Introdução: A ereção peniana é um processo neurovascular complexo iniciado através de estimulação sexual, que podem ser fatores físicos ou psicológicos com atuação de substâncias no endotélio vascular resultando no ato sexual satisfatório. Diversos fatores podem interferir de forma negativa no mecanismo fisiológico da ereção peniana, consequentemente, levando a disfunção erétil, tais fatores como hipertensão arterial sistêmica, diabetes mellitus, tabagismo e alcoolismo. O etanol é uma das substâncias mais consumidas nas diferentes sociedades, tornando-se, assim, alvo de inúmeros estudos que visam conhecer sobre sua toxicidade. Apesar da grande associação entre o consumo de álcool e o aumento da incidência da disfunção erétil, os mecanismos moleculares envolvidos ainda são poucos conhecidos. Devido a abundância, os microRNAs tem sido descrito envolvidos em diversas funções fisiológicas dos processos celulares, e além disso estão envolvidos em muitos processos fisiopatológicos, como, por exemplo, a disfunção erétil. Dentre os processos celulares, os microRNAs exercem funções anti ou pró apoptóticas. Embora a conexão dos microRNAs a apoptose esteja bem estabelecida, sua função em resposta a apoptose induzida pelo etanol permanece em grande parte desconhecida. Objetivos: Avaliar o mecanismo de apoptose, pela expressão de AIF e PARP, assim como dos seus microRNAs reguladores: miR-145, miR-210 e miR-486, nos corpos cavernosos de ratos submetidos a modelo de \"alcoolismo semivoluntário\". Material e métodos: Foram utilizados 12 ratos Wistar divididos em dois grupos: controle (C) e tratado com etanol (A) a 20% durante sete semanas. As amostras dos corpos cavernosos foram preparadas para o estudo morfométrico pela coloração de tricrômico de Masson, para o estudo da expressão protéica de AIF e PARP por imunohistoquímica e para o estudo da expressão gênica no tecido cavernoso do miR- 145, miR-210 e do miR-486, por PCR em tempo real. Resultados: A análise imuhistoquímica mostrou pouca marcação positiva nuclear para a proteína PARP e AIF nos corpos cavernosos dos animais dos grupos controle e tratado com etanol. Após análise da expressão dos microRNAs miR-145, -210 e -486, nos 12 animais estudados, não foram encontrados resultados com diferença estatística significativa entre os grupos controle e alcoolizado. Conclusões: A expressão gênica do miRNA -145 e miRNA-486 foi maior nos animais do grupo tratado com etanol quando comparado aos animais do grupo controle; A expressão gênica do miRNA - 210 foi maior nos animais do grupo controle quando comparado aos animais do grupo tratado com etanol; Foi observada correlação entre a expressão protéica de PARP e AIF e do miRNA -210, ambos com maior marcação positiva no grupo controle. / Introduction: Penile erection is a complex neurovascular process initiated through sexual stimulation, which can be physical or psychological factors with action of substances in the vascular endothelium resulting in the satisfactory sexual act. Several factors can negatively interfere in the physiological mechanism of penile erection, consequently leading to erectile dysfunction, such factors as systemic arterial hypertension, diabetes mellitus, smoking and alcoholism. Ethanol is one of the most consumed substances in different societies, becoming, therefore, the target of numerous studies that aim to know about its toxicity. Despite the large association between alcohol consumption and the increased incidence of erectile dysfunction, the molecular mechanisms involved are still poorly understood. Due to abundance, microRNAs have been described involved in various physiological functions of cellular processes, and in addition are involved in many pathophysiological processes, such as erectile dysfunction. Among the cellular processes microRNAs have anti-apoptotic or pro functions. Although the connection of the microRNAs to apoptosis is well established, their function in response to ethanol-induced apoptosis remains largely unknown. Objectives: To evaluate the mechanism of apoptosis, by the expression of AIF and PARP, as well as of its regulatory microRNAs: miR-145, miR-210 and miR-486, in the cavernous bodies of rats submitted to a model of \"semi-voluntary alcoholism\". Material and methods: 12 Wistar rats were divided into two groups: Control (C) and treated with ethanol (A) diluted 20% for seven weeks. Samples of the corpus cavernosum were prepared for morphometric study by Masson\'s trichrome stain, study for protein expression of CASPASE 3 (pro-apoptotic) by immunohistochemistry and study for gene expression of miRNA-21 (anti-apoptotic) in serum and the cavernous tissue. Results: The immunohistochemical analysis showed little positive nuclear marking for the PARP and AIF protein in the corpus cavernosum of the control and ethanol treated groups. After analysis of miR-145, -210 and -486 microRNA expression in the 12 animals studied, no statistically significant differences were found between the control and alcoholized groups. Conclusions: The gene expression of miRNA-145 and miRNA-486 was higher in the animals of the ethanol treated group when compared to the animals in the control group; Gene expression of miRNA - 210 was higher in the control group than in the animals treated with ethanol; A correlation was observed between the protein expression of PARP and AIF and of the -210 miRNA, both with greater positive marking in the control group.

Orientadores: Gilberto de Nucci, Fabíola Taufic Monica Iglesias / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T01:00:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_RenataLopes_M.pdf: 1896765 bytes, checksum: 79601ac40320374fce18c0c0436647a0 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O fato da cópula em serpentes ser muito prolongada, chegando a mais de 20 horas, sem que os mecanismos farmacológicos estejam conhecidos, motivou o nosso grupo a estudar o hemipênis de Crotalus durissus terrificus (cascavel). Diferentemente do observado em corpo cavernoso de outros mamíferos, o relaxamento induzido pela estimulação elétrica foi mais duradouro, além de resistente a ação da neurotoxina tetrodotoxina (TTX) em hemipênis de Crotalus. Uma hipótese inicial aventada foi que este canal, cuja cinética de abertura e fechamento é mais lenta, seria o responsável pelo relaxamento duradouro e, portanto, pelo coito mais prolongado. Baseado nestes resultados, e considerando que a resistência à TTX e duração prolongada também foram observadas na contração induzida pela estimulação elétrica, o objetivo do presente projeto foi caracterizar através de experimentos funcionais in vitro a contração mediada por agonistas ou pela estimulação elétrica. Os experimentos funcionais foram divididos em cinco etapas: 1) contração frente a noradrenalina, adrenalina e dopamina; contração frente a estimulação elétrica ou fenilefrina na presença de 2) tetrodotoxina (TTX), fentolamina e guanetidina; 3) neurotoxinas seletivas para os canais de sódio ou cálcio dependentes de voltagem; 4) após a troca de cloreto de sódio pela N-metil-D-glucamina (NMDG) e 5) determinação na noradrenalina triciada após estimulação elétrica em corpo cavernoso de Crotalus (CCC) e de coelho (RbCC). Em CCC todas as catecolaminas produziram contração dependente da concentração, sendo este efeito reduzido na presença de fentolamina. A estimulação elétrica induziu contração que foi dependente da frequência tanto em RbCC como em CCC, sendo esta contração devido, principalmente, à liberação de catecolaminas, uma vez que tanto a fentolamina como guanetidina praticamente aboliram esta resposta. Surpreendentemente, diferente de RbCC, em CCC a substituição equimolar de NaCl por N-metil-D-glucamina (NMDG) não causou nenhuma alteração na amplitude de contração frente a estimulação elétrica. Os anestésicos locais bupivacaína e ropivacaína reduziram significantemente a contração induzida pela estimulação elétrica em CCC e RbCC, enquanto a veratridina, um ativador deste canal, causou contração que foi dependente da liberação de catecolamina. Na presença das neurotoxinas GVIIA ou MVIIA pudemos observar uma redução de, aproximadamente, 50 % na contração induzida pela estimulação elétrica em CCC e RbCC. As toxinas para os canais de sódio ou cálcio não interferiram na contração induzida pela fenilefrina. Em relação aos experimentos com noradrenalina triciada não foi detectado nenhum sinal de radioatividade no sobrenadante de CCC após a estimulação elétrica, indicando a baixa sensibilidade do método ou a liberação de outra catecolamina. Por outro lado, em RbCC na presença de TTX, NMDG e na ausência de Ca+2 houve uma redução significativa na fração de [3H]-noradrenalina liberada após o estímulo elétrico, indicando a participação do influxo de sódio e de cálcio na neurotransmissão adrenérgica no RbCC. Os experimentos funcionais sugerem que em CCC a liberação de catecolaminas independe do influxo de sódio, porém é dependente do influxo de cálcio / Abstract: The snake's coitus may last up to 20 hours, although the pharmacological mechanism remains unknown. Conversely to mammalian corpus cavernosum (CC), the relaxation induced by electrical field stimulation (EFS) in Crotalus corpus cavernosum (CCC) was long-lasting and resistant to tetrodotoxin (TTX). Since TTX-resistant sodium current has much slower activation and inactivation kinetics than TTX-sensitive sodium current, one may speculate that the prolonged coitus was due to persistent sodium channel activation, and thus nitric oxide release. Based on these results and considering that TTX-resistant was also observed in EFS-induced contraction, the aim of this study was to characterize the contraction in CCC. The functional assays were divided in five steps: 1) concentration response curve to noradrenaline, adrenaline and dopamine in the absence and presence of phentolamine; contraction induced by electrical field stimulation (EFS) or phenylephrine (PE) in the presence of 2) TTX, phentolamine or guanetidine; 3) of blockers for voltage gated sodium- or calcium channels; 4) EFS- and PE-induced contraction after NaCl replacement by N-methyl-D-glucamine (NMDG); 5) quantification of titrated [3H] noradrenaline after EFS in RbCC and CCC. Noradrenaline, adrenaline, dopamine and EFS induced contraction, which were practically abolished in the presence of phentolamine or guanethidine in RbCC and CCC. Surprisingly, low sodium levels did not affect EFS-induced contraction in CCC, but abolished in RbCC. The sodium channel activator, veratridine induced contraction in both RbCC and CCC being this response abolished in the presence of phentolamine. Local anaesthetics, ropivacaine and bupivacaine and the neuronal N-type calcium channel blocker, GVIA and MVIIA reduced by, approximately, 50 % EFS-induced contraction, without affecting the contraction by PE. In CCC no radioactivity was detected after EFS stimulation, whereas in RbCC TTX, sodium or calcium ions removal a significant reduction on [3H]-noradrenaline release was observed. Our results suggest that EFS-induced contraction was independent on sodium influx, but rather dependent on calcium influx / Mestrado / Farmacologia / Mestra em Farmacologia

Orientador: Gilberto De Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T13:06:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Martins_RodrigodeOliveiraCapel_D.pdf: 3076126 bytes, checksum: 396a3a2afbc6ff0897c19649a03f2ed5 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A ereção peniana é um fenômeno vascular sob controle psicológico modulado por andrógenos onde o estado de flacidez ou ereção peniana é determinado pela condição momentânea de contração ou relaxamento do sistema arterial cavernoso e da musculatura lisa trabecular. Já a disfunção erétil é definida como a incapacidade de alcançar ou manter uma ereção peniana satisfatória para uma relação sexual e pode acontecer por causas psicológicas ou orgânicas, podendo esta ser, vascular, neurológica, cirúrgica ou medicamentosa e atinge cerca de 50% dos homens com idade superior a 40 anos e um número crescente de adultos com 20 anos ou mais. Os inibidores de fosfodiesterase tipo 5 são, por via oral, a melhor opção terapêutica embora existam outras alternativas como a injeção intracavernosa de papaverina, fentolamina ou alprostadil e, em casos mais severos, a prótese peniana. Contudo existem casos de pessoas que não respondem de maneira satisfatória a essas drogas e, a(s) causa(s) permanece(m) pouco conhecida(s). Com o objetivo de investigar se no modelo proposto de disfunção erétil in vivo causado por orquiéctomia ocorrem também alterações da resposta do corpo cavernoso in vitro a estímulos contráteis e estímulos relaxantes, bem como, alterações morfológicas nos corpos cavernosos de camundongos utilizamos camundongos C57bl/6 adultos machos (25--30g) castrados cirurgicamente. Avaliamos a resposta contrátil à fenilefrina (agonista alfa1) na presença ou ausência de L--NAME (inibidor de NO) e fasudil (HA1077: inibidor de Rho-- cinase), estimulação elétrica (EFS: 4, 8, 16Hz, 50V, 10 segundos), bem como a resposta relaxante à acetilcolina (ACh) na presença ou ausência de L--NAME, ao Bay 41--2272 (ativador de guanilil ciclase) na ausência ou presença de ODQ (inibidor de guanilil ciclase), ao nitroprussiato de sódio (SNP: doador de NO) na ausência ou presença de ODQ e ao HA 1077. Os parâmetros morfológicos avaliados foram, comprimento, área da secção transversal e volume peniano, área da secção transversal dos corpos cavernosos, fração de musculatura lisa, colágeno e lúmen sinusoidal e a relação quantitativa musculatura lisa/tecido colágeno bem como a imunoexpressão de guanilil ciclase, fosfodiesterase tipo 5 e sintase endotelial de NO. Dois segmentos de corpos cavernosos foram obtidos de cada animal. Os tecidos foram montados em banhos para órgão isolados preenchidos com a solução Krebs--Henseleit e após o período de estabilização foram realizadas curvas concentração efeito. Nossos resultados mostraram que a castração cirúrgica aumentou a potência e a resposta máxima da fenilefrina (pEC50=5,452±0,100; Emax=0,117±0,005) em relação ao grupo controle (pEC50=6,138±0,110; Emax=0,086±0,005 e) e que, a presença de HA1077 reverte esse efeito sem causar alteração na resposta do animal controle, a resposta contraturante à estimulação elétrica foi significativamente maior nos animais castrados (p<0,001) em todas as frequências testadas. Observamos que a resposta relaxante da ACh está diminuída nos animais castrados e, as doses maiores causaram contração, já o Bay 41-- 2272 teve sua potência e resposta máxima reduzidas no grupo castrado enquanto que, ao SNP não há diferença entre os grupos. Já o relaxamento ao HA1077 foi significativamente maior tanto em potência quanto a resposta máxima no animais castrados (pEC50=5,863±0,060; Emax=0,141±0,005) em relação ao grupo controle (pEC50=6,867±0,070; Emax=0,058±0,001). A análise macroscópica mostrou que, entre a primeira e a oitava, a castração induziu no pênis dos animais uma hipoplasia passando para atrofia a partir de então. Nos parâmetros microscópicos os animais castrados perderam 7% da área dos corpos cavernosos e 30% da fração de musculatura lisa. A imunoexpressão da nNOS foi semelhante para os dois grupos já a eNOS, guanilil ciclase e PDE5 estão diminuídas nos animais castrados, os dados da guanili cilcase e da PDE5 foram, também, confirmados por western blot. Neste trabalho demonstramos que a castração cirúrgica: aumenta a sensibilidade da musculatura lisa cavernosa aos mecanismos contraturantes, quer por estimulação adrenégica quer pelo mecanismo de sensibilização ao cálcio mediado pela Rho--cinase, além de reduzir a resposta aos mecanismos relaxantes mediados pela via óxido nitrico--GMP cíclico--PDE5; provoca perda de musculatura lisa e estriada, aumento de tecido adiposo e redução na expressão de proteínas essenciais para a manutenção do funcionamento do mecanismo de ereção / Abstract: Penile erection is a vascular phenomenon under psychological control, modulated by androgens where the erection or flacid penile state is determined by the momentary condition of either contraction or relaxation of the arterial system and the cavernous trabecular smooth muscle. Since erectile dysfunction is defined as the inability to achieve or maintain a penile erection for satisfactory sexual intercourse and may be due to psychological or organic causes, which may be, vascular, neurological, surgical or drug induced and affects about 50% of men older than 40 years old and a growing number of men aged 20 years or more. The phosphodiesterase type 5 inhibitors are orally, the best treatment option although there are other alternatives such as intracavernous injection of papaverine, phentolamine, or alprostadil, and in severe cases, the penile prosthesis. However there are cases of people who do not respond satisfactorily to these drugs and, cause(s) remain unknown. In order to investigate whether the proposed model of erectile dysfunction caused by orchiectomy in vivo also changes the response of corpus cavernosum in vitro contractile and relaxing stimulation, as well as morphological changes in the corpus cavernosum of C57BL / 6 adults males mice (25-30g) surgically castrated. We evaluated the contractile response to phenylephrine (alpha1 agonist) in the presence or absence of L-NAME (NO-inhibitor) and fasudil (HA1077, Rho-kinase inhibitor), electrical stimulation (EFS: 4, 8, 16Hz, 50V, 10 seconds), as well as the relaxation response to acetylcholine (ACh) in the presence or absence of L-NAME, HA 1077, Bay 41-2272 (guanylyl cyclase activator) in the absence or presence of ODQ (guanylyl cyclase inhibitor) and sodium nitroprusside (SNP, NO donor) in the absence or presence of ODQ. The morphological parameters evaluated were length, cross-sectional area and volume of the penis, transversal sectional area of corpora cavernosa, fraction of smooth muscle, collagen xxx and sinusoidal lumen and quantitative smooth muscle / collagen tissue as well as the immunoexpression of guanylyl cyclase, phosphodiesterase 5 type and endothelial NOS. Two segments of the corpus cavernosum were obtained from each animal. Tissues were mounted in organ baths with Krebs-Henseleit and after stabilization, concentration curves were performed. Our results showed that castration increased the potency and maximal response of phenylephrine (pEC50 = 5.452 ± 0.100, Emax = 0.117 ± 0.005) compared to controls (pEC50 = 6.138 ± 0.110; Emax = ± 0.005 and 0.086) and HA1077 reverses this effect causing any alterations in the response of the animal control, electrical field stimulation was significantly higher in castrated animals (p <0.001) at all frequencies tested. We observed that the relaxation of ACh is diminished in the castrated animals, and higher doses caused contraction, Bay 41-2272 had reduced potency and maximum response in the castrated group, while SNP had no difference between groups. HA1077 was significantly higher in both potency and maximum response in castrated animals (pEC50 = 5.863 ± 0.060; Emax = 0.141 ± 0.005) compared to controls (pEC50 = 6.867 ± 0.070; Emax = 0.058 ± 0.001). Macroscopic analysis showed that, between the first and eighth weeks after castration, castrated animals showed hypoplasia and atrophy thereafter. Microscopic parameters: castrated animals lost 7% of the corpus cavernosum and 30% of the fraction of smooth muscle. The nNOS immunoreactivity was similar in both groups as eNOS, guanylyl cyclase and PDE5 are reduced in castrated animals, and data of guanyl cilcase and PDE5 were also confirmed by western blot. We demonstrated that surgical castration: increases the sensitivity of the cavernous smooth muscle contraction mechanisms, either by adrenergic stimulation or by the mechanism of calcium sensitization mediated by Rho-kinase, and reduces the relaxing response to mechanisms mediated by nitric oxide-cGMP-PDE5; causes loss of striated and smooth muscle, increased fat and decreased expression of proteins essential for maintaining the function of the erection mechanism / Doutorado / Farmacologia / Doutor em Farmacologia

A endotelina-1 (ET-1) é um peptídeo vasoconstritor que exerce um papel importante no controle do tônus do corpo cavernoso. No entanto, tem sido demonstrado que esse peptídeo também está envolvido na disfunção erétil (DE) associada ao diabetes mellitus e hipertensão. O consumo de etanol aumenta os níveis plasmáticos de ET-1 e a resposta contrátil a esse peptídeo em tecidos vasculares. Os objetivos deste trabalho foram o de estudar as consequências funcionais e celulares do consumo crônico de etanol sobre o sistema endotelinérgico no corpo cavernoso e identificar os mediadores envolvidos nessa resposta. Ratos Wistar foram divididos em dois grupos, os quais receberam água (controle) ou solução de etanol a 20% (vol./vol.) por seis semanas. Nossos resultados mostram que em tiras de tecido cavernoso, não houve alteração da resposta de relaxamento induzida pela adrenomedulina e nitroprussiato de sódio após tratamento com etanol. Com relação à acetilcolina, o consumo crônico de etanol reduziu o relaxamento induzido pelo referido agonista. Além disso, observou-se redução dos níveis plasmáticos e teciduais de nitrato no grupo etanol. Em conjunto, esses resultados sugerem que o tratamento crônico com etanol reduz a síntese/liberação do NO tecidual sem prejuízo em sua via de sinalização. O tratamento com etanol aumentou os níveis plasmáticos de ET-1 e a resposta contrátil induzida por esse peptídeo em corpo cavernoso de ratos. A contração induzida pela fenilefrina ou KCl 120 mmol/L não foi afetada pelo tratamento com etanol, sugerindo que os efeitos do tratamento sobre a reatividade do corpo cavernoso não são inespecíficos. O antagonista dos receptores ETB, o BQ788, não alterou a resposta de contração induzida pela ET-1 em corpo cavernoso de animais do grupo controle ou etanol. Não houve alteração da resposta de relaxamento induzida pelo IRL1620, um agonista seletivo dos receptores ETB. O tratamento com etanol não alterou os níveis de RNAm assim como a expressão protéica dos receptores ETB. Esses resultados mostram que o aumento da contração induzida pela ET-1 após tratamento com etanol não está relacionado à redução do relaxamento mediado pelos receptores ETB. Em nosso estudo o BQ123, antagonista seletivo dos receptores ETA, deslocou a curva cumulativa para ET-1 para direita em músculo cavernoso de ratos do grupo controle com consequente redução do valor de pD2. O mesmo não foi observado no tecido de animais do grupo etanol, indicando que a resposta mediada pelos receptores ETA está favorecida após o tratamento. O consumo de etanol não afetou os níveis de RNAm dos componentes do sistema endotelinérgico (ET-1, ECE-1, receptores ETA e ETB) e das isoformas da enzima óxido nítrico sintase (NOS) (eNOS, nNOS e iNOS), porém aumentou a expressão protéica do receptor ETA, da ET-1 e da iNOS no músculo cavernoso. O tratamento com etanol induziu aumento do estresse oxidativo sistêmico assim como dos níveis de ânions superóxido (O2-) no corpo cavernoso. As espécies reativas de oxigênio (ERO), os metabólitos derivados da NOS e da ciclooxigenase (COX) modulam negativamente a contração induzida por ET-1 e mostraram-se importantes no aumento da contração à ET-1 observada no corpo cavernoso de animais tratados com etanol. O Y27632, um inibidor da Rho-cinase, reduziu a resposta contrátil da ET-1 em corpo cavernoso de animais de ambos os grupos. Portanto, os resultados mostram que o tratamento com etanol aumenta a resposta contrátil da ET-1 por mecanismos que envolvem o aumento da expressão dos receptores ETA e das ERO e a via da Rho-cinase. / Endothelin-1 (ET-1) is a vasoconstrictor peptide that plays an important role in controlling the tone of the cavernosal smooth muscle (CSM). ET-1 is also involved in erectile dysfunction (ED) associated with diabetes mellitus and hypertension. Ethanol consumption increases plasma levels of ET-1 and the contractile response to this peptide in vascular tissues. This study aimed to investigate the cellular and functional consequences of chronic ethanol consumption on the endothelinergic system in CSM as well as the mediators involved in this response. Male Wistar rats were treated with ethanol 20% (vol./vol.) for 6 weeks. Reactivity experiments were performed on isolated CSM. Our findings show that adrenomedullin and sodium nitroprusside-induced relaxation was not altered after treatment with ethanol. On the other hand, acetylcholine-induced relaxation was reduced in CSM from ethanol-treated rats. Moreover, chronic ethanol consumption reduced plasma and CSM nitrate levels. These observations suggest that chronic ethanol consumption reduces NO synthesis/release but does not alter NO signaling pathway. Ethanol consumption increases plasma levels of ET-1 and the contractile response to this peptide in isolated CSM. Chronic ethanol consumption did not alter the contraction induced by phenylephrine or KCl 120mmol/L in isolated CSM strips. These observations suggest that the effects of chronic ethanol consumption on the CSM reactivity are nonspecific. BQ788, a selective ETB receptor antagonist, did not alter ET-1-induced contraction in CSM from both control and ethanol-treated rats. The relaxation induced by IRL1620, a selective ETB receptors agonist, was not affected by ethanol consumption. mRNA levels and protein expression for ETB receptor were not affected by ethanol consumption. We concluded that CSM hyper-reactivity to ET-1 is not related to reduction of ETB receptor-mediated relaxation. BQ123, a selective ETA receptor antagonist, shifted the concentration-response curve for ET-1 to the right in CSM from control rats. However, this response was not observed in CSM from ethanol group, indicating that the response mediated by the ETA receptor is favored after ethanol treatment. It was found that chronic ethanol consumption did not alter mRNA levels for the components of the endothelinergic system (ET-1, ECE-1, ETA and ETB receptors) and the isoforms of nitric oxide synthase (NOS) (eNOS, nNOS and iNOS), but increased protein expression for ETA receptor, ET-1 and iNOS. Ethanol induced systemic and cavernosal oxidative stress. Reactive oxygen species (ROS), metabolites derived from cyclooxygenase (COX) and NOS, modulate negatively ET-1-induced contraction and appear to be important mediators of ethanol-induced ET-1 hyper-reactivity in the isolated CSM. Y27632, a Rho-kinase inhibitor, reduced ET-1-induced contraction in CSM from both control and ethanol-treated rats. Our results show that chronic ethanol consumption increases ET-1 induced contraction in isolated CSM and that this response is mediated by the Rho-kinase pathway and an increase in ROS generation and ETA receptor expression.

A hiperhomocisteinemia (HHcy) tem sido associada à disfunção endotelial, em decorrência do aumento de ânion superóxido (O2-) e redução da biodisponibilidade de óxido nítrico (NO), fatos estes que poderiam acarretar disfunção erétil. O objetivo deste trabalho foi estudar as consequências da HHcy sobre as respostas à endotelina-1 (ET-1) e fenilefrina (PhE) em corpos cavernosos de ratos, bem como os mecanismos envolvidos. Os animais foram divididos em dois grupos, os quais receberam água (controle) ou DL-homocisteina tiolactona (DL-HcyT, grupo HHcy), na dose de 1 g/Kg/dia, via oral por 15 dias. Análises morfológicas, de colágeno e expressão de -actina não revelaram macroalterações na estrutura de corpos cavernosos de ratos HHcy, sugerindo que alterações na funcionalidade destes tecidos não decorrem de modificações estruturais. A HHcy acarretou aumento dos níveis de O2- em corpos cavernosos de ratos, avaliados por microscopia confocal. A reatividade vascular foi avaliada para KCl, nitroprussiato de sódio (NPS), acetilcolina (ACh), ET-1, IRL-1620 e PhE. Não foram observadas alterações na reatividade vascular para KCl ou NPS. O relaxamento induzido por ACh foi reduzido em corpos cavernosos de ratos HHcy. A contração induzida por ET-1, via receptores ETA, mostrou-se aumentada em corpos cavernosos de ratos HHcy, sugerindo possível envolvimento de O2- basais em vias intracelulares, decorrentes da ativação de receptores ETA. Observou-se prejuízo do relaxamento induzido por ET-1 e IRL-1620 em corpos cavernosos de ratos HHcy, por ativação de receptores ETB. O prejuízo do relaxamento induzido por IRL-1620 foi decorrente da produção e/ou biodisponibilidade reduzida de NO. A expressão de RNAm para pré-pró-ET-1, enzima conversora de ET-1 e receptores ETA e ETB não foram alteradas em decorrência da HHcy. O Emax da PhE foi aumentado em corpos cavernosos de ratos HHcy, em decorrência de aumento nos níveis basais de O2- e redução de fatores moduladores negativos da contração, tal como peróxido de hidrogênio (H2O2), sugerindo possível prejuízo da enzima superóxido dismutase. A participação de metabólitos derivados da isoformas da enzima óxido nítrico sintase (NOS), eNOS, nNOS e iNOS que modulam negativamente a contração da PhE, mostraram-se importantes nesta resposta. Na HHcy, os metabólitos derivados principalmente da iNOS estão prejudicados, possivelmente por redução da atividade da NOS, processo de desacoplamento e/ou redução da biodisponibilidade de NO por interação com espécies reativas de oxigênio (ERO), formando peróxinitrito. A expressão de nitrotirosina, indicador da presença de peroxinitrito, não foi alterada em corpos cavernosos de ratos HHcy. As dosagens plasmáticas de nitrato mostraram redução dos níveis de NO em ratos HHcy, sendo sugestivo de redução de sua biodisponibilidade. A HHcy não alterou a expressão de RNAm para eNOS, nNOS e iNOS em corpos cavernosos de ratos. Os metabólitos da enzima cicloxigenase-1 (COX-1) e COX-2 participam modulando negativamente a contração da PhE e a HHcy não alterou esta modulação. Concluindo, a HHcy intermediária, por sua capacidade de aumentar os níveis basais de O2-, pode afetar a função vasoativa, contração e relaxamento, do peptídeo ET-1, bem como aumentar a resposta de contração à PhE em decorrência de prejuízo de H2O2 e redução de metabólitos derivados da iNOS em corpos cavernosos de ratos. / Hyperhomocysteinemia (HHcy) has been associated with endothelial dysfunction, due to the increase in superoxide anion (O2-) and reduced bioavailability of nitric oxide (NO), these facts could result in erectile dysfunction. The objective of this work was to study the consequences of HHcy on the responses to endothelin-1 (ET-1) and phenylephrine (PhE) in rat corpus cavernosum, as well as the mechanisms involved. The animals were divided into two groups, which received water (control) or DL-homocysteine thiolactone (DL-HcyT; HHcy group) at a dose of 1 g/kg/day for 15 days orally. Morphological analysis and collagen and expression of -actin revealed no considerable alterations in the structure of the corpus cavernosum of HHcy rats, suggesting that alterations in the functionality of these tissues are not based on structural modifications. The HHcy resulted in increased levels of O2- in corpus cavernosum of rats, assessed by confocal microscopy. Vascular reactivity was assessed for substances KCl, sodium nitroprusside (SNP), acetylcholine (ACh), ET-1, IRL-1620 and PhE. There were no changes in vascular reactivity to KCl or NPS. The relaxation induced by ACh was reduced in HHcy rat corpus cavernosum. The contraction induced by ET-1, by ETA receptors, was increased in corpus cavernosum of HHcy rats, suggesting possible involvement of basal O2- in intracellular pathways by activation of ETA receptors. There was prejudice to the relaxation to ET-1 and IRL-1620 in HHcy rat corpus cavernosum by activation of ETB receptors. The decreased IRL-1620-induced relaxation was due to the reduced production and/or bioavailability of NO.The expression of mRNA for pre-pro-ET-1, endothelin converting enzyme and ETA and ETB receptors were not altered in HHcy. The Emax of PhE was increased in HHcy rat corpus cavernosum, due to increase in basal levels of O2- and reducing negative modulators factors of the contraction, such as hydrogen peroxide (H2O2), suggesting possible loss of the enzyme superoxide dismutase (SOD). The participation of metabolites derived from eNOS, nNOS and iNOS, that modulate negatively PhE-induced contraction appear to be important in this response. In HHcy, these metabolites, derived primary from iNOS, are damaged, possibly by reducing the activity of NOS, the process of decoupling and/or reduced bioavailability of NO by interaction with reactive oxidative species (ROS) to form peroxynitrite. The expression of nitrotyrosine, inidicador the presence of peroxynitrite, was not altered in HHcy rat corpus cavernosum. Plasma levels of nitrate showed reduced levels of NO in HHcy rats, being suggestive of reduced bioavailability. The HHcy did not alter the expression of mRNA for eNOS, iNOS and nNOS in rat corpus cavernosum. The metabolites of the enzyme cyclooxygenase-1 (COX-1) and COX-2 participate negatively modulating the contraction of PhE and HHcy does not seem to change this modulation. In conclusion, intermediate HHcy, by its ability to increase basal levels of O2-, may affect the vasoactive function, contraction and relaxation of ET-1 peptide, as well as increase the contraction induced by PhE due to decrease of H2O2 and reduced of the metabolites derived from iNOS in rat corpus cavernosum.

Introdução: A ereção peniana é um processo neurovascular complexo dependente do relaxamento da musculatura lisa dos corpos cavernosos. O etanol exerce diversos efeitos na atividade sexual masculina e a disfunção sexual induzida pelo etanol é causada pelo seu efeito no sistema nervoso central, principalmente pela sua ingestão aguda e crônica. Foi demonstrado que o etanol afeta significativamente tanto a contração quanto o relaxamento da musculatura lisa dos corpos cavernosos. Os relatos da ocorrência do mecanismo de apoptose nos corpos cavernosos estão associados à denervação, à castração e a doenças crônicas como o diabetes. Poucos são os estudos morfológicos sobre o efeito do etanol no tecido cavernoso; porém, não são descritos trabalhos relacionando as alterações morfológicas causadas pelo etanol no tecido cavernoso, a eventos moleculares e sua relação com o mecanismo de apoptose celular. Objetivos: avaliar e comparar o efeito do alcoolismo na morfometria e no mecanismo de apoptose dos corpos cavernosos de ratos submetidos a modelo de alcoolismo crônico. Material e métodos: Foram utilizados 24 ratos Wistar divididos em dois grupos: controle (C) e tratado com etanol (A) a 20% durante sete semanas. As amostras dos corpos cavernosos foram preparadas para o estudo morfométrico pela coloração de tricrômico de Masson, para o estudo da expressão protéica de CASPASE 3 (pró-apoptótica) por imunohistoquímica e para o estudo da expressão gênica sérica e no tecido cavernoso do miRNA-21 (anti-apoptótico). Resultados: O estudo morfométrico mostrou principalmente diminuição de fibras musculares lisas dos corpos cavernosos nos animais do grupo A. Também foi observado aumento significativo na expressão de CASPASE 3 nos animais do grupo A e baixa expressão gênica sérica e no tecido cavernoso do miRNA-21 nos grupos C e A. Conclusões: A análise morfométrica correspondente à área ocupada pelas fibras musculares lisas dos corpos cavernosos nos animais do grupo A mostrou correlação com os locais de maior expressão protéica de CASPASE 3 e, portanto, de apoptose. Neste estudo, a morte celular por apoptose não foi suprimida pela expressão do miRNA-21. / Introduction: Penile erection is a complex neurovascular process dependent smooth muscle relaxation in the corpus cavernosum. Ethanol exerts different effects on male sexual activity and sexual dysfunction induced by ethanol is caused by its effect on the central nervous system, primarily for its acute and chronic ingestion. Ethanol has been shown to significantly affect both the contraction and the relaxation of smooth muscle of the corpus cavernosum. The reports of the occurrence of the apoptosis mechanism in the corpus cavernosum are associated with denervation, castration and chronic diseases like diabetes. There are few morphological studies on the effect of ethanol in the cavernous tissue, but are not described studies correlating morphological changes caused by ethanol in the cavernous tissue, the molecular events and their relation to the mechanism of apoptosis. Objectives: To evaluate and compare the effect of alcoholism in the morphometry and mechanism of apoptosis in the corpus cavernosum of rats subjected to chronic alcoholism model. Material and methods: 24 Wistar rats were divided into two groups: Control (C) and treated with ethanol (A) diluted 20% for seven weeks. Samples of the corpus cavernosum were prepared for morphometric study by Masson\'s trichrome stain, study for protein expression of CASPASE 3 (pro-apoptotic) by immunohistochemistry and study for gene expression of miRNA-21 (anti-apoptotic) in serum and the cavernous tissue. Results: The morphometric study primarily showed a decrease in smooth muscle cells of the corpus cavernosum in group A. Significant increase for expression of CASPASE 3 in group A and low gene expression of miRNA-21 was also observed in serum and the cavernous tissue in groups C and A. Conclusions: The morphometric analysis corresponding to the area occupied by smooth muscle cells of the corpus cavernosum in group A showed correlation with the sites of increased protein expression of CASPASE 3 and thus apoptosis. In this study, cell death by apoptosis was not suppressed by the expression of miRNA-21.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / IntroduÃÃo: Cerca de 52% dos homens na faixa etÃria entre 40 e 70 anos sofrem de disfunÃÃo erÃtil (DE). A ioimbina (IOI), um inibidor adrenÃrgico &#945;2, vem sendo usada no tratamento da DE hà dÃcadas, e ainda tem as suas indicaÃÃes, porÃm seu mecanismo de aÃÃo ainda permanece obscuro. A maior parte dos estudos com IOI foi realizada em corpos cavernosos e aorta de ratos e coelhos, devido à dificuldade de se obter tecido humano. O objetivo deste estudo à definir o mecanismo de aÃÃo nÃo-adrenÃrgico nÃo-colinÃgico da IOI, avaliando a via nitrÃrgica e a via dos canais iÃnicos no mÃsculo liso de corpo cavernoso humano. MÃtodos: Os corpos cavernosos foram retirados de 13 doadores cadÃveres masculinos (idade 18-53 anos), durante cirurgia pra retirada de ÃrgÃos para transplante, seguindo os protocolos de doaÃÃo de tecidos. As tiras de mÃsculo cavernoso humano foram montadas verticalmente em paralelo, em banho de registro isomÃtrico em soluÃÃo de KHS (pH 7,4, a 37ÂC), constantemente aerada (O2-95% e CO2-5%). Foram realizadas curvas dose-resposta com IOI (10-12 â10-4 M) em tiras de corpos cavernosos de humanos prÃ-contraÃdas com fenilefrina (10 ÂM) e com soluÃÃo despolarizante rica em potÃssio (60 mM de K+), em associaÃÃo com inibidores da via nitrÃrgica e da via de canais iÃnicos (Na+, K+ e Cl-), para estudo das vias NANC. Resultados: A IOI obteve relaxamento importante das tiras de corpo cavernoso humano in vitro na dose 10-4 M. ApÃs prÃ-contraÃÃo com fenilefrina (10 ÂM), as tiras submetidas à IOI nesta dose, relaxaram 95,8%, e quando a prÃ-contraÃÃo foi realizada com soluÃÃo despolarizante rica em K+ (60 mM de K+), Ca++ (2 mM), contendo 10 ÂM guanetidina (simpatolÃtico quÃmico) e 10 ÂM fentolamina (bloqueador &#945;-adrenÃrgico), o relaxamento foi de 69,5% (p<0,05). A IOI (10-4M), apÃs prÃ-contraÃÃo com fenilefrina (10 ÂM), e na presenÃa de 7- NI (10ÂM) e do L-NAME (100ÂM) (bloqueadores das enzimas Ãxido nÃtrico sintetases constitutivas (nNOS e eNOS, respectivamente)) e do ODQ (inibidor da enzima guanilato ciclase solÃvel - 10ÂM) proporcionou relaxamento do mÃsculo cavernoso humano de 57,4%; 55,5%; 62,99%; respectivamente (p<0,05). Em associaÃÃo com TTX (Tetrodotoxina - bloqueador do canal de sÃdio neuronal - 100ÂM), TEA (tetraetilamonio - bloqueador de canais de potÃssio voltagem-dependentes ativados por cÃlcio - 100ÂM), e com apamina + charybdotoxina (inibidores dos canais de potÃssio ativados por cÃlcio de baixa, mÃdia e alta condutÃncia -0,1ÂM + 1ÂM), obteu-se relaxamento de 56,4%; 100%; 100% respectivamente (p>0,05). Jà com a glibenclamida (inibidor dos canais de KATP e de Cl- - 10ÂM), proporcionou relaxamento de 71,1% (p<0,05). ConclusÃo: Os resultados dos estudos farmacolÃgicos sugerem que a IOI relaxa o corpo cavernoso de humano por mecanismo outro que nÃo o seu bloqueio adrenÃrgico, possivelmente ativando a via nitrÃrgica, e via canais de KATP e de CL- (NO â GUANILATO CICLASE â GMPc â canais de KATP e de cloreto). A IOI nÃo age via canais de Na+, e nem atua via canais de potÃssio voltagem-dependentes ativados por cÃlcio, como tambÃm nÃo age nos canais de potÃssio ativados por cÃlcio de baixa, mÃdia e alta condutÃncia. Palavras-chave: ioimbina, corpo cavernoso, disfunÃÃo erÃtil, canais de K+. / Introduction: About 52% of men aged between 40 and 70 years old suffer with erectile dysfunction (ED). Yohimbine (YOH), an &#945;2-adrenergic blocker, has been used for ED treatment for several decades, and it still has its indications. However its mechanism of action still remains obscure. Most of the studies with YOH were made with corpus cavernosum and aorta of rats and rabbits, due to the difficulty of getting human tissue. The aim of this study is to define the non-cholinergic non-adrenergic mechanism of action of the YOH, evaluating the nitrergic pathway and the role of the ionic channels in the human cavernosum smooth muscle. Methods: The corpus cavernosum were removed from 13 male cadavers donors (18-53 years old), during surgery for removing of organs for transplant, following the national protocols for organs donation. The strips of human cavernosum muscle were vertically settled in parallel, in isometric register bath in KHS solution (pH 7,4, at 37ÂC), constantly gassed with (O2-95% and CO2-5%). Curves dose-reply were performed with IOI (10-12 - 10-4 M) in strips of human corpus cavernosum beings pre-contracted with phenilefrine (10 ÂM) and with rich depolarizing solution in potassium (60 mM of K+), in association with nitrergic and ionic channels inhibitors (Na+, K+ and Cl-), for study of NANC ways. Results: The YOH provided an important relaxation for the strips of in vitro human corpus cavernosum under the dose of 10-4 M. After pre-contraction with phenilefrine (10 ÂM), the strips submitted to the YOH in this dose, got relaxed 95.8%, and when the pre-contraction was made with rich depolarizing K+ solution (60 mM of K+), Ca++ (2 mM), containing 10 ÂM guanethidine (chemical simpatolitic) e 10ÂM phentolamine (&#945;-adrenergic blocker), the relaxation was of 69,5% (p<0,05). The YOH (10-4M), after pre-contraction with fenilefrina (10 ÂM), under the presence of 7-NI (10 ÂM) and of L-NAME (100 ÂM) (nitric oxide synthases inhibitors (nNOS and eNOS, respectively)), and of the ODQ (soluble guanylate cyclase enzyme inhibitor â 10 ÂM) provided relaxation of the human cavernosum muscle of 57,4%; 55.5%; 62.99%; respectively (p<0,05). In association with TTX (Tetrodotoxina - neuronal sodium channel inhibitor â 100 ÂM), TEA (tetraetilamonio - potassium channels voltage-dependents activated by calcium blocker â 100 ÂM), and with apamina + charybdotoxina (potassium channels activated by calcium blocker of low and high conductance - 0,1 ÂM + 1 ÂM), we got a relaxation of 56,4%; 100%; 100% respectively (p>0,05). With the glibenclamida (KATP and Cl- channels blocker â 10 ÂM), we got a 71,1% relaxation (p<0,05). Conclusion: The pharmacologic studies results suggest that the YOH relaxes the human corpus cavernosum by another mechanism different of his adrenergic blockade, possibly activating the nitrergic pathway, and through Cl- and KATP channels (NO - GUANILATO CICLASE - GMPc - chloride and KATP channels). The YOH doesnât act through Na+ channels, and doesnât act through potassium channels voltage-dependents activated by calcium, as well as it doesnât act in the K+ channels activated by calcium of low and high conductance.

A hiperhomocisteinemia (HHcy) tem sido associada à disfunção endotelial, em decorrência do aumento de ânion superóxido (O2-) e redução da biodisponibilidade de óxido nítrico (NO), fatos estes que poderiam acarretar disfunção erétil. O objetivo deste trabalho foi estudar as consequências da HHcy sobre as respostas à endotelina-1 (ET-1) e fenilefrina (PhE) em corpos cavernosos de ratos, bem como os mecanismos envolvidos. Os animais foram divididos em dois grupos, os quais receberam água (controle) ou DL-homocisteina tiolactona (DL-HcyT, grupo HHcy), na dose de 1 g/Kg/dia, via oral por 15 dias. Análises morfológicas, de colágeno e expressão de -actina não revelaram macroalterações na estrutura de corpos cavernosos de ratos HHcy, sugerindo que alterações na funcionalidade destes tecidos não decorrem de modificações estruturais. A HHcy acarretou aumento dos níveis de O2- em corpos cavernosos de ratos, avaliados por microscopia confocal. A reatividade vascular foi avaliada para KCl, nitroprussiato de sódio (NPS), acetilcolina (ACh), ET-1, IRL-1620 e PhE. Não foram observadas alterações na reatividade vascular para KCl ou NPS. O relaxamento induzido por ACh foi reduzido em corpos cavernosos de ratos HHcy. A contração induzida por ET-1, via receptores ETA, mostrou-se aumentada em corpos cavernosos de ratos HHcy, sugerindo possível envolvimento de O2- basais em vias intracelulares, decorrentes da ativação de receptores ETA. Observou-se prejuízo do relaxamento induzido por ET-1 e IRL-1620 em corpos cavernosos de ratos HHcy, por ativação de receptores ETB. O prejuízo do relaxamento induzido por IRL-1620 foi decorrente da produção e/ou biodisponibilidade reduzida de NO. A expressão de RNAm para pré-pró-ET-1, enzima conversora de ET-1 e receptores ETA e ETB não foram alteradas em decorrência da HHcy. O Emax da PhE foi aumentado em corpos cavernosos de ratos HHcy, em decorrência de aumento nos níveis basais de O2- e redução de fatores moduladores negativos da contração, tal como peróxido de hidrogênio (H2O2), sugerindo possível prejuízo da enzima superóxido dismutase. A participação de metabólitos derivados da isoformas da enzima óxido nítrico sintase (NOS), eNOS, nNOS e iNOS que modulam negativamente a contração da PhE, mostraram-se importantes nesta resposta. Na HHcy, os metabólitos derivados principalmente da iNOS estão prejudicados, possivelmente por redução da atividade da NOS, processo de desacoplamento e/ou redução da biodisponibilidade de NO por interação com espécies reativas de oxigênio (ERO), formando peróxinitrito. A expressão de nitrotirosina, indicador da presença de peroxinitrito, não foi alterada em corpos cavernosos de ratos HHcy. As dosagens plasmáticas de nitrato mostraram redução dos níveis de NO em ratos HHcy, sendo sugestivo de redução de sua biodisponibilidade. A HHcy não alterou a expressão de RNAm para eNOS, nNOS e iNOS em corpos cavernosos de ratos. Os metabólitos da enzima cicloxigenase-1 (COX-1) e COX-2 participam modulando negativamente a contração da PhE e a HHcy não alterou esta modulação. Concluindo, a HHcy intermediária, por sua capacidade de aumentar os níveis basais de O2-, pode afetar a função vasoativa, contração e relaxamento, do peptídeo ET-1, bem como aumentar a resposta de contração à PhE em decorrência de prejuízo de H2O2 e redução de metabólitos derivados da iNOS em corpos cavernosos de ratos. / Hyperhomocysteinemia (HHcy) has been associated with endothelial dysfunction, due to the increase in superoxide anion (O2-) and reduced bioavailability of nitric oxide (NO), these facts could result in erectile dysfunction. The objective of this work was to study the consequences of HHcy on the responses to endothelin-1 (ET-1) and phenylephrine (PhE) in rat corpus cavernosum, as well as the mechanisms involved. The animals were divided into two groups, which received water (control) or DL-homocysteine thiolactone (DL-HcyT; HHcy group) at a dose of 1 g/kg/day for 15 days orally. Morphological analysis and collagen and expression of -actin revealed no considerable alterations in the structure of the corpus cavernosum of HHcy rats, suggesting that alterations in the functionality of these tissues are not based on structural modifications. The HHcy resulted in increased levels of O2- in corpus cavernosum of rats, assessed by confocal microscopy. Vascular reactivity was assessed for substances KCl, sodium nitroprusside (SNP), acetylcholine (ACh), ET-1, IRL-1620 and PhE. There were no changes in vascular reactivity to KCl or NPS. The relaxation induced by ACh was reduced in HHcy rat corpus cavernosum. The contraction induced by ET-1, by ETA receptors, was increased in corpus cavernosum of HHcy rats, suggesting possible involvement of basal O2- in intracellular pathways by activation of ETA receptors. There was prejudice to the relaxation to ET-1 and IRL-1620 in HHcy rat corpus cavernosum by activation of ETB receptors. The decreased IRL-1620-induced relaxation was due to the reduced production and/or bioavailability of NO.The expression of mRNA for pre-pro-ET-1, endothelin converting enzyme and ETA and ETB receptors were not altered in HHcy. The Emax of PhE was increased in HHcy rat corpus cavernosum, due to increase in basal levels of O2- and reducing negative modulators factors of the contraction, such as hydrogen peroxide (H2O2), suggesting possible loss of the enzyme superoxide dismutase (SOD). The participation of metabolites derived from eNOS, nNOS and iNOS, that modulate negatively PhE-induced contraction appear to be important in this response. In HHcy, these metabolites, derived primary from iNOS, are damaged, possibly by reducing the activity of NOS, the process of decoupling and/or reduced bioavailability of NO by interaction with reactive oxidative species (ROS) to form peroxynitrite. The expression of nitrotyrosine, inidicador the presence of peroxynitrite, was not altered in HHcy rat corpus cavernosum. Plasma levels of nitrate showed reduced levels of NO in HHcy rats, being suggestive of reduced bioavailability. The HHcy did not alter the expression of mRNA for eNOS, iNOS and nNOS in rat corpus cavernosum. The metabolites of the enzyme cyclooxygenase-1 (COX-1) and COX-2 participate negatively modulating the contraction of PhE and HHcy does not seem to change this modulation. In conclusion, intermediate HHcy, by its ability to increase basal levels of O2-, may affect the vasoactive function, contraction and relaxation of ET-1 peptide, as well as increase the contraction induced by PhE due to decrease of H2O2 and reduced of the metabolites derived from iNOS in rat corpus cavernosum.

A endotelina-1 (ET-1) é um peptídeo vasoconstritor que exerce um papel importante no controle do tônus do corpo cavernoso. No entanto, tem sido demonstrado que esse peptídeo também está envolvido na disfunção erétil (DE) associada ao diabetes mellitus e hipertensão. O consumo de etanol aumenta os níveis plasmáticos de ET-1 e a resposta contrátil a esse peptídeo em tecidos vasculares. Os objetivos deste trabalho foram o de estudar as consequências funcionais e celulares do consumo crônico de etanol sobre o sistema endotelinérgico no corpo cavernoso e identificar os mediadores envolvidos nessa resposta. Ratos Wistar foram divididos em dois grupos, os quais receberam água (controle) ou solução de etanol a 20% (vol./vol.) por seis semanas. Nossos resultados mostram que em tiras de tecido cavernoso, não houve alteração da resposta de relaxamento induzida pela adrenomedulina e nitroprussiato de sódio após tratamento com etanol. Com relação à acetilcolina, o consumo crônico de etanol reduziu o relaxamento induzido pelo referido agonista. Além disso, observou-se redução dos níveis plasmáticos e teciduais de nitrato no grupo etanol. Em conjunto, esses resultados sugerem que o tratamento crônico com etanol reduz a síntese/liberação do NO tecidual sem prejuízo em sua via de sinalização. O tratamento com etanol aumentou os níveis plasmáticos de ET-1 e a resposta contrátil induzida por esse peptídeo em corpo cavernoso de ratos. A contração induzida pela fenilefrina ou KCl 120 mmol/L não foi afetada pelo tratamento com etanol, sugerindo que os efeitos do tratamento sobre a reatividade do corpo cavernoso não são inespecíficos. O antagonista dos receptores ETB, o BQ788, não alterou a resposta de contração induzida pela ET-1 em corpo cavernoso de animais do grupo controle ou etanol. Não houve alteração da resposta de relaxamento induzida pelo IRL1620, um agonista seletivo dos receptores ETB. O tratamento com etanol não alterou os níveis de RNAm assim como a expressão protéica dos receptores ETB. Esses resultados mostram que o aumento da contração induzida pela ET-1 após tratamento com etanol não está relacionado à redução do relaxamento mediado pelos receptores ETB. Em nosso estudo o BQ123, antagonista seletivo dos receptores ETA, deslocou a curva cumulativa para ET-1 para direita em músculo cavernoso de ratos do grupo controle com consequente redução do valor de pD2. O mesmo não foi observado no tecido de animais do grupo etanol, indicando que a resposta mediada pelos receptores ETA está favorecida após o tratamento. O consumo de etanol não afetou os níveis de RNAm dos componentes do sistema endotelinérgico (ET-1, ECE-1, receptores ETA e ETB) e das isoformas da enzima óxido nítrico sintase (NOS) (eNOS, nNOS e iNOS), porém aumentou a expressão protéica do receptor ETA, da ET-1 e da iNOS no músculo cavernoso. O tratamento com etanol induziu aumento do estresse oxidativo sistêmico assim como dos níveis de ânions superóxido (O2-) no corpo cavernoso. As espécies reativas de oxigênio (ERO), os metabólitos derivados da NOS e da ciclooxigenase (COX) modulam negativamente a contração induzida por ET-1 e mostraram-se importantes no aumento da contração à ET-1 observada no corpo cavernoso de animais tratados com etanol. O Y27632, um inibidor da Rho-cinase, reduziu a resposta contrátil da ET-1 em corpo cavernoso de animais de ambos os grupos. Portanto, os resultados mostram que o tratamento com etanol aumenta a resposta contrátil da ET-1 por mecanismos que envolvem o aumento da expressão dos receptores ETA e das ERO e a via da Rho-cinase. / Endothelin-1 (ET-1) is a vasoconstrictor peptide that plays an important role in controlling the tone of the cavernosal smooth muscle (CSM). ET-1 is also involved in erectile dysfunction (ED) associated with diabetes mellitus and hypertension. Ethanol consumption increases plasma levels of ET-1 and the contractile response to this peptide in vascular tissues. This study aimed to investigate the cellular and functional consequences of chronic ethanol consumption on the endothelinergic system in CSM as well as the mediators involved in this response. Male Wistar rats were treated with ethanol 20% (vol./vol.) for 6 weeks. Reactivity experiments were performed on isolated CSM. Our findings show that adrenomedullin and sodium nitroprusside-induced relaxation was not altered after treatment with ethanol. On the other hand, acetylcholine-induced relaxation was reduced in CSM from ethanol-treated rats. Moreover, chronic ethanol consumption reduced plasma and CSM nitrate levels. These observations suggest that chronic ethanol consumption reduces NO synthesis/release but does not alter NO signaling pathway. Ethanol consumption increases plasma levels of ET-1 and the contractile response to this peptide in isolated CSM. Chronic ethanol consumption did not alter the contraction induced by phenylephrine or KCl 120mmol/L in isolated CSM strips. These observations suggest that the effects of chronic ethanol consumption on the CSM reactivity are nonspecific. BQ788, a selective ETB receptor antagonist, did not alter ET-1-induced contraction in CSM from both control and ethanol-treated rats. The relaxation induced by IRL1620, a selective ETB receptors agonist, was not affected by ethanol consumption. mRNA levels and protein expression for ETB receptor were not affected by ethanol consumption. We concluded that CSM hyper-reactivity to ET-1 is not related to reduction of ETB receptor-mediated relaxation. BQ123, a selective ETA receptor antagonist, shifted the concentration-response curve for ET-1 to the right in CSM from control rats. However, this response was not observed in CSM from ethanol group, indicating that the response mediated by the ETA receptor is favored after ethanol treatment. It was found that chronic ethanol consumption did not alter mRNA levels for the components of the endothelinergic system (ET-1, ECE-1, ETA and ETB receptors) and the isoforms of nitric oxide synthase (NOS) (eNOS, nNOS and iNOS), but increased protein expression for ETA receptor, ET-1 and iNOS. Ethanol induced systemic and cavernosal oxidative stress. Reactive oxygen species (ROS), metabolites derived from cyclooxygenase (COX) and NOS, modulate negatively ET-1-induced contraction and appear to be important mediators of ethanol-induced ET-1 hyper-reactivity in the isolated CSM. Y27632, a Rho-kinase inhibitor, reduced ET-1-induced contraction in CSM from both control and ethanol-treated rats. Our results show that chronic ethanol consumption increases ET-1 induced contraction in isolated CSM and that this response is mediated by the Rho-kinase pathway and an increase in ROS generation and ETA receptor expression.

Introdução: A ereção peniana é um processo neurovascular complexo dependente do relaxamento da musculatura lisa dos corpos cavernosos. O etanol exerce diversos efeitos na atividade sexual masculina e a disfunção sexual induzida pelo etanol é causada pelo seu efeito no sistema nervoso central, principalmente pela sua ingestão aguda e crônica. Foi demonstrado que o etanol afeta significativamente tanto a contração quanto o relaxamento da musculatura lisa dos corpos cavernosos. Os relatos da ocorrência do mecanismo de apoptose nos corpos cavernosos estão associados à denervação, à castração e a doenças crônicas como o diabetes. Poucos são os estudos morfológicos sobre o efeito do etanol no tecido cavernoso; porém, não são descritos trabalhos relacionando as alterações morfológicas causadas pelo etanol no tecido cavernoso, a eventos moleculares e sua relação com o mecanismo de apoptose celular. Objetivos: avaliar e comparar o efeito do alcoolismo na morfometria e no mecanismo de apoptose dos corpos cavernosos de ratos submetidos a modelo de alcoolismo crônico. Material e métodos: Foram utilizados 24 ratos Wistar divididos em dois grupos: controle (C) e tratado com etanol (A) a 20% durante sete semanas. As amostras dos corpos cavernosos foram preparadas para o estudo morfométrico pela coloração de tricrômico de Masson, para o estudo da expressão protéica de CASPASE 3 (pró-apoptótica) por imunohistoquímica e para o estudo da expressão gênica sérica e no tecido cavernoso do miRNA-21 (anti-apoptótico). Resultados: O estudo morfométrico mostrou principalmente diminuição de fibras musculares lisas dos corpos cavernosos nos animais do grupo A. Também foi observado aumento significativo na expressão de CASPASE 3 nos animais do grupo A e baixa expressão gênica sérica e no tecido cavernoso do miRNA-21 nos grupos C e A. Conclusões: A análise morfométrica correspondente à área ocupada pelas fibras musculares lisas dos corpos cavernosos nos animais do grupo A mostrou correlação com os locais de maior expressão protéica de CASPASE 3 e, portanto, de apoptose. Neste estudo, a morte celular por apoptose não foi suprimida pela expressão do miRNA-21. / Introduction: Penile erection is a complex neurovascular process dependent smooth muscle relaxation in the corpus cavernosum. Ethanol exerts different effects on male sexual activity and sexual dysfunction induced by ethanol is caused by its effect on the central nervous system, primarily for its acute and chronic ingestion. Ethanol has been shown to significantly affect both the contraction and the relaxation of smooth muscle of the corpus cavernosum. The reports of the occurrence of the apoptosis mechanism in the corpus cavernosum are associated with denervation, castration and chronic diseases like diabetes. There are few morphological studies on the effect of ethanol in the cavernous tissue, but are not described studies correlating morphological changes caused by ethanol in the cavernous tissue, the molecular events and their relation to the mechanism of apoptosis. Objectives: To evaluate and compare the effect of alcoholism in the morphometry and mechanism of apoptosis in the corpus cavernosum of rats subjected to chronic alcoholism model. Material and methods: 24 Wistar rats were divided into two groups: Control (C) and treated with ethanol (A) diluted 20% for seven weeks. Samples of the corpus cavernosum were prepared for morphometric study by Masson\'s trichrome stain, study for protein expression of CASPASE 3 (pro-apoptotic) by immunohistochemistry and study for gene expression of miRNA-21 (anti-apoptotic) in serum and the cavernous tissue. Results: The morphometric study primarily showed a decrease in smooth muscle cells of the corpus cavernosum in group A. Significant increase for expression of CASPASE 3 in group A and low gene expression of miRNA-21 was also observed in serum and the cavernous tissue in groups C and A. Conclusions: The morphometric analysis corresponding to the area occupied by smooth muscle cells of the corpus cavernosum in group A showed correlation with the sites of increased protein expression of CASPASE 3 and thus apoptosis. In this study, cell death by apoptosis was not suppressed by the expression of miRNA-21.