O Papilomavírus Bovino do tipo 1 (BPV-1) causa fibropapilomas em bovinos e sarcóide em equinos, associados à expressão de oncoproteínas virais, principalmente E6 e E7. A purificação de oncoproteínas a partir de sistema recombinante possibilita seu estudo. Os objetivos foram expressar o gene E6 do BPV-1, purificar e analisar in silico a proteína recombinante obtida. O amplificado foi clonado em E. coli e os plasmídeos foram sequenciados, confirmando a matriz correta de leitura. Após indução da expressão, a proteína recombinante foi identificada e purificada. A microscopia eletrônica mostrou a formação de corpúsculos de inclusão. As análises in silico apontaram as mutações das sequências gênica e proteica de E6-1 em relação às depositadas. Foi realizada a predição tridimensional da estrutura da proteína recombinante e identificadas as regiões conservadas, antigênicas e capazes de realizar ligações cátion-<font face=\"Symbol\">p. Logo, a proteína recombinante E6 do BPV-1 foi obtida e purificada com sucesso, possibilitando o início de novos experimentos e estudos mais detalhados. / Bovine Papillomavirus type 1 (BPV-1) causes fibropapillomas in cattle and sarcoid in equines, associated with the expression of viral oncoproteins, E6 and E7 particularly. Purification of oncoproteins from recombinant system allows their study. The aim of this study was cloning and expressing BPV-1 E6 gene, purify and analyze in silico recombinant protein. Amplicon was cloned into E. coli and the plasmids were sequenced to confirm the correct reading frame. After induction of expression, the recombinant protein was identified and purified. Electron microscopy showed the inclusion bodies formation. In silico analysis showed mutations in E6-1 gene and protein sequences when there were compared to sequences available in current database. Three-dimensional structure prediction of the recombinant protein was performed and conserved, antigenic and cation-<font face=\"Symbol\">p interaction regions were identified. Therefore, BPV-1 E6 recombinant protein was obtained and successfully purified enabling new experiments and more detailed studies.

O Papilomavírus Bovino do tipo 1 (BPV-1) causa fibropapilomas em bovinos e sarcóide em equinos, associados à expressão de oncoproteínas virais, principalmente E6 e E7. A purificação de oncoproteínas a partir de sistema recombinante possibilita seu estudo. Os objetivos foram expressar o gene E6 do BPV-1, purificar e analisar in silico a proteína recombinante obtida. O amplificado foi clonado em E. coli e os plasmídeos foram sequenciados, confirmando a matriz correta de leitura. Após indução da expressão, a proteína recombinante foi identificada e purificada. A microscopia eletrônica mostrou a formação de corpúsculos de inclusão. As análises in silico apontaram as mutações das sequências gênica e proteica de E6-1 em relação às depositadas. Foi realizada a predição tridimensional da estrutura da proteína recombinante e identificadas as regiões conservadas, antigênicas e capazes de realizar ligações cátion-<font face=\"Symbol\">p. Logo, a proteína recombinante E6 do BPV-1 foi obtida e purificada com sucesso, possibilitando o início de novos experimentos e estudos mais detalhados. / Bovine Papillomavirus type 1 (BPV-1) causes fibropapillomas in cattle and sarcoid in equines, associated with the expression of viral oncoproteins, E6 and E7 particularly. Purification of oncoproteins from recombinant system allows their study. The aim of this study was cloning and expressing BPV-1 E6 gene, purify and analyze in silico recombinant protein. Amplicon was cloned into E. coli and the plasmids were sequenced to confirm the correct reading frame. After induction of expression, the recombinant protein was identified and purified. Electron microscopy showed the inclusion bodies formation. In silico analysis showed mutations in E6-1 gene and protein sequences when there were compared to sequences available in current database. Three-dimensional structure prediction of the recombinant protein was performed and conserved, antigenic and cation-<font face=\"Symbol\">p interaction regions were identified. Therefore, BPV-1 E6 recombinant protein was obtained and successfully purified enabling new experiments and more detailed studies.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2002. / Härtill 4 uppsatser.

O Papilomavírus bovino (BPV) gera prejuízos à pecuária. O trabalho buscou isolar vírions de BPV de papilomas cutâneos previamente diagnosticados e avaliar o potencial clastogênico do vírus através do ensaio cometa (EC). O DNA tecidual foi extraído e submetido a PCR. As bandas foram purificadas e sequenciadas. As sequências foram analisadas através de bioinformática. A tipagem mostrou a prevalência de BPV-2. A análise histopatológica revelou acantose, coilocitose e hiperqueratose. Foi possível detectar a presença de fibroblastos transformados, sugerindo uma via de infecção através do sangue. A imuno-detecção das proteínas L1 e E7 no estroma sugere atividade transformadora do BPV em fibroblastos. O EC mostrou a ação clastogênica estatisticamente igual entre os tipos virais BPV-2, 5 e 9. O isolamento viral foi realizado através de ultracentrifugação em densidade única de cloreto de césio, empregando uma nova metodologia, que se mostrou menos laboriosa do que as já descritas, permitindo o isolamento de vírions de BPV-2, iniciando o banco de vírus proposto. / The Bovine papillomavirus (BPV) generates losses to livestock. The study sought to isolate BPV virions from cutaneous papillomas previously diagnosed and evaluate the clastogenic potential of the virus through the comet assay (EC). The tissue DNA was extracted and subjected to PCR. The bands were purified and sequenced. Sequences were analyzed using bioinformatics. The typing showed the prevalence of BPV-2. Histopathology showed acanthosis, hyperkeratosis and koilocytosis. It was possible to detect the presence of transformed fibroblasts, suggesting a route of infection through the blood. Immunohistochemical detection of L1 and E7 proteins in the stroma suggests transforming activity of BPV in fibroblasts. The EC clastogenic action showed statistically equal among the virus types BPV-2, 5 and 9. Viral isolation was performed by ultracentrifugation in a single cesium chloride density, using a new method that was less laborious than those already described, allowing the isolation of BPV-2 virions, starting the proposed stock virus.

O Papilomavírus bovino (BPV) gera prejuízos à pecuária. O trabalho buscou isolar vírions de BPV de papilomas cutâneos previamente diagnosticados e avaliar o potencial clastogênico do vírus através do ensaio cometa (EC). O DNA tecidual foi extraído e submetido a PCR. As bandas foram purificadas e sequenciadas. As sequências foram analisadas através de bioinformática. A tipagem mostrou a prevalência de BPV-2. A análise histopatológica revelou acantose, coilocitose e hiperqueratose. Foi possível detectar a presença de fibroblastos transformados, sugerindo uma via de infecção através do sangue. A imuno-detecção das proteínas L1 e E7 no estroma sugere atividade transformadora do BPV em fibroblastos. O EC mostrou a ação clastogênica estatisticamente igual entre os tipos virais BPV-2, 5 e 9. O isolamento viral foi realizado através de ultracentrifugação em densidade única de cloreto de césio, empregando uma nova metodologia, que se mostrou menos laboriosa do que as já descritas, permitindo o isolamento de vírions de BPV-2, iniciando o banco de vírus proposto. / The Bovine papillomavirus (BPV) generates losses to livestock. The study sought to isolate BPV virions from cutaneous papillomas previously diagnosed and evaluate the clastogenic potential of the virus through the comet assay (EC). The tissue DNA was extracted and subjected to PCR. The bands were purified and sequenced. Sequences were analyzed using bioinformatics. The typing showed the prevalence of BPV-2. Histopathology showed acanthosis, hyperkeratosis and koilocytosis. It was possible to detect the presence of transformed fibroblasts, suggesting a route of infection through the blood. Immunohistochemical detection of L1 and E7 proteins in the stroma suggests transforming activity of BPV in fibroblasts. The EC clastogenic action showed statistically equal among the virus types BPV-2, 5 and 9. Viral isolation was performed by ultracentrifugation in a single cesium chloride density, using a new method that was less laborious than those already described, allowing the isolation of BPV-2 virions, starting the proposed stock virus.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 1994. / Vita. Includes bibliographical references (leaves [57]-62).

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2002. / Härtill 4 uppsatser.

Resumo não disponível.

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