• Refine Query
  • Source
  • Publication year
  • to
  • Language
  • 562
  • 9
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • 2
  • 1
  • 1
  • 1
  • Tagged with
  • 577
  • 276
  • 126
  • 98
  • 74
  • 64
  • 42
  • 40
  • 40
  • 40
  • 40
  • 40
  • 40
  • 40
  • 39
  • About
  • The Global ETD Search service is a free service for researchers to find electronic theses and dissertations. This service is provided by the Networked Digital Library of Theses and Dissertations.
    Our metadata is collected from universities around the world. If you manage a university/consortium/country archive and want to be added, details can be found on the NDLTD website.
1

Mycorrhizal effects on the growth of common bean (phaseolus vulgaris L.)

Oliveira, Antônio Alberto Rocha 16 October 2012 (has links)
Tese (doutorado) - University of Leeds, Departament of Pure and Applied Biology, 1995 / Made available in DSpace on 2012-10-16T08:07:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0
2

Mycorrhizal effects on the growth of common bean (phaseolus vulgaris L.)

Oliveira, Antônio Alberto Rocha 08 January 2016 (has links)
Tese (doutorado) - University of Leeds, Departament of Pure and Applied Biology, 1995 / Made available in DSpace on 2016-01-08T19:53:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0
3

Ficções sociológicas : três estudos de interpretação literária

Lima, João Daniel Cardoso de January 2009 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Sociais, Departamento de Sociologia, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-07-08T18:35:16Z No. of bitstreams: 1 2009_JoaoDanielCardosodeLima.pdf: 768418 bytes, checksum: 14c08ac05669abb79788912c8cc98386 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-07-10T17:59:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_JoaoDanielCardosodeLima.pdf: 768418 bytes, checksum: 14c08ac05669abb79788912c8cc98386 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-10T17:59:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_JoaoDanielCardosodeLima.pdf: 768418 bytes, checksum: 14c08ac05669abb79788912c8cc98386 (MD5) Previous issue date: 2009 / Este é um estudo de epistemologia das ciências sociais. Mais especificamente, é uma ilustração de efeitos destrutivos, sobre a investigação social empírica, acarretados pelo compromisso com teorias sociológicas e com uma tentativa de ruptura com o universo conceitual de senso comum. Tal exercício é aqui levado a cabo sobretudo pela comparação entre interpretações literárias orientadas por teorias sociológicas e interpretações ―tradicionais‖, isto é, em continuidade com o repertório linguístico-interpretativo de senso comum. A dissertação se desenvolve em três capítulos relativamente independentes. O primeiro avalia a análise de A educação sentimental, de Gustave Flaubert, feita por Pierre Bourdieu (1996); o segundo, o estudo de Oliver Twist e Bleak house, de Charles Dickens, por D. A. Miller (1988); e o terceiro, a análise de Lord Jim e Nostromo, de Joseph Conrad, por Fredric Jameson (1981). O que une os três casos analisados é o abuso do argumento analógico, onde se confunde a aproximação metafórica de realidades distintas com a demonstração de elos empíricos. Os três críticos compartilham também o recurso a estratégias de imunização de possíveis contra-argumentos, drenando suas hipóteses de conteúdo empírico. No caso de Bourdieu, no entanto, algumas teses não são completamente infalseáveis (sendo, nesses casos, simplesmente, falsas). Não é o que se constata em Miller e Jameson: estes críticos não tratam de nada observável, recorrendo invariavelmente à imputação especulativa de sentidos ocultos, inverificáveis, às obras que analisam. As interpretações ―tradicionais‖ invocadas servem, por sua vez, não só na identificação de incorreções factuais (quando há hipóteses com conteúdo empírico), mas também no grifo de distorções dos enredos literários, derivadas da aplicação forçada de teorias sociológicas. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This is a survey on the epistemology of the social sciences. More specifically, it‘s an illustration of destructive effects on empirical work resulting from the use of sociological theories and the attempt of conceptual break with ordinary language. Such exercise is overall sought here by means of comparison between, on one hand, literary interpretations guided by sociological theories and, on the other, ―traditional‖ interpretations, that is, those made in continuity with common vocabulary. The dissertation evolves in three relatively independent chapters. The first evaluates the analysis of The sentimental education, by Gustave Flaubert, made by Pierre Bourdieu (1996); the second, the interpretation of Oliver Twist and Bleak house, by Charles Dickens, made by D.A. Miller (1988); and the third, the study of Lord Jim and Nostromo, by Joseph Conrad, made by Fredric Jameson (1981). What brings the three analyses together is the misuse of analogical arguments, whereby different realities are united solely by metaphor, without any demonstration of empirical links. The three critics also share the deployment of immunization strategies against potencial counter-arguments, draining their hypothesis of empirical content. In Bourdieu‘s case, however, some theses are not completely irrefutable (being, in such cases, quite simply, false). The same does not apply to Miller and Jameson: these critics are not dealing with anything observable, resorting invariably to the speculative assignment of hidden unverifiable meanings to the works analysed. The ―traditional interpretations‖ invoked, on their turn, serve not only the identification of factual incorrections (when there are hypotheses with empirical content), but also the highlight of distortions inflicted on literary plots, resulting from the forced application of sociological theories.
4

Hipersensibilidade e resistencia sistemica adquirida em feijoeiro moruna NC, induzidas pelo virus do mosaico do feijoeiro do sul dos EUA

Rocha, Andrea Brondani da 19 June 2000 (has links)
Orientador: Jorge Vega / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T04:18:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rocha_AndreaBrondanida_D.pdf: 12961975 bytes, checksum: e6c9f9fee433398c749a5c14f022d096 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: As plantas podem ficar sistemicamente protegidas contra diversas moléstias através de uma inoculação prévia com patógenos causadores de necrose. Este fenômeno é conhecido como resistência sistêmica adquirida. O envolvimento de vários mecanismos na indução da resistência adquirida tem sido sugerido. Entre eles estão a resposta de hipersensibilidade, aumento na atividade da peroxidase, e o aumento no conteúdo de ácido salicílico nas folhas resistentes. Esta tese teve como objetivos caracterizar o fenômeno da resistência adquirida em plantas de feijoeiro Moruna nc inoculadas com o vírus VMFS-EUA, quanto à ocorrência da reação de hipersensibilidad e; efeito do número de lesões necróticas necessárias para a indução da resistência; efeito de condições ambientais (radiação e temperatura), duração do fenômeno e efeito da nodulação por Rhizobium tropici; avaliar os processos bioquímicos envolvidos na resistência adquirida, tais como peroxidação de lipídeos, atividade enzimáticas (catalase, peroxidase e fenilalanina amônia-liase) e o envolvimento do ácido salicílico; e estudar o efeito da aplicação de citocininas, ácido salicílico e benzotiadiazole sobre a resposta de hipersensibilidade e a expressão da resistência sistêmica adquirida. Para tanto, na maioria dos experimentos (exceção aos experimentos em que foi estudada a influência do número de lesões ocorridas na indução na expressão da resistência), o feijoeiro Moruna nc foi inoculado na folha primária com o vírus VMFS-EUA purificado, na concentração de 10 ~glmL. Geralmente a reação de hipersensibilidade ocorreu 72 horas após esta inoculação (inoculação de indução). A planta inoculada recebeu outra inoculação ( de desafio) com a mesma concentração de VMFS-EUA, na 23 folha trifoliolada. Quatro dias após esta última inoculação, foram realizados os ensaios enzimáticos e as outras determinações bioquímicas em ambas as folhas, induzi da e desafiada. Nos experimentos em que foi estudada a influência do número de lesões ocorridas na indução na expressão da resistência adquirida, verificou-se que o aumento na concentração viral de 1,7 para 20 JlglrnL durante a inoculação de indução resultou em menos lesões ocorridas no desafio, tanto nos experimentos realizados em casa de vegetação como em câmara de crescimento. As mudanças realizadas experimentalmente na radiação luminosa incidente não resultaram em alterações na expressão da resistência adquirida. No entanto, a aumento na temperatura de 20°C para 30°C causou uma redução no número e tamanho de lesões ocorridas no desafio. De um modo geral, a resistência adquirida teve duração de 13 a 22 dias após a indução da mesma. Não foi observado efeito da nodulação na expressão da resistência adquirida. Malondialdeído, um produto da peroxidação de lipídeos, esteve relacionado com a resposta de hipersensibilidade. Não foi observado aumento na atividade da enzima catalase em relação à ocorrência de resistência adquirida. A atividade da peroxidase aumentou de aproximadamente 3 para 15 unidades (expressas em Mbs4701min.g massa fresca) durante a expressão da resistência sistêmica adquirida. A enzima fenilalanina amônia-liase (P AL) também apresentou aumento de atividade nas plantas que estavam expressando resistência (uma média de 7 UA.2901h. g massa fresca x100. nas folhas não induzi das e 27 U.A.290/h.g massa fresca x 100 nas folhas com resistência adquirida). O conteúdo de ácido salicílico nasfolhas com resistência induzida aumentou mais de 30 vezes durante a ocorrência da resistência no feijoeiro Moruna nc. O tratamento de aplicação de citocinina permitiu maior replicação viral, monitorada pelo teste PT A-ELISA, tanto nas plantas de uma variedade que permite a invasão sistêmica (cultivar Jalo), como na variedade Moruna nc. Já as folhas tratadas com ácido salicílico apresentaram redução na replicação viral. A aplicação do ácido salicílico induziu resistência sistêmica a partir de doze horas após sua aplicação, evidenciada pela redução de 15lesõeslcm2 de folha, no controle, para 2 lesõeslcm2 de folha nas folhas tratadas. O benzotiadiazole (sob a forma do produto comercial BION), produto indutor de resistência análogo ao ácido salicílico, induziu resistência nos feijoeiros quando aplicado nas doses de 2,5 e 5 g/100L. Doses maiores do produto causaram sintomas de toxidez nas plantas. Peroxidase teve sua atividade aumentada nas plantas tratadas com o produto, mas a enzima P AL não apresentou tal comportamento. O produto conferiu resistência às plantas durante o período de nove dias. O trabalho permite concluir que o número e tamanho das lesões causadas pelo VMFS EUA na indução foram afetados pela temperatura, e foram fatores determinantes para a ocorrência da resistência adquirida. As enzimas peroxidase e P AL foram associadas aos processos bioquímicos que possibilitaram a ocorrência da resistência sistêmica. O ácido salicílico também esteve envolvido na expressão de resistência sistêmica adquirida em plantas de feijoeiro Moruna nc inoculadas com VMFS-EUA / Abstract: Plants can be systemically protected against diseases by prior inoculation with necrotizing pathogens or physiologicallbiochemical stresses. This phenomenon has been tenned systemic acquired resistance (SAR). Several mechanisms have been suggested to contribute to plant induced resistance. They inc1ude the hypersensitive response (HR), enhanced systemic extracellular peroxidase activity, and the involvement of salicylic acid. The purposes of this work were to characterize SAR in Moruna bean inoculated with Southern Bean Mosaic Vírus (SBMV) in relation to the HR occurrence; study the effect of lesion number necessary to induce SAR; study the effects of light radiation and temperature; evaluate time extension and effect of Rhizobium tropici nodulation; study biochemical processes involved with SAR, such as lipid peroxidation, enzymatic activities (catalase, peroxidase, and P AL) and the involvement of salicylic acid; and finally study the effects of cytokinin, salicily acid and benzothiadiazole application in the HR and SAR expression. In most of the experiments (except for those where the effect of lesion number necessary to induce SAR was studied) Moruna bean was inoculated on the primary leaves with purified SBMV at the concentration of 1 O ~g/rnL. lt usually showed HR 72 hours after this inoculation. Inoculated plants were challenged with the same concentration of SBMV on the second trifoliate leaf. Four days after challenge, enzymatic assays and other biochemical assays were performed on both induced and challenged leaves. In the experiments where the effect of lesion number necessary to induce SAR was studied, increasing SBMV concentration ftom 1.7 to 20 ~glmL as the inducing inoculum resulted in the development of fewer lesions at cha1lenge in both greenhouse and growth chamber experiments. Changes in incident light radiation did not modify the pattem of SAR expression, but increase of temperature ftom 20°C to 30°C caused a reduction in both number and lesion size at challenge. In general, SAR was expressed during 13 to 22 days. No nodulation etfects were observed on the expression of SAR. Malondialdehyde, a product oflipid peroxidation, was associated with HR. No changes in catalase activity were observed in relation to SAR. Peroxidase activity increased ftom approximately 3 to 15 units (expressed in ~AbS4701min.g ftesh weight) during SAR expression. Phenylalanine ammonia-Iyase (P AL) also showed enhanced activity in the induced leaves (an average of7 U.A.2901 h. g ftesh weight xl00 in non-induced leaves, and 27 U.A.2901 h. g ftesh weight x 100 in SAR expressing leaves). Salicylic acid content on the induced leaves increased up to 30 fold during SAR expression in Moruna bean. Leaves treated with cytokinin showed increased virus replication, measured by PT A ELISA, both for plants that permit systemic spread (Jalo) as for Moruna nc. On the other hand, leaves sprayed with salicylic acid presented less virus replication. Treatment with salicylic acid induced systemic resistance after 12 hours, showing a reduction ftom 15 lesions/cm2 (control) to 2lesionslcm2 (treated leaves). Benzothiadiazole (which commercial product is called BION), an analog of salicylic acid, induced resistance in bean when it was applied at 2.5 and 5 g/100 L. Higher amounts of this product were toxic to the plants. Peroxidase activity was higher in plants treated with BTH than in the control, but PAL did not show this increase in activity. Plants treated with BTH remained resistant to SBMV during 9 days. We conclude that number and lesion size caused by SBMV at induction were atfected by temperature, and were important for SAR occurrence. Extracellular peroxidase and P AL were associated with the biochemica1 processes leading to resistance. Salicylic acid was also related to induced resistance ofMoruna bean plants inoculated with SBMV / Doutorado / Doutor em Biologia Vegetal
5

Qualidade de sementes de feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) de diversas densidades obtidas na mesa gravitacional

Linares, Jussara Bertho Fantinatti 26 July 2018 (has links)
Orientador: Sylvio Luis Honorio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Agricola / Made available in DSpace on 2018-07-26T06:41:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Linares_JussaraBerthoFantinatti_M.pdf: 382992 bytes, checksum: be93e67d3f02ae20ea77d906dae46632 (MD5) Previous issue date: 1999 / Mestrado
6

O estado e a educação

Pasold, Cesar Luiz January 1980 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Jurídicas, Curso de Pós-Graduação em Direito / Made available in DSpace on 2012-10-16T20:46:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2016-01-08T13:50:41Z : No. of bitstreams: 1 179344.pdf: 2690265 bytes, checksum: 438e308f61fe4e842a006388a7428200 (MD5)
7

Polinômios multivariados : fatoração e MDC

Allem, Luiz Emílio January 2010 (has links)
Nesta tese de doutorado estudamos polinômios multivariados. Começamos fazendo uma revisão bibliográfica sobre o teorema da irredutibilidade de Hilbert. Abordamos com detalhes as demonstrações da versão clássica feita pelo próprio Hilbert e das versões efetivas feitas por Erich Kaltofen e Shuhong Gao. Desenvolvemos um novo algoritmo para fatoração de polinômios multivariados inteiros usando logaritmo discreto. Nosso método é baseado em novos tipos de reduções de polinômios multivariados para polinômios bivariados, as quais têm como principal característica manter a esparsidade do polinômio. Nosso método mostrou-se eficiente quando usado para fatorar polinômios multivariados que possuem apenas fatores esparsos e quando usado para extrair fatores esparsos de polinômios multivariados que têm fatores esparsos e densos. Terminamos essa tese trabalhando com o máximo divisor comum (mdc) de polinômios. Estudamos critérios geométricos de politopos para determinar coprimalidade entre polinômios multivariados. Desenvolvemos um novo algoritmo que trabalha em tempo polinomial (sobre o número de monômios) para detectar coprimalidade entre polinômios multivariados usando seus politopos de Newton associados. Esse método geométrico tem a vantagem de determinar a coprimalidade entre famílias de polinômios, pois podemos mudar arbitrariamente os coeficientes dos polinômios desde que certos coeficientes permaneçam não nulos. Além disso, os polinômios permanecerão coprimos sobre qualquer corpo. Terminamos mostrando como construir o mdc entre dois polinômios bivariados usando seus polígonos de Newton associados. / In this dissertation we study multivariate polynomials. We begin with a bibliographical review on the Hilbert irreducibility theorem. We cover in detail the demonstrations of the classic version due to Hilbert himself and effective versions due to Erich Kaltofen and Shuhong Gao. We developed a new algorithm for factoring multivariate integral polynomials using discrete logarithm. Our method is based on new types of reductions, from multivariate polynomias to bivariate polynomials, whose main feature is to maintain the sparsity of the polynomial. Our method has proved to be eficient when used for factoring multivariate polynomials that have only sparse factors and when used to extract sparse factors of multivariate polynomials that have sparse and dense factors. We finish this dissertation studying the greatest common divisor (gcd) of polynomials. We study geometric criteria of polytopes to determine coprimality between multivariate polynomials. We developed a new algorithm that works in polynomial time (on the number of monomials) to detect coprimality between multivariate polynomials using their associated Newton polytopes. This geometric method has the advantage of determining the coprimality between families of polynomials, since we can arbitrarily change the polynomial coeficients as long as some coeficients remain nonzero. Moreover, the coprime polynomials shall remain coprime on anyfield. We ended up showing how to build the gcd between two bivariate polynomials using their associated Newton polygons.
8

A lei natural como fundamento da ordem política em Tomás de Aquino

Ascari, Giovani Alberton January 2006 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Filosofia e Ciências Humanas. Programa de Pós-graduação em Filosofia / Made available in DSpace on 2012-10-22T13:08:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O objetivo principal da pesquisa é o de entender o pensamento político de Tomás de Aquino. Para tanto, é imprescindível partir do pressuposto de que, em Tomás, a ordem política está para a ordem natural e ambas estão para a ordem divina. Assim, começo a pesquisa apresen-tando o pensamento de Tomás sobre a lei eterna, para num segundo momento falar sobre a lei natural, que é a presença da lei eterna na estrutura do universo e que está como fundamento da ordem política. Somos naturalmente seres racionais, inclinados à sociabilidade e conseqüen-temente à vida na polis, sendo a política a principal ciência da razão prática que tem a respon-sabilidade maior de arquitetar toda a construção do edifício que compõe o tecido social. Ain-da, a política está para a lei natural e a lei eterna, numa dependência salutar e necessária. Se a política é a principal ciência da razão prática, a metafísica a transcende e é a principal ciência da razão especulativa. Portanto, para levantar o edifício do tecido social, o pensamento políti-co tomista se encontra dentro de um contexto maior que tem como pano de fundo a lei natural e a lei eterna. Devido à nossa inclinação natural à sociabilidade, formamos distintas comuni-dades, a começar pela família, passando por grupos intermediários até a comunidade mais complexa e ao mesmo tempo mais perfeita que é a comunidade civil. Ver-se-á que, para To-más, a comunidade civil necessita naturalmente de uma autoridade política, que ele identifi-cou com a figura do rei na defesa que fez do regime monárquico como aquele que mais se aproxima da lei natural. O bem comum é a causa final, o grande horizonte temporal a ser bus-cado pela ordem política. Viver as virtudes (em especial a justiça) é o melhor modo para se alcançar o bem comum. Para além do bem comum está o Ser absoluto (alfa e ômega) do qual deriva todo o bem e para o qual se dirige nosso bem maior: a vida dos bem-aventurados junto de Deus. This research's main goal is to understand Tomas Aquinas' political thought. For that, it is mandatory to take as presupposition that in Aquinas the political order is related to the natural order and both are related to the divine order. So that I begin the research presenting Aquinas' thought on eternal law, and in the second moment I explain about the natural law that is the presence of eternal law in the universe structure as foundation to political order. We are natu-rally rational beings, inclined to sociability and consequently to live in the polis, having poli-tics the main science of practical reason whose major responsibility is to plan the whole con-struction of the social organization as a structure. Moreover, politics is related to natural law and eternal law in a sound and necessary dependence. If politics is the main science of practi-cal reason, metaphysics goes beyond it as main science of speculative reason. Therefore, to build up the social structure, Aquinas' political thought remains within the broad context of natural law and eternal law. Due to natural inclination to sociability, we form different com-munities beginning with family, intermediary groups and more complex and perfect commu-nities such as civil community. For Aquinas the civil community naturally needs a political authority that he identified with the king in the defense of the monarchical regime as the clos-est to natural law. The common good is the final cause, the larger temporal horizon aimed by political order. To live the virtues (especially justice) is the best way to reach the common good. Beyond the common good remains the absolute Being (Alfa and Omega) from whom comes all good and to whom goes our greater good: the life of the blessed ones close to God.
9

Vantagens comparativas das exportações do Brasil para os demais países do Mercosul em 2008

Leite, Cristiane Sobreira January 2010 (has links)
LEITE, Cristiane Sobreira. Vantagens comparativas das exportações do Brasil para os demais paises do Mercosul em 2008. 2010. 48f. Dissertação (mestrado profissional) - Programa de Pós Graduação em Economia, CAEN, Universidade Fedeal do Ceará, Fortaleza-Ce, 2010. / Submitted by Mônica Correia Aquino (monicacorreiaaquino@gmail.com) on 2013-08-30T17:00:20Z No. of bitstreams: 1 2010_dissert_csleite.pdf: 161912 bytes, checksum: 263c74afde86c87380d981a07cca3b3d (MD5) / Approved for entry into archive by Mônica Correia Aquino(monicacorreiaaquino@gmail.com) on 2013-08-30T17:00:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dissert_csleite.pdf: 161912 bytes, checksum: 263c74afde86c87380d981a07cca3b3d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-30T17:00:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dissert_csleite.pdf: 161912 bytes, checksum: 263c74afde86c87380d981a07cca3b3d (MD5) Previous issue date: 2010 / This paper aims to identify and analyze Brazil's exports to the rest of the Southern Common Market - Mercosur in 2008 by groups of products exported, based on the percentage of dollars traded and on the use of labor-skilled or not, as factor of production. This way, sectors are identified in descending order of percentage of exports, which together concentrate half of Brazilian exports to the rest of the bloc, which, since its original formation, consists of four countries: Argentina, Brazil, Paraguay and Uruguay. It is also identified based on the Heckscher-Ohlin model, which labor force prevails. The analysis of these data lead to the conclusion that this business relationship, only three sectors of the Brazilian economy now constitute more than half of exports, and that they are labor-educated workforce. / Este trabalho objetiva identificar e analisar as exportações do Brasil para o Resto do Mercado Comum do Sul – Mercosul, em 2008, por grupos de produtos exportados, baseado no percentual de dólares negociados e na utilização da mão-de-obra qualificada ou não, como fator de produção correspondente. Para isso, são identificados os setores por ordem decrescente do percentual das exportações, os quais, juntos, concentram a metade das exportações brasileiras para o restante do bloco econômico, que, desde sua formação original, é composto por quatro países: Argentina, Brasil, Paraguai e Uruguai. Também é identificado, com base no modelo de Heckscher-Ohlin, que tipo de mão-de-obra prevalece. A análise desses dados leva a conclusão que, nessa relação comercial, apenas três setores da economia brasileira já correspondem a mais da metade das exportações e que estes produtos são intensivos em mão-de-obra qualificada.
10

Desenvolvimento de iniciadores e sonda espécie-específicos para quantificação por PCR em tempo real de feijão (Phaseolus vulgaris L) em alimentos

Venturelli, Gustavo Luiz January 2014 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:57:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327001.pdf: 1518423 bytes, checksum: fd32c8d9d8e9dc8d241f276f283d883d (MD5) Previous issue date: 2014 / A cada ano, no Brasil, o número de aprovações para eventos geneticamente modificados cresce, bem como a área plantada de culturas transgênicas. Uma vez que no Brasil a legislação exige que produtos que contenham mais de 1% de organismos geneticamente modificados (OGM) em sua composição sejam rotulados, a identificação e quantificação destes OGM se fazem necessária. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método de detecção e quantificação, por PCR em tempo real, para o feijoeiro GM Embrapa 5.1 a partir de uma nova referência endógena táxon-específica para Phaseolus vulgaris, tendo como alvo uma sequência de um gene de proteína. Para isso, três genes candidatos foram selecionados e os iniciadores testados com SYBR Green. O ensaio para o gene da Arcelina não apresentou amplificação. Ambos os ensaios para o gene da Lectina e Faseolina apresentaram especificidade esperada, entretanto o da Lectina apresentou maior especificidade e eficiência. Uma sonda TaqMan foi então desenhada, para tornar o ensaio da Lectina ainda mais específico. A especificidade do ensaio LEC foi testada com 50 amostras de feijão, provenientes de dois pools genéticos, Andino e Mesoamericano e 15 amostras de controle negativo. O ensaio táxon-específico FEI, previamente desenvolvido, foi testado com 44 amostras de feijão, a fim de comparação com o ensaio LEC. As amostras de DNA de feijão apresentaram a amplificação esperada para ambos os ensaios, LEC e FEI, apresentando um Ct médio de 20,3 ± 0,73 e 26,34 ± 1,26, respectivamente. Isto sugere que o ensaio LEC possui uma especificidade maior que o ensaio FEI. A alta homogeneidade apresentada capacita o ensaio LEC a detectar variedades de feijão dos dois pools genéticos existentes. O ensaio LEC apresentou amplificação com Ct tardio (Ct > 35) para quatro amostras negativas, porém em apenas algumas reações onde foram testadas. As eficiências do método LEC foram testadas com as amostras Pérola, Pérola GM, Pontal e Pontal GM e variaram de 92% a 101% com o R2 variando entre 0,994 e 0,998. O limite de detecção para o método foi de 101 cópias de DNA genômico. Os resultados obtidos com o ensaio LEC estão dentro dos parâmetros propostos pelo European Network of GMO Laboratories (ENGL), podendo, desta forma, o ensaio ser utilizado em estudos de análise de feijão GM. Além disso, os iniciadores desenvolvidos podem ser utilizados para quantificação e detecção tanto do feijão convencional quanto do feijoeiro Embrapa 5.1 com ambos os sistemas de PCR, TaqMan e SYBR Green.<br> / Abstract : Every year the number of approvals for genetically modified events grows in Brazil as well as the area of cultivated transgenic crops. Once Brazilian legislation requires the labeling on products containing > 1% of GMOs in its composition, methods for the detection and quantification of new GMOs are necessary. The aim of the present work was to develop a new real time PCR assay for the detection and quantification of the GM common bean Embrapa 5.1 using a new taxon-specific endogenous reference targeting a coding gene of Phaseolus vulgaris. Three genes encoding common bean proteins were chosen and tested using SYBR Green chemistry. The assay for the Arcelin gene did not show amplification. Both Lectin and Faseolin assays showed the expected specificity although the Lectin assay presented higher specificity and efficiency. A TaqMan probe was then designed in order to develop a more specific detection method. The specificity of LEC assay was tested for 50 common bean samples from two gene pools, Andean and Mesoamerican, and 15 negative control samples. The previously developed taxon-specific FEI assay was evaluated by testing forty-four Phaseolus vulgaris varieties in order to compare with LEC assay. These common bean DNA samples presented the expected amplification signal and the mean Ct was 20.3 ± 0.73 and 26.34 ± 1.26 for LEC and FEI assays, respectively. It suggests that LEC assay has higher specificity than FEI assay. The high homogeneity makes the LEC assay able to reliably detect common bean varieties from both gene pools. LEC assay presented amplification at late Ct (Ct value > 35) in few reactions of four negative samples. The efficiencies of LEC method were performed using non-GM Pérola, non-GM Pontal, GM Pérola and GM Pontal samples and they ranged from 92% to 101% and R2 ranged from 0.994 to 0.998. Moreover, this assay presented a limit of detection of 101 genome copies. The results showed that the LEC assay meets the requirements proposed by the ENGL and it can be used in further studies of GM common bean analyses. Furthermore, the primers and probe developed in this work are suitable for both real time PCR detection chemistries, TaqMan and SYBR Green and they are suitable to detect and quantify either GM and non-GM common bean.

Page generated in 0.0377 seconds