (SDM) and Have yOur Protein Explained (HOPE). The mutations were localized in the FVIII structure by PyMOL and the FVIII A domains eletrostatic surface was visualized using GRASP2. When no mutation was found, the Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) analysis was performed. As for the recurrent mutations, haplotype analyses were conducted to investigate whether they emerged in this population through several distinct mutational events or from a founder effect. We identified the disease causing mutation in 69 (91%) patients, who showed 33 different mutations: 27 missense, one small deletion, two small duplications and three splice site changes. Seven missense and two splice site mutations had not been previously reported in HAMSTeRS and were not identified in any literature search. The latter were all considered pathogenic; p.Val266Met is located near a copper binding site and may decrease the interaction between the FVIII A2 and A3 domains; p. Met567Lys can affect a factor IX binding site; p.Arg1764Gly, p.Tyr1786Phe and p.Tyr1792Cys can affect factor IX and von Willebrand Factor binding sites. Nine recurrent mutations were found, one of them (p.Tyr1786Phe) never described before. Haplotype analysis suggests that this mutation originated in the Brazilian population as a single event in a common ancestor. One of the subjects developed inhibitors. A general evaluation was also made about the role of F8 mutations in the development of inhibitors in severe patients studied in a previous investigation, and significant associations were found both in relation to the domains where the mutations occurred, as well as in the mutations found. The data of these studies will be useful in the diagnosis and early prevention of inhibitors in haemophilia A, and in the detection of female carriers in the southern Brazilian population. We hope to offer a better monitoring to the patients, to give genetic counseling, and psychological/emotional support to the families of affected persons.

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A deficiência parcial ou total ou defeitos funcionais no fator VIII (FVIII) resultam na doença hereditária hemofilia A (HA), geralmente causada por mutações heterogêneas no gene do FVIII (F8). Embora mais de 1200 mutações no gene do F8 tenham sido descritas, dados sobre o espectro dessas mutações na população do Sul do Brasil são insuficientes e o estudo das mesmas possibilita uma melhor compreensão da genética molecular da doença nessa população. Além disso, ao estimar o efeito que uma mutação exerce em uma proteína, obtem-se subsídios para uma melhor avaliação de sua função, bem como das interações entre ela e estruturas afins. Os objetivos desse estudo foram identificar as mutações gênicas em pacientes com HA leve ou moderada do Rio Grande do Sul e posterior análise do papel dessas mutações na determinação da doença e presença de inibidores. Um total de 76 pacientes não-relacionados do sexo masculino, com HA leve (n=55) ou moderada (n=21) foram incluídos no estudo. Todos os 26 éxons do F8, as regiões 5’não-traduzida e 3’não-traduzida, as junções éxon-intron e a região promotora foram amplificadas por PCR e analisadas por sequenciamento direto. Foram examinados também 100 cromossomos normais de doadores de banco de sangue para excluir mudanças polimórficas como causadoras da doença. Todas as sequências do F8 dos pacientes foram comparadas com a sequência referência (NCBI: NG_005114.1), utilizando o software CodonCode Aligner implementado no Mega 5.04. As mutações encontradas foram comparadas com as do banco de dados The Haemophilia A Mutation, Structure, Test and Resource Site (HAMSTeRS) e a conservação dos aminoácidos mutados também foi verificada. A detecção de mutações em sítios de processamento foi realizada pelo programa de predição de sítios de processamento (Berkeley Drosophila Genome Project) e para a análise do efeito das mutações de sentido trocado foram utilizados três preditores: PolyPhen-2 (Polymorphism Phenotyping), Site Direct Mutator (SDM) e Have yOur Protein Explained (HOPE). A localização das mutações na estrutura do FVIII foi realizada no programa PyMol e para a visualização da superfície eletrostática dos domínios A foi utilizado o programa GRASP2. Quando nenhuma mutação foi encontrada, foi executada a análise de Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA). Quanto às mutações recorrentes, a análise de haplótipos foi feita a fim de investigar se elas surgiram nessa população através de vários eventos mutacionais distintos ou através de efeito fundador. Foi identificada a mutação causadora da doença em 69 (91%) pacientes, que apresentaram 33 mutações diferentes: 27 de sentido trocado, uma pequena deleção, duas pequenas duplicações e três mudanças em sítios de processamento. Sete mutações de sentido trocado e duas em sítios de processamento não tinham sido previamente descritas no HAMSTeRS e não foram identificadas na literatura. Todas as últimas foram consideradas patogênicas; a mutação p.Val266Met, muito próxima a um sítio de ligação ao cobre, pode diminuir a interação entre os domínios A2 e A3 do FVIII; a mutação p. Met567Lys pode afetar um sítio de ligação ao fator IX; as mutações p.Arg1764Gly, p.Tyr1786Phe e p.Tyr1792Cys podem afetar a ligação ao fator IX e ao Fator von Willebrand. Nove mutações recorrentes foram encontradas, uma delas nunca descrita anteriormente (p.Tyr1786Phe). A análise de haplótipos sugere que essa mutação tenha se originado na população brasileira como um único evento em um ancestral comum. Um dos indivíduos desenvolveu inibidores. Foi feita, também, uma avaliação geral sobre o papel das mutações no F8 na formação de inibidores em pacientes graves estudados em investigação anterior, verificando-se associações significativas tanto no que se refere aos domínios em que as mutações ocorreram, quanto aos tipos de mutações encontrados. Os dados desses estudos são úteis no diagnóstico e prevenção precoce de inibidores na hemofilia A, bem como na detecção de mulheres heterozigotas na população do sul do Brasil. Espera-se oferecer um melhor manejo aos pacientes, fornecer aconselhamento genético e suporte psicológico/emocional para as famílias dos afetados. / Factor VIII (FVIII) partial or total deficiency, or functional defects, result in the hereditary disease haemophilia A (HA), generally caused by heterogeneous mutations in the FVIII gene (F8). Although more than 1200 F8 mutations have been reported, data regarding these mutations are insufficient in southern Brazilian populations and their study provides a better understanding of the molecular genetics of the disease in this population. Furthermore, after evaluating the effect that a mutation has on a protein, we can do a better assessment of its function, as well as of the interactions between the mutated protein and related structures. The objectives of this study were to identify gene mutations in patients with mild and moderate HA living in the southern Brazilian state of Rio Grande do Sul and to analyze the role of these mutations in disease determination and presence of inhibitors. A total of 76 unrelated male patients with mild (n = 55) or moderate (n = 21) HA were included in the study. All F8 26 exons, the 5 'UTR and 3' UTR, intron-exon junctions and the promoter region were amplified by PCR and analyzed by direct sequencing. We also examined 100 blood bank donors’ normal chromosomes to exlude polymorphic changes as causal to the disease. F8 patients’ sequences were compared with the reference sequence (NCBI: NG_005114.1) using the CodonCode Aligner software implemented in Mega 5.04. The mutations found were compared with those present in The Haemophilia A Mutation, Structure, Test and Resource Site (HAMSTeRS) database and the conservation of the mutated amino acids was also verified. Splice site mutations were detected using the Berkeley Drosophila Genome Project splice site prediction program, and for the analysis of missense mutation effects three predictors were used: PolyPhen-2 (Polymorphism Phenotyping), Site Direct Mutator (SDM) and Have yOur Protein Explained (HOPE). The mutations were localized in the FVIII structure by PyMOL and the FVIII A domains eletrostatic surface was visualized using GRASP2. When no mutation was found, the Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) analysis was performed. As for the recurrent mutations, haplotype analyses were conducted to investigate whether they emerged in this population through several distinct mutational events or from a founder effect. We identified the disease causing mutation in 69 (91%) patients, who showed 33 different mutations: 27 missense, one small deletion, two small duplications and three splice site changes. Seven missense and two splice site mutations had not been previously reported in HAMSTeRS and were not identified in any literature search. The latter were all considered pathogenic; p.Val266Met is located near a copper binding site and may decrease the interaction between the FVIII A2 and A3 domains; p. Met567Lys can affect a factor IX binding site; p.Arg1764Gly, p.Tyr1786Phe and p.Tyr1792Cys can affect factor IX and von Willebrand Factor binding sites. Nine recurrent mutations were found, one of them (p.Tyr1786Phe) never described before. Haplotype analysis suggests that this mutation originated in the Brazilian population as a single event in a common ancestor. One of the subjects developed inhibitors. A general evaluation was also made about the role of F8 mutations in the development of inhibitors in severe patients studied in a previous investigation, and significant associations were found both in relation to the domains where the mutations occurred, as well as in the mutations found. The data of these studies will be useful in the diagnosis and early prevention of inhibitors in haemophilia A, and in the detection of female carriers in the southern Brazilian population. We hope to offer a better monitoring to the patients, to give genetic counseling, and psychological/emotional support to the families of affected persons.

Resumo não disponível

A deficiência parcial ou total ou defeitos funcionais no fator VIII (FVIII) resultam na doença hereditária hemofilia A (HA), geralmente causada por mutações heterogêneas no gene do FVIII (F8). Embora mais de 1200 mutações no gene do F8 tenham sido descritas, dados sobre o espectro dessas mutações na população do Sul do Brasil são insuficientes e o estudo das mesmas possibilita uma melhor compreensão da genética molecular da doença nessa população. Além disso, ao estimar o efeito que uma mutação exerce em uma proteína, obtem-se subsídios para uma melhor avaliação de sua função, bem como das interações entre ela e estruturas afins. Os objetivos desse estudo foram identificar as mutações gênicas em pacientes com HA leve ou moderada do Rio Grande do Sul e posterior análise do papel dessas mutações na determinação da doença e presença de inibidores. Um total de 76 pacientes não-relacionados do sexo masculino, com HA leve (n=55) ou moderada (n=21) foram incluídos no estudo. Todos os 26 éxons do F8, as regiões 5’não-traduzida e 3’não-traduzida, as junções éxon-intron e a região promotora foram amplificadas por PCR e analisadas por sequenciamento direto. Foram examinados também 100 cromossomos normais de doadores de banco de sangue para excluir mudanças polimórficas como causadoras da doença. Todas as sequências do F8 dos pacientes foram comparadas com a sequência referência (NCBI: NG_005114.1), utilizando o software CodonCode Aligner implementado no Mega 5.04. As mutações encontradas foram comparadas com as do banco de dados The Haemophilia A Mutation, Structure, Test and Resource Site (HAMSTeRS) e a conservação dos aminoácidos mutados também foi verificada. A detecção de mutações em sítios de processamento foi realizada pelo programa de predição de sítios de processamento (Berkeley Drosophila Genome Project) e para a análise do efeito das mutações de sentido trocado foram utilizados três preditores: PolyPhen-2 (Polymorphism Phenotyping), Site Direct Mutator (SDM) e Have yOur Protein Explained (HOPE). A localização das mutações na estrutura do FVIII foi realizada no programa PyMol e para a visualização da superfície eletrostática dos domínios A foi utilizado o programa GRASP2. Quando nenhuma mutação foi encontrada, foi executada a análise de Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA). Quanto às mutações recorrentes, a análise de haplótipos foi feita a fim de investigar se elas surgiram nessa população através de vários eventos mutacionais distintos ou através de efeito fundador. Foi identificada a mutação causadora da doença em 69 (91%) pacientes, que apresentaram 33 mutações diferentes: 27 de sentido trocado, uma pequena deleção, duas pequenas duplicações e três mudanças em sítios de processamento. Sete mutações de sentido trocado e duas em sítios de processamento não tinham sido previamente descritas no HAMSTeRS e não foram identificadas na literatura. Todas as últimas foram consideradas patogênicas; a mutação p.Val266Met, muito próxima a um sítio de ligação ao cobre, pode diminuir a interação entre os domínios A2 e A3 do FVIII; a mutação p. Met567Lys pode afetar um sítio de ligação ao fator IX; as mutações p.Arg1764Gly, p.Tyr1786Phe e p.Tyr1792Cys podem afetar a ligação ao fator IX e ao Fator von Willebrand. Nove mutações recorrentes foram encontradas, uma delas nunca descrita anteriormente (p.Tyr1786Phe). A análise de haplótipos sugere que essa mutação tenha se originado na população brasileira como um único evento em um ancestral comum. Um dos indivíduos desenvolveu inibidores. Foi feita, também, uma avaliação geral sobre o papel das mutações no F8 na formação de inibidores em pacientes graves estudados em investigação anterior, verificando-se associações significativas tanto no que se refere aos domínios em que as mutações ocorreram, quanto aos tipos de mutações encontrados. Os dados desses estudos são úteis no diagnóstico e prevenção precoce de inibidores na hemofilia A, bem como na detecção de mulheres heterozigotas na população do sul do Brasil. Espera-se oferecer um melhor manejo aos pacientes, fornecer aconselhamento genético e suporte psicológico/emocional para as famílias dos afetados. / Factor VIII (FVIII) partial or total deficiency, or functional defects, result in the hereditary disease haemophilia A (HA), generally caused by heterogeneous mutations in the FVIII gene (F8). Although more than 1200 F8 mutations have been reported, data regarding these mutations are insufficient in southern Brazilian populations and their study provides a better understanding of the molecular genetics of the disease in this population. Furthermore, after evaluating the effect that a mutation has on a protein, we can do a better assessment of its function, as well as of the interactions between the mutated protein and related structures. The objectives of this study were to identify gene mutations in patients with mild and moderate HA living in the southern Brazilian state of Rio Grande do Sul and to analyze the role of these mutations in disease determination and presence of inhibitors. A total of 76 unrelated male patients with mild (n = 55) or moderate (n = 21) HA were included in the study. All F8 26 exons, the 5 'UTR and 3' UTR, intron-exon junctions and the promoter region were amplified by PCR and analyzed by direct sequencing. We also examined 100 blood bank donors’ normal chromosomes to exlude polymorphic changes as causal to the disease. F8 patients’ sequences were compared with the reference sequence (NCBI: NG_005114.1) using the CodonCode Aligner software implemented in Mega 5.04. The mutations found were compared with those present in The Haemophilia A Mutation, Structure, Test and Resource Site (HAMSTeRS) database and the conservation of the mutated amino acids was also verified. Splice site mutations were detected using the Berkeley Drosophila Genome Project splice site prediction program, and for the analysis of missense mutation effects three predictors were used: PolyPhen-2 (Polymorphism Phenotyping), Site Direct Mutator (SDM) and Have yOur Protein Explained (HOPE). The mutations were localized in the FVIII structure by PyMOL and the FVIII A domains eletrostatic surface was visualized using GRASP2. When no mutation was found, the Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) analysis was performed. As for the recurrent mutations, haplotype analyses were conducted to investigate whether they emerged in this population through several distinct mutational events or from a founder effect. We identified the disease causing mutation in 69 (91%) patients, who showed 33 different mutations: 27 missense, one small deletion, two small duplications and three splice site changes. Seven missense and two splice site mutations had not been previously reported in HAMSTeRS and were not identified in any literature search. The latter were all considered pathogenic; p.Val266Met is located near a copper binding site and may decrease the interaction between the FVIII A2 and A3 domains; p. Met567Lys can affect a factor IX binding site; p.Arg1764Gly, p.Tyr1786Phe and p.Tyr1792Cys can affect factor IX and von Willebrand Factor binding sites. Nine recurrent mutations were found, one of them (p.Tyr1786Phe) never described before. Haplotype analysis suggests that this mutation originated in the Brazilian population as a single event in a common ancestor. One of the subjects developed inhibitors. A general evaluation was also made about the role of F8 mutations in the development of inhibitors in severe patients studied in a previous investigation, and significant associations were found both in relation to the domains where the mutations occurred, as well as in the mutations found. The data of these studies will be useful in the diagnosis and early prevention of inhibitors in haemophilia A, and in the detection of female carriers in the southern Brazilian population. We hope to offer a better monitoring to the patients, to give genetic counseling, and psychological/emotional support to the families of affected persons.

Orientador : Reinaldo Wilson Vieira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T18:32:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MoreiraNeto_FranciscoFernandes_M.pdf: 1863125 bytes, checksum: 471488fa133951fb5ae5518da2b5c0f3 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Complicações por sangramento podem impedir o sucesso de qualquer cirurgia. Complicações causadas pelas transfusões sangüíneas também são fatores que devem ser levados em consideração quando analisamos o resultado das mesmas. As reações transfusionais são eventos comuns, mas são, felizmente na maioria das vezes, extremamente leves, não resultando em conseqüências mais graves Para os pacientes. No entanto, reações fatais etransmissão de doenças graves podem ocorrer. Acirculação extracorpórea aparece como amaior responsável pelas disfunções hemostáticas que ocorrem durante acirurgia cardíaca. As maiores causas dessas disfunções hemostáticas são as disfunções plaquetárias, da coagulação propriamente dita, ou da fibrinólise. As desordens da hemostasia causadoras de sangramento devem ser combatidas. Para tanto,o desenvolvimento de estratégias de prevenção e tratamento das mesmas é de grande importância e significado clínico. A utilização de anti-fibrinolíticos vem sendo feita como parte dessa estratégia, tanto que já existem vários trabalhos na literatura demonstrando aeficácia, especialmente, da aprotinina e, secundariamente, do ácido tranexâmico. No entanto aprotinina é cara e pode induzir a graves complicações anafiláticas. Quanto ao ácido tranexâmico, na literatura ainda não há consenso quanto à dose, nem quanto ao melhor regime de administração a ser utilizado. No presente trabalho, prospectivo, randomizado e duplo cego, estudamos a utilização profilática do anti-fibrinolítico ácido tranexâmico (Transamin@) , em um grupo de 80 pacientes submetidos àcirurgia primária de revascularização do miocárdio com o auxílio da circulação extracorpórea, que foram dividiqos em 2 grupos. No grupo-estudo o ácido tranexâmico foi administrado endovenosamente na dose de 4g (aproximadamente 50mg/Kg num paciente de 80 Kg)divididas em 2 partes: 2 g no início da cirurgia e 2 g adicionados ao perfusato da CEC; no grupo-controle foi administrada somente solução salin~ à 0,9% (placebo). Os grupos eram comparáveis em todas as variáveis demográficas, pré e intra-operatórias, exceto pelo número de anastomoses que foi significativamente maior no grupo-estudo. Como resultado encontramos que o grupo-estudo apresentou uma quantidade de sangramento pós-operatório pelos drenos mediastinais cerca de 30% menor, o que foi estatisticamente significativo (p=O,Ol). Não conseguimos em nossa amostra, não obstante, demonstrar uma redução na quantidade ou no número de pacientes transfundidos. Na análise das complicações pudemos verificar que o uso do ácido tranexâmico é seguro na dose de 4g, pois não houve diferença significativa na ocorrência de infarto agudo do miocárdio, insuficiência renal ou acidente vascular encefálico quando comparados os grupos, estudo econtrole. Em conclusão podemos afirmar que o ácido tranexâmico na dose de 4g reduz o sangramento no pós-operatório de cirurgia çardíaca primária de revascularização do miocárdio com circulação extracorpórea, sem aumentar significativamente aocorrência de complicações / Abstract: Bleeding complications, as well as complications related to blood transfusions may impair the results of any kind of surgery, especially cardiac surgery. Cardiopulmonary bypass appears as responsible for major hemostatic dysfunctions that happen during cardiac surgery. These dysfunctions are related mostly to platelet function or fibrinolisis and strategies should be developed to prevent or treat these dysfunctions. In the literature there are some papers showing the efficacy of antifibrinolitic agents like aprotinin and tranexamic acid. For this purpose, Aprotinin is very efficient but expensive and can induce anaphylactic reactions. Tranexamic acid is cheaper out the best re-gimen of administration is still controversial. We have undertaken arandomized study to examine prophylactic administration of~tranexamic acid (Transamin) in eighty patients submi tted to primary coronary artery bypass graft operation with cardiopulmonary bypass. In one group, 39 patients recei ved 4g of tranexamic acid di vided in 2 hal ves: the first half given before sternotomy and the other half in the priming of the cardiopulmonary bypass circuito The other group of 41 patients was used as contraIs and received only saline solution (placebo). Both groups were comparable in alI demographic variables. The tranexamic acid group had asignificantly higher number of distal anastomoses. Our results, showed that tranexamic acid group bled 30% less than the placebo group (p=O, 013). However we could not find significant reduction in use of blood products ar in the number of transfused patients. Analyzing the complications (such as myocardial infarction, renal failure ar stroke) we also could not find any statistical difference, between both groups. In conclusion, 4gof the tranexamic acid given prophylacticly reduced postoperative bleeding after primary coronary artery bypass operation without increasing the rate of complications / Mestrado / Mestre em Cirurgia

O envenenamento causado pela lagarta Lonomia obliqua é um problema de saúde pública nas regiões do Sul do Brasil. As vítimas envenenadas apresentam uma síndrome hemorrágica grave que pode evoluir para insuficiência renal aguda, hemorragia intracraniana e óbito. Com o objetivo de compreender os mecanismos que levam à hemorragia, neste trabalho foram avaliados a função plaquetária e os parâmetros de coagulação sangüínea em um modelo experimental de envenenamento em ratos e também foram investigados os efeitos diretos do veneno de L. obliqua sobre plaquetas isoladas in vitro. Os ratos envenenados apresentaram hipofibrinogenemia e hipoagregação plaquetária. A produção intravascular de óxido nítrico e a geração dos produtos de degradação de fibrinogênio/fibrina parecem estar envolvidos na hipoagregação plaquetária. Os animais envenenados também apresentaram incoagulabilidade sangüínea e um aumento significativo na atividade de trombina, plasmina e uroquinase no plasma. Apesar desta geração intravascular de trombina, somente uma pequena redução na contagem de plaquetas foi detectada. Quando testado in vitro, o veneno de L. obliqua foi capaz de induzir diretamente agregação e adesão de plaquetas isoladas. A agregação plaquetária induzida pelo veneno foi significativamente inibida por brometo de p-bromofenacila (p-BPB), um inibidor específico de fosfolipases A2. Experimentos com diferentes antagonistas farmacológicos indicaram que a agregação plaquetária disparada pelo veneno ocorre por um mecanismo dependente de cálcio envolvendo a via das ciclooxigenases e a ativação da fosfodiesterase 3A, uma enzima que leva ao consumo dos níveis intracelulares de AMPc. Se analisados em conjunto, os resultados aqui apresentados são importantes para a compreensão da síndrome hemorrágica resultante do contato acidental com a lagarta L. obliqua e podem auxiliar na descoberta de novas formas de tratamento para o quadro clínico. / The envenomation caused by the caterpillar Lonomia obliqua is a public health hazard in Southern Brazil regions. Envenomed victims present a severe hemorrhagic syndrome that can progress to acute renal failure, intracranial hemorrhage and death. To understand the mechanisms that lead to hemorrhage, we evaluated the platelet function and blood coagulation parameters in an experimental model of envenomation in rats and investigated the direct effects of L. obliqua venom on isolated platelets in vitro. Envenomed rats presented hypofibrinogenemia and platelet hypoaggregation. The intravascular production of nitric oxide and generation of fibrinogen/fibrin degradation products seems to be involved in platelet hypoaggregation. Animals also showed intense blood incoagulability and a significant increase in thrombin, plasmin and urokinase plasmatic activities. Despite this intravascular thrombin generation, only a slight decrease in platelet numbers was detected. When tested in vitro, L. obliqua venom was able to directly induce aggregation and adhesion of isolated platelets. The venom-induced platelet aggregation was significativly inhibited by p-bromophenacyl bromide (p-BPB), a specific inhibitor of phospholipases A2. Experiments with different pharmacological antagonists indicate that the aggregation response triggered by venom occurs through a calcium-dependent mechanism involving the cyclooxygenase pathway and activation of phosphodiesterase 3A, an enzyme that leads to the consumption of intracellular cAMP content. Altogether, these findings may be important to the understanding of the complex hemorrhagic syndrome resulting from accidental contact with L. obliqua caterpillars and may give new insights in the management of the clinical profile.