A evolução sofrida pelas resinas compostas, aliada à sua característica de restaurar a aparência natural dos dentes em relação à cor e opacidade, torna esses materiais uma das principais escolhas entre os materiais restauradores usados na odontologia. A estabilidade de cor e a opacidade assumem um papel crucial no sucesso do tratamento restaurador estético, pois a alteração destas características pode indicar a substituição das restaurações estéticas. Essas propriedades estão relacionadas ao grau de conversão desses materiais no momento da polimerização. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do envelhecimento artificial acelerado sobre a estabilidade de cor, opacidade e densidade das ligações cruzadas de compósitos armazenados por 30 e 90 dias em ambientes diferentes (temperatura ambiente/geladeira). Foram utilizados 5 compósitos odontológicos em duas tonalidades: claras e escuras. As embalagens dos compósitos foram mantidas em temperatura ambiente (+/- 25ºC) e em geladeira (+/- 8ºC), sendo armazenados nestes ambientes por 30 e 90 dias, para posterior confecção dos corpos-de-prova (12 mm de diâmetro / 2 mm de espessura). Sobre essas amostras, foram realizadas as leituras da alteração de cor ( E), opacidade (OP), e densidade das ligações cruzadas, previamente e posteriormente a realização do procedimento de envelhecimento artificial acelerado. Após análise estatística (2-way ANOVA - Tukey - nível de significância em p<0.05), observou-se que compósitos QuiXfil Universal, Tetric EvoCeram C3 e SR Adoro A2, apresentaram valores para alteração de cor clinicamente inaceitável ( E 3,3). Quanto à opacidade, as resinas diretas, de tonalidades claras apresentaram menor opacidade que as tonalidades escuras enquanto que a resina indireta apresentou maior opacidade para a tonalidade clara que a escura. Quanto à densidade de ligações cruzadas, o envelhecimento artificial acelerado produziu um aumento na densidade de ligações cruzadas das resinas diretas. Concluiu-se que não houve um comportamento homogêneo dos materiais, em relação às propriedades estudadas, em função do tempo e ambiente de armazenagem sugerindo que a ação do envelhecimento é primordial e mais relevante para a alteração dos materiais ao longo do tempo. / The evolution of composite resins, allied to their characteristic of restoring the natural appearance of teeth regarding color and opacity, makes them one of the main materials of choice among the restorative materials used in dentistry. Color and opacity stability assume a crucial role in a successful aesthetic restoration treatment, since changes in these characteristics may indicate the replacement of aesthetic restorations. These properties are associated with these materials\' degree of conversion at the moment of polymerization. The purpose of this study was to evaluate the influence of artificial accelerated aging on color stability, opacity, and density of cross-links in composites stored for 30 and 90 days in different environments (room temperature/refrigerator). Five dental composites were used, with two shades: light and dark. Composite packages were kept in room temperature (+/- 25ºC) and in a refrigerator (+/- 8ºC), for 30 and 90 days, for posterior specimen fabrication (12 mm in diameter / 2 mm thick). Specimens were subjected to readings for color change ( E), opacity (OP), and cross-link density, before and after artificial accelerated aging. Statistical analysis (2-way ANOVA - Tukey - level of significance at p<0.05), revealed that QuiXfil Universal, Tetric EvoCeram C3, and SR Adoro A2 composites presented clinically unacceptable color changes ( E 3.3). Regarding opacity, light shade direct resins presented less opacity compared to dark shades, whereas light shade indirect resins presented more opacity than dark ones. As to cross-link density, artificial accelerated aging increased crosslink density in direct resins. It is concluded that the materials did not behave homogenously, in terms of the studied properties, under the effects of storage time and environment. This suggests that the effects of aging are imperative and more relevant to material changes over time.

Introdução: Testes de histocompatibilidade são indispensáveis para viabilizar o transplante renal. A prova cruzada por citotoxicidade dependente de complemento (CDC) tem sido a técnica padrão para avaliar risco imunológico pré-transplante, no entanto, a prova cruzada por citometria de fluxo (FCXM) possui benefícios adicionais, como maior sensibilidade e análise semi-quantitativa através do Median Channel Shift (MCS). Objetivo: Definir pontos de corte de MCS baseado em correlação inter-técnicas e desfechos clínicos pós-transplante. Método: Estudo retrospectivo com pacientes candidatos a transplante renal no Hospital de Clínicas de Porto Alegre, entre janeiro/2016-agosto/2017. Foram avaliadas 1705 provas cruzadas e 221 pacientes submetidos ao transplante. Resultados: A FCXM, relacionada ao CDC, apresentou sensibilidade=87%(FCXM-T) e 90%(FCXM-B), e VPN=98% para ambos. FCXM-B apresentou especificidade=43%, relacionada aos casos CDC-/FCXMB+. FCXM-T e -B detectaram 53% e 76% dos casos de DSA≥5001 (Donor Specific Antibody). MCS apresentou desempenho satisfatório em detectar CDC+ (AUC/IC): MCST=0,909(0,886-0,933) e MCSB=0,775(0,724-0,826). Pontos de corte de MCST=245 e MCSB=282 apresentaram melhor predição de CDC+. Não houve diferença na função do enxerto de pacientes transplantados com FCXM+. Apenas 30% das FCXM+ estiveram diretamente relacionadas com DSA pré-tx. No entanto, episódios de rejeição foram mais frequentes no grupo FCXM+vs.FCXM- (95%vs.86%, p=0,04). Conclusão: É possível calibrar o MCS baseado no CDC+, no entanto, significa um risco em termos da não detecção de anticorpos de baixo título. A FCXM+, em curto prazo, não deve ser por si só um fator impeditivo para o transplante. A análise conjunta do MCS e DSA parece ser uma boa ferramenta de seleção dos receptores renais. / Introduction: Histocompatibility tests are indispensable for enable the renal transplantation. Crossmatching tests for complement dependent cytotoxicity (CDC) has been a standard technique for assess pre-transplant immunological risk, however, the flow cytometry crossmatching test (FCXM) has additional benefits, such as increased sensitivity and semi-quantitative analysis through the Median Channel Shift (MCS). Objective: Define MCS cutoff values based on inter-technical correlation and post-transplant clinical outcomes. Methods: A retrospective study with renal transplant candidates at the Hospital de Clínicas of Porto Alegre, between January/2016-August/2017. A total of 1705 crossmatching and 221 patients submitted to transplantation were evaluated. Results: The FCXM, related to CDC, resulted in sensitivity=87% (FCXM-T) and 90% (FCXM-B), and NPV=98%, for both. FCXM-B resulted in specificity=43%, related to cases CDC-/FCXMB+. FCXM-T and -B detected 53% and 76% of cases of DSA≥5001 (Donor Specific Antibody). The MCS showed satisfactory performance in detecting CDC + (AUC/IC): MCST=0.909(0.886-0.933) and MCSB=0.775(0.724-0.826). Cutoff values of MCST=245 and MCSB=282 showed better prediction of CDC+. There was no difference in the graft function of patients transplanted with FCXM+. Only 30% of FCXM + were directly related to pre-tx DSA. However, rejection episodes were more frequent in the group FCXM+vs.FCXM- (95%vs.86%, p=0,04). Conclusion: it is possible to calibrate MCS based on CDC +, however, that means a risk in terms as to the non-detection of low-titre antibodies. The FCXM+, in the short term, should not be by itself an impediment to transplantation. Joint analysis of MCS and DSA seems to be a good tool for selection of renal receptors.

A evolução sofrida pelas resinas compostas, aliada à sua característica de restaurar a aparência natural dos dentes em relação à cor e opacidade, torna esses materiais uma das principais escolhas entre os materiais restauradores usados na odontologia. A estabilidade de cor e a opacidade assumem um papel crucial no sucesso do tratamento restaurador estético, pois a alteração destas características pode indicar a substituição das restaurações estéticas. Essas propriedades estão relacionadas ao grau de conversão desses materiais no momento da polimerização. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do envelhecimento artificial acelerado sobre a estabilidade de cor, opacidade e densidade das ligações cruzadas de compósitos armazenados por 30 e 90 dias em ambientes diferentes (temperatura ambiente/geladeira). Foram utilizados 5 compósitos odontológicos em duas tonalidades: claras e escuras. As embalagens dos compósitos foram mantidas em temperatura ambiente (+/- 25ºC) e em geladeira (+/- 8ºC), sendo armazenados nestes ambientes por 30 e 90 dias, para posterior confecção dos corpos-de-prova (12 mm de diâmetro / 2 mm de espessura). Sobre essas amostras, foram realizadas as leituras da alteração de cor ( E), opacidade (OP), e densidade das ligações cruzadas, previamente e posteriormente a realização do procedimento de envelhecimento artificial acelerado. Após análise estatística (2-way ANOVA - Tukey - nível de significância em p<0.05), observou-se que compósitos QuiXfil Universal, Tetric EvoCeram C3 e SR Adoro A2, apresentaram valores para alteração de cor clinicamente inaceitável ( E 3,3). Quanto à opacidade, as resinas diretas, de tonalidades claras apresentaram menor opacidade que as tonalidades escuras enquanto que a resina indireta apresentou maior opacidade para a tonalidade clara que a escura. Quanto à densidade de ligações cruzadas, o envelhecimento artificial acelerado produziu um aumento na densidade de ligações cruzadas das resinas diretas. Concluiu-se que não houve um comportamento homogêneo dos materiais, em relação às propriedades estudadas, em função do tempo e ambiente de armazenagem sugerindo que a ação do envelhecimento é primordial e mais relevante para a alteração dos materiais ao longo do tempo. / The evolution of composite resins, allied to their characteristic of restoring the natural appearance of teeth regarding color and opacity, makes them one of the main materials of choice among the restorative materials used in dentistry. Color and opacity stability assume a crucial role in a successful aesthetic restoration treatment, since changes in these characteristics may indicate the replacement of aesthetic restorations. These properties are associated with these materials\' degree of conversion at the moment of polymerization. The purpose of this study was to evaluate the influence of artificial accelerated aging on color stability, opacity, and density of cross-links in composites stored for 30 and 90 days in different environments (room temperature/refrigerator). Five dental composites were used, with two shades: light and dark. Composite packages were kept in room temperature (+/- 25ºC) and in a refrigerator (+/- 8ºC), for 30 and 90 days, for posterior specimen fabrication (12 mm in diameter / 2 mm thick). Specimens were subjected to readings for color change ( E), opacity (OP), and cross-link density, before and after artificial accelerated aging. Statistical analysis (2-way ANOVA - Tukey - level of significance at p<0.05), revealed that QuiXfil Universal, Tetric EvoCeram C3, and SR Adoro A2 composites presented clinically unacceptable color changes ( E 3.3). Regarding opacity, light shade direct resins presented less opacity compared to dark shades, whereas light shade indirect resins presented more opacity than dark ones. As to cross-link density, artificial accelerated aging increased crosslink density in direct resins. It is concluded that the materials did not behave homogenously, in terms of the studied properties, under the effects of storage time and environment. This suggests that the effects of aging are imperative and more relevant to material changes over time.

Foram identificadas diversas ambigüidades e contradições acerca do significado semântico, e da identificação de imagens tidas como de \"felinos\", no trabalho de diversos pesquisadores da área andina. Essas contradições são constantemente acompanhadas por uma idéia de que as representações de felinos teriam um conjunto de significados comuns, presentes praticamente em todas as culturas pré-colombianas, desde o período pré-formativo. Este trabalho procura questionar essa idéia, demonstrando, através da sociedade mochica, que as representações de felinos que figuram em suas manifestações artístico-religiosas não correspondem a esta idéia de universalidade. Da mesma forma, são discutidas as contradições presentes na bibliografia, a fim de elucidar a condição do felino dentro do âmbito da cultura analisada. Será dada especial atenção ao fato de que, de forma geral, há uma identificação imediata de imagens de \"mamíferos com presas à mostra\", como sendo de felinos. / Several ambiguities and contradictions in relation to the meaning and the identification of images held as \"felines\" have been identified in the works of many researches specialized in the Andean Pre-Columbian cultures. Such contradictions are constantly followed by the concept that all feline representations would carry the same symbolic meanings, regardless of the cultural differences or of the context in which they would be inserted in. This present work challenges this idea by demonstrating, through the analysis of the iconography produced by the mochica culture, that its feline representations do not correspond to such generalizations. An attempt is also made to elucidate the condition of the image of the feline in realm of the culture here analyzed. Special attention will be given to the fact that usually images of other mammals that carry the symbol of the \"cross-fangs\" are mistakenly identified as felines.

O número de dispositivos conectados e presentes na vida dos usuários é expressivo e a realização de atividades utilizando múltiplos dispositivos já é uma realidade. Entretanto, o uso integrado e sinérgico desses recursos, a que se denomina interação distribuída, tem encontrado empecilhos nas limitações dos sistemas em prover e atender interações dos usuários que atravessem as fronteiras do dispositivo. A diversidade de plataformas, bem como das áreas de pesquisa envolvidas são também forças contrárias à interação distribuída. O objetivo desta pesquisa, portanto, está em definir uma arquitetura que facilite a construção de aplicações observando aspectos de uma interação distribuída, na qual usuário e dispositivo não se acoplem unicamente no modelo de interação 1 usuário:1 dispositivo. Definiu-se uma arquitetura orientada a serviço, após pesquisa exploratória e sistemática acerca de frameworks e middlewares que promovem a integração entre dispositivos, e verificou-se sua viabilidade por provas de conceito. Como resultados, obteve-se um padrão de transições necessários para a construção de diversos cenários de uso e uma arquitetura orientada a serviços P2P dirigida a eventos que permite a implementação e execução desses cenários. / The number of connected devices and present in the lives of users is currently expressive and performing activities using multiple devices is already a reality. However, the integrated and synergistic use of these resources, which is called distributed interaction, has found obstacles in the limitations of current systems to provide and attend user interactions that cross the boundaries of the device. A variety of platforms, also involved research areas are contrary forces to the distributed interaction too. The aim of this research is therefore to define an architecture that facilitates the building of applications observing aspects of a distributed interaction, where user and device does not only bind in the interaction model 1 user:1 device. A service-oriented architecture has been defined, after exploratory and systematic research about frameworks and middlewares that promote integration among devices, and its feasibility has been verified by proofs of concept. As a result, we have obtained a pattern of transitions necessary for the construction of various usage scenarios and a P2P event-driven service-oriented architecture that allows implementation and execution of these scenarios.

Made available in DSpace on 2016-03-15T19:48:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Raimundo Monteiro Montenegro Neto.pdf: 581777 bytes, checksum: 809511339f05b79a3bd158efd3c97f53 (MD5) Previous issue date: 2010-08-19 / Raymond Lully, a citizen of the thirteenth century, developed a missions theory which he put into practice, in here called Lullyany Missiology. His theory was based on a vast philosophic, literary and apologetic work sympathetic to the Christianization of the world. According to Lully, the people would be reached by the argumentation and demonstration of the superiority of the Catholic Christian faith above all others religions. Lullyany Missiology focused primarily on the conversion from other religions people to Christianity, especially Muslims. It also included the restoration of Christianity through educating the people in their own values. During the days of Lully, there were many great conflicts between Christians and Muslims; much like the today s Christian Missions to the Muslims continue to provide challenges. The lack of true dialog and objective debate of ideas that has a mutual respect, audition and knowledge still marks the relationship between the followers of Christ and Mohammad. Lullyany Missiology sought to win the resistance through dialog and appreciation on the ambit and limitations of her days. It is presented here as an historic paradigm relevant to the realization of contemporary Christian Missions to the Muslims. The knowledge of that distant medieval scenery is necessary for the understanding of polemics and criticism to the Lullyany Missiology, as is the acknowledgement of the vanguard nature in the pursuit to demonstrate the next research. / Raimundo Lúlio, um cidadão catalão do séc. XIII, desenvolveu um projeto teóricoprático de missões (missiologia luliana) baseado em um vasto trabalho filosófico, literário e apologético em prol da cristianização do mundo a ser alcançada por intermédio da argumentação e demonstração racional da superioridade da fé cristã católica sobre as demais religiões. A missiologia luliana implicava primordialmente a conversão dos adeptos de outras religiões ao cristianismo, especialmente os muçulmanos, mas também incluía a restauração da cristandade através da educação nos seus próprios valores. As tensões entre cristãos e muçulmanos eram grandes nos dias de Lúlio e ainda hoje as missões cristãs aos islâmicos continua sendo um grande desafio. A falta de um diálogo franco e de um debate objetivo de idéias que tenham mútuos respeito, audição e conhecimento ainda têm marcado a relação entre os seguidores de Cristo e os de Maomé. A missiologia luliana buscou, no âmbito dos limites dos seus dias, vencer estas resistências através do diálogo e da alteridade e é aqui apresentada como um paradigma histórico relevante para a realização contemporânea de missões cristãs aos muçulmanos. O reconhecimento daquele distante cenário medieval é necessário para o devido entendimento das polêmicas e críticas à missiologia luliana, assim como para o reconhecimento da sua natureza vanguardista, como se busca demonstrar nesta pesquisa.

O pneu é o único vínculo entre o veículo e o solo, é ele que transmite toda a potência e carga, e garante a dirigibilidade e condução do automóvel. A estrutura resistente de um pneu é um dos pontos de maior importância para o rendimento, tipo de aplicação e segurança. E conhecê-la é condição primária para o projeto. Pneus convencionais, via de regra, apresentam uma estrutura par de lonas cruzadas (cross-ply), dispostas em ângulos opostos, menores que 90º. Este trabalho visa avaliar as influências de uma estrutura ímpar de lonas cruzadas, em pneus convencionais. Objetiva-se com isso uma redução na matéria prima e uma otimização no tempo de processo. As influências da estrutura ímpar foram verificadas através de uma análise de elementos finitos, examinando o andamento das tensões internas na carcaça do pneu e observando a geometria da região de contato pneu/solo. Verificou-se também a variação da uniformidade utilizando-se do ensaio SAE J332 em uma máquina Akron FD90. A utilização de uma estrutura ímpar, em pneus de lonas cruzadas, acarreta numa deformação na região de contato pneu/solo, devido ao desbalanceamento de tensões nos fios da carcaça, um aumento das componentes de ply-steer e uma variação de força lateral nas componentes dinâmicas avaliadas. A utilização de uma estrutura ímpar deve ser cuidadosamente selecionada dependendo da velocidade, severidade e condições de utilização. / The tire is the only bond between the vehicle and the ground, is it that transmits all the power and load, and guarantees the driven and conduction of the automobile. The resistant structure of a tire is one of the most important factors for the efficiency, type of application and security. Knowing these parameters is the primary condition to design a tire. Conventional tires, usually have a pair structure, made of crossed plies (cross-ply) in opposite angles lesser than 90º. The present work aim to evaluate the influence of an odd cross-ply structure, in conventional tires, looking forward to a material reduction and also an optimization on time process. The influence of an odd structure was evaluated through a finite element analysis, examining the cord stress at the tire carcass and the tire/ground contact region (foot-print). The variation of the uniformity was also verified through a SAE332 test did on Akron FD90 machine. It was observed that the use of an odd structure in cross-ply tires cause a tire/ground contact region deformation, because of the unbalance internal cord stress (at the carcass), and an increase of uniformities components (ply-steer and variation of lateral force). The use of an odd structure must be carefully selected, depending on the speed, severity and condition of use.

Orientador: Josimeri Hebling / Resumo: Objetivo: Avaliar o desempenho clínico de restaurações de resina composta em lesões cervicais não cariosas (LCNC) realizadas com ou sem a aplicação de um agente de ligação cruzada (carbodiimida, EDC) durante o período de 12 meses. Métodos: 21 pacientes com no mínimo duas LCNC participaram deste estudo. Um total de 142 LCNC foram distribuídas randomicamente em dois grupos (n=71 cada): controle e experimental. Todas as LCNC foram restauradas pelo mesmo operador e com os mesmos materiais (sistema adesivo Adper Single Bond 2 e resina composta Z350), sendo que, no grupo experimental a dentina recebeu a aplicação de EDC 0,5 mol/L por 60 segundos após o condicionamento ácido e no grupo controle apenas PBS. As restaurações foram avaliadas imediatamente após sua confecção (baseline) e após uma semana, 6 e 12 meses pelo critério USPHS/Ryge por apenas um avaliador calibrado. Os escores obtidos a partir da avaliação clínica, considerando-se os fatores de confundimento, foram analisados pelos testes de Woolf e Cochran-Mantel-Haenzel (p<0,05). Resultados: As taxas de falhas acumuladas na retenção das restaurações nos períodos 7 dias, 6 e 12 meses, foram de 0%; 3,0% e 4,5%, respectivamente, para o grupo controle e de 0%; 3,0% e 7,4% para o grupo experimental (EDC). Não houve diferença estatisticamente significante entre os dois grupos para todos os critérios e períodos avaliados. A taxa de retorno dos pacientes nos períodos de 7 dias, 6 e 12 meses foi de 100%, 90,5% e 85,7%, respectivamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: o evaluate the clinical performance of composite restorations placed in noncarious cervical lesions (NCCL) performed with or without the application of a cross-linking agent, over a period of 12 months. Methods: 21 patients with at least two NCCL, participated in this study. A total of 142 NCCL were randomly allocated into two groups (n=71): control and experimental. All NCCL were restored by the same operator and with the same materials (Single Bond 2 and Z350). In the experimental group the etched dentin was exposed to 0.5 mol/L EDC for 60 seconds while in the control group the etched dentin was exposed to Phosphate buffer solution (PBS). The restorations were evaluated at baseline, 7 days, 6 and 12 months using the USPHS/Ryge criteria, by one blinded calibrated examiner. The scores from the clinical evaluation were submitted to Woolf and CochranMantel-Haenzel tests, considering the confounding factors (p<0.05). Results: The rates of accumulated failures in the retention of restorations in the periods 7 days, 6 and 12 months were 0%; 3,0% and 4.5%, respectively, for the control group, and 0%; 3,0% and 7.4% for the experimental group. There was no statistically significant difference between the two groups for all criteria and periods. The return rate of patients in the 7-day, 6- and 12-month periods was 100%, 90.5% and 85.7%, respectively. Conclusion: The treatment of the etched dentin with with EDC prior to the application of the dentin bonding agent did not affect the performance of composite resin restorations in NCCL...(Complete abstract electronic access below) / Doutor

O pneu é o único vínculo entre o veículo e o solo, é ele que transmite toda a potência e carga, e garante a dirigibilidade e condução do automóvel. A estrutura resistente de um pneu é um dos pontos de maior importância para o rendimento, tipo de aplicação e segurança. E conhecê-la é condição primária para o projeto. Pneus convencionais, via de regra, apresentam uma estrutura par de lonas cruzadas (cross-ply), dispostas em ângulos opostos, menores que 90º. Este trabalho visa avaliar as influências de uma estrutura ímpar de lonas cruzadas, em pneus convencionais. Objetiva-se com isso uma redução na matéria prima e uma otimização no tempo de processo. As influências da estrutura ímpar foram verificadas através de uma análise de elementos finitos, examinando o andamento das tensões internas na carcaça do pneu e observando a geometria da região de contato pneu/solo. Verificou-se também a variação da uniformidade utilizando-se do ensaio SAE J332 em uma máquina Akron FD90. A utilização de uma estrutura ímpar, em pneus de lonas cruzadas, acarreta numa deformação na região de contato pneu/solo, devido ao desbalanceamento de tensões nos fios da carcaça, um aumento das componentes de ply-steer e uma variação de força lateral nas componentes dinâmicas avaliadas. A utilização de uma estrutura ímpar deve ser cuidadosamente selecionada dependendo da velocidade, severidade e condições de utilização. / The tire is the only bond between the vehicle and the ground, is it that transmits all the power and load, and guarantees the driven and conduction of the automobile. The resistant structure of a tire is one of the most important factors for the efficiency, type of application and security. Knowing these parameters is the primary condition to design a tire. Conventional tires, usually have a pair structure, made of crossed plies (cross-ply) in opposite angles lesser than 90º. The present work aim to evaluate the influence of an odd cross-ply structure, in conventional tires, looking forward to a material reduction and also an optimization on time process. The influence of an odd structure was evaluated through a finite element analysis, examining the cord stress at the tire carcass and the tire/ground contact region (foot-print). The variation of the uniformity was also verified through a SAE332 test did on Akron FD90 machine. It was observed that the use of an odd structure in cross-ply tires cause a tire/ground contact region deformation, because of the unbalance internal cord stress (at the carcass), and an increase of uniformities components (ply-steer and variation of lateral force). The use of an odd structure must be carefully selected, depending on the speed, severity and condition of use.

Orientador: Flavia Maria Netto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-20T14:16:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VillasBoas_MarianaBattaglin_D.pdf: 3357506 bytes, checksum: 10d878e81440a9db2f379bd1dd93146f (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Tratamento térmico, alta pressão ou hidrólise enzimática, utilizados em conjunto ou separadamente, podem alterar determinantes antigênicos (epítopos) presentes nas proteínas, e têm sido estudados como estratégia para obtenção de produtos com menor potencial alergênico, porém ainda com sucesso limitado. A enzima transglutaminase (TG), que catalisa a reação de ligação cruzada inter ou intramolecular em diversas proteínas, também tem sido utilizada com este propósito. A associação da hidrólise enzimática com a polimerização por TG é uma estratégia ainda pouco explorada, mas que oferece boas perspectivas em relação à redução da antigenicidade de proteínas. Diante disso, o presente estudo teve como objetivos obter e caracterizar a ß-Lactoglobulina (ß-Lg) polimerizada por TG e a ß-Lg polimerizada pré e pós hidrólise enzimática com as proteases Alcalase, Neutrase ou bromelina, e avaliar o efeito destes processos na antigenicidade da proteína. A melhor condição de hidrólise da ß-Lg, com cada uma das proteases estudadas foi definida a partir de um delineamento composto central rotacional (DCCR), tendo como variáveis independentes a concentração de proteína (2,2 -7,8% p/v) e relação enzima : substrato (E:S), 6,9 - 28 U g-1 proteína e, como variável dependente o grau de hidrólise (GH), determinado pelo método pH-stat. A condição selecionada, 3% de proteína e E:S 25 U g-1, foi a utilizada para a hidrólise da ß-Lg pré ou pós polimerização com a enzima TG. As condições experimentais foram: (1) hidrólise da ß-Lg com as três enzimas, seguida de polimerização com TG (10 ou 25 U g-1) ou (2) polimerização da ß-Lg (7%p/v) com TG (10U TG g-1) realizada pós tratamento térmico ou na presença de agente redutor Cys (0,1 mol L-1), seguido por hidrólise com as diferentes proteases. As amostras hidrolisadas e as polimerizadas pré ou pós hidrólise foram caracterizadas por eletroforese SDS-PAGE/tricina, cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa (CLAE-FR), cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (MS) e ensaios imunoquímicos (ELISA e Imunoblote). Os hidrolisados obtidos com Alcalase apresentaram 12,7% de GH e com Neutrase e bromelina aproximadamente 4%. Os perfis eletroforéticos da ß-Lg polimerizada pós tratamento térmico (ß-Lg TT TG) ou na presença de Cys (ß-Lg Cys TG), apresentaram bandas de massa molecular (MM) alta, porém a polimerização pós hidrólise, avaliada por eletroforese e cromatografia, não resultou em aumento da MM aparente dos hidrolisados. A ligação isopeptídica e-(?-Gln)Lys, catalisada pela TG, foi detectada em concentração mais elevada no material polimerizado pós hidrólise com alcalase, seguido do tratamento de polimerização da presença de Cys. No estudo da polimerização pré hidrólise, a alcalase foi a enzima que hidrolisou mais eficientemente tanto a ß-Lg como seus polímeros. Os polimerizados pre ou pós hidrólise com neutrase ou bromelina apresentaram ß-Lg residual, observada no perfil eletroforético e cromatográfico, sendo que para os hidrolisados com neutrase, a fração correspondente à ß-Lg residual apresentou maior intensidade. O tratamento isolado de hidrólise, principalmente com alcalase ou bromelina, ou a associação deste processo com a TG foram capazes de reduzir significativamente a resposta antigênica da ß-Lg. Os hidrolisados da ß-Lg com neutrase apresentaram reação antígeno-anticorpo apenas na região correspondente ao monômero da ß-Lg, sendo que a reação foi menos intensa após a polimerização do hidrolisado com a TG. As amostras foram submetidas à digestão in vitro e avaliadas por espectrometria de massas (MS/MS) quanto à identificação de epítopos lineares. Verificou-se que tanto a ß-Lg polimerizada após tratamento térmico ou na presença de Cys como a amostras polimerizadas pré ou pós hidrólise com bromelina apresentaram alguns fragmentos correspondentes aos epítopos, embora em menor número quando comparados aos epítopos identificados na ß-Lg nativa. Para o tratamento com a alcalase, isolado ou associado à TG, não foram identificados fragmentos correspondentes aos epítopos após digestão gastrointestinal das amostras. Os resultados obtidos indicaram que a hidrólise, principalmente com alcalase, associada ou não à polimerização com TG, foi capaz de reduzir a antigenicidade da ß-Lg, mostrando-se uma alternativa para a produção de alimentos hipoalergênicos / Abstract: Heat treatment, high pressure and enzymatic hydrolysis have been studied aiming at obtaining products with low allergenic potential since they can alter antigenic determinants (epitopes) in the protein. The transglutaminase (TG), an enzyme that catalyzes inter or intramolecular cross-link in different proteins has also been used to reduce the protein antigenicity. The association of enzymatic hydrolysis and polymerization by TG is another strategy for reducing the antigenicity of food proteins, promising that needs further research. Therefore, the present study aimed to obtain and characterize the ß-Lg polymerized by TG before or after enzymatic hydrolysis with the proteases alcalase, neutrase or bromelain and evaluate the effect of these processes on the protein antigenic response. The optimum conditions for hydrolysis of ß-Lg, obtained with the three different enzymes, were defined using a central composite rotatable design (CCRD), where the independent variables were protein concentration (2.2% -7.8 w / v) and enzyme: substrate ratio (E:S), 6.9 to 28 U g-1 protein, and the dependent variable (response) was the degree of hydrolysis (DH) determined by the pH-stat method. The hydrolysis condition defined by CCRD was 3% of protein (w/v) and E:S ratio 25 U g-1. The experimental conditions were: (1) hydrolysis of ß-Lg with the three enzymes used separately, followed by polymerization by TG (10 or 25 U g-1) or (2) polymerization of ß-Lg (7% w/v) by TG (10U g TG-1) after heat-treatment (80 °C/60 min) or in presence of reducing agent Cys (0.1 mol L-1), followed by hydrolysis. The samples were characterized by SDS-PAGE/tricine, reverse phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC), liquid chromatography coupled to mass spectrometry (HPLC-MS) and by immunochemical assays (ELISA and Imunoblote). The highest DH of the ß-Lg was obtained with alcalase (12.6%), while with neutrase or bromelain a DH of 4% approximately was achieved. The electrophoresis profiles of ß-Lg polymerized after heat treatment (ß-Lg TT TG) or in the presence of Cys (ß-Lg Cys TG) showed bands with high molecular mass (MM). On the other hand, the post-hydrolysis polymerization, analyzed by SDS-PAGE and RP-HPLC, resulted in no increase in the MM of the hydrolysates. The highest concentration of the cross-link, by formation of the isopeptide bound e-(?-Gln) Lys, was found in the sample polymerized after hydrolysis with alcalase, followed by the sample ß-Lg Cys TG. The polymerized pre or pos hydrolysis with neutrase or with bromelain showed residual ß-Lg, observed in electrophoretic and chromatographic profiles, and for hydrolysates with neutrase, the band corresponding to ß-Lg showed higher residual intensity. Alcalase was the enzyme which hydrolysed more efficiently both untreated and polymerized ß-Lg. Using neutrase or bromelain to hydrolyse polymerized ß-Lg, a residual ß-Lg (18.3 kDa) was observed in the electrophoretic and chromatographic profiles. The avaluation of antigenicity showed that hydrolysis treatment used alone, especially with alcalase or bromelain, or the combination of this process with TG was capable to reduce significantly the antigenic response of ß-Lg. The ß-Lg hydrolysed with neutrase showed antigen-antibody reaction only in the region corresponding to the ß-Lg monomer, and this reaction was less intense after the association of hydrolysis with neutrase and polymerization by TG. The samples were submitted to in vitro digestion and then analyzed by mass spectrometry (MS / MS) to identification of linear epitopes in the protein. It was verified that the polymerized samples (ß-Lg TT TG or ß-Lg Cys TG) as well as those polymerized before or after hydrolysis with bromelain, retained some fragments corresponding to the epitopes, although to a lesser extent when compared to the epitopes identified in the untreated ß-Lg. Interestingly that for the treatment with alcalase, associated or not with the TG, no epitopes were identified after gastrointestinal digestion. These results indicated that the hydrolysis, especially with alcalase, and the association of hydrolysis with polymerization, were capable to reduce the ß-Lg antigenicity and could be an alternative for elaboration of hypoallergenic products / Doutorado / Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos / Doutor em Alimentos e Nutrição