Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T08:42:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 286377.pdf: 3812439 bytes, checksum: 6fcfa72b2a13e20109075fe00c344e6a (MD5) / Agaricus subrufescens (=A. brasiliensis) é um fungo comestível amplamente comercializado no Brasil e em outros países, devido as suas propriedades nutricionais e medicinais relacionadas principalmente aos polissacarídeos presentes em sua parede celular, tais como glucanas e glucomananas. Certos processos biotecnológicos têm sido utilizados para aumentar a escala produtiva do micélio e, consequentemente, aumentar a obtenção dos polissacarídeos. Previamente ao desenvolvimento desses processos de produção é importante estabelecer métodos de preservação do fungo in vitro e a recuperação do micélio após estocagem. Para a produção de biomassa foi utilizada a fermentação no estado sólido (FES) em grãos de trigo pré-tratados e a fermentação submersa (FSm) em hidrolisados de resíduos agroindustriais, como farelo de trigo (FT) e resíduo de cervejaria (RC). Polissacarídeos extraídos da frutificação (controle), do micélio em FES e do micélio isolado da FSm foram separados de acordo com suas massas molares por meio de diferentes membranas. Essas frações de polissacarídeos foram testadas na ativação de macrófagos in vitro. Entre os métodos de preservação, melhores resultados foram obtidos quando o meio de cultura foi suplementado com carvão ativo, tanto para a preservação quanto para a recuperação de A. subrufescens, sem alterações significativas na morfologia e genética do fungo durante um período de até 12 meses de estocagem. Para a FES, 21 min de cozimento dos grãos de trigo seguido de 24 min de molho após o cozimento demonstrou ser mais adequado para a produção de polissacarídeos (glucomananas) pelo fungo, inclusive quando o substrato não foi suplementado com cálcio, ou com adição máxima de 0,25 % CaCO3 (pH 6,6). A quantidade inicial de inoculante para a melhor produção de glucomananas (6,89 mg.mL-1) foi aproximadamente 10,3 %, numa temperatura ótima de incubação de 27,2 °C. As maiores biomassas de A. subrufescens para a FSm em hidrolisados de RC e FT foram obtidas na concentração de HCl 0,45 % e 20 min de hidrólise, apresentando 9,65 g.L-1 e 22,1 g.L-1, respectivamente. Porém, melhores resultados de bioconversão foram obtidos em hidrolisados utilizando até 0,3 % de HCl e 30 min de hidrólise, com adição de 2 g.L-1 de carvão ativo durante a hidrólise. Também foram obtidas altas taxas de biomassa de A. subrufescens no cultivo em hidrolisado com pH 5,3 e temperatura de incubação de 30,2 ºC. Na separação com membranas houve aumento da retenção dos polissacarídeos de todos os extratos à medida que o tamanho dos poros da membrana diminuiu. Os polissacarídeos separados pelas membranas de microfiltração (MF) e ultrafiltração (UF1) favoreceram a retenção de polissacarídeos de maior massa molar da frutificação (627 g.mol-1) e do micélio (310 g.mol-1), obtido tanto em FES quanto em FSm. Todos os polissacarídeos extraídos e retentados pelas membranas ativaram macrófagos através da expressão do Fator de Necrose Tumoral-a (TNF-a). Porém, somente os extratos brutos da frutificação e do micélio isolado da FSm, e seus polissacarídeos de maior massa molar retidos pela membrana MF ativaram macrófagos através da expressão de Óxido Nítrico Sintase Induzível (iNOS). Resultados importantes também foram obtidos para os polissacarídeos das frutificações de A. subrufescens, apresentando efeito antigenotóxico e atividade antiherpética quando esses foram sulfatados. Baseado nesses resultados, pesquisas complementares estão sendo desenvolvidas para a obtenção de produtos biotecnológicos com finalidade nutricêutica e/ou farmacêutica. / Agaricus subrufescens (=A. brasiliensis) is an edible fungus widely commercialized in Brazil and other countries, mainly due to its nutritional and medicinal properties related principally to the polysaccharides present in the fungus cell wall, such as glucans and glucomannans. Biotechnological processes may in turn be used to scale up the production of mycelium and consequently the polysaccharides. Previous to the development of the production process it is important to establish techniques for the in vitro preservation and recovery of the mycelium after storage. Solid state fermentation (SSF) on pre-treated wheat grains and submerse fermentation (SmF) on hydrolyzed residues from the agro industries, such as wheat bran (FT) and brewery residues (RC) were used for biomass production. Polysaccharides extracted from fruiting bodies (control), mycelium on SSF and isolated mycelium from SmF were separated by molecular weight through different membranes. These polysaccharide fractions were tested on macrophage activity in vitro. Among the preservation techniques, better results were obtained when the media was supplemented with activated charcoal both for preservation and further recovery of A. subrufescens, without significant morphological and genetic changes within the 12 month storage period. For SSF, 21 min of wheat grain cooking followed by a 24 min resting time has shown to be the optimal condition for the production of polysaccharides (glucomannans) by the fungus, either with no supplement added, or when up to 0.25 % CaCO3 (pH 6.6) has been added to the substrate. The initial inoculum amount for the best polysaccharide production levels (6.89 %) was around 10.3 % with an optimal temperature of 27.2 °C. The highest biomass of A. subrufescens for the SmF in hydrolyzed RC and FT using HCL 0.45% and 20 min hydrolysis was 9.65 g.L-1 and 22.1 g.L-1, respectively. On the other hand, better results of bioconversion were obtained in hydrolyzed residues using up to 0.30 % HCl and 30 min hydrolysis, with the addition of 2 g.L-1 of activated charcoal throughout the process. High biomass levels were also obtained when the cultivation was carried out at a pH of 5.3 and with incubation temperature of 30.2 ºC. The results showed an increase in retention of all polysaccharide extracts as the membro ane porosity decreased. Microfiltration (MF) and ultrafiltration (UF1) membranes retained the highest polysaccharides from fruiting body (627 g.mol-1) and mycelium (310 g.mol-1) obtained on both SSF and SFm. All polysaccharide extracts and fractions separated by the membranes showed biological activity for TNF-a cytokines. On the other hand, only extracts obtained from fruiting bodies and isolated mycelium of FSm, and its high molecular weight polysaccharides retained by the MF membrane activated the iNOS. Important results were also obtained for the polysaccharides extracted from the fruiting bodies, showing antigenotoxic and antiherpetic activities after sulphatation. Based on these findings, additional research is currently in progress to purpose biotechnological products that can be used in both the nutraceutical and/or pharmaceutical areas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2008 / Made available in DSpace on 2012-10-24T04:14:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Agaricus blazei, conhecido popularmente no Brasil como cogumelo-do-sol e himematsutake no Japão, é um cogumelo nativo no sudeste brasileiro e amplamente consumido devido às suas propriedades nutricionais e medicinais. Neste estudo, foi avaliada a citotoxicidade, a genotoxicidade e a atividade anti-herpética das suas frações de beta-glucanas (E-SI, E-SII e E-SIII) e do seu extrato polissacarídico (ERP). A citotoxicidade e a genotoxicidade foram avaliadas através dos ensaios do MTT e do cometa, respectivamente. A ação antiviral in vitro frente ao Herpes Simplex Vírus tipo 1 (HSV-1, cepa KOS) e Herpes Simplex Vírus tipo 2 (HSV-2, cepa 333) foi testada pelo ensaio de redução de placas de lise. Nenhuma amostra apresentou genotoxicidade, nas condições experimentais testadas, e os valores de CC50 foram maiores do que 320 µg/ml para as frações de beta-glucanas e maior do que 2.370 µg/ml para o extrato ERP. Somente o ERP mostrou atividade antiviral entre as amostras testadas, para ambos os vírus. Os valores de CI50 foram de 6,74 µg/ml para o HSV-1 e 4,62 µg/ml para o HSV-2, com índices de seletividade de 393 e 545, respectivamente. A fim de determinar o possível mecanismo da ação anti-herpética detectada para o ERP, outras análises foram realizadas: ação virucida, influência na adsorção e penetração dos vírus nas células, e na propagação intercelular viral. O ERP não teve efeito direto na inativação dos vírions, mas inibiu significativamente a adsorção, a penetração do vírus nas células hospedeiras e a difusão intercelular viral. Estes resultados sugerem que o mecanismo de ação do ERP é particularmente interessante e difere daquele do aciclovir, que é o fármaco de escolha para o tratamento de infecções herpéticas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos. / Made available in DSpace on 2013-03-04T19:06:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 305250.pdf: 1279611 bytes, checksum: 85fa4d588f03cf34811d1f02b10b6bf1 (MD5) / O Agaricus brasiliensis, conhecido popularmente no Brasil como cogumelo do sol, é amplamente utilizado nos países orientais como um cogumelo comestível. Além disso, o cogumelo do sol tem sido extensivamente estudado devido a suas propriedades medicinais, havendo uma abundante literatura sobre o tema. O presente trabalho avaliou a composição química e atividade antioxidante e antimicrobiana dos extratos de A. brasiliensis obtidos por extração supercrítica (ESC) com CO2 puro e com a adição de etanol como cossolvente. Para avaliar o método a alta pressão quanto a rendimento, composição e atividade antioxidante e antimicrobiana dos extratos, métodos a baixa pressão, como hidrodestilação, maceração etanólica e soxhlet com diferentes solventes foram aplicados. As condições testadas na ESC foram: 40 oC, 50 oC e 60 oC e pressões entre 10 MPa e 30 MPa. A cinética de extração e o emprego de cossolvente no processo de extração supercrítica também foram avaliados. Os extratos obtidos por soxhlet utilizando água (56,8 %) e etanol (36,7 %) como solventes apresentaram os maiores rendimentos, enquanto que o menor rendimento foi observado na hidrodestilação (0 %). A extração supercrítica de cogumelo do sol apresentou rendimentos inferiores àqueles alcançados nas extrações à baixa pressão, em soxhlet e maceração. O melhor rendimento no processo de extração supercrítica utilizando CO2 puro foi na condição de 50 oC e 30 MPa (1,2 %). O emprego de 10 % de etanol como cossolvente no processo de extração supercrítica aumentou 3,8 vezes o rendimento de extração. O teor de compostos fenólicos totais foi avaliado pelo método de Folin-Ciocalteau e a atividade antioxidante pelo método DPPH, sendo verificado que os melhores resultados foram obtidos no extrato proveniente da maceração etanólica. A adição de cossolvente ao processo de extração supercrítica promoveu um incremento do teor de compostos fenólicos totais e atividade antioxidante dos extratos de cogumelo do sol. A atividade antimicrobiana foi avaliada pela concentração mínima inibitória e pelo método de difusão em gel. Os extratos de cogumelos do sol obtidos por técnicas a baixa pressão como por extração supercrítica apresentaram atividade antibacteriana, sendo maior para bactérias Gram-positivas. Apenas os extratos de cogumelos do sol obtidos por ESC (20 MPa/50 °C e 20 MPa/60 °C) apresentaram uma fraca atividade antifúngica frente a espécie Candida albicans. A quantificação e a identificação da composição dos extratos foram realizadas por cromatografia. Os principais compostos identificados nos extratos foram o ácido linoléico e ácido palmítico. Apesar dos baixos rendimentos observados na ESC, esta técnica torna-se bem interessante na obtenção de compostos de alto valor agregado, devido à seletividade do processo. A busca por condições operacionais que favoreçam positivamente o rendimento das extrações é uma alternativa a esta situação. / Agaricus brasiliensis, popularly known in Brazil as Sun mushroom, is widely used in oriental countries as an edible mushroom. Furthermore, Sun mushroom is a mushroom extensively studied for its medicinal properties for several years and literature abounds on the topic. The objective of this study was to obtain extracts from the mushroom A.brasiliensis using supercritical fluid extraction (SFE) with pure CO2 and with CO2 and co-solvent. In order to evaluate the high pressure method in terms of process yield, extract composition and biological activity, low pressure methods were also applied to obtain extracts, such as maceration with ethanol (Mac), Soxhlet (Sox) with different organic solvents, and hydrodistillation (HD). The SFE conditions were temperatures of 40 oC, 50 oC and 60 oC and pressures from 10 to 30 MPa. The SFE kinetic the overall extraction curve (OEC) was investigated. Soxhlet presented the highest yields when using water (56.8 %) and ethanol (36.7 %) as solvent. Hydrodistillation technique showed the lowest extraction yields (0 %). Supercritical extraction of Sun mushroom showed lower yields than the low pressure extraction in Soxhlet and maceration. The best conditions in the studied range to obtain high yields resulted to be 30.0 MPa and 50 oC (1.2 %). When 10 % of ethanol was added as co-solvent, the yield of extraction increased 3.8 times. Total phenol content was evaluated by the Folin-Ciocalteu and antioxidant activity by DPPH method, being verified the best results for the maceration extract. The use of ethanol as a co-solvent in the SFE improves antioxidant activity by DPPH assays and the total phenolic content. Antimicrobial activity was evaluated by minimum inhibitory concentration and gel diffusion assay. The antimicrobial activity presented by SFE and low pressure methods indicated great potential of the extracts as inhibitors of the microorganism growth, especially for Gran-positive bacteria. Only extracts of sun mushroom obtained by SFE (20 MPa/50 °C and 20 MPa/60 °C) showed a weak antifungal activity against Candida albicans. The identification and quantification of the composition of the extracts was performed by chromatography. The major compounds identified in extracts were linoleic acid and palmitic acid. Despite the low yields observed in the SFE, this technique is very interesting in obtaining the compounds of high aggregated value due to the selectivity of the process. The optimization of operating conditions that favor a positive yield of extraction is an alternative to this situation.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2013-06-25T18:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 311573.pdf: 7982077 bytes, checksum: 243e7ae4350af569490079c4e00e4810 (MD5) / Agaricus brasiliensis (syn A. subrufescens) é um fungo basidiomiceto nativo no Brasil, que apresenta paredes celulares ricas em polissacarídeos, tais como ?-(1?6)-(1?3)-glicanas nos corpos de frutificação e ?-(1?2)-glico-?-(1?3)-mananas no micélio. Neste trabalho, estes polissacarídeos foram isolados e modificados quimicamente gerando seus respectivos derivados sulfatados. Os polissacarídeos nativos (FR e MI) e sulfatados (FR-S e-MI-S) foram caracterizados quimicamente e avaliados quanto as suas atividades citotóxica e anti-herpética in vitro. Uma vez que FR-S e MI-S apresentaram uma promissora ação anti-HSV-1 (cepas KOS e 29-R) e anti-HSV-2 (cepa 333), seu mecanismo de ação foi determinado. A atividade anti-herpética in vivo do MI-S também foi testada utilizando-se modelos murinos de infecção ocular, cutânea e genital. FR-S e MI-S apresentaram duas novas bandas de absorção no espectro de infravermelho em 1253 e 810 cm-1, relacionados aos grupamentos C-S-O e S=O, respectivamente. A massa molecular do FR e MI foram estimados em 609 e 310 kDa, respectivamente. FR-S (127 kDa) e MI-S (86 kDa) apresentaram massas reduzidas provavelmente devido a hidrólise ocorrida durante a reação de sulfatação. FR-S e MI-S apresentaram ~14% de enxofre na análise elementar. Análise de RMN de 1H e 13C confirmaram as estruturas mencionadas anteriormente para FR e MI, sendo o FR-S totalmente sulfatado em C-4 e C-6, enquanto o MI-S parcialmente sulfatado em C-2, C-3, C-4 e C-6. Embora FR e MI não terem apresentado atividade, FR-S e MI-S exibiram promissora ação anti-HSV, com índices de seletividade (SI=CC50/EC50) superiores a 208. FR-S e MI-S não tiveram efeito virucida, mas significativamente inibiram a adsorção e penetração, provavelmente por interagir com glicoproteínas virais. Estudos de combinação revelaram que FR-S e MI-S atuam de forma sinérgica com o aciclovir. Além disso, MI-S inibiu a expressão das proteínas virais ICP27, UL42, gB e gD. Não foi observada toxicidade nos grupos de animais não infectados e tratados com MI-S. O tratamento tópico e oral com MI-S não foi efetivo na redução da doença ocular. A aplicação tópica de MI-S nas lesões cutâneas também não foi efetiva, mas os animais infectados cutaneamente e tratados oralmente com MI-S mostraram redução significativa dos escores da doença e cura acelerada das lesões pelo HSV-1 após o nono dia. A administração vaginal de MI-S (500 µg), 20 min antes do desafio viral, significantemente reduziu os escores da doença (dias 5 a 9), títulos virais (dias 1 e 3) e mortalidade em comparação aos grupos controles. A sulfatação aumentou em 5X o efeito citotóxico do FR contra células tumorais A549, enquanto foi essencial para a atividade do MI. A combinação de fatores como o alto grau de substituição e a massa molecular relativamente menor teve impacto positivo sobre a atividade citotóxica do FR-S e MI-S. Os resultados mostram que o MI-S tem potencial a ser utilizado na redução da severidade das lesões cutâneas pelo HSV-1 e principalmente como um microbicida evitando a transmissão sexual das infecções genitais pelo HSV-2. Ainda, os resultados promissores obtidos na triagem preliminar estimulam novos estudos para avaliação do mecanismo da atividade citotóxica do MI-S e FR-S.

Orientador: Marli Teixeira de Almeida Minhoni / Banca: Edson Luiz Furtado / Banca: Eustáquio Souza Dias / Banca: Arailde Fontes Urben / Banca: Luiz Antonio Graciolli / Resumo: O cogumelo Agaricus subrufescens [A. blazei (Murrill) ss. Heinemann] vem sendo muito estudado em várias partes do mundo devido às suas propriedades medicinais e farmacológicas. Como substância de interesse, na parede celular do fungo, tem-se a presença de polissacarídeos chamados β-glucanas, os quais possuem função estrutural. Poucos estudos são encontrados na literatura sobre quais fatores influenciam a concentração de β - glucana nos basidiomas; para isso foram realizados 3 experimentos a fim de se entender melhor o processo. O primeiro experimento teve como objetivo avaliar a influência do processo de compostagem "Indoor" no comportamento agronômico do A. subrufescens e nas características químicas dos basidiomas, sendo analisados os cogumelos "in natura", desidratados e liofilizados. Para isso, o experimento constou de um fatorial simples com 3 compostos (provindos de diferentes centrais de compostagem "Indoor", os quais foram produzidos através de distintos métodos), com 5 repetições cada tratamento. O fator composto afetou a produtividade e o número de basidiomas, porém não afetou a massa de basidiomas, a precocidade e o tempo para o primeiro fluxo. O processo de compostagem para o cultivo de A. subrufescens não está totalmente conhecido, sendo necessárias maiores pesquisas com enfoque de manejo, métodos e formulações a serem utilizadas para a produção de composto. O método de desidratação de basidiomas para sua conservação se mostrou eficiente (pouca mudança nas características químicas dos cogumelos foram observadas) e não possui um custo elevado de processamento quando comparado com o método de liofilização... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The mushroom Agaricus subrefescens Peck [A. blazei (Murrill) ss. Heinemann] has been widely studied in various parts of the world, because their medical and pharmacological properties. As substances of interest, on the cell wall of fungi, there is the presence of polysaccharides called β-glucans, which have structural function. Few results are found in the literature about which factors influence the concentration of β - glucan in the mushrooms. For these, 3 experiments were carried out in order to better understand this particular case. The first experiment aimed to evaluate the influence of the "Indoor" composting process in the agronomic performance (yield, number and weight of basidiocarps, precociousness and earliness) of A. subrufescens and their chemical characteristics of basidiocaps, had been analyzed the mushrooms in natura, dehydrated and freeze-dried. The experiment followed a simple factorial with 3 composts (coming from different composting "Indoor" installations, which were produced through varied methods) with five replicates per treatment. The compost factor affected the yield and the number of basidiocarps, but not affected the weight of the basidiocarps, the precociousness and the earliness. The compost process for the cultivation of A. subrufescens is still unknown, requiring further research with management approaches, methods and formulations to be used for the production of the compost. The method of dehydration of the basidiocarps for its conservation is efficient (little change in the chemical characteristics of the mushrooms was observed) and does not have a high cost of production when compared to the freeze-dried. The second experiment aimed to analyze the agronomic performance (yield, number and weight of basidiocarps, precociousness and earliness) and the medicinal potential (β-glucan) of A. subrufecens, according to the different strains... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:03:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Christine Garrido Marquez.pdf: 3277601 bytes, checksum: e27c6b29c8e0951b47d16d9bbfeb2287 (MD5) Previous issue date: 2006-08-31 / Eight reinforced concrete square flat slabs of reinforced concrete were tested. Slabs were 130mm thick with an 1800 mm side and were submitted to central loading, and the objective was to investigate the influence of column rectangularity coefficient. Column cross section dimensions (cmáx/cmín) varyied between 1 and 4, with a constant perimeter equal to 1000mm. Results presented and analysed include ultimate loads and failure types, modes of rupture, vertical displacements, cracking and deformations of steel and concrete. Comparisons with codes, norms and results of literature results are also presented. The results indicate that as the rectangularity coefficient increases, punching shear resistance decreases for constant perimeter column flat slabs. Suggesting that punching shear has to be considered specially in regions close to column extremity, where there is a larger concentration of shear forces. A proposal for an inclusion of the retangularity parameter (cmáx/cmín) in expressions for calculation punching shear resistance of ACI (2002), CEB-FIP (1991), EC2 (2001) and NBR-6118 (2003) codes is presented. / São analisadas experimentalmente 8 (oito) lajes cogumelo de concreto armado quadradas com 1800 mm de lado e 130 mm de espessura, submetidas a carregamento central, com o objetivo de investigar a influência do índice de retanguralidade do pilar, sendo que a relação entre as dimensões da seção transversal do pilar (cmáx/cmín) variou entre 1 e 4, com perímetro mantido constante e igual a 1000 mm. São apresentados e analisados os resultados das cargas últimas, modos de ruptura, deslocamentos verticais, fissuração e deformações do aço e concreto. São apresentadas comparações dos resultados experimentais com códigos, normas de projeto e resultados da literatura. Os resultados indicam que à medida que aumenta o índice de retangularidade, a resistência à punção diminui, para lajes que possuem pilares com o perímetro constante. Sugerindo que o combate à punção pode ser mais efetivo em regiões próximas das extremidades dos pilares, onde há maior concentração de forças cortantes. É apresentada uma proposta de inclusão do parâmetro cmáx/cmín nas expressões de cálculo da resistência à punção do ACI (2002), CEB-FIP (1991), EC2 (2001) e NBR-6118 (2003).

O objetivo principal deste trabalho é apresentar uma associação dos cálculos elástico e plástico, para análise de lajes-cogumelo. Foram considerados painéis retangulares, com carregamento uniformemente distribuído. O cálculo elástico é utilizado como pré-dimensionamento, fornecendo a razão entre os momentos de vão e permitindo a fixação dos momentos de plastificação negativos. O cálculo plástico é feito através da Teoria das Charneiras Plásticas, que é utilizada na obtenção dos momentos de plastificação, com os quais é feito o dimensionamento. Também se apresentam dois exemplos completos, para comparar os resultados do cálculo elástico com aqueles relativos ao procedimento ora proposto. O cálculo elástico foi feito através do Processo dos Pórticos Equivalentes. Não houve diferença significativa entre os resultados obtidos com os dois processos, para os exemplos considerados. Novas pesquisas são sugeridas para aprimorar o procedimento proposto. / The main aim of this work is to present an association of elastic plate theory and plastic analysis, to beamless slabs (flat slabs and flat plates) analysis. Rectangular panels uniformly loaded were considered. Elastic plate theory is used to predimensioning, determining the relation between positive bending moments and permiting to fix the ultimate negative moments of resistance. Plastic analysis is made by Yield Line Theory, that is used to obtain ultimate moments of resistance, which are used in dimensioning. Two complete examples are also presented, to compare results of elastic plate theory with those relative to proposed proceeding. Elastic calculus is made by Equivalent Frame Method. There was not significant difference between results obtained with the two processes in the considered examples. New researches are suggested in order to perfect proposed proceeding.

Lajes-cogumelo são sistemas estruturais que apresentam uma série de vantagens em relação aos sistemas convencionais. Por outro lado, com a retirada das vigas, podem surgir problemas como o deslocamento transversal das lajes, a instabilidade global do edifício e a punção da laje pelo pilar. Este trabalho concentra-se no estudo dos deslocamentos transversais das lajes-cogumelo, procurando-se fazer a comparação entre deslocamentos calculados por diferentes processos: o das vigas cruzadas, o de Rangan e o dos elementos finitos. São abordados conceitos básicos para o cálculo desses deslocamentos, o estado de fissuração a ser adotado na determinação da rigidez e os efeitos da fluência e da retração do concreto, que foram baseados no ACI 209R-92. São apresentados três exemplos de aplicação. Com base nos resultados obtidos, verifica-se que os valores dos deslocamentos calculados pelos diferentes processos dependem muito da rigidez considerada, uma vez que é grande a influência do estado de fissuração nos deslocamentos da laje. Nos dois primeiros exemplos, pode-se observar que a diferença de resultados entre o processo de Rangan (que adota um estado padrão de fissuração) e a análise por elementos finitos (considerando a fissuração) é muito variável; os resultados diferem de 1% a 200%. Os resultados obtidos com dois programas de elementos finitos (que consideram a fissuração de formas diferentes) não apresentam diferenças maiores que 14%. / Flat plates are structural systems that present some advantages when compared to slabs with beams. On the other hand, when beams are removed some problems can arise, such as slab deflections, global instability of the building and punching shear. This work deals with the flat plate deflections, comparing computed deflections using different procedures: crossing beam method, Rangan method and finite element method. Basic concepts for the calculation of these deflections, the cracking stage to be adopted in order to determine the stiffness and the effects of concrete creep and shrinkage using the ACI 209R-92 are presented. Three examples are developed. Based on the results, it is noticed that the computed deflections using different procedures depend on the esteemed stiffness, since the influence of cracking stage in the slab deflections is great. In the first two examples, the difference between the results calculated using the Rangan method (which adopts a standard cracking stage) and the finite element method (considering cracking) is very variable; the results differ within a range of 1% to 200%. The results calculated with two finite element program (which consider cracking by different ways) do not present differences greater than 14%.

O objetivo principal deste trabalho é apresentar uma associação dos cálculos elástico e plástico, para análise de lajes-cogumelo. Foram considerados painéis retangulares, com carregamento uniformemente distribuído. O cálculo elástico é utilizado como pré-dimensionamento, fornecendo a razão entre os momentos de vão e permitindo a fixação dos momentos de plastificação negativos. O cálculo plástico é feito através da Teoria das Charneiras Plásticas, que é utilizada na obtenção dos momentos de plastificação, com os quais é feito o dimensionamento. Também se apresentam dois exemplos completos, para comparar os resultados do cálculo elástico com aqueles relativos ao procedimento ora proposto. O cálculo elástico foi feito através do Processo dos Pórticos Equivalentes. Não houve diferença significativa entre os resultados obtidos com os dois processos, para os exemplos considerados. Novas pesquisas são sugeridas para aprimorar o procedimento proposto. / The main aim of this work is to present an association of elastic plate theory and plastic analysis, to beamless slabs (flat slabs and flat plates) analysis. Rectangular panels uniformly loaded were considered. Elastic plate theory is used to predimensioning, determining the relation between positive bending moments and permiting to fix the ultimate negative moments of resistance. Plastic analysis is made by Yield Line Theory, that is used to obtain ultimate moments of resistance, which are used in dimensioning. Two complete examples are also presented, to compare results of elastic plate theory with those relative to proposed proceeding. Elastic calculus is made by Equivalent Frame Method. There was not significant difference between results obtained with the two processes in the considered examples. New researches are suggested in order to perfect proposed proceeding.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T09:16:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 286647.pdf: 2822556 bytes, checksum: efcdfec4981831ef957fb764c96e7d5d (MD5) / Neste estudo foi padronizada a reação de RT-PCR para a detecção da expressão do mRNA dos marcadores TNF-?, IL-10 e iNOS, importantes no contexto de ativação de macrófagos, para seleção in vitro de substâncias naturais ou sintéticas com potencial atividade imunomodulatória sobre macrófagos, visto que estes constituem uma das principais populações de células do sistema imune. Para isso foi selecionada a linhagem murina RAW 264.7, cultivada in vitro e que responde a estímulos como o LPS. Para a realização da RT-PCR, o RNA foi extraído das células utilizando o reagente Trizol e posteriormente feito reação de transcrição reversa com 1 µg de RNA total, em condições padronizadas. Na etapa de amplificação do cDNA, foram testadas a melhor temperatura de anelamento para cada marcador, concentração dos iniciadores específicos e diluição do cDNA. Determinou-se que o melhor tempo necessário para visualizar os produtos de amplificação era de 6 horas para os ensaios de ativação e foram estabelecidas as concentrações de LPS capazes de estimular as células em cultura, quando avaliadas pela RT-PCR e dosagem de óxido nítrico. Verificou-se que a adição prévia de polimixina B (50 µg/ml) nas amostras é eficiente na inativação de endotoxinas contaminantes. Estabeleceu-se um protocolo para testar a potencial atividade antiinflamatória de compostos químicos, pela adição da substância a ser testada 6 horas após a ativação prévia com LPS, incubação por 18 horas e observação da inibição da expressão dos marcadores. Determinou-se em seguida, a atividade de 15 formulações de polissacarídeos de Agaricus blazei, sendo que todos os extratos mostraram atividade, pela RT-PCR, para a concentração de 10 µg/ml para a citocina TNF-? e nas frações 2, 3, 11 e 12 para a enzima iNOS; enquanto que a dosagem de óxido nítrico realizada em paralelo mostrou-se menos sensível. Também avaliou-se a atividade de 9 galatos sintéticos, e concluiu-se que nenhuma das amostras testadas demonstrava atividade ativadora de macrófagos. Ficou evidenciado neste estudo, portanto, a utilidade de uma técnica in vitro para a triagem de substâncias com potencial atividade imunomodulatória sobre macrófagos, que permite vislumbrar a análise de grande número destas substâncias, sem a utilização de animais de laboratório. / In this study an RT-PCR to detect mRNA expression of the markers TNF-?, IL-10 and iNOS, relevant in the macrophage activation context, was standardized in order to in vitro screening of natural or synthetic compounds with potential immunomodulatory activity in macrophages, whereas they constitute a major population of immune systems cells. For this, was selected the murine strain RAW 264.7 cultured in vitro, and that responds to stimuli such as LPS. To perform RT-PCR, RNA was extracted from cells using Trizol reagent and subsequently made a reverse transcription reaction with 1 µg of total RNA under standard conditions. In amplification of cDNA step, were tested the best annealing temperature for each marker, the concentration of specific primers and dilution of cDNA. It was determined that the best time to view the amplification products was 6 hours for the testing of activation, and states the concentrations of LPS the cells were responsive to our model of RT-PCR and measurement of nitric oxide. It was found that the previous addition of polymyxin B (50 µg / ml) in samples is efficient in the inactivation of endotoxin contaminants. Was established a protocol to test the potential anti-inflammatory activity of chemical compounds, by adding the substance to be tested after 6 hours prior to activation with LPS, incubated for 18 hours and observing the inhibition of expression of markers. Was determined activity of 15 polysaccharides of Agaricus blazei where all the extracts showed activity in the RT-PCR for the concentration of 10 µg / ml for TNF-? cytokine and for the fractions 2, 3, 11 and 12 for the iNOS enzyme; but not in the dosage of nitric oxide. We also determined the activity of 9 gallates synthetic, and concluded that none of gallates tested showed activity in activating macrophages. Was evidenced in this study, therefore, the usefulness of an in vitro technique for screening of substances with potential immunomodulatory activity on macrophages, which paves the analysis of many of these substances without the use of laboratory animals.