O mecônio é uma matéria fecal que começa a acumular no intestino do feto por volta do terceiro mês de gestação e normalmente é eliminado nos primeiros dias de vida do recém nascido. No mecônio ocorre o acúmulo de substâncias com as quais a mãe entrou em contato durante o período de gestação e, portanto, sendo possível avaliar a exposição fetal. Nos casos de mães fumantes, compostos presentes no tabaco tais como nicotina e substâncias que são formadas após a metabolização da nicotina como por exemplo a cotinina, podem ser também detectadas nas amostras de mecônio, já que ocorre o acúmulo de nicotina e seus metabólitos no mesmo. O uso do cigarro durante o período gestacional acarreta em uma série de problemas ao feto como baixo peso ao nascer, parto pré-maturo, doenças no trato respiratório, dentre outros. Nos dias atuais é possível fazer a pesquisa de drogas lícitas e ilícitas em várias amostras biológicas tais como, sangue, urina, cabelo, fluido oral, mecônio, entre outras. O mecônio é uma boa opção, por vários motivos: amostragem fácil e não invasiva (a coleta pode ser feita na fralda), indica o histórico do uso de substâncias pela mãe durante a gestação por ser cumulativo, etc. O objetivo foi desenvolver e validar um método analítico empregando cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas para a determinação de nicotina e, seu metabólito, cotinina em amostras de mecônio coletadas de recém nascidos. Para o desenvolvimento do método foi utilizado 0,5g de mecônio e os analitos foram extraídos com metanol e em seguida a amostra foi submetida a purificação através da extração em fase sólida utilizando cartuchos Bond Elut Certify I. O método foi validado de acordo com os parâmetros estabelecidos pela ANVISA e demonstrou linearidade de 160 1600 ng/g para nicotina e de 160 1000 ng/g para cotinina. Os limites de detecção estabelecidos foram de 10 ng/g para nicotina e 60 ng/g para cotinina, enquanto os limites de quantificação foram de 60 ng/g para nicotina e 100 ng/g para cotinina. A exatidão apresentou valores de 91,73% a 103,73%, a precisão intra-ensaio variou entre 3,21% a 10,86%, e a precisão inter-ensaio obteve valores entre 4,91% a 9,88%. O método validado foi aplicado em amostras de mecônio coletadas no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (HCFMRP-USP). / Meconium is a fecal matter passed by the newborn after birth. It begins to form around the 3th month of gestation and accumulates in the fetus until birth. Substances which the mothers had contact during the gestation period may accumulate in meconium and, therefore, its possible to assess fetal exposure. Substances from the tobacco smoke, like nicotine and its metabolite cotinine, also accumulates in the meconium and can be detected .Maternal smoking during pregnancy is hazardous to the fetus and it is associated with low birth weight, prematurity, respiratory tract infections and others. Nowadays it is possible to assess licit and illicit drugs in several biological samples like blood, urine, hair, oral fluid, meconium and others. Meconium is the best choice because its easy to collect and its noninvasive, indicates a history of substances use by the mother in the latter half of pregnancy, etc. The purpose of this study was to develop and validate a methodology using gas chromatography-mass spectrometry to assess nicotine and cotinine in meconium samples collected from newborns. To the development of the methodology 0,5g of meconium was used per assay and the analytes were extracted from the matrix using methanol. Then, a solid phase extraction was applied using Bond Elut Certify I cartridges. The methodology was validated in the range of 160 1600 ng/g for nicotine and 160 - 1000 ng/g for cotinine. The limit of detection established was 10 ng/g for nicotine and 60 ng/g for cotinine, while the limit of quantification was 60 ng/g for nicotine and 100 ng/g for cotinine. The accuracy showed values between 91,73% and 103,73%, the intra-assay precision between 3,21% and 10,86% and the inter-assay precision between 4,91% and 9,88%. The validated methodology was applied to analysis of meconium samples collected from newborns in the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (HCFMRP-USP).

Tobacco and alcohol are often co-abused. Nicotine can enhance alcoholic fatty liver, and CYP2A6 (CYP2A5 in mice), a major metabolism enzyme for nicotine, can be induced by alcohol. CYP2A5 knockout (cyp2a5−/−) mice and their littermates (cyp2a5+/+) were used to test whether CYP2A5 has an effect on nicotine-enhanced alcoholic fatty liver. The results showed that alcoholic fatty liver was enhanced by nicotine in cyp2a5+/+ mice but not in the cyp2a5−/− mice. Combination of ethanol and nicotine increased serum triglyceride in cyp2a5+/+ mice but not in the cyp2a5−/− mice. Cotinine, a major metabolite of nicotine, also enhanced alcoholic fatty liver, which was also observed in cyp2a5+/+ mice but not in the cyp2a5−/− mice. Nitrotyrosine and malondialdehyde (MDA), markers of oxidative/nitrosative stress, were induced by alcohol and were further increased by nicotine and cotinine in cyp2a5+/+ mice but not in the cyp2a5−/− mice. Reactive oxygen species (ROS) production during microsomal metabolism of nicotine and cotinine was increased in microsomes from cyp2a5+/+ mice but not in microsomes from cyp2a5−/− mice. These results suggest that nicotine enhances alcoholic fatty liver in a CYP2A5-dependent manner, which is related to ROS produced during the process of CYP2A5-dependent nicotine metabolism.

O uso de drogas por mulheres em idade reprodutiva é considerado um grave problema de saúde pública mundial. O mecônio é a primeira excreção do recém-nascido e tem sido utilizado como uma matriz alternativa em análises toxicológicas. A extração em fase sólida (SPE) é um método amplamente utilizado para a purificação e concentração dos analitos em amostras biológicas no campo da análise forense. A maioria dos produtos de SPE convencionais requerem volumes relativamente grandes de solventes levando a um custo acrescido por amostra e um aumento no tempo de processamento da amostra. As ponteiras de extração com fase sólida modificada (DPX) foram utilizadas como uma alternativa aos cartuchos SPE tradicionais. A técnica combina eficiência e rapidez no procedimento de extração, com redução significativa no consumo de solvente e na quantidade de amostra. O objetivo desse estudo foi desenvolver e validar um método para a determinação de nicotina, cotinina, cocaína, benzoilecgonina, cocaetileno e éster metil anidroecgonina em amostras de mecônio usando DPX e cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC/MS). Os resultados da validação indicaram uma extração eficiente, exata e precisa, com recuperação entre 50-98%, exatidão entre 92-106%, precisão intra-ensaio 4-12% e precisão inter-ensaio 6 a 12%. As curvas de calibração foram lineares com valores de R2 superiores a 0,99; os limites de detecção (LOD) variaram entre 2,5-15 ng/g e os limites de quantificação (LOQ) entre 10-20 ng/g. O método DPX-GC/MS mostrou ser eficaz para análise traços de drogas presentes em amostras de mecônio. Após desenvolvimento e validação, o método foi aplicado em 50 amostras de mecônio coletadas no berçário da Maternidade do Complexo Aeroporto (MATER) na cidade de Ribeirão Preto - São Paulo, Brasil. / Drug abuse by pregnant women is considered a serious public health problem worldwide. Meconium is the first excretion in newborns and has been used as an alternative matrix to evaluate in utero drug exposure. Solid phase extraction (SPE) is widely employed to prepare and cleanup samples in the field of forensic analysis. Most SPE products require large volumes of solvent, which culminates in longer sample processing times; increased cost per sample and higher limits of detection. Disposable Pipette Extraction tips (DPX) have been used as an alternative to traditional SPE cartridges. They combine efficient and rapid extraction with reduced solvent consumption. The purpose of this study was to develop and validate a method to determine nicotine, cotinine, cocaine, benzoylecgonine, cocaethylene and methyl ester anhydroecgonine in meconium using DPX and GC/MS. Validation results indicated extraction efficiency, ranged between 50-98%, accuracy 92-106%, intra-assay precision 4-12% and inter-assay precision 6 to 12%. Linear calibration curves resulted in R2 values greater than 0.99; limits of detection ranged from 2.5 - 15 ng/g and the limit of quantitation from 10 - 20 ng/g. The DPX-GC/MS method provided to selectively analyze trace concentrations of drugs in meconium samples. Finally, the developed and validated method was applied to 50 meconium samples collected at the nursery of Maternidade do Complexo Aeroporto (MATER) in the city of Ribeirão Preto - São Paulo, Brazil.

Passive smoking has been recognised as a health hazard, and chidren are especially vulnerable. The general aim of this thesis was to describe and analyse the importance of parents’ smoking and smoking behaviour for children’s tobacco smoke exposure. The studies were conducted in the South-East part of Sweden and pre-school children and their parents constituted the study samples. Five studies are described in six papers. Smoking prevalence among parents (14%) and commonly used measures of protection were surveyed. An instrument designed to measure children’s tobacco smoke exposure in the home was developed and validated. It was used on 687 families with a smoking parent and a child 2½-3 years old, included in a prospective cohort study on environmental variables of importance for immun-mediated diseases ABIS (All Babies in South-East Sweden). Almost 60% of the parents stated that they always smoked outdoors with the door closed, 14% mixed this with smoking near the kitchen fan, 12% near an open door, 7% mixed all these behaviours and 8 % smoked indoors without precautions. The smoking behaviours were related to the children’s creatinine adjusted urine cotinine. All groups had significantly higher values than had children from non-smoking homes, controls. Outdoor smoking with the door closed seemed to be the best, though not a total, measure for tobacco smoke protection in the home. Most parents were aware of the importance of protecting children from tobacco smoke exposure but all were not convinced of the increased risk for disease for exposed children. The majority of parents were not satisfied with the smoking prevention in health-care and 50% did not think that their smoking was of any concern to the child health care nurse. Further research is warranted to describe if the difference in exposure score related to smoking behaviours is related to different prevalence of disease. Efforts are needed to convince those who still smoke indoors that tobacco smoke exposure influence children’s health and that consequent outdoor smoking with the door closed seemed to give the best protection. / Article I: copyright (2003), with permission from Oxford University Press. On the day of the public defence the status of article III was: Submitted and the status of article VI was: Revised and resubmitted and the original title was: Attitudes to children’s tobacco smoke exposure among smoking and non-smoking parents and their opinions on how the issue is handled in health care.

Orientadores: Francisco Carlos Groppo, Reginaldo Bruno Gonçalves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-12T19:00:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cogo_Karina_D.pdf: 3355648 bytes, checksum: d8afd799c6d162cda6cbb9bad9d225a5 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O uso do cigarro tem sido associado com a progressão da periodontite bem como com a redução da resposta à terapia aplicada a essa doença. Porphyromonas gingivalis é um importante colonizador do biofilme subgengival além de ser um dos principais patógenos envolvidos no estabelecimento e progressão da doença periodontal. No entanto, os possíveis efeitos dos principais derivados do cigarro sobre P. gingivalis ainda não foram totalmente investigados. Dessa forma, os objetivos deste estudo foram avaliar os efeitos da nicotina e cotinina sobre a expressão de proteínas e sobre a capacidade de adesão e invasão celular de P. gingivalis. A fim de avaliar a expressão de proteínas, culturas de P. gingivalis W83 foram expostas à nicotina e cotinina nas concentrações de 6 e 600µg/mL, as proteínas foram extraídas, separadas por eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida (12.5% SDS-PAGE) e identificadas por LC-MS/MS. Os géis e suas corridas eletroforéticas foram feitas em triplicatas e a detecção de proteínas nos mesmos foi feita através de coloração com corante Coomassie. Proteínas diferentemente expressas foram digeridas com tripsina e as amostras de peptídeos sequenciadas utilizando um sistema Q-TOF API LC-MS/MS. A busca MS/MS foi realizada utilizando os bancos de dados MSDB e NCBI através do programa Mascot. Para examinar a capacidade de adesão e invasão de P. gingivalis, monocamadas de células KB e culturas de P. gingivalis ATCC 33277 foram expostas às concentrações de 0.1, 10 e 100 µg/mL de nicotina e cotinina. As células epiteliais foram incubadas por 24 h enquanto P. gingivalis foi exposta a essas substâncias até atingir a fase logarítmica. Após o período de incubação, P. gingivalis foi submetida aos ensaios de adesão e invasão às células KB. O número de bactérias associadas às células foi obtido através de contagem de unidades formadoras de colônia. Os resultados obtidos da análise expressão de proteínas mostraram que a adição de nicotina e cotinina promoveram alterações no proteoma de P. gingivalis. Entre os ± 430 spots de proteínas reproduzíveis detectados em cada gel, 20 proteínas foram menos expressas e 42 foram mais expressas em pelo menos um dos tratamentos (p<0.05; ANOVA - Tukey). Entre as proteínas identificadas, muitas estavam envolvidas em processos como produção de energia celular, síntese de proteínas, estresse oxidativo, virulência, transporte, etc. Em relação aos resultados obtidos nos ensaios de adesão e invasão, foi evidenciado que, quando as células epiteliais foram inoculadas com nicotina e cotinina, nenhuma diferença significativa na colonização de P. gingivalis foi encontrada. Quando P. gingivalis foi exposta à maior concentração de cotinina, sua capacidade de adesão e invasão às células epiteliais aumentou de forma expressiva (p<0.05; ANOVA - Tukey). No entanto, a nicotina e as outras concentrações de cotinina testadas não alteraram a capacidade de colonização. Esses achados indicam que a nicotina e a cotinina podem afetar a expressão de proteínas de P. gingivalis. Ainda, a cotinina pode alterar positivamente a eficiência de adesão e invasão de P. gingivalis. / Abstract: Cigarette smoking is associated with the development of periodontitis and the decreased response to periodontal therapy. P. gingivalis is an important colonizer of the subgingival biofilm and is one of the major pathogens involved in the initiation and progression of periodontal disease. However, the possible effects of major cigarette's derivatives on P. gingivalis were not fully investigated. Thus, the purpose of the present study was to evaluate the effects of nicotine and cotinine on the protein expression and cellular adhesion and invasion abilities of P. gingivalis. To evaluate protein expression, P. gingivalis W83 cultures were exposed to nicotine and cotinine 6 and 600µg/mL concentrations, the proteins were extracted, separated by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (12.5% PAGE) and identified with LC-MS/MS. The gels were run in triplicates and detection of proteins was obtained by staining the gels with Coomassie blue. Proteins differentially expressed were digested with trypsin, and the peptide samples sequenced using a Q-TOF API LC-MS/MS system. The MS/MS was searched against the MSDB and NCBI databank using Mascot program. In order to assess P. gingivalis adhesion and invasion abilities, KB cells monolayers and P. gingivalis ATCC 33277 cultures were exposed to 0.1, 10 and 100 µg/mL nicotine and cotinine concentrations. The epithelial cells were incubated for 24 h while P. gingivalis was exposed to these substances until early logarithmic phase. After incubation period, P. gingivalis were submitted to assays to evaluate adhesion to and invasion of KB cells. The number of bacteria associated with these cells was assessed by counting the colony-forming unities. The results from protein expression analyses showed that addition of nicotine and cotinine promoted alterations in proteome profile of P. gingivalis. Among ± 430 protein spots reproducibly detected on each gel, 20 protein spots were downregulated, and 42 were upregulated at least in one treatment (p<0.05; ANOVA - Tukey test). The identified proteins are involved in several processes, i.e. energy production, protein synthesis, oxidative stress, virulence, transport and binding activities. Data obtained from adhesion and invasion assays evidenced that epithelial cells inoculated with nicotine and cotinine did not show any significant differences in P. gingivalis colonization. When P. gingivalis was exposed to the higher concentration of cotinine, adherence and invasion of this bacterium to the epithelial cells markedly increased (p<0.05; ANOVA - Tukey test). However, nicotine and the other concentrations of cotinine did not alter the colonization ability. These findings indicate that nicotine and cotinine may affect P. gingivalis protein expression. In addition, cotinine may alter positively P. gingivalis adhesion and invasion efficiencies. / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

O uso de drogas por mulheres em idade reprodutiva é considerado um grave problema de saúde pública mundial. O mecônio é a primeira excreção do recém-nascido e tem sido utilizado como uma matriz alternativa em análises toxicológicas. A extração em fase sólida (SPE) é um método amplamente utilizado para a purificação e concentração dos analitos em amostras biológicas no campo da análise forense. A maioria dos produtos de SPE convencionais requerem volumes relativamente grandes de solventes levando a um custo acrescido por amostra e um aumento no tempo de processamento da amostra. As ponteiras de extração com fase sólida modificada (DPX) foram utilizadas como uma alternativa aos cartuchos SPE tradicionais. A técnica combina eficiência e rapidez no procedimento de extração, com redução significativa no consumo de solvente e na quantidade de amostra. O objetivo desse estudo foi desenvolver e validar um método para a determinação de nicotina, cotinina, cocaína, benzoilecgonina, cocaetileno e éster metil anidroecgonina em amostras de mecônio usando DPX e cromatografia em fase gasosa acoplada à espectrometria de massa (GC/MS). Os resultados da validação indicaram uma extração eficiente, exata e precisa, com recuperação entre 50-98%, exatidão entre 92-106%, precisão intra-ensaio 4-12% e precisão inter-ensaio 6 a 12%. As curvas de calibração foram lineares com valores de R2 superiores a 0,99; os limites de detecção (LOD) variaram entre 2,5-15 ng/g e os limites de quantificação (LOQ) entre 10-20 ng/g. O método DPX-GC/MS mostrou ser eficaz para análise traços de drogas presentes em amostras de mecônio. Após desenvolvimento e validação, o método foi aplicado em 50 amostras de mecônio coletadas no berçário da Maternidade do Complexo Aeroporto (MATER) na cidade de Ribeirão Preto - São Paulo, Brasil. / Drug abuse by pregnant women is considered a serious public health problem worldwide. Meconium is the first excretion in newborns and has been used as an alternative matrix to evaluate in utero drug exposure. Solid phase extraction (SPE) is widely employed to prepare and cleanup samples in the field of forensic analysis. Most SPE products require large volumes of solvent, which culminates in longer sample processing times; increased cost per sample and higher limits of detection. Disposable Pipette Extraction tips (DPX) have been used as an alternative to traditional SPE cartridges. They combine efficient and rapid extraction with reduced solvent consumption. The purpose of this study was to develop and validate a method to determine nicotine, cotinine, cocaine, benzoylecgonine, cocaethylene and methyl ester anhydroecgonine in meconium using DPX and GC/MS. Validation results indicated extraction efficiency, ranged between 50-98%, accuracy 92-106%, intra-assay precision 4-12% and inter-assay precision 6 to 12%. Linear calibration curves resulted in R2 values greater than 0.99; limits of detection ranged from 2.5 - 15 ng/g and the limit of quantitation from 10 - 20 ng/g. The DPX-GC/MS method provided to selectively analyze trace concentrations of drugs in meconium samples. Finally, the developed and validated method was applied to 50 meconium samples collected at the nursery of Maternidade do Complexo Aeroporto (MATER) in the city of Ribeirão Preto - São Paulo, Brazil.

O tabaco é uma das principais drogas consumidas mundialmente e seu uso por mulheres em idade reprodutiva, em particular, têm representado uma grande preocupação por parte de especialistas e da sociedade em geral. Apesar dos efeitos adversos associados ao ato de fumar durante a gestação serem bastante documentados e conhecidos, sabe-se que uma parcela de mulheres grávidas tem dificuldades em abandonar o hábito. A exposição fetal aos constituintes do tabaco tem sido associada com aumento do risco de aborto espontâneo e nascimentos prematuros, incidência de recém-nascidos com baixo peso, síndrome de morte súbita infantil e desordens cognitivas e neurocomportamentais. Entretanto, devido ao sentimento de culpa e medo de ações punitivas, mulheres raramente admitem terem utilizado tabaco durante a gestação. Como resultado, uma série de marcadores biológicos tem sido estudada para se diagnosticar a exposição fetal aos constituintes do tabaco. Dentre os marcadores utilizados estão a nicotina e o seu principal produto de biotransformação, a cotinina, que podem ser detectados em amostras de mecônio de recém-nascidos. No presente estudo, um método analítico foi desenvolvido visando à detecção desses marcadores em amostras de mecônio. Foi considerada neste projeto a técnica de extração acelerada por solvente (ASE) por ser uma técnica promissora para o preparo de amostras sólidas e/ou semi-sólidas. Os analitos foram identificados por cromatografia em fase-gasosa com detector de nitrogênio e fósforo (GC/NPD). Os limites de detecção foram de 3 ng/g e 30 ng/g e os de quantificação foram de 5 ng/g e 40 ng/g, para cotinina e nicotina respectivamente, e apresentaram boa linearidade na faixa de concentração estudada (5-500 ng/g), com coeficiente de correlação (r2) maior que 0,98. A precisão intra-ensaio, determinada pelo coeficiente de variação do método (CV%) foi menor que 15% e a precisão interensaio foram menor ou igual a 20% para nicotina e cotinina. A recuperação média foi de 77%. O método desenvolvido demonstrou ser rápido, preciso, prático e sensível e com uso de menores volumes de solventes orgânicos do que outros métodos descritos na literatura. O método desenvolvido e validado foi aplicado em amostras de mecônio de neonatos com suspeita ou não de exposição fetal aos constituintes do tabaco. / Tobacco is one of the main drugs consumed worldwide and its use by women of reproductive age in particular has played a major concern among experts and society in general. Despite the adverse effects associated with smoking during pregnancy are well documented, it is known that a significant proportion of pregnant women have difficulties to quit the habit. Fetal exposure to tobacco constituents has been associated with increased risk of spontaneous abortion (miscarriage) and premature births, incidence of newborns with low birth weight, sudden infant death syndrome and neurobehavioral and cognitive disorders. However, due to guilt and fear of punitive actions, women rarely admit to have used tobacco during pregnancy. As a result, a series of biological markers have been studied to diagnose fetal exposure to tobacco constituents. Nicotine and cotinine are some of these biomarkers which can be detected in meconium samples from newborns. In this study, an analytical method was developed to detect these biomarkers in meconium samples. Accelerated solvent extraction (ASE), a promising technique for solid or semi-solid sample preparation, was considered in this work the that is considered a. The analytes were identified by gas-chromatography with nitrogen phosphorus detector (GC / NPD). The limits of detection (LOD) were 3 ng/g and 30 ng/g and the limits of quantification (LOQ) were 5 ng/g and 40 ng/g for cotinine and nicotine, respectively. The method showed good linearity in the concentration range studied (5-500 ng/g), with a coefficient of correlation (r2) greater than 0.98. The intraday precision, determined by the coefficient of variation (CV %) was less than 15% and the interday precision was less or equal than 20% for nicotine and cotinine. The average recovery was 77%. The method proved to be fast, accurate, practical and sensitive and smaller volumes of organic solvents are necessary, compared to other methods published in the scientific literature. The developed and validated method was applied to meconium samples of suspected and nonsuspected neonates of having been exposed to tobacco constituents during gestation.

Objetivos: Diversos trabalhos documentaram a associação entre o fumo ativo na gestação e a redução no peso,comprimento e perímetro cefálico dos recémnascidos. Porém, existem controvérsias quanto aos efeitos do fumo passivo. Esse estudo buscou colaborar na elucidação sobre os efeitos da exposição da gestante ao fumo nas medidas antropométricas do recém-nascido. Métodos: Estudo transversal, que incluiu 200 parturientes, identificando a intensidade da exposição das mesmas ao fumo através da mensuração da cotinina urinária e do auto-relato sobre seu hábito tabágico e de seus familiares,o que possibilitou categorizá-las em não fumantes, fumantes passivas e fumantes ativas e posterior comparação com as medidas antropométricas dos recémnascidos. Resultados: Encontramos uma diferença estatisticamente significativa no peso,quando comparamos as fumantes passivas às não fumantes, -152g (IC95%: -285 a -18;P=0,026) e a diferença encontrada nas fumantes ativas foi de - 159g (IC95%: -301 a -16; P=0,029), em relação às não fumantes. Na medida do comprimento, observou-se uma diferença significativa entre as fumantes passivas, -0,8cm (IC95%: -1,4 a -0,2;P=0,012) em relação às não fumantes, e entre as fumantes ativas a diferença foi de -1,0cm (IC95%: -1,6 a -0,3;P=0,003), quando comparado às não fumantes. Quanto à medida do perímetro cefálico, não foram observadas diferenças significativas quando os grupos, das fumantes passivas e fumantes ativas, foram comparados ao grupo das não fumantes. Conclusões: Os resultados sugerem que o fumo passivo durante a gestação pode apresentar efeitos semelhantes aos do fumo ativo nas medidas antropométricas dos recém-nascidos. / Objectives: Several studies have documented the association between active smoking during pregnancy to weight, height and head circumference reduction on newborns. However, there are controversies about the passive smoking. The present study sough the elucidation of the effects of tobacco exposition of pregnant women on anthropometric measurements of newborns. Methods: Cross-sectional study, including 200 in labor women, identifying the intensity of their exposition to tobacco through the measurement of urine cotinine and the self reported information about the smoking habit of their relatives and themselves, what allowed us to classify them as non-smokers, passive smokers and active smokers and later the comparison with the anthropometric measurements of newborns. Results: We found a statistically significant difference in weight when comparing passive smokers to non-smokers, -152g (CI 95%: -285 to –18; P=0.026) and the difference found on active smokers was - 159g (CI 95%: -301 to 16; P=0.029) when compared to non-smokers. On the height measurements, a significant difference was found within the group of passive smokers, -0,8 cm (CI 95%: -1,4 to -0.2; P=0.012) comparing to the non-smokers group, within the smokers group the difference was -1,0 cm (CI 95%: -1,6 to -0.3; P=0.003) when compared to nonsmokers. About the measurements of head circumference, no was found a significant difference when the passive smokers and active smokers group was compared to non-smokers group. Conclusions: The results suggest that the passive smoking during pregnancy may present similar effects as the active smoking on the anthropometric measurements of newborns.

O tabaco é uma das principais drogas consumidas mundialmente e seu uso por mulheres em idade reprodutiva, em particular, têm representado uma grande preocupação por parte de especialistas e da sociedade em geral. Apesar dos efeitos adversos associados ao ato de fumar durante a gestação serem bastante documentados e conhecidos, sabe-se que uma parcela de mulheres grávidas tem dificuldades em abandonar o hábito. A exposição fetal aos constituintes do tabaco tem sido associada com aumento do risco de aborto espontâneo e nascimentos prematuros, incidência de recém-nascidos com baixo peso, síndrome de morte súbita infantil e desordens cognitivas e neurocomportamentais. Entretanto, devido ao sentimento de culpa e medo de ações punitivas, mulheres raramente admitem terem utilizado tabaco durante a gestação. Como resultado, uma série de marcadores biológicos tem sido estudada para se diagnosticar a exposição fetal aos constituintes do tabaco. Dentre os marcadores utilizados estão a nicotina e o seu principal produto de biotransformação, a cotinina, que podem ser detectados em amostras de mecônio de recém-nascidos. No presente estudo, um método analítico foi desenvolvido visando à detecção desses marcadores em amostras de mecônio. Foi considerada neste projeto a técnica de extração acelerada por solvente (ASE) por ser uma técnica promissora para o preparo de amostras sólidas e/ou semi-sólidas. Os analitos foram identificados por cromatografia em fase-gasosa com detector de nitrogênio e fósforo (GC/NPD). Os limites de detecção foram de 3 ng/g e 30 ng/g e os de quantificação foram de 5 ng/g e 40 ng/g, para cotinina e nicotina respectivamente, e apresentaram boa linearidade na faixa de concentração estudada (5-500 ng/g), com coeficiente de correlação (r2) maior que 0,98. A precisão intra-ensaio, determinada pelo coeficiente de variação do método (CV%) foi menor que 15% e a precisão interensaio foram menor ou igual a 20% para nicotina e cotinina. A recuperação média foi de 77%. O método desenvolvido demonstrou ser rápido, preciso, prático e sensível e com uso de menores volumes de solventes orgânicos do que outros métodos descritos na literatura. O método desenvolvido e validado foi aplicado em amostras de mecônio de neonatos com suspeita ou não de exposição fetal aos constituintes do tabaco. / Tobacco is one of the main drugs consumed worldwide and its use by women of reproductive age in particular has played a major concern among experts and society in general. Despite the adverse effects associated with smoking during pregnancy are well documented, it is known that a significant proportion of pregnant women have difficulties to quit the habit. Fetal exposure to tobacco constituents has been associated with increased risk of spontaneous abortion (miscarriage) and premature births, incidence of newborns with low birth weight, sudden infant death syndrome and neurobehavioral and cognitive disorders. However, due to guilt and fear of punitive actions, women rarely admit to have used tobacco during pregnancy. As a result, a series of biological markers have been studied to diagnose fetal exposure to tobacco constituents. Nicotine and cotinine are some of these biomarkers which can be detected in meconium samples from newborns. In this study, an analytical method was developed to detect these biomarkers in meconium samples. Accelerated solvent extraction (ASE), a promising technique for solid or semi-solid sample preparation, was considered in this work the that is considered a. The analytes were identified by gas-chromatography with nitrogen phosphorus detector (GC / NPD). The limits of detection (LOD) were 3 ng/g and 30 ng/g and the limits of quantification (LOQ) were 5 ng/g and 40 ng/g for cotinine and nicotine, respectively. The method showed good linearity in the concentration range studied (5-500 ng/g), with a coefficient of correlation (r2) greater than 0.98. The intraday precision, determined by the coefficient of variation (CV %) was less than 15% and the interday precision was less or equal than 20% for nicotine and cotinine. The average recovery was 77%. The method proved to be fast, accurate, practical and sensitive and smaller volumes of organic solvents are necessary, compared to other methods published in the scientific literature. The developed and validated method was applied to meconium samples of suspected and nonsuspected neonates of having been exposed to tobacco constituents during gestation.

Background Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system. It usually strikes during young adulthood, and 2.5 million individuals are estimated to have the disease worldwide. The causes of MS are not known, but several factors have been shown to be associated with the risk of the disease, including certain genes, vitamin D, smoking and Epstein- Barr virus infection. Little is known about how/if these factors interact. Methods Study I: The risk of MS by month of birth was investigated using MS cases from the Swedish MS registry and using general population controls. Studies II–V: We identified MS cases who had donated blood prior to disease onset, and MS cases whose mothers had donated blood during pregnancy, by cross-linking a database of MS cases, and a database of mothers of MS cases, to two local biobank cohorts. One of them consisted of blood samples collected during early pregnancy, and one with samples collected during health controls. Levels of 25(OH)D (25-hydroxyvitamin D), RBP (retinol binding protein, a surrogate marker for vitamin A), CRP (C- reactive protein), cotinine (a nicotine metabolite) and anti Epstein-Barr virus nuclear antigen-1 (EBNA-1) antibodies were measured in cases and matched controls. The risk of MS by categories of these exposures was estimated in bi- and multivariable matched logistic regression models. Results Subjects born in spring had a higher risk of MS, but no influence of early gestational levels of the measured risk factors on the risk of MS in the offspring was observed. In prospective samples from MS cases and controls, 25(OH)D levels ≥75 nmol/l, intermediate RBP levels, and elevated CRP levels in young were associated with a decreased risk of MS. Elevated cotinine levels (suggestive of smoking) and high antibody reactivity against EBNA-1 were associated with an increased risk of MS. All factors but RBP were more clearly associated with MS in young subjects. Conclusion All factors analyzed in prospectively collected samples were associated with the risk of MS, and taken together, the data indicate that the key etiopathological events that lead to MS occur before the age of 20–30. Study II provides support for trials exploring the primary preventive potential of oral vitamin D supplementation.