O uso do frio pela medicina é muito antigo, utilizado inicialmente de forma empírica, teve grandes avanços nos séculos XIV e XX, evoluindo juntamente com a Física. O surgimento de novas técnicas e equipamentos, possibilitou à crioterapia tornar-se uma importante opção no tratamento de neoplasias, benignas e malignas, de diferentes órgãos (tais como fígado, próstata, pâncreas e mamas) e sistemas (ósseo, neurológico e tegumentar). O grande desenvolvimento tecnológico permitiu além do maior número de indicações, melhores resultados, mormente com o uso de técnicas de imagem para o acompanhamento do procedimento. Porém, poucos são os trabalhos que enfocam a monitorização e mensuração do congelamento, pela tomografia computadorizada, bem como avaliação da necrose obtida. No presente trabalho propôs-se avaliar as relações entre as medidas obtidas pela tomografia computadorizada, em 20 cães da raça Beagle, durante o congelamento por aplicação do nitrogênio pela sonda fechada (75 segundos), spray (75 e 135 segundos) e derramamento (75 segundos), comparando estas medidas com aquelas mensuradas pela histopatologia da necrose provocada, para posteriormente avaliar a efetividade dos métodos e criar protocolos de tratamento. Os valores de diâmetro, raio, profundidade e volume do congelamento foram comparados entre si e, com os respectivos valores da necrose após 96 horas do procedimento. Os valores foram submetidos a análise de variância de medidas repetidas e teste de Bonferroni (p<0,05). Constatou-se que: a técnica de sonda fechada oferece congelamento e subseqüente necrose mais superficial que os outros métodos, sendo a técnica menos efetiva; em todas as técnicas o volume, diâmetro e profundidade são inferiores no tecido necrosado quando comparados aos seus similares naquele congelado; em nenhuma das quatro técnicas a profundidade de congelamento foi equivalente ao seu raio. Finalmente, houve a possibilidade de desenvolvimento de protocolos alternativos de congelamento a partir da profundidade de necrose pretendida (hf), obtendo-se como resultado (sonda - Di = hf / 0,29; spray I; Di = hf / 0,31; spray II - Di = hf / 0,35; derramamento -Di = hf / 0,38) o diâmetro do congelamento (Di) necessário para o êxito do tratamento / The use of cold by Medicine is a very old practice, initially used empirically, which had significant advances in the XIV and XX centuries, developing along with Physics. The appearance of new techniques and equipment turned cryotherapy into an important option in the treatment of benign and malignant neoplasms in different organs (such as the liver, the prostate, the pancreas and breasts) and systems (bone, neurological and tegumentary). The large technological development resulted in a higher number of indications as well as better results, especially with the concomitant use of imaging techniques to follow the procedure. However, few studies focus on the monitoring and mensuration of freezing through computed tomography, as well as the assessment of the resulting necrosis. Our study aims at evaluating the association between the measurements obtained through computed tomography in 20 Beagle dogs during freezing by liquid nitrogen use through a probe (75 sec), spray (75 and 135 sec) and overflow (75 sec), comparing these measurements to those obtained through histopathological analysis of the resulting necrosis, for later evaluation of the effectiveness of the methods and design of better treatment protocols. The values of diameter, radius, depth and volume of freezing were compared among them and also with the respective necrosis values 96 hours after the procedure. The values were submitted to analysis of variance of repeated measurements and Bonferroni test (p<0.05). We observed that the closed probe technique causes a more superficial freezing and resulting necrosis when compared to the other methods, being the less effective technique. In all techniques, the volume, diameter and depth are lower in the necrotic tissue when compared to those in the frozen tissue; none of the four techniques showed that freezing depth was equivalent to its radius. Finally, alternative freezing protocols could be developed from the depth of the intended necrosis (hf), resulting in the freezing diameter (Di) (probe - Di = hf/0.29; spray I; Di = hf/0.31; spray II Di = hf/0.35; overflow Di = hf/0.38), which is necessary for therapy success

O uso do frio pela medicina é muito antigo, utilizado inicialmente de forma empírica, teve grandes avanços nos séculos XIV e XX, evoluindo juntamente com a Física. O surgimento de novas técnicas e equipamentos, possibilitou à crioterapia tornar-se uma importante opção no tratamento de neoplasias, benignas e malignas, de diferentes órgãos (tais como fígado, próstata, pâncreas e mamas) e sistemas (ósseo, neurológico e tegumentar). O grande desenvolvimento tecnológico permitiu além do maior número de indicações, melhores resultados, mormente com o uso de técnicas de imagem para o acompanhamento do procedimento. Porém, poucos são os trabalhos que enfocam a monitorização e mensuração do congelamento, pela tomografia computadorizada, bem como avaliação da necrose obtida. No presente trabalho propôs-se avaliar as relações entre as medidas obtidas pela tomografia computadorizada, em 20 cães da raça Beagle, durante o congelamento por aplicação do nitrogênio pela sonda fechada (75 segundos), spray (75 e 135 segundos) e derramamento (75 segundos), comparando estas medidas com aquelas mensuradas pela histopatologia da necrose provocada, para posteriormente avaliar a efetividade dos métodos e criar protocolos de tratamento. Os valores de diâmetro, raio, profundidade e volume do congelamento foram comparados entre si e, com os respectivos valores da necrose após 96 horas do procedimento. Os valores foram submetidos a análise de variância de medidas repetidas e teste de Bonferroni (p<0,05). Constatou-se que: a técnica de sonda fechada oferece congelamento e subseqüente necrose mais superficial que os outros métodos, sendo a técnica menos efetiva; em todas as técnicas o volume, diâmetro e profundidade são inferiores no tecido necrosado quando comparados aos seus similares naquele congelado; em nenhuma das quatro técnicas a profundidade de congelamento foi equivalente ao seu raio. Finalmente, houve a possibilidade de desenvolvimento de protocolos alternativos de congelamento a partir da profundidade de necrose pretendida (hf), obtendo-se como resultado (sonda - Di = hf / 0,29; spray I; Di = hf / 0,31; spray II - Di = hf / 0,35; derramamento -Di = hf / 0,38) o diâmetro do congelamento (Di) necessário para o êxito do tratamento / The use of cold by Medicine is a very old practice, initially used empirically, which had significant advances in the XIV and XX centuries, developing along with Physics. The appearance of new techniques and equipment turned cryotherapy into an important option in the treatment of benign and malignant neoplasms in different organs (such as the liver, the prostate, the pancreas and breasts) and systems (bone, neurological and tegumentary). The large technological development resulted in a higher number of indications as well as better results, especially with the concomitant use of imaging techniques to follow the procedure. However, few studies focus on the monitoring and mensuration of freezing through computed tomography, as well as the assessment of the resulting necrosis. Our study aims at evaluating the association between the measurements obtained through computed tomography in 20 Beagle dogs during freezing by liquid nitrogen use through a probe (75 sec), spray (75 and 135 sec) and overflow (75 sec), comparing these measurements to those obtained through histopathological analysis of the resulting necrosis, for later evaluation of the effectiveness of the methods and design of better treatment protocols. The values of diameter, radius, depth and volume of freezing were compared among them and also with the respective necrosis values 96 hours after the procedure. The values were submitted to analysis of variance of repeated measurements and Bonferroni test (p<0.05). We observed that the closed probe technique causes a more superficial freezing and resulting necrosis when compared to the other methods, being the less effective technique. In all techniques, the volume, diameter and depth are lower in the necrotic tissue when compared to those in the frozen tissue; none of the four techniques showed that freezing depth was equivalent to its radius. Finally, alternative freezing protocols could be developed from the depth of the intended necrosis (hf), resulting in the freezing diameter (Di) (probe - Di = hf/0.29; spray I; Di = hf/0.31; spray II Di = hf/0.35; overflow Di = hf/0.38), which is necessary for therapy success

Imiquimod é uma imidazoquinolina, agonista do TLR-7, ativador de células dendríticas (DC) e indutor da transcrição de diversas citocinas. O objetivo deste estudo é avaliar o crescimento tumoral, a formação de metástases em órgãos internos, a atividade do sistema imune e o tipo de morte celular induzido devido ao tratamento tópico. Camundongos foram inoculados com células de melanoma murino B16F10. O fármaco, na dose de 5mg, foi aplicado no local da inoculação uma vez por dia até o fim do experimento. Foram estudados quatro grupos experimentais, dois inoculado com células tumorais, sendo um tratado e outro não, e outros dois grupos, um recebeu somente o tratamento com o fármaco e o outro não recebeu tratamento. Os animais foram pesados e seus tumores medidos periodicamente. Exemplares dos grupos foram sacrificados em quatro tempos diferentes, imediatamente submetidos à necropsia para a análise de massas tumorais por citometria de fluxo com caspase-3 e anexina-v para investigar a indução de apoptose e/ ou necrose tumoral, e remoção do tumor, pele, Baço, linfonodo e pulmão, que foram fixados, inclusos em parafina, cortados e corados com HE, para análise histológica. / Imiquimod is a TLR-7 agonist and activator of dendritic cells (DC), and induces transcription of several cytokines. This study`s objective is to evaluate tumor growth, development of metastasis within internal organs and the immune system`s function, due to the topical treatment. Two groups of C57BL/6J mice were inoculated with B16F10 melanoma cells subcutaneously, and only one of the groups was treated, applied topically at the injection site once a day, followed by a second round of two groups, one treated and the other as a healthy group. Every two tumors and weight were measured. In order to observe the tumor progression and treatment effects, groups of animals were sacrificed on four days apart and immediately submitted to necropsy for a tumor analysis by flow cytometry, to evaluate the induction of apoptosis and necrosis, and to macroscopically observe the tumor development within internal organs, vascularization and posterior inclusion of the organs in paraffin for histological analysis. Tumor, skin, spleen, limph node and lung were colored with HE for histological analysis of migrating immune system cells and tumoral cells in the organs and describing its integrity.

A toxicidade da formulação comercial contendo o praguicida piretróide deltametrina foi testada nas espécies de peixe Danio rerio, Hyphessobrycon bifasciatus, Geophagus brasiliensis e Oreochromis niloticus por meio de testes de toxicidade aguda, avaliação de alterações comportamentais e análises anatomopatológicas do fígado e das brânquias. A espécie D. rerio apresentou CL50;48h igual a 0,078&micro;g L-1, a espécie H. bifasciatus apresentou CL50;48h igual a 0,082&micro;g L-1, a espécie G. brasiliensis apresentou CL50;48h igual a 0,594&micro;g L-1 e O. niloticus apresentou CL50;48h igual a 0,954&micro;g L-1. As análises de comportamento realizadas com as espécies D. rerio e H. bifasciatus mostrou ser a segunda mais sensível ao praguicida, revelando alterações significativas nas menores doses de exposição. As análises anatomopatológicas realizadas com a espécie G. brasiliensis quando exposta à concentrações subagudas do praguicida mostrou vacuolização e degeneração nuclear hepática e nas brânquias a ocorrência de hiperplasia lamelar e fusão nas lamelas secundárias que aumentaram em função da concentração do praguicida e do tempo de exposição. Os resultados demonstraram elevada toxicidade do praguicida para todas as espécies testadas. / The toxicity of the commercial formulation containing the pesticide pirethroid deltamethrin was tested in the species of fish Danio rerio, Hyphessobrycon bifasciatus, Geophagus brasiliensis and Oreochromis niloticus through tests of acute toxicity, evaluation of behavioral alterations and anatomopathological analysis of the liver and of the gills. The species D. rerio presented LC50;48h equals to 0,078&micro;g L-1, the species H. bifasciatus presented LC50;48h equals to 0,082&micro;g L-1, the species G. brasiliensis presented LC50;48h equals to 0,594&micro;g L- 1 and O. niloticus presented LC50;48h equals to 0,954&micro;g L-1. The analysis of behavior accomplished with the species D. rerio and H. bifasciatus showed that the second one was more sensitive to the pesticide, and revealed significant alterations in the exhibition of fewer doses. The anatomopathological analysis accomplished with the species G. brasiliensis, when exposed to underacute concentrations of the pesticide, showed vacuolization and hepatical nuclear degeneration and the occurrence of lamellar hyperplasia in the gills plus fusion in the secondary lamellas which were increased due to the concentration of the pesticide and of the time of exposition. The results demonstrated high toxicity of the pesticide for all of the tested species.

A toxicidade da formulação comercial contendo o praguicida piretróide deltametrina foi testada nas espécies de peixe Danio rerio, Hyphessobrycon bifasciatus, Geophagus brasiliensis e Oreochromis niloticus por meio de testes de toxicidade aguda, avaliação de alterações comportamentais e análises anatomopatológicas do fígado e das brânquias. A espécie D. rerio apresentou CL50;48h igual a 0,078&micro;g L-1, a espécie H. bifasciatus apresentou CL50;48h igual a 0,082&micro;g L-1, a espécie G. brasiliensis apresentou CL50;48h igual a 0,594&micro;g L-1 e O. niloticus apresentou CL50;48h igual a 0,954&micro;g L-1. As análises de comportamento realizadas com as espécies D. rerio e H. bifasciatus mostrou ser a segunda mais sensível ao praguicida, revelando alterações significativas nas menores doses de exposição. As análises anatomopatológicas realizadas com a espécie G. brasiliensis quando exposta à concentrações subagudas do praguicida mostrou vacuolização e degeneração nuclear hepática e nas brânquias a ocorrência de hiperplasia lamelar e fusão nas lamelas secundárias que aumentaram em função da concentração do praguicida e do tempo de exposição. Os resultados demonstraram elevada toxicidade do praguicida para todas as espécies testadas. / The toxicity of the commercial formulation containing the pesticide pirethroid deltamethrin was tested in the species of fish Danio rerio, Hyphessobrycon bifasciatus, Geophagus brasiliensis and Oreochromis niloticus through tests of acute toxicity, evaluation of behavioral alterations and anatomopathological analysis of the liver and of the gills. The species D. rerio presented LC50;48h equals to 0,078&micro;g L-1, the species H. bifasciatus presented LC50;48h equals to 0,082&micro;g L-1, the species G. brasiliensis presented LC50;48h equals to 0,594&micro;g L- 1 and O. niloticus presented LC50;48h equals to 0,954&micro;g L-1. The analysis of behavior accomplished with the species D. rerio and H. bifasciatus showed that the second one was more sensitive to the pesticide, and revealed significant alterations in the exhibition of fewer doses. The anatomopathological analysis accomplished with the species G. brasiliensis, when exposed to underacute concentrations of the pesticide, showed vacuolization and hepatical nuclear degeneration and the occurrence of lamellar hyperplasia in the gills plus fusion in the secondary lamellas which were increased due to the concentration of the pesticide and of the time of exposition. The results demonstrated high toxicity of the pesticide for all of the tested species.

O Papilomavírus bovino (BPV) gera prejuízos à pecuária. O trabalho buscou isolar vírions de BPV de papilomas cutâneos previamente diagnosticados e avaliar o potencial clastogênico do vírus através do ensaio cometa (EC). O DNA tecidual foi extraído e submetido a PCR. As bandas foram purificadas e sequenciadas. As sequências foram analisadas através de bioinformática. A tipagem mostrou a prevalência de BPV-2. A análise histopatológica revelou acantose, coilocitose e hiperqueratose. Foi possível detectar a presença de fibroblastos transformados, sugerindo uma via de infecção através do sangue. A imuno-detecção das proteínas L1 e E7 no estroma sugere atividade transformadora do BPV em fibroblastos. O EC mostrou a ação clastogênica estatisticamente igual entre os tipos virais BPV-2, 5 e 9. O isolamento viral foi realizado através de ultracentrifugação em densidade única de cloreto de césio, empregando uma nova metodologia, que se mostrou menos laboriosa do que as já descritas, permitindo o isolamento de vírions de BPV-2, iniciando o banco de vírus proposto. / The Bovine papillomavirus (BPV) generates losses to livestock. The study sought to isolate BPV virions from cutaneous papillomas previously diagnosed and evaluate the clastogenic potential of the virus through the comet assay (EC). The tissue DNA was extracted and subjected to PCR. The bands were purified and sequenced. Sequences were analyzed using bioinformatics. The typing showed the prevalence of BPV-2. Histopathology showed acanthosis, hyperkeratosis and koilocytosis. It was possible to detect the presence of transformed fibroblasts, suggesting a route of infection through the blood. Immunohistochemical detection of L1 and E7 proteins in the stroma suggests transforming activity of BPV in fibroblasts. The EC clastogenic action showed statistically equal among the virus types BPV-2, 5 and 9. Viral isolation was performed by ultracentrifugation in a single cesium chloride density, using a new method that was less laborious than those already described, allowing the isolation of BPV-2 virions, starting the proposed stock virus.

O Papilomavírus bovino (BPV) gera prejuízos à pecuária. O trabalho buscou isolar vírions de BPV de papilomas cutâneos previamente diagnosticados e avaliar o potencial clastogênico do vírus através do ensaio cometa (EC). O DNA tecidual foi extraído e submetido a PCR. As bandas foram purificadas e sequenciadas. As sequências foram analisadas através de bioinformática. A tipagem mostrou a prevalência de BPV-2. A análise histopatológica revelou acantose, coilocitose e hiperqueratose. Foi possível detectar a presença de fibroblastos transformados, sugerindo uma via de infecção através do sangue. A imuno-detecção das proteínas L1 e E7 no estroma sugere atividade transformadora do BPV em fibroblastos. O EC mostrou a ação clastogênica estatisticamente igual entre os tipos virais BPV-2, 5 e 9. O isolamento viral foi realizado através de ultracentrifugação em densidade única de cloreto de césio, empregando uma nova metodologia, que se mostrou menos laboriosa do que as já descritas, permitindo o isolamento de vírions de BPV-2, iniciando o banco de vírus proposto. / The Bovine papillomavirus (BPV) generates losses to livestock. The study sought to isolate BPV virions from cutaneous papillomas previously diagnosed and evaluate the clastogenic potential of the virus through the comet assay (EC). The tissue DNA was extracted and subjected to PCR. The bands were purified and sequenced. Sequences were analyzed using bioinformatics. The typing showed the prevalence of BPV-2. Histopathology showed acanthosis, hyperkeratosis and koilocytosis. It was possible to detect the presence of transformed fibroblasts, suggesting a route of infection through the blood. Immunohistochemical detection of L1 and E7 proteins in the stroma suggests transforming activity of BPV in fibroblasts. The EC clastogenic action showed statistically equal among the virus types BPV-2, 5 and 9. Viral isolation was performed by ultracentrifugation in a single cesium chloride density, using a new method that was less laborious than those already described, allowing the isolation of BPV-2 virions, starting the proposed stock virus.

Imiquimod é uma imidazoquinolina, agonista do TLR-7, ativador de células dendríticas (DC) e indutor da transcrição de diversas citocinas. O objetivo deste estudo é avaliar o crescimento tumoral, a formação de metástases em órgãos internos, a atividade do sistema imune e o tipo de morte celular induzido devido ao tratamento tópico. Camundongos foram inoculados com células de melanoma murino B16F10. O fármaco, na dose de 5mg, foi aplicado no local da inoculação uma vez por dia até o fim do experimento. Foram estudados quatro grupos experimentais, dois inoculado com células tumorais, sendo um tratado e outro não, e outros dois grupos, um recebeu somente o tratamento com o fármaco e o outro não recebeu tratamento. Os animais foram pesados e seus tumores medidos periodicamente. Exemplares dos grupos foram sacrificados em quatro tempos diferentes, imediatamente submetidos à necropsia para a análise de massas tumorais por citometria de fluxo com caspase-3 e anexina-v para investigar a indução de apoptose e/ ou necrose tumoral, e remoção do tumor, pele, Baço, linfonodo e pulmão, que foram fixados, inclusos em parafina, cortados e corados com HE, para análise histológica. / Imiquimod is a TLR-7 agonist and activator of dendritic cells (DC), and induces transcription of several cytokines. This study`s objective is to evaluate tumor growth, development of metastasis within internal organs and the immune system`s function, due to the topical treatment. Two groups of C57BL/6J mice were inoculated with B16F10 melanoma cells subcutaneously, and only one of the groups was treated, applied topically at the injection site once a day, followed by a second round of two groups, one treated and the other as a healthy group. Every two tumors and weight were measured. In order to observe the tumor progression and treatment effects, groups of animals were sacrificed on four days apart and immediately submitted to necropsy for a tumor analysis by flow cytometry, to evaluate the induction of apoptosis and necrosis, and to macroscopically observe the tumor development within internal organs, vascularization and posterior inclusion of the organs in paraffin for histological analysis. Tumor, skin, spleen, limph node and lung were colored with HE for histological analysis of migrating immune system cells and tumoral cells in the organs and describing its integrity.

Por meio desse estudo foi estabelecido um novo modelo de gestação complicada por diabetes tipo 1 em camundongos. O diabetes foi induzido em fêmeas de camundongos Swiss por aloxana e os animais foram acasalados após diferentes períodos de tempo. As fêmeas diabéticas apresentaram hiperglicemia, hipoinsulinemia, glicosúria, polifagia, polidipsia, e diminuição de peso corporal. A histoquímica do Picrosirius demonstrou o aumento dos colágenos fibrilares na decídua do grupo diabético. Análises imunohistoquímicas mostraram aumento dos colágenos I e V e diminuição do colágeno III e dos proteoglicanos biglicam e lumicam. Entretanto, a análise por PCR em tempo real indicou apenas o aumento do mRNA do colágeno I. A microscopia eletrônica revelou alterações na fibrilogênese do colágeno. O miométrio apresentou alterações na organização, citoarquitetura e sistema contráctil das camadas musculares, associadas à diminuição da proliferação celular. Esses resultados contribuem para explicar as alterações no desenvolvimento embrionário e a maior incidência de partos prematuros nas gestações diabéticas. / By means of this study a new mouse model of pregnancy complicated by type 1 diabetes was established. Diabetes was induced in female Swiss mice by alloxan and the animals were mated after different periods of time. Diabetic females showed hyperglycemia, hypoinsulinemia, glycosuria, polyphagy, polydipsy and decreased body weight. Picrosirius histochemistry demonstrated increased fibrillar collagens in the decidua of the diabetic group. Immunohistochemical analysis showed increased collagens I and III, and decreased collagen V and proteoglycans biglycan and lumican. However, real time PCR analysis indicated that only collagen I mRNA was increased. Transmission electron microscopy revealed alterations in collagen fibrillogenesis. The myometrium showed alterations in the organization, cytoarchitecture and contractile system of the muscle layers, associated with decreased proliferation. These results contribute to explain the alterations in embryo development and the higher incidence of preterm labor in diabetic pregnancies.

Por meio desse estudo foi estabelecido um novo modelo de gestação complicada por diabetes tipo 1 em camundongos. O diabetes foi induzido em fêmeas de camundongos Swiss por aloxana e os animais foram acasalados após diferentes períodos de tempo. As fêmeas diabéticas apresentaram hiperglicemia, hipoinsulinemia, glicosúria, polifagia, polidipsia, e diminuição de peso corporal. A histoquímica do Picrosirius demonstrou o aumento dos colágenos fibrilares na decídua do grupo diabético. Análises imunohistoquímicas mostraram aumento dos colágenos I e V e diminuição do colágeno III e dos proteoglicanos biglicam e lumicam. Entretanto, a análise por PCR em tempo real indicou apenas o aumento do mRNA do colágeno I. A microscopia eletrônica revelou alterações na fibrilogênese do colágeno. O miométrio apresentou alterações na organização, citoarquitetura e sistema contráctil das camadas musculares, associadas à diminuição da proliferação celular. Esses resultados contribuem para explicar as alterações no desenvolvimento embrionário e a maior incidência de partos prematuros nas gestações diabéticas. / By means of this study a new mouse model of pregnancy complicated by type 1 diabetes was established. Diabetes was induced in female Swiss mice by alloxan and the animals were mated after different periods of time. Diabetic females showed hyperglycemia, hypoinsulinemia, glycosuria, polyphagy, polydipsy and decreased body weight. Picrosirius histochemistry demonstrated increased fibrillar collagens in the decidua of the diabetic group. Immunohistochemical analysis showed increased collagens I and III, and decreased collagen V and proteoglycans biglycan and lumican. However, real time PCR analysis indicated that only collagen I mRNA was increased. Transmission electron microscopy revealed alterations in collagen fibrillogenesis. The myometrium showed alterations in the organization, cytoarchitecture and contractile system of the muscle layers, associated with decreased proliferation. These results contribute to explain the alterations in embryo development and the higher incidence of preterm labor in diabetic pregnancies.