A criocirurgia tem sido utilizada no tratamento de diferentes enfermidades de sistemas e órgãos, tanto na medicina humana quanto na medicina veterinária, sendo sua maior indicação o tratamento de dermatopatias. Contudo, efeitos adversos como a cicatrização lenta, cicatrizes extensas, disfunção estética e funcional, foram relatadas após a aplicação da substância criogênica. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a influência da sulfadiazina de prata, própolis, ácidos graxos essenciais e calêndula no tempo da cicatrização de feridas cutâneas padronizadas e induzidas pelo nitrogênio líquido em ratos. Utilizaram-se 40 ratos Wistar, divididos aleatoriamente em cinco grupos de oito animais cada: grupo vaselina (V), grupo sulfadiazina de prata (S), grupo própolis (P), grupo ácidos graxos essenciais (A) e grupo calêndula (C). Através da aplicação do nitrogênio líquido pela técnica do spray aberto, realizou-se a indução de duas feridas na região dorsal em segmentos paralelos de pele, uma no antímero direito e outra no esquerdo. A ferida direita recebeu o tratamento de acordo com os agentes tópicos escolhidos ou apenas com o veículo da pomada (vaselina sólida). A ferida esquerda recebeu a limpeza com solução cloreto de sódio 0,9% ou nenhum tratamento adicional. As aplicações tópicas foram realizadas duas vezes ao dia, durante 28 dias após a indução das lesões. Macroscopicamente, a cada dois dias, analisaram-se as medidas das lesões e calculou-se a área e a taxa de contração cicatricial das mesmas. No 28º dia pós-operatório, procedeu-se à coleta das biópsias para avaliação histopatológica e imuno-histoquímica, quanto à presença de células inflamatórias, intensidade de deposição de colágeno, densidade de mastócitos, proliferação epitelial e angiogênese. Com base nos resultados obtidos concluiu-se que: 1) o grupo própolis apresenta a maior taxa de contração das feridas, demonstrando diferença estatística significativa em relação ao grupo sem tratamento nas avaliações a partir do 6º dia pós-cirúrgico; 2) não se observa diferenças estatísticas significativas entre os grupos pesquisados quanto à proliferação epitelial, neovascularização e deposição de colágeno, nas avaliações histopatológicas e imuno-histoquímicas aos 28 dias de pós-operatório; 3) a terapia com os agentes tópicos ou, apenas, com a limpeza com solução cloreto de sódio 0,9% proporciona uma relevante evolução clínica das feridas frente a não intervenção no processo cicatricial. Sugere-se a necessidade de novos estudos com cicatrização de lesões causadas pela criocirurgia, no que diz respeito às ferramentas que podem ser usadas com o intuito de acelerar esse processo e melhorar a qualidade das cicatrizes. / Cryosurgery has been used to treat different diseases of systems and organs in both human and veterinary medicine. Although treatment of skin disorders is the leading indication, adverse effects, such as delayed wound healing, large scars, esthetical deformation, and functional impairment, have been reported with administration of cryogenic substance. This study aims to evaluate the influence of silver sulfadiazine, propolis, essential fatty acids and calendula at healing time of cutaneous wounds that were standardized and induced by liquid nitrogen in rats. For that, forty Wistar rats were randomly divided in five groups of eight animals each: vaseline group (V), silver sulfadiazine group (S), propolis group (P), essential fatty acids group (A) and calendula group (C). Two parallel lesions were produced in the dorsal region of each rat through the application of liquid nitrogen by spraying technique. The right wound received treatment according to the chosen topical agents or only with ointment vehicle (solid vaseline). The left wound was just cleaned with a 0.9% sodium chloride solution or it received no additional treatment. Topical applications were carried out twice daily for 28 days after wound induction. Macroscopically, every two days, the wounds were measured to calculate their area and healing rate. On the 28th postoperative day, biopsies were performed for histopathological and immunohistochemical evaluations. Microscopic analysis included: presence of inflammatory cells, intensity of collagen deposition, mast cells density, epithelial proliferation and angiogenesis. By the obtained results, the study concludes that: 1) propolis group shows the highest wound contraction rate, with a statistical difference to the untreated group in all the evaluations performed after the sixth day of treatment; 2) there were no significant differences among groups regarding epithelial proliferation, neovascularization and collagen deposition; 3) therapy with topical agents or just a cleaning with 0.9% sodium chloride solution provides an important clinical evolution of wounds when compared to non-intervention in healing process. Lastly, this paper proposes that new studies on ways of accelerating and improving quality of the healing process following cryosurgery are necessary.

A criocirurgia tem sido utilizada no tratamento de diferentes enfermidades de sistemas e órgãos, tanto na medicina humana quanto na medicina veterinária, sendo sua maior indicação o tratamento de dermatopatias. Contudo, efeitos adversos como a cicatrização lenta, cicatrizes extensas, disfunção estética e funcional, foram relatadas após a aplicação da substância criogênica. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a influência da sulfadiazina de prata, própolis, ácidos graxos essenciais e calêndula no tempo da cicatrização de feridas cutâneas padronizadas e induzidas pelo nitrogênio líquido em ratos. Utilizaram-se 40 ratos Wistar, divididos aleatoriamente em cinco grupos de oito animais cada: grupo vaselina (V), grupo sulfadiazina de prata (S), grupo própolis (P), grupo ácidos graxos essenciais (A) e grupo calêndula (C). Através da aplicação do nitrogênio líquido pela técnica do spray aberto, realizou-se a indução de duas feridas na região dorsal em segmentos paralelos de pele, uma no antímero direito e outra no esquerdo. A ferida direita recebeu o tratamento de acordo com os agentes tópicos escolhidos ou apenas com o veículo da pomada (vaselina sólida). A ferida esquerda recebeu a limpeza com solução cloreto de sódio 0,9% ou nenhum tratamento adicional. As aplicações tópicas foram realizadas duas vezes ao dia, durante 28 dias após a indução das lesões. Macroscopicamente, a cada dois dias, analisaram-se as medidas das lesões e calculou-se a área e a taxa de contração cicatricial das mesmas. No 28º dia pós-operatório, procedeu-se à coleta das biópsias para avaliação histopatológica e imuno-histoquímica, quanto à presença de células inflamatórias, intensidade de deposição de colágeno, densidade de mastócitos, proliferação epitelial e angiogênese. Com base nos resultados obtidos concluiu-se que: 1) o grupo própolis apresenta a maior taxa de contração das feridas, demonstrando diferença estatística significativa em relação ao grupo sem tratamento nas avaliações a partir do 6º dia pós-cirúrgico; 2) não se observa diferenças estatísticas significativas entre os grupos pesquisados quanto à proliferação epitelial, neovascularização e deposição de colágeno, nas avaliações histopatológicas e imuno-histoquímicas aos 28 dias de pós-operatório; 3) a terapia com os agentes tópicos ou, apenas, com a limpeza com solução cloreto de sódio 0,9% proporciona uma relevante evolução clínica das feridas frente a não intervenção no processo cicatricial. Sugere-se a necessidade de novos estudos com cicatrização de lesões causadas pela criocirurgia, no que diz respeito às ferramentas que podem ser usadas com o intuito de acelerar esse processo e melhorar a qualidade das cicatrizes. / Cryosurgery has been used to treat different diseases of systems and organs in both human and veterinary medicine. Although treatment of skin disorders is the leading indication, adverse effects, such as delayed wound healing, large scars, esthetical deformation, and functional impairment, have been reported with administration of cryogenic substance. This study aims to evaluate the influence of silver sulfadiazine, propolis, essential fatty acids and calendula at healing time of cutaneous wounds that were standardized and induced by liquid nitrogen in rats. For that, forty Wistar rats were randomly divided in five groups of eight animals each: vaseline group (V), silver sulfadiazine group (S), propolis group (P), essential fatty acids group (A) and calendula group (C). Two parallel lesions were produced in the dorsal region of each rat through the application of liquid nitrogen by spraying technique. The right wound received treatment according to the chosen topical agents or only with ointment vehicle (solid vaseline). The left wound was just cleaned with a 0.9% sodium chloride solution or it received no additional treatment. Topical applications were carried out twice daily for 28 days after wound induction. Macroscopically, every two days, the wounds were measured to calculate their area and healing rate. On the 28th postoperative day, biopsies were performed for histopathological and immunohistochemical evaluations. Microscopic analysis included: presence of inflammatory cells, intensity of collagen deposition, mast cells density, epithelial proliferation and angiogenesis. By the obtained results, the study concludes that: 1) propolis group shows the highest wound contraction rate, with a statistical difference to the untreated group in all the evaluations performed after the sixth day of treatment; 2) there were no significant differences among groups regarding epithelial proliferation, neovascularization and collagen deposition; 3) therapy with topical agents or just a cleaning with 0.9% sodium chloride solution provides an important clinical evolution of wounds when compared to non-intervention in healing process. Lastly, this paper proposes that new studies on ways of accelerating and improving quality of the healing process following cryosurgery are necessary.

A criocirurgia é o uso de baixas temperaturas para induzir uma necrose celular gerando em consequência uma ablação seletiva, em um determinado tecido alvo. O congelamento rápido causa a formação de cristais de gelo, gerando dano celular. Em medicina veterinária, a criocirurgia ainda é pouco difundida e a literatura carece de mais informações quanto à sua aplicação. A criocirurgia hepática é usada para tratar tumores hepáticos e pode ser realizada por laparoscopia. As técnicas ablativas locais têm a vantagem de preservar o parênquima hepático envolvido e evitar a morbidade e mortalidade de cirurgia hepática e pode ser uma opção de tratamento para aqueles pacientes com tumores irressecáveis. O objetivo deste trabalho foi avaliar a viabilidade da técnica de criocirurgia hepática videolaparoscópica em coelhos, com uso do aparelho Cryogun B-700G Cry-Ac® com ponteira circular fechada, de 6mm de diâmetro cilindrical probe 205-8 Cry-Ac®. Foram utilizadas treze coelhas adultas, pesando entre 2.800 e 3.720 Kg, mantidas em alojamento adequado às necessidades da espécie, sendo realizada técnica de criocirurgia hepática laparoscópica através de acesso a cavidade abdominal por dois portais, pela técnica aberta. O primeiro trocarte com 5 mm de Ø foi introduzido na linha média ventral, para passagem do endoscópio rígido e segundo, com 10mm de Ø, foi introduzido no lado esquerdo do abdômen, para acesso da ponteira criocirúrgica. A criocirurgia foi realizada por um jato contínuo de nitrogênio liquido, por 25 segundos, em três locais previamente estabelecidos, sendo repetida novamente durante o mesmo tempo. Foram avaliados os tempos de congelamento e descongelamento das três lesões, primeiro e segundo ciclo. O tempo de introdução do primeiro e do segundo trocarte apresentaram diferença estatisticamente significativa. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os dois ciclos de congelamento e descongelamento, nas 3 diferentes lesões. Conclui-se que a técnica de criocirurgia usando o acesso laparoscópico para congelamento hepático em coelhos é exequível e o aparelho criocirúrgico Cryogun B-700Cry-Ac®com uso da ponteira fechada e cilíndrica permitiu a sua execução. / Cryosurgery is the use of low temperatures to induce cell necrosis and thereby generating a selective ablation in a given target tissue. The fast freezing causes the formation of ice crystals, causing cellular damage. The use of cold therapy has evolved over the last 200 years, however the currently nominated cryosurgery appeared 60 years ago, with the development of a portable system for the use of cryotherapy, giving a big development to this type of therapy. In veterinary medicine, cryosurgery is still little known and the literature lacks information regarding its application. Hepatic cryosurgery is used for treating hepatic tumors and can be performed laparoscopically. Local ablative techniques have the advantage of preserving the hepatic parenchyma involved and to avoid the morbidity and mortality from hepatic surgery and may be a treatment option for patients with inoperable tumors. The objective of this study is to evaluate the feasibility of laparoscopic hepatic crysurgery in rabbits with use of the device Cryogun B - 700G Cry - AC® with closed circular tip, 6mm diameter cilindrical probe 205-8 Cry - AC®, and to quantify and to describe technical difficulties in its implementation. We used thirteen adult rabbits, weighing between 2.800 and 3.720 Kg, kept in suitable accommodation for the needs of the species, the technique of hepatic cryosurgery was performed over access to the abdominal cavity by two portals, the open technique. The first trocar with Ø 5 mm was inserted in the ventral midline for the passage of the rigid endoscope, and second, with Ø 10mm, was introduced into the left side of the abdomen to the access of the cryosurgical probe. Cryosurgery was performed by a continuous jet of liquid nitrogen for 25 seconds, at three locations previously established, and again repeated for the same time. We evaluated the time of freezing and thawing of the three lesions, first and second cycle. The time of introduction of the first and second trocar presented statistically significant difference. There was no statistically significant difference between the two cycles of freezing and thawing in the 3 different injuries. We conclude that the execution of the technique of hepatic cryotherapy using the laparoscopic approach is feasible in rabbits and the cryosurgical device Cryogun B -700 Cry - AC® with the use of closed cylindrical probe 205-8 Cry-Ac® allowed the execution of the technique.

A criocirurgia é o uso de baixas temperaturas para induzir uma necrose celular gerando em consequência uma ablação seletiva, em um determinado tecido alvo. O congelamento rápido causa a formação de cristais de gelo, gerando dano celular. Em medicina veterinária, a criocirurgia ainda é pouco difundida e a literatura carece de mais informações quanto à sua aplicação. A criocirurgia hepática é usada para tratar tumores hepáticos e pode ser realizada por laparoscopia. As técnicas ablativas locais têm a vantagem de preservar o parênquima hepático envolvido e evitar a morbidade e mortalidade de cirurgia hepática e pode ser uma opção de tratamento para aqueles pacientes com tumores irressecáveis. O objetivo deste trabalho foi avaliar a viabilidade da técnica de criocirurgia hepática videolaparoscópica em coelhos, com uso do aparelho Cryogun B-700G Cry-Ac® com ponteira circular fechada, de 6mm de diâmetro cilindrical probe 205-8 Cry-Ac®. Foram utilizadas treze coelhas adultas, pesando entre 2.800 e 3.720 Kg, mantidas em alojamento adequado às necessidades da espécie, sendo realizada técnica de criocirurgia hepática laparoscópica através de acesso a cavidade abdominal por dois portais, pela técnica aberta. O primeiro trocarte com 5 mm de Ø foi introduzido na linha média ventral, para passagem do endoscópio rígido e segundo, com 10mm de Ø, foi introduzido no lado esquerdo do abdômen, para acesso da ponteira criocirúrgica. A criocirurgia foi realizada por um jato contínuo de nitrogênio liquido, por 25 segundos, em três locais previamente estabelecidos, sendo repetida novamente durante o mesmo tempo. Foram avaliados os tempos de congelamento e descongelamento das três lesões, primeiro e segundo ciclo. O tempo de introdução do primeiro e do segundo trocarte apresentaram diferença estatisticamente significativa. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os dois ciclos de congelamento e descongelamento, nas 3 diferentes lesões. Conclui-se que a técnica de criocirurgia usando o acesso laparoscópico para congelamento hepático em coelhos é exequível e o aparelho criocirúrgico Cryogun B-700Cry-Ac®com uso da ponteira fechada e cilíndrica permitiu a sua execução. / Cryosurgery is the use of low temperatures to induce cell necrosis and thereby generating a selective ablation in a given target tissue. The fast freezing causes the formation of ice crystals, causing cellular damage. The use of cold therapy has evolved over the last 200 years, however the currently nominated cryosurgery appeared 60 years ago, with the development of a portable system for the use of cryotherapy, giving a big development to this type of therapy. In veterinary medicine, cryosurgery is still little known and the literature lacks information regarding its application. Hepatic cryosurgery is used for treating hepatic tumors and can be performed laparoscopically. Local ablative techniques have the advantage of preserving the hepatic parenchyma involved and to avoid the morbidity and mortality from hepatic surgery and may be a treatment option for patients with inoperable tumors. The objective of this study is to evaluate the feasibility of laparoscopic hepatic crysurgery in rabbits with use of the device Cryogun B - 700G Cry - AC® with closed circular tip, 6mm diameter cilindrical probe 205-8 Cry - AC®, and to quantify and to describe technical difficulties in its implementation. We used thirteen adult rabbits, weighing between 2.800 and 3.720 Kg, kept in suitable accommodation for the needs of the species, the technique of hepatic cryosurgery was performed over access to the abdominal cavity by two portals, the open technique. The first trocar with Ø 5 mm was inserted in the ventral midline for the passage of the rigid endoscope, and second, with Ø 10mm, was introduced into the left side of the abdomen to the access of the cryosurgical probe. Cryosurgery was performed by a continuous jet of liquid nitrogen for 25 seconds, at three locations previously established, and again repeated for the same time. We evaluated the time of freezing and thawing of the three lesions, first and second cycle. The time of introduction of the first and second trocar presented statistically significant difference. There was no statistically significant difference between the two cycles of freezing and thawing in the 3 different injuries. We conclude that the execution of the technique of hepatic cryotherapy using the laparoscopic approach is feasible in rabbits and the cryosurgical device Cryogun B -700 Cry - AC® with the use of closed cylindrical probe 205-8 Cry-Ac® allowed the execution of the technique.

A criocirurgia tem sido utilizada no tratamento de diferentes enfermidades de sistemas e órgãos, tanto na medicina humana quanto na medicina veterinária, sendo sua maior indicação o tratamento de dermatopatias. Contudo, efeitos adversos como a cicatrização lenta, cicatrizes extensas, disfunção estética e funcional, foram relatadas após a aplicação da substância criogênica. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a influência da sulfadiazina de prata, própolis, ácidos graxos essenciais e calêndula no tempo da cicatrização de feridas cutâneas padronizadas e induzidas pelo nitrogênio líquido em ratos. Utilizaram-se 40 ratos Wistar, divididos aleatoriamente em cinco grupos de oito animais cada: grupo vaselina (V), grupo sulfadiazina de prata (S), grupo própolis (P), grupo ácidos graxos essenciais (A) e grupo calêndula (C). Através da aplicação do nitrogênio líquido pela técnica do spray aberto, realizou-se a indução de duas feridas na região dorsal em segmentos paralelos de pele, uma no antímero direito e outra no esquerdo. A ferida direita recebeu o tratamento de acordo com os agentes tópicos escolhidos ou apenas com o veículo da pomada (vaselina sólida). A ferida esquerda recebeu a limpeza com solução cloreto de sódio 0,9% ou nenhum tratamento adicional. As aplicações tópicas foram realizadas duas vezes ao dia, durante 28 dias após a indução das lesões. Macroscopicamente, a cada dois dias, analisaram-se as medidas das lesões e calculou-se a área e a taxa de contração cicatricial das mesmas. No 28º dia pós-operatório, procedeu-se à coleta das biópsias para avaliação histopatológica e imuno-histoquímica, quanto à presença de células inflamatórias, intensidade de deposição de colágeno, densidade de mastócitos, proliferação epitelial e angiogênese. Com base nos resultados obtidos concluiu-se que: 1) o grupo própolis apresenta a maior taxa de contração das feridas, demonstrando diferença estatística significativa em relação ao grupo sem tratamento nas avaliações a partir do 6º dia pós-cirúrgico; 2) não se observa diferenças estatísticas significativas entre os grupos pesquisados quanto à proliferação epitelial, neovascularização e deposição de colágeno, nas avaliações histopatológicas e imuno-histoquímicas aos 28 dias de pós-operatório; 3) a terapia com os agentes tópicos ou, apenas, com a limpeza com solução cloreto de sódio 0,9% proporciona uma relevante evolução clínica das feridas frente a não intervenção no processo cicatricial. Sugere-se a necessidade de novos estudos com cicatrização de lesões causadas pela criocirurgia, no que diz respeito às ferramentas que podem ser usadas com o intuito de acelerar esse processo e melhorar a qualidade das cicatrizes. / Cryosurgery has been used to treat different diseases of systems and organs in both human and veterinary medicine. Although treatment of skin disorders is the leading indication, adverse effects, such as delayed wound healing, large scars, esthetical deformation, and functional impairment, have been reported with administration of cryogenic substance. This study aims to evaluate the influence of silver sulfadiazine, propolis, essential fatty acids and calendula at healing time of cutaneous wounds that were standardized and induced by liquid nitrogen in rats. For that, forty Wistar rats were randomly divided in five groups of eight animals each: vaseline group (V), silver sulfadiazine group (S), propolis group (P), essential fatty acids group (A) and calendula group (C). Two parallel lesions were produced in the dorsal region of each rat through the application of liquid nitrogen by spraying technique. The right wound received treatment according to the chosen topical agents or only with ointment vehicle (solid vaseline). The left wound was just cleaned with a 0.9% sodium chloride solution or it received no additional treatment. Topical applications were carried out twice daily for 28 days after wound induction. Macroscopically, every two days, the wounds were measured to calculate their area and healing rate. On the 28th postoperative day, biopsies were performed for histopathological and immunohistochemical evaluations. Microscopic analysis included: presence of inflammatory cells, intensity of collagen deposition, mast cells density, epithelial proliferation and angiogenesis. By the obtained results, the study concludes that: 1) propolis group shows the highest wound contraction rate, with a statistical difference to the untreated group in all the evaluations performed after the sixth day of treatment; 2) there were no significant differences among groups regarding epithelial proliferation, neovascularization and collagen deposition; 3) therapy with topical agents or just a cleaning with 0.9% sodium chloride solution provides an important clinical evolution of wounds when compared to non-intervention in healing process. Lastly, this paper proposes that new studies on ways of accelerating and improving quality of the healing process following cryosurgery are necessary.

O uso do frio pela medicina é muito antigo, utilizado inicialmente de forma empírica, teve grandes avanços nos séculos XIV e XX, evoluindo juntamente com a Física. O surgimento de novas técnicas e equipamentos, possibilitou à crioterapia tornar-se uma importante opção no tratamento de neoplasias, benignas e malignas, de diferentes órgãos (tais como fígado, próstata, pâncreas e mamas) e sistemas (ósseo, neurológico e tegumentar). O grande desenvolvimento tecnológico permitiu além do maior número de indicações, melhores resultados, mormente com o uso de técnicas de imagem para o acompanhamento do procedimento. Porém, poucos são os trabalhos que enfocam a monitorização e mensuração do congelamento, pela tomografia computadorizada, bem como avaliação da necrose obtida. No presente trabalho propôs-se avaliar as relações entre as medidas obtidas pela tomografia computadorizada, em 20 cães da raça Beagle, durante o congelamento por aplicação do nitrogênio pela sonda fechada (75 segundos), spray (75 e 135 segundos) e derramamento (75 segundos), comparando estas medidas com aquelas mensuradas pela histopatologia da necrose provocada, para posteriormente avaliar a efetividade dos métodos e criar protocolos de tratamento. Os valores de diâmetro, raio, profundidade e volume do congelamento foram comparados entre si e, com os respectivos valores da necrose após 96 horas do procedimento. Os valores foram submetidos a análise de variância de medidas repetidas e teste de Bonferroni (p<0,05). Constatou-se que: a técnica de sonda fechada oferece congelamento e subseqüente necrose mais superficial que os outros métodos, sendo a técnica menos efetiva; em todas as técnicas o volume, diâmetro e profundidade são inferiores no tecido necrosado quando comparados aos seus similares naquele congelado; em nenhuma das quatro técnicas a profundidade de congelamento foi equivalente ao seu raio. Finalmente, houve a possibilidade de desenvolvimento de protocolos alternativos de congelamento a partir da profundidade de necrose pretendida (hf), obtendo-se como resultado (sonda - Di = hf / 0,29; spray I; Di = hf / 0,31; spray II - Di = hf / 0,35; derramamento -Di = hf / 0,38) o diâmetro do congelamento (Di) necessário para o êxito do tratamento / The use of cold by Medicine is a very old practice, initially used empirically, which had significant advances in the XIV and XX centuries, developing along with Physics. The appearance of new techniques and equipment turned cryotherapy into an important option in the treatment of benign and malignant neoplasms in different organs (such as the liver, the prostate, the pancreas and breasts) and systems (bone, neurological and tegumentary). The large technological development resulted in a higher number of indications as well as better results, especially with the concomitant use of imaging techniques to follow the procedure. However, few studies focus on the monitoring and mensuration of freezing through computed tomography, as well as the assessment of the resulting necrosis. Our study aims at evaluating the association between the measurements obtained through computed tomography in 20 Beagle dogs during freezing by liquid nitrogen use through a probe (75 sec), spray (75 and 135 sec) and overflow (75 sec), comparing these measurements to those obtained through histopathological analysis of the resulting necrosis, for later evaluation of the effectiveness of the methods and design of better treatment protocols. The values of diameter, radius, depth and volume of freezing were compared among them and also with the respective necrosis values 96 hours after the procedure. The values were submitted to analysis of variance of repeated measurements and Bonferroni test (p<0.05). We observed that the closed probe technique causes a more superficial freezing and resulting necrosis when compared to the other methods, being the less effective technique. In all techniques, the volume, diameter and depth are lower in the necrotic tissue when compared to those in the frozen tissue; none of the four techniques showed that freezing depth was equivalent to its radius. Finally, alternative freezing protocols could be developed from the depth of the intended necrosis (hf), resulting in the freezing diameter (Di) (probe - Di = hf/0.29; spray I; Di = hf/0.31; spray II Di = hf/0.35; overflow Di = hf/0.38), which is necessary for therapy success

Orientador: Aparecida Machado de Moraes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T14:06:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pimentel_CamilaBianco_M.pdf: 2170672 bytes, checksum: 382d051a461d1bf38d120f7595ee3e8d (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A criocirurgia é uma técnica terapêutica muito eficaz no tratamento de diversas lesões cutâneas benignas e malignas. O principal mecanismo de ação desta técnica está relacionado aos seus efeitos vasculares no tecido tratado. Após o procedimento criocirúrgico ocorre a formação de um tecido de granulação exuberante no local da aplicação, provavelmente por estímulo angiogênico do criógeno e da resposta inflamatória, particularmente nas células endoteliais. Objetivos: avaliar e comparar os efeitos angiogênicos da criocirurgia, por método histopatológico (hematoxilina-eosina), na pele normal e previamente submetida a injúria experimental de ratos, utilizando-se o nitrogênio líquido como criógeno de escolha. Métodos: Foram realizadas duas feridas experimentais no dorso de 20 ratos, machos, linhagem Lewis, adultos jovens, com peso entre 180 e 220gramas, utilizando-se punch de 5mm, distantes 2 cm uma da outra. Após 3 dias, foi realizada criocirurgia com nitrogênio líquido em uma delas, utilizando-se a técnica do spray aberto por 15 segundos. Os animais foram divididos de forma aleatória em dois grupos de dez animais. Após 7 dias (grupo I) e 14 dias (grupo II), as amostras foram coletadas e encaminhadas para análise histológica, para avaliação da celularidade (angiogênese) local nos diferentes momentos e situações. Resultados: Foi possível comprovar que a criocirurgia, apesar de promover morte celular logo após sua aplicação e um processo inflamatório local acentuado, induz em um segundo momento, uma rápida proliferação celular e a manutenção desta taxa de celularidade, quando comparada ao mesmo fenômeno na cicatrização tecidual sem este procedimento. Conclusão: Estes achados, juntamente com o conhecimento de que existe uma relação direta entre as células mononucleares e neovascularização, e que há o desenvolvimento de um rico sistema de novos vasos em injúria causada pelo frio, sugerem que a criocirurgia, apesar de levar a uma cicatrização completa em um tempo mais prolongado, possuí estímulo angiogênico / Abstract: Cryosurgery is a very efficient therapeutic technique to treat benign and malignant cutaneous diseases. The primary active mechanism of cryosurgery is related to vascular effects in treated tissue. After a cryosurgical procedure, exuberant granulation tissue is formed at the injection site, probably as a result of angiogenic stimulation of the cryogen and inflammatory response, particularly in endothelial cells. The objective of this study is to evaluate the angiogenic effects of freezing, as part of the phenomenon of healing rat skin subjected to previous injury. Methods: 20 young adult Lewis strain male rats were used, weighing between 180 and 220 grams. Each rat received two wounds that were administered 2 cm apart using a 5mm punch. After 3 days, cryosurgery with liquid nitrogen for 15 seconds, using the open spray technique, was done in one of them. These rats were divided randomly into two groups of 10 animals, group I (GI) and group II (GII). After 7 days (GI) and 14 days (GII), samples were collected cut and stained to realize histopathological examination, to assess the local angiogenesis in differents moments and situations. Results: It was possible to demonstrate that cryosurgery, in spite of promoting cell death and accentuated local inflammation soon after its application, induces a more rapid cell proliferation in the affected tissue and maintenance of this rate in a second phase, than in tissue healing without this procedure. Conclusion: These findings, together with the knowledge that there is a direct relationship between mononuclear cells and neovascularization (the development of a rich system of new vessels in injury caused by cold), suggest that cryosurgery possesses angiogenic stimulus, even if taking longer for complete healing to occur / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

INTRODUÇÃO: A criocirurgia (crioablação) percutânea em tecidos ósseos próximos da medula espinhal e sistema nervoso periférico tem sido feita na prática clínica, porém sem estudos experimentais que provem sua segurança e eficácia. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um modelo experimental suíno in vivo de crioablação vertebral guiada por tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC). Um estudo preliminar de morfometria da coluna vertebral suína por imagens de TCFC foi realizado. Um protocolo específico de crioablação foi criado para adaptar a bola de gelo às dimensões da vértebra suína e testado em modelos in vitro, ex vivo e in vivo. MÉTODOS: O comitê institucional de cuidados com os animais aprovou este estudo. Dezesseis parâmetros anatômicos foram medidos em 36 vértebras lombares suínas e comparados às medidas aferidas nas imagens de TCFC e TC multidetectores (TCMD). Três simuladores in vitro / ex vivo foram desenvolvidos para o posicionamento de sensores de temperatura (termopares) em volta de uma sonda de congelamento. As isotermas foram obtidas durante um protocolo duplo de congelamento-descongelamento de 2-8 minutos. Vinte e duas crioablações vertebrais guiadas por TCFC foram realizadas em oito suínos, mediante termometria e dissecção por dióxido de carbono (CO2) no espaço epidural a fim de proteger os nervos. O seguimento clínico foi realizado até seis dias antes da eutanásia. Os dados clínicos e radiológicos foram correlacionados com o estudo histopatológico à microscopia de luz (n=20) ou eletrônica de transmissão (n=2). RESULTADOS: Na avaliação anatômica da coluna lombar suína a TCFC se mostrou um método de imagem comparável à TCMD e ao estudo anatômico, com correlação significativa (p < 0,05) em todas as variáveis, exceto aquelas que incluiu o tecido cartilaginoso dos planaltos vertebrais. As isotermas registradas foram mais frias no modelo ex vivo imerso em gel (-34 °C e -2 °C; -30 °C e 3 °C; -10 °C e 13 °C, respectivamente), do que nos modelos in vitro (-23 °C e 3 °C; -7 °C e 10 °C; 1 °C e 16 °C) ou ex vivo sem gel (-30 °C e 28 °C). No estudo in vivo, a demonstração das sondas de congelamento no corpo vertebral e do CO2 epidural pelas imagens de TCFC foi bem sucedida em todos os procedimentos. A taxa de complicação maior foi de 4,5%. A distância entre a sonda de congelamento e o canal vertebral (Cp-Sc) foi o parâmetro mais eficiente para categorizar as temperaturas do canal vertebral inferiores a 19 °C à análise do modelo de regressão logística (p < 0,004). Nenhum infiltrado inflamatório perineural foi identificado à microscopia de luz. O suíno cujas vertebras foram submetidas a análise ultraestrutural não apresentou déficit neurológico, embora tenha sido evidenciada a ruptura da bainha de mielina em algumas fibras neurais maiores. CONCLUSÕES: A TCFC foi validada como método de imagens para a análise de vértebras suínas. O modelo ex vivo em gel caracterizou melhor a preservação do frio no tecido ósseo. A combinação de um protocolo específico de congelamento associado a medidas de proteção epidural tornou viável e exequível a crioablação vertebral suína guiada por TCFC. A análise ultraestrutural mostrou modificações precoces das fibras nervosas, sem correlação clínica / INTRODUCTION: Percutaneous spine cryosurgery (cryoablation) close to nerves and spinal cord has been performed in the clinical practice, however without experimental studies proving its safety and efficacy. The aim of this work was to develop an experimental swine model of in vivo cone beam computed tomography (CBCT) guided vertebral cryoablation. A preliminary morphometric study of the porcine spine by CBCT imaging was carried out. A specific cryoablation protocol was proposed to adapt the \"ice ball\" to the swine vertebrae dimensions. Subsequently, the protocol was tested in in vitro, ex vivo and in vivo models. METHODS: The institutional animal care committee approved this study. Sixteen anatomical parameters were measured in 36 lumbar swine vertebrae and compared to the same measurements of the CBCT and multidetector CT (MDCT). Three models of in vitro / ex vivo studies were developed for the positioning of thermocouples around the cryoprobe. Isotherms were obtained from measured temperatures for each minute during a 2-8 minutes double freezing-thawing protocol. Twenty -two CBCT-guided vertebral cryoablations were performed in eight pigs. Epidural thermocouples registered the temperatures while carbon dioxide (CO2) was injected in the epidural space to protect nerves. The clinical follow-up was carried out until six days before euthanasia. Clinical and radiologic data were correlated to the histopathology study with light microscopy (n=20) or electron transmission microscopy (n=2). RESULTS: CBCT was proven to be a comparable imaging method to MDCT with significant correlation (p < 0.05) in all variables, except in those including the cartilaginous tissue of the vertebral plateau. The registered isotherms were colder in the ex vivo model embedded in gel (-34 °C and -2 °C; -30 °C and 3 °C; -10 °C and 13 °C, respectively) than in the in vitro model (-23 °C and 3 °C; -7 °C and 10 °C; 1 °C and 16 °C) or the ex vivo model without gel (-30 °C and 28 °C). In the in vivo study the CBCT imaging was well succeeded to demonstrate the cryoprobes inserted in the vertebral body and the epidural CO2 in all procedures. The major complication rate was 4.5%. The distance between the cryoprobe and the spinal canal (Cp-Sc) was the most efficient parameter to categorize the vertebral canal temperatures below 19 °C in the logistic regression model analysis (p < 0.004). Perineural inflammatory infiltrate was not identified in the light microscopy analysis. One swine did not present neurological deficits, although the ultra-structural analysis has evidenced myelin sheath disruption in some large neural fibers. CONCLUSIONS: The CBCT imaging was validated as an imaging method for the swine vertebrae analysis. The ex vivo model embedded in gel featured better the cold preservation in the bone tissue. The combination of a specific freezing protocol associated with epidural protective measures allowed the feasibility of the CBCT-guided vertebral cryoablation in the swine model. The ultra-structural analysis showed early modifications of the nerve fibers

A criocirurgia tem sido utilizada no tratamento de diferentes enfermidades de sistemas e órgãos, tanto na medicina humana quanto na medicina veterinária, sendo sua maior indicação o tratamento de dermatopatias. Contudo, efeitos adversos como a cicatrização lenta, cicatrizes extensas, disfunção estética e funcional, são relatados após a aplicação da substância criogênica. Ainda, existem as lesões que ocorrem naturalmente pela exposição ao frio extremo, afetando principalmente o nariz, dedos das mãos e pés ou orelhas. Na maioria das vezes resultam em gangrena e são bem comuns nos habitantes dos polos, turistas e praticantes de modalidades na neve. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a influência das células-tronco mesenquimais de origem adiposa (ADSCs) na cicatrização de feridas cutâneas padronizadas e induzidas pelo nitrogênio líquido em ratos em duas fases da cicatrização cutânea: fase de proliferação e fase de remodelação. Utilizaram-se 83 ratos Wistar, machos, hígidos, com oito semanas de idade, sendo três animais usados como doadores de tecido adiposo para posterior obtenção das ADSCs e, 80 animais divididos aleatoriamente em oito grupos de tratamento (n=10). Através da aplicação do nitrogênio líquido pela técnica do spray aberto, realizou-se a indução de uma ferida, de aproximadamente 15 mm de diâmetro, na região dorsal de cada rato. A ferida recebeu o tratamento de acordo com o grupo ao qual pertencia: a) aplicação das ADSCs, por via subcutânea, no 15º dia (T1), no 30º dia (T2) ou nos dois tempos mencionados (T3) após a indução da lesão; b) aplicação da solução cloreto de sódio 0,9%, por via subcutânea, no 15º dia (S1), no 30º dia (S2) ou nesses dois tempos (S3) após a indução da lesão; c) nenhuma intervenção até o momento da eutanásia dos animais no 45º dia (C1) ou no 60º dia (C2). Macroscopicamente, a cada cinco dias, analisaram-se as medidas das lesões e calculou- se a área e a taxa de contração cicatricial das mesmas. No 45º ou no 60º dia pós- operatório, procedeu-se à coleta das biópsias para avaliação histopatológica e imuno- histoquímica. Com base nos resultados obtidos concluiu-se que: 1) o grupo T1 apresenta as maiores taxas de contração média das feridas no 20º e 25º dia; 2) o grupo T3 obteve a maior taxa de contração média das feridas no 30º dia pós-operatório; 3) o grupo T2 apresenta as maiores taxas de contração média das feridas no 55º e 60º dia; 4) o grupo T1 obteve diferença estatisticamente significativa em relação ao grupo sham (S3) quanto à neovascularização, avaliada pela técnica de imuno-histoquímica com o VEGF; 5) o grupo sham (S1) obteve diferença estatística significativa em relação aos grupos tratados com as ADSCs (T2 e T3) quanto à proliferação epitelial, avaliada pela técnica de imuno-histoquímica com o anticorpo Ki-67; 6) a terapia com as ADSCs proporciona uma relevante evolução clínica das feridas, podendo ser constatada ao final do período de avaliação por cicatrizes mais estreitas e compridas com as medidas da área final inferiores às cicatrizes dos grupos controle (C1 e C2) e sham (S1, S2 e S3). Propõem-se a necessidade de novos estudos com as ADSCs na cicatrização de lesões cutâneas provocadas pela criocirurgia ou por outra modalidade de congelamento, realizando biópsias com análises histopatológicas e imuno-histoquímicas em períodos de tempo menores e maiores aos realizados nesse estudo, a fim de detectar, respectivamente, diferenças no processo de cicatrização imediatamente após a aplicação das ADSCs e, também, acompanhar o remodelamento da cicatriz por um período mais longo. / Cryosurgery has been used to treat different diseases of systems and organs in both human and veterinary medicine. Although treatment of skin disorders is the leading indication, adverse effects such as delayed wound healing, large scars, esthetical deformation and functional impairment have been reported from administration of cryogenic substance. Beside that there are injuries caused naturally by the exposure to extreme cold weather conditions, which affect specially nose, fingers, toes and ears, mostly resulting in gangrene. These frostbites are very common in people who live in the Poles, tourists and snowboarders. This study aims to evaluate the influence of adipose-derived stem cells (ADSCs) on cutaneous wound healing that were standardized and induced by liquid nitrogen in rats according to two phases of cutaneous healing: proliferation phase and remodelling phase. For research purposes, 83 male, healthy and eight-weeks-old Wistar rats were required. Among 83 rats, three were used as adipose tissue donor for later ADSCs obtention and 80 Wistar rats were randomly divided in eight treatment groups (n=10). Through the application of liquid nitrogen by spraying technique, a 15 millimetres in diameter lesion was produced in the dorsal region of each rat. The wound received treatment according to the group it belonged: a) subcutaneously ADSCs application on the 15th day (T1), on the 30th day (T2) or in both periods mentioned (T3) after wound induction; b) subcutaneously application of 0.9% sodium chloride solution on the 15th day (S1), on the 30th day (S2) or in both periods mentioned (S3) after wound induction; c) no intervention until euthanasia on the 45th day (C1) or 60th day (C2) Macroscopically, every five days, the wounds were measured to calculate their area and healing rate. On the 45th and 60th postoperative day, biopsies were performed for histopathological and immunohistochemical evaluations. By the obtained results, the study concludes that:1) T1 group shows the highest wound average contraction rate on the 20th and 25th day; 2) T3 group presents the highest wound average contraction rate on the 30th postoperative day; 3) T2 group has the highest wound average contraction rate on the 55th and 60th day; 4) T1 group got a significant statistical difference in relation to sham group (S3) when it refers to neovascularization, which was evaluated by immunohistochemical technique with VEGF; 5) sham group (S1) obtained a significant statistical difference when compared to ADSCs groups (T2 and T3) with respect to epithelial proliferation, that was evaluated by immunohistochemical technique using antibody Ki-67; 6) the ADSCs therapy provides an important clinical evolution of wounds. This was verified at the end of evaluation period through narrower and longer scars with bottom end area measurements inferior to control group scars (C1 and C2) and sham group scars (S1, S2 and S3). Lastly, this paper proposes the necessity of new studies about the uses of ADSCs for cutaneous wound healing caused by cryosurgery or other sort of freeze. Furthermore it is opportune taking an action on studies that do biopsies with histopathological and immunohistochemical analyses using shorter and longer periods of time that those executed on this paper. Thus it will be possible to find out, respectively, differences on the healing process immediately after applying ADSCs and also follow up the scar remodelling for a longer period.

A criocirurgia tem sido utilizada no tratamento de diferentes enfermidades de sistemas e órgãos, tanto na medicina humana quanto na medicina veterinária, sendo sua maior indicação o tratamento de dermatopatias. Contudo, efeitos adversos como a cicatrização lenta, cicatrizes extensas, disfunção estética e funcional, são relatados após a aplicação da substância criogênica. Ainda, existem as lesões que ocorrem naturalmente pela exposição ao frio extremo, afetando principalmente o nariz, dedos das mãos e pés ou orelhas. Na maioria das vezes resultam em gangrena e são bem comuns nos habitantes dos polos, turistas e praticantes de modalidades na neve. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a influência das células-tronco mesenquimais de origem adiposa (ADSCs) na cicatrização de feridas cutâneas padronizadas e induzidas pelo nitrogênio líquido em ratos em duas fases da cicatrização cutânea: fase de proliferação e fase de remodelação. Utilizaram-se 83 ratos Wistar, machos, hígidos, com oito semanas de idade, sendo três animais usados como doadores de tecido adiposo para posterior obtenção das ADSCs e, 80 animais divididos aleatoriamente em oito grupos de tratamento (n=10). Através da aplicação do nitrogênio líquido pela técnica do spray aberto, realizou-se a indução de uma ferida, de aproximadamente 15 mm de diâmetro, na região dorsal de cada rato. A ferida recebeu o tratamento de acordo com o grupo ao qual pertencia: a) aplicação das ADSCs, por via subcutânea, no 15º dia (T1), no 30º dia (T2) ou nos dois tempos mencionados (T3) após a indução da lesão; b) aplicação da solução cloreto de sódio 0,9%, por via subcutânea, no 15º dia (S1), no 30º dia (S2) ou nesses dois tempos (S3) após a indução da lesão; c) nenhuma intervenção até o momento da eutanásia dos animais no 45º dia (C1) ou no 60º dia (C2). Macroscopicamente, a cada cinco dias, analisaram-se as medidas das lesões e calculou- se a área e a taxa de contração cicatricial das mesmas. No 45º ou no 60º dia pós- operatório, procedeu-se à coleta das biópsias para avaliação histopatológica e imuno- histoquímica. Com base nos resultados obtidos concluiu-se que: 1) o grupo T1 apresenta as maiores taxas de contração média das feridas no 20º e 25º dia; 2) o grupo T3 obteve a maior taxa de contração média das feridas no 30º dia pós-operatório; 3) o grupo T2 apresenta as maiores taxas de contração média das feridas no 55º e 60º dia; 4) o grupo T1 obteve diferença estatisticamente significativa em relação ao grupo sham (S3) quanto à neovascularização, avaliada pela técnica de imuno-histoquímica com o VEGF; 5) o grupo sham (S1) obteve diferença estatística significativa em relação aos grupos tratados com as ADSCs (T2 e T3) quanto à proliferação epitelial, avaliada pela técnica de imuno-histoquímica com o anticorpo Ki-67; 6) a terapia com as ADSCs proporciona uma relevante evolução clínica das feridas, podendo ser constatada ao final do período de avaliação por cicatrizes mais estreitas e compridas com as medidas da área final inferiores às cicatrizes dos grupos controle (C1 e C2) e sham (S1, S2 e S3). Propõem-se a necessidade de novos estudos com as ADSCs na cicatrização de lesões cutâneas provocadas pela criocirurgia ou por outra modalidade de congelamento, realizando biópsias com análises histopatológicas e imuno-histoquímicas em períodos de tempo menores e maiores aos realizados nesse estudo, a fim de detectar, respectivamente, diferenças no processo de cicatrização imediatamente após a aplicação das ADSCs e, também, acompanhar o remodelamento da cicatriz por um período mais longo. / Cryosurgery has been used to treat different diseases of systems and organs in both human and veterinary medicine. Although treatment of skin disorders is the leading indication, adverse effects such as delayed wound healing, large scars, esthetical deformation and functional impairment have been reported from administration of cryogenic substance. Beside that there are injuries caused naturally by the exposure to extreme cold weather conditions, which affect specially nose, fingers, toes and ears, mostly resulting in gangrene. These frostbites are very common in people who live in the Poles, tourists and snowboarders. This study aims to evaluate the influence of adipose-derived stem cells (ADSCs) on cutaneous wound healing that were standardized and induced by liquid nitrogen in rats according to two phases of cutaneous healing: proliferation phase and remodelling phase. For research purposes, 83 male, healthy and eight-weeks-old Wistar rats were required. Among 83 rats, three were used as adipose tissue donor for later ADSCs obtention and 80 Wistar rats were randomly divided in eight treatment groups (n=10). Through the application of liquid nitrogen by spraying technique, a 15 millimetres in diameter lesion was produced in the dorsal region of each rat. The wound received treatment according to the group it belonged: a) subcutaneously ADSCs application on the 15th day (T1), on the 30th day (T2) or in both periods mentioned (T3) after wound induction; b) subcutaneously application of 0.9% sodium chloride solution on the 15th day (S1), on the 30th day (S2) or in both periods mentioned (S3) after wound induction; c) no intervention until euthanasia on the 45th day (C1) or 60th day (C2) Macroscopically, every five days, the wounds were measured to calculate their area and healing rate. On the 45th and 60th postoperative day, biopsies were performed for histopathological and immunohistochemical evaluations. By the obtained results, the study concludes that:1) T1 group shows the highest wound average contraction rate on the 20th and 25th day; 2) T3 group presents the highest wound average contraction rate on the 30th postoperative day; 3) T2 group has the highest wound average contraction rate on the 55th and 60th day; 4) T1 group got a significant statistical difference in relation to sham group (S3) when it refers to neovascularization, which was evaluated by immunohistochemical technique with VEGF; 5) sham group (S1) obtained a significant statistical difference when compared to ADSCs groups (T2 and T3) with respect to epithelial proliferation, that was evaluated by immunohistochemical technique using antibody Ki-67; 6) the ADSCs therapy provides an important clinical evolution of wounds. This was verified at the end of evaluation period through narrower and longer scars with bottom end area measurements inferior to control group scars (C1 and C2) and sham group scars (S1, S2 and S3). Lastly, this paper proposes the necessity of new studies about the uses of ADSCs for cutaneous wound healing caused by cryosurgery or other sort of freeze. Furthermore it is opportune taking an action on studies that do biopsies with histopathological and immunohistochemical analyses using shorter and longer periods of time that those executed on this paper. Thus it will be possible to find out, respectively, differences on the healing process immediately after applying ADSCs and also follow up the scar remodelling for a longer period.