Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii são leveduras do grupo dos basidiomicetos que causam criptococcose em indivíduos imunocomprometidos e imunocompetentes, respectivamente. Ambas as espécies são caracterizadas por diferenças moleculares, imunológicas, fisiológicas e epidemiológicas. Visando identificar diferenças morfológicas, foi desenvolvido um procedimento de preparação alternativo para análise de C. neoformans e C. gattii por MEV (Microscopia eletrônica de varredura) fixando as células diretamente na cultura em ágar. Este método é mais simples do que os outros já publicados e a morfologia das células foi bem preservada. Neste trabalho também foi realizado o método de RDA (Análise de diferença representacional) com o objetivo de isolar seqüências que representam diferenças no DNA genômico de C. neoformans var. grubii e C. gattii. Aproximadamente 200 clones foram seqüenciados permitindo a identificação de 19 seqüências diferentes com significante similaridade (Evalue < 10-5) com o genoma completamente seqüenciado de C. neoformans var. neoformans linhagem JEC21. A maioria das seqüências identificadas representa proteínas hipotéticas ou proteínas de função desconhecida. Experimentos de Southern blot com cinco clones selecionados confirmaram a presença de polimorfismos ou especificidade para C. gattii. Os dados de seqüenciamento de uma das regiões identificadas como polimórficas, IDE (do inglês, insulin degrading enzime), foram usados juntamente com os dados de seqüenciamento de outros 3 loci (ACT1, URA5, PLB1) para estudar as relações filogenéticas entre as espécies. O locus IDE mostrou-se mais conservado entre diferentes tipos moleculares do que os outros loci estudados, e as variações intra-variedades em C. gattii são maiores do que em C. neoformans. Estes resultados sugerem que o RDA é um método eficiente para isolar regiões polimórficas de leveduras e suportam o conceito de duas espécies reconhecido atualmente para o complexo C. neoformans. / Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii are basidiomycetous yeasts that cause cryptococcosis in immunecompromised and immunecompetent individuals. Both species are characterized by biochemical, immunological, molecular and epidemiological differences. Aiming to identify morphological differences, we propose an alternative to conventional preparation procedures for scanning electron microscopy (SEM) analysis of C.neoformans and C. gattii was done fixing the cells directly in the agar culture. This method is simpler than others already reported and the morphology of the cells was well preserved. We also applied representational difference analysis (RDA) to isolate sequences representing genomic differences between C. neoformans var. grubii and C. gattii. Approximately 200 clones were sequenced leading to the identification of 19 different sequences with significant similarities (Evalue< 10-5) to the completely sequenced genome of the C. neoformans var. neoformans JEC21 strain. Most of the identified sequences represent hypothetical proteins or proteins of unknown function. Southern blot experiments using five selected clones confirmed the presence of polymorphisms or specificity to C. gattii. The polymorphic IDE (insulin degrading enzyme, putative) sequence data were used together with the DNA sequence data of other 3 loci (ACT1, URA5, PLB1) for studying phylogenetic relationship between species. The IDE locus was exceptionally conserved among individual molecular types compared with other loci, and intra-varieties variations in C. gattii is higher than in C. neoformans. Our results suggest that RDA provides an efficient way to isolate polymorphic regions from yeasts and highly supports the two species concept recognized currently.

Cryptococcus neoformans species complex são fungos oportunistas que desencadeiam meningite, tanto em pacientes imunocompetentes como em indivíduos hígidos. Este trabalho teve como objetivo estudar as espécies circulantes de Cryptococcus neoformans species complex isolados no Estado de Sergipe tanto a partir do LCR (líquido céfalo raqueanao) de pacientes com meningite infecciosa como de diversos substratos ambientais. Foram utilizadas amostras do LCR que deram entrada no IPH/HEMOLACEN/SE no período de 2001 a 2007. Foram realizadas 104 coletas ambientais dentro do Estado de Sergipe, das quais 55 foram obtidas a partir de excretas de aves e quatro de amostras de fezes de morcegos coletadas em cavernas. As demais foram obtidas de materiais de origem vegetal, perfazendo 45 amostras: 21 de Eucalyptus spp., oito de material de troncos vegetais em decomposição, 10 de restos vegetais coletados em duas praças e seis de Anacardium occidentale L. (cajueiro). O líquor foi examinado por microscopia direta e cultivado a 25ºC e a 37ºC. No período de 2005 a 2007 foram obtidos 141 isolados ambientais e 35 isolados clínicos de Cryptococcus neoformans species complex. Foram determinadas inferências ecológicas e epidemiológicas dos isolados obtidos além de realização de provas para identificação presuntiva fenotípica em meioNíger e, das espécies em meio CGB, teste de sensibilidade frente aosantifúngicos, caracterização enzimática de interesse biotipar e/ou marcador de linhagens, determinação de mating type sexual utilizando PCR e PCR Fingerprintig com iniciador M13. Nas linhagens de Cryptococcus spp. isoladas de líquor de pacientes com meningite infecciosa no Estado de Sergipe prevaleceu a espécie C. neoformans. Em relação às linhagens ambientais, somente uma amostra, dentre 140, foi identifcada como C. gattii. Todas as amostras oriundas de excretas de aves foram positivas no isolamento da levedura. Os isolados clínicos de C. neoformans e C. gattii oriundos de pacientes com meningite criptocócica no Estado de Sergipe apresentaram valores altos de concentração inibitória mínima (CIM) para os agentes antifúngicos testados, o que simboliza alta taxa de resistência, principalmente à Anfotericina B e ao Fluconazol. Em relação ao mating type sexual foi evidenciando que a maioria das linhagens clínicas foi identificada como MAT, confirmando o caráter de virulência que esta levedura desenvolve. Entretanto, no isolados ambientais o MATa foi mais prevalente, evidenciando o caráter menos virulento destas linhagens frente às de origem clínica. Cryptococcus neoformans foi a única espécie amplificada por PCR fingerprinting. Houve presença, dentre as amostras locais, de três perfis genéticos distintos epertencentes a uma mesma espécie. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT: Cryptococcus neoformans species complex are opportunistic fungi that cause meningitis in both immunocompetent patients and in healthy individuals. This work aimed to study the species of circulating Cryptococcus neoformans species complex isolated from northeastern Brazil from both the CSF (cerebrospinal fluid) of patients with infectious meningitis as various environmental substrates. Samples of CSF were received at IPH/HEMOLACEN/SE in the period 2001 to 2007. Were carried out 104 environmental samples within the state of Sergipe, of which 55 were obtained from the feces of birds and four stool samples collected from bat caves. The other samples were obtained from plant materials, totaling 45 samples: 21 from Eucalyptus spp., eight from material of decomposing trunks of plants, 10 from plant collected in two squares, six from Anacardium occidentale L. - (Cashew). CSF was examined by direct microscopy by staining with Indian ink and cultured in Sabouraud agar with chloramphenicol at 25 °C and 37 ºC. In the period from 2005 to 2007 were obtained from 141 environmental isolates and35 clinical isolates of Cryptococcus neoformans species complex. Ecological and epidemiological inferences were determined. In addition characteristics of isolates were carried out by tests for presumptive phenotypic identification, through Niger medium and species into the CGB test, sensitivity to the antifungal, enzymatic characterization of biotypes of interest and/or marker lines, determining sexual mating type using PCR and PCR Fingerprintig with primer M13. Among the strains of Cryptococcus spp. isolated from CSF of patients with infectious meningitis in the state of Sergipe, in the period from 2001 to 2009, prevaled the species C. neoformans. Among the environmental strains, only one sample of 140, was identified as C. gattii. All samples from thefeces of birds were positive in the isolation of yeast. Clinical isolates ofCryptococcus neoformans and C. gattii originating from patients withcryptococcal meningitis in the state of Sergipe exhibited higher values ofminimum inhibitory concentration (MIC) to the antifungal agents tested, which symbolizes high rate of resistance, especially to amphotericin B and fluconazole. In relation to sexual mating type was evident that most of the clinics were MAT strains, confirming the character of virulence of this yeast. However, among the environmental isolates the MATa was more prevalent, showing the character of these less virulent strains. Cryptococcus neoformans was the only species amplified by PCR fingerprinting. There was a presence among the local samples of three different genetic profiles belonging to the same species.

Orientador: João Claudio Thomeo / Banca: Daniela Alonso Bocchini Martins / Banca: Tatiane Iembo / Resumo: A criptococose é uma micose sistêmica que afeta principalmente o sistema nervoso central, causando meningite. Causada pela inalação de propágulos de fungos do gênero Cryptococcus sp, C neoformans acomete hospedeiros com imunodepressão celular, cujo maior contingente é representado por indivíduos com AIDS. A fonte principal de aquisição desta levedura são fezes de aves, principalmente pombos (Columba livia). C. gattii infecta indivíduos aparentemente imunocompetentes, sendo isolado principalmente em espécies de eucaliptos. C. albidus e C. laurentii aparece em casos de meningites, fungemias, pneumonias, abscessos pulmonares e infecções cutâneas. C.uniguttulatus é encontrado no trato gastrointestinal, fezes de pássaros e contaminante de leitos de animais e habitats de roedores. Termo-tolerância, parede celular, cápsula, adesão, e produção de enzimas são fatores importantes de virulência do gênero. São José do Rio Preto é a 5ª cidade entre os 100 municípios do estado de São Paulo em de casos de AIDS. Analisou-se morfologicamente e bioquimicamente 48 amostras clínicas e 155 ambientais. Amostras de líquor resultaram em 30 isolados da espécie C. neoformans, 17 de C. gattii e um de C. luteolus. Foram identificados 26 isolados de C.albidus, 22 de C. laurentii, 9 de C. neoformans, 5 de C. gattii e um de C.uniguttulatus nas amostras ambientais. A concentração inibitória mínima para antifúngicos foi determinada para todos os isolados por meio do teste de microdiluição em caldo padronizado pelo NCCLS. Os resultados obtidos mostraram resistência à anfotericina B e itraconazol nas cepas clínicas de C. neoformans e C. gattii, e as cepas de C.albidus e C. laurentii apresentaram resistência a 5-fluorcitosina, itraconazol e anfotericina B / Abstract: Cryptococcosis is a systemic mycosis that mainly affects the central nervous system, causing meningitis. Caused by inhalation of seedlings of fungi of the genus Cryptococcus sp, C. neoformans affects hosts with immunosuppression cellular, whose largest contingent is represented by individuals with AIDS. The main source of acquiring this yeast is feces of birds, especially pigeons (Columba livia). C. gattii infects individuals apparently immunocompetent, being isolated mainly in species of eucalyptus. C. albidus and C. laurentii appear in cases of meningitis, nosocomial fungemia, pneumonia, lung abscesses and skin infections. C. uniguttulatus is found in the gastrointestinal tract and feces of birds and contaminant of beds of animals and habitats of rodents. Thermo-tolerance, cell wall, capsule, accession, and production of enzymes are important factors in the virulence of the genus. São José do Rio Preto is the 5th city among the 100 cities in the state of São Paulo in cases of AIDS. We analyzed morphologically and biochemically 48 clinical samples and 155 environmental. Liquor samples resulted in 30 isolates of the species C. neoformans, 17 of C. gattii and one of C. luteolus. We identified 26 isolates of C. albidus, 22 of C. laurentii, 9 of C. neoformans, 5 of C. gattii and one of C. uniguttulatus in environmental samples. The minimal inhibitory concentration for antifungal agents was determined for all isolates by means of the test of broth microdilution standardized by the NCCLS. The results obtained showed resistance to amphotericin B and itraconazole in clinical strains of C. neoformans and C. gattii, C. albidus and C. laurentii exhibited resistance to 5-fluorocytosine, itraconazole and amphotericin B / Mestre

Infecções fúngicas em humanos vem aumentando nos últimos anos e acometem principalmente pacientes imunocomprometidos, portadores do vírus HIV, transplantados ou com câncer. Os antifúngicos empregados no tratamento pertencem a poucos grupos de fármacos e o aparecimento de resistência antifúngica em muitos patógenos leva à necessidade de desenvolvimento de novos agentes antifúngicos. As cepas Trichosporon japonicum QU139 e Candida catenulata LV102 apresentam atividade killer sobre diversas leveduras patogênicas, apresentando bom potencial para desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos. O objetivo do trabalho foi a otimização das condições para produção e detecção dos compostos antimicrobianos, para seu futuro uso terapêutico, e sua purificação. O efeito killer da cepa T. japonicum QU139 foi avaliado pelo método dos poços contra células sensíveis de Cryptococcus gattii C20 nos meios GYP, YM e Queijo em diferentes pH e temperaturas. A máxima atividade killer foi encontrada no meio GYP, pH 4,5 à 25°C após 24 horas de incubação para T.japonicum QU139 e C. catenulata LV102. Não foi possível isolar o composto antimicrobiano produzido pela levedura T.japonicum QU139 pelos métodos de isolamento de proteína/glicoproteína, corroborando a hipótese de que a toxina seja um glicolipídeo. / Human fungal infections have increased in the last years and affect mainly immunocompromised patients, carriers of HIV vírus, transplanted or with cancer. The antifungal agents used in treatment belong to a few groups of drugs and the increase of antifungal resistance in many pathogens leads to the necessity of developing new antifungal agents. Strains Trichosporon japonicum QU139 and Candida catenulata LV102 showed killer activity against several pathogenic yeasts, having a good potential for the development of new antimicrobial agents. The objective of the work was the optimization of conditions for production and detection of the antimicrobial compounds, aiming their future terapeutic use, and their purification. The killer effect of T. japonicum QU139 strain was evaluated by the well method against sensitive cells of Cryptococcus gattii C20 in media GYP, YM and Cheese in different pH and temperatures. The maximum killer activity was found in media GYP, pH 4.5, 25°C after 24 hours of incubation for T.japonicum QU139 and C. catenulata LV102. The isolation of the antimicrobial compound produced by the yeast T.japonicum QU139 was not possible by the methods for isolation of proteins/glicoproteins, corroborating the hypothesis that the toxin is a glycolipid.

Infecções fúngicas em humanos vem aumentando nos últimos anos e acometem principalmente pacientes imunocomprometidos, portadores do vírus HIV, transplantados ou com câncer. Os antifúngicos empregados no tratamento pertencem a poucos grupos de fármacos e o aparecimento de resistência antifúngica em muitos patógenos leva à necessidade de desenvolvimento de novos agentes antifúngicos. As cepas Trichosporon japonicum QU139 e Candida catenulata LV102 apresentam atividade killer sobre diversas leveduras patogênicas, apresentando bom potencial para desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos. O objetivo do trabalho foi a otimização das condições para produção e detecção dos compostos antimicrobianos, para seu futuro uso terapêutico, e sua purificação. O efeito killer da cepa T. japonicum QU139 foi avaliado pelo método dos poços contra células sensíveis de Cryptococcus gattii C20 nos meios GYP, YM e Queijo em diferentes pH e temperaturas. A máxima atividade killer foi encontrada no meio GYP, pH 4,5 à 25°C após 24 horas de incubação para T.japonicum QU139 e C. catenulata LV102. Não foi possível isolar o composto antimicrobiano produzido pela levedura T.japonicum QU139 pelos métodos de isolamento de proteína/glicoproteína, corroborando a hipótese de que a toxina seja um glicolipídeo. / Human fungal infections have increased in the last years and affect mainly immunocompromised patients, carriers of HIV vírus, transplanted or with cancer. The antifungal agents used in treatment belong to a few groups of drugs and the increase of antifungal resistance in many pathogens leads to the necessity of developing new antifungal agents. Strains Trichosporon japonicum QU139 and Candida catenulata LV102 showed killer activity against several pathogenic yeasts, having a good potential for the development of new antimicrobial agents. The objective of the work was the optimization of conditions for production and detection of the antimicrobial compounds, aiming their future terapeutic use, and their purification. The killer effect of T. japonicum QU139 strain was evaluated by the well method against sensitive cells of Cryptococcus gattii C20 in media GYP, YM and Cheese in different pH and temperatures. The maximum killer activity was found in media GYP, pH 4.5, 25°C after 24 hours of incubation for T.japonicum QU139 and C. catenulata LV102. The isolation of the antimicrobial compound produced by the yeast T.japonicum QU139 was not possible by the methods for isolation of proteins/glicoproteins, corroborating the hypothesis that the toxin is a glycolipid.

Infecções fúngicas em humanos vem aumentando nos últimos anos e acometem principalmente pacientes imunocomprometidos, portadores do vírus HIV, transplantados ou com câncer. Os antifúngicos empregados no tratamento pertencem a poucos grupos de fármacos e o aparecimento de resistência antifúngica em muitos patógenos leva à necessidade de desenvolvimento de novos agentes antifúngicos. As cepas Trichosporon japonicum QU139 e Candida catenulata LV102 apresentam atividade killer sobre diversas leveduras patogênicas, apresentando bom potencial para desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos. O objetivo do trabalho foi a otimização das condições para produção e detecção dos compostos antimicrobianos, para seu futuro uso terapêutico, e sua purificação. O efeito killer da cepa T. japonicum QU139 foi avaliado pelo método dos poços contra células sensíveis de Cryptococcus gattii C20 nos meios GYP, YM e Queijo em diferentes pH e temperaturas. A máxima atividade killer foi encontrada no meio GYP, pH 4,5 à 25°C após 24 horas de incubação para T.japonicum QU139 e C. catenulata LV102. Não foi possível isolar o composto antimicrobiano produzido pela levedura T.japonicum QU139 pelos métodos de isolamento de proteína/glicoproteína, corroborando a hipótese de que a toxina seja um glicolipídeo. / Human fungal infections have increased in the last years and affect mainly immunocompromised patients, carriers of HIV vírus, transplanted or with cancer. The antifungal agents used in treatment belong to a few groups of drugs and the increase of antifungal resistance in many pathogens leads to the necessity of developing new antifungal agents. Strains Trichosporon japonicum QU139 and Candida catenulata LV102 showed killer activity against several pathogenic yeasts, having a good potential for the development of new antimicrobial agents. The objective of the work was the optimization of conditions for production and detection of the antimicrobial compounds, aiming their future terapeutic use, and their purification. The killer effect of T. japonicum QU139 strain was evaluated by the well method against sensitive cells of Cryptococcus gattii C20 in media GYP, YM and Cheese in different pH and temperatures. The maximum killer activity was found in media GYP, pH 4.5, 25°C after 24 hours of incubation for T.japonicum QU139 and C. catenulata LV102. The isolation of the antimicrobial compound produced by the yeast T.japonicum QU139 was not possible by the methods for isolation of proteins/glicoproteins, corroborating the hypothesis that the toxin is a glycolipid.

La cryptococcose chez les patients atteints du VIH-1 est principalement causée par Cryptococcus neoformans var. grubii tandis que Cryptococcus gattii infecte surtout les personnes immunocompétentes. Afin d’élucider les mécanismes causant la susceptibilité différentielle à l’égard de ces deux espèces de Cryptococcus dans le contexte de l’infection au VIH-1, nous avons utilisé un modèle novateur de la cryptococcose chez la souris transgénique CD4C/HIVMutA, qui exprime les gènes nef, env et rev du VIH-1. L’expression du transgène VIH-1 a augmenté le recrutement pulmonaire des macrophages alvéolaires mais a diminué celui des lymphocytes T CD4+ et CD8+ en réponse à l’infection par le C. neoformans ou le C. gattii. La production pulmonaire des chimiokines MCP-1 (CCL2) et RANTES (CCL5) était également réduite chez les souris transgéniques infectées par l’une ou l’autre de ces espèces de Cryptococcus. La production pulmonaire de MIP-1α, MIP-1β, TNF-α, TGF-β, IL-2, IL-4 et IL-13 était augmentée chez la souris infectée au C. neoformans comparativement à C. gattii. In vitro, les macrophages alvéolaires prélevés chez la souris Tg et stimulés par des agonistes ont produit davantage de MIP-1β, alors que les chimiokines MCP-1 et RANTES n’ont pas été détectées. / The most common cause of cryptococcosis in HIV-1-infected patients is Cryptococcus neoformans var. grubii, while Cryptococcus gattii usually infects immunocompetent people. We used a novel inhalation model of cryptococcosis in CD4C/HIVMutA transgenic mice expressing nef, env, and rev of HIV-1 to examine the mechanisms that cause differential susceptibility to these species of Cryptococcus in the context of HIV-1 infection. HIV-1 transgene expression increased alveolar macrophage but decreased pulmonary CD4+ and CD8+ T lymphocyte recruitment. Pulmonary production of the CC chemokines MCP-1 (CCL2) and RANTES (CCL5) was reduced in transgenic mice infected with C. neoformans or C. gattii, and concentrations were lower after infection with C. gattii compared to C. neoformans. Production of MIP-1α, MIP-1β, TNF-α, TGF-β, IL-2, IL-4 and IL-13 was increased in mice infected with C. neoformans compared to C. gattii. Production of MIP-1β by alveolar macrophages harvested from Tg mice was enhanced after agonist exposure in vitro, but production of the chemokines MCP-1 and RANTES was undetectable.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-04-18T19:50:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoAudiometricaPacientes.pdf: 5250268 bytes, checksum: a28385f4a2649f6226a3b1bb08578125 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-04-19T15:13:19Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoAudiometricaPacientes.pdf: 5250268 bytes, checksum: a28385f4a2649f6226a3b1bb08578125 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-19T15:13:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoAudiometricaPacientes.pdf: 5250268 bytes, checksum: a28385f4a2649f6226a3b1bb08578125 (MD5) Previous issue date: 2007 / Este estudo mostra a avaliação audiométrica, composta de audiometria tonal limiar e imitanciometria, em pacientes tratados de meningite por Cryptococcus gattii. Trata-se de um estudo tipo relato de casos. Foram avaliados seis pacientes com infecção comprovada do sistema nervoso central pelo Cryptococcus gattii, internados no Hospital Universitário João de Barros Barreto, entre janeiro de 2000 a novembro de 2007, para tratamento antifúngico. A idade dos pacientes analisados variou entre 12 e 37 anos. Três eram homens e três mulheres. Todos procedentes de municípios vizinhos, não sendo ninguém da capital Belém. As principais manifestações clínicas foram cefaléia e vômitos, presentes nas histórias de todos os pacientes, seguidas de febre e rigidez de nuca, cada uma delas ausentes em apenas um paciente, não coincidentes. O tempo de doença até o diagnóstico variou de 3 a 8 semanas. Dos três homens avaliados, dois apresentaram perda auditiva. Num deles a perda foi moderada e unilateral e no outro foi assimétrica e bilateral. Das três mulheres, apenas uma apresentou alteração auditiva. Nessa paciente houve apenas um rebaixamento leve numa freqüência isolada, de 4.000 Hz. Descreve-se achados audiométricos em relato de casos de pacientes tratados de meningite por Cryptococcus gattii. / This study shows the audiometric evaluation, composed by tonal audiometry and imitanciometry, in patients treated for Cryptococcus gattii meningitis. It was analyzed six patients with proven Cryptococcus gattii central nervous system infection, interned in the Hospital Universitário João de Barros Barreto, Belém, PA, Brazil, between January of 2000 and November of 2007, for antifungal treatment. The age of the analyzed patients ranged from 12 to 37 years-old. Three were men and three women. All of them originating from neighboring cities, nobody from the capital, Belém. The most common clinical findings were headache and vomiting, present in all the patients; fever and nuchal rigidity, each one absent in only one patient, not coincidents. The time of illness until the diagnosis varied from 3 to 8 weeks. Of the three evaluated men, hearing loss was presenting in two. In one of them deafness was moderate and unilateral and in the other it was bilateral and not symmetrical. Of the three women, only one presented hearing impairment. In this patient, occurred just a mild alteration in an isolated frequency, of 4.000 Hz. It is described audiometric findings in a relate of cases of patients treated for meningeal neurocryptococcosis due to Cryptococcus gattii.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:56:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ludmila de Matos Baltazar _ dissertacao.pdf: 1344528 bytes, checksum: 3adf6afe644493dc3f572d95071acc58 (MD5) Previous issue date: 2009-03-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The cryptococcosis is a systemic mycosis, which the meningoencephalitis is the most severe and most common clinical manifestation. The main species involved in your etiology are Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii. The ecology of these species is not well, known, C. neoformans has the excrement of birds, mainly pigeons, as its principal habitat and C. gattii is commonly associate to the trees. The presence of C. gattii was investigated in different regions of Espirito Santo State and it was found in only two (0,7%) of the 209 samples of trees analyzed whereas C. neoformans was isolated in 9 (17%) of the 54 pigeon excrements analyzed. The occurrence of C. neoformans (63 isolates) at both clinical and environmental samples was higher than C. gattii (4 isolates). In the total, 67 isolates, clinical and environmental, of C. neoformans and C. gattii, were analyzed and all of then were sensitive to the voriconazole (VCZ) and amphotericin B (AMB). For the drug itraconazole (ITZ), 82% were sensitive (S), 18% sensitive-dose-dependent (SDD) and for fluconazole (FCZ), 75% S, 24% SDD and 1% resistant (R). Considering the origin of the isolates, the susceptibility profile was similar between the clinical and environmental origin. Among the azoles, the VCZ was the drug that showed higher activity and FCZ which showed less activity in vitro. There was no crossresistance between FCZ and VCZ. Regard the production of the phospholipase enzyme, 84% of the isolates had high production and only 3% showed no production of the enzyme. All the 67 isolates showed activity of phenoloxidase enzyme, being 71% low and none of then with negative activity. Lower production of phospholipase and higher phenoloxidase activity were observed in strains isolated from HIV-pos. All the clinical and environmental strains of C. neoformans belonged to genotype VNI and all C. gattii to VGII genotype. These results showed similarity in the genetic pattern, susceptibility profile of the drugs and production of extracellular enzymes, phospholipase and phenoloxidase between environmental and clinical isolates and confirm that the infection can be from environmental source. / A criptococose é uma micose sistêmica e a meningoencefalite é a sua manifestação clínica mais grave e mais comum. As principais espécies envolvidas na etiologia são Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. A ecologia destas espécies não é ainda bem conhecida, C. neformans tem como habitat, fezes de aves, principalmente pombos e C. gattii é comumente associada a árvores. A presença de C. gattii foi investigada em diferentes regiões do Estado do Espírito Santo e foi encontrada em apenas duas (0,7%) das 209 amostras de árvores analisadas enquanto C. neoformans foi isolado em 9 (17%) das 54 amostras de excrementos de aves analisadas. A ocorrência de Cryptococcus neoformans (63 isolados) tanto em amostras ambientais como clínicas foi maior que a de Cryptococcus gattii (4 isolados). No total, 67 isolados, clínicos e ambientais, de C. neoformans e C. gattii, foram analisados e todos foram sensíveis as drogas voriconazol (VCZ) e anfotericina B (AMB). Para a droga itraconazol (ITZ), 82% foram sensíveis (S), 18% sensível-dosedependente (SDD) e para fluconazol (FCZ), 75% S, 24% SDD e 1% resistente (R). Considerando a origem dos isolados, o perfil de suscetibilidade foi semelhante entre os de origem clínica e os ambientais. Entre os azólicos, o voriconazol foi o fármaco que apresentou maior atividade e o fluconazol o que apresentou menor atividade in vitro. Não foi observada resistência cruzada entre voriconazol e fluconazol. Quanto à produção da enzima fosfolipase, 84% dos isolados apresentaram produção alta e apenas 3% não produziram a enzima. Todos os 67 isolados mostraram atividade da enzima fenoloxidase, sendo 71% com atividade baixa e nenhum com atividade negativa. Produção mais baixa da fosfolipase e níveis mais altos de atividade da fenoloxidase foram observados em cepas isoladas de pacientes HIV-positivos. Todas as cepas clínicas e ambientais de C. neoformans pertenceram ao genótipo VNI e todas C. gattii ao genótipo VGII. Esses resultados revelaram semelhança no padrão genético, perfil de suscetibilidade a drogas e produção das enzimas extracelulares, fosfolipase e fenoloxidase, entre isolados ambientais e clínicos e confirmam que a infecção pode ocorrer a partir de fontes ambientais.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-10-18T14:56:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoEpidemiologicaGenotipica.pdf: 2006227 bytes, checksum: 29730c9982b04cd3d56cbf0c52947d27 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-11-08T14:22:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoEpidemiologicaGenotipica.pdf: 2006227 bytes, checksum: 29730c9982b04cd3d56cbf0c52947d27 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-08T14:22:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoEpidemiologicaGenotipica.pdf: 2006227 bytes, checksum: 29730c9982b04cd3d56cbf0c52947d27 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A criptococose é uma infecção fúngica causada por uma levedura encapsulada do gênero Cryptococcus que afeta tanto humanos quanto animais, sendo considerada como uma infecção oportunista normalmente associada à imunodepressão. Trata-se de uma das infecções fúngicas humanas de significativa morbidade e mortalidade tanto em indivíduos imunocomprometidos quanto em imunocompetentes, e manifesta-se principalmente sob a forma de meningoencefalite. O objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização epidemiológica, genotípica e fenotípica da criptococose em uma unidade de referência no estado do Pará. A população alvo foi composta pelos pacientes atendidos no Hospital Universitário João de Barros Barreto/UFPA, de janeiro de 2010 a dezembro de 2011 com diagnóstico de criptococose confirmado laboratorialmente. Os dados pessoais, clínicos e laboratoriais foram coletados a partir da revisão dos prontuários do arquivo médico do HUJBB e os isolados foram identificados e caracterizados morfológica e bioquimicamente. O tipo sexuado e o genótipo foram identificados através de PCR utilizando iniciadores específicos. No período de janeiro de 2010 a dezembro de 2011 foram identificados 59 casos de criptococose. A maioria dos pacientes eram homens (36/59, 61%), com idade entre 5 a 70 anos, média de 30,8 anos. A faixa etária que predominou foi de 34 a 43 anos (39% dos casos). Os principais sinais e sintomas apresentados por eles foram cefaleia (85,5%), vômito (80%) e febre (76,4%). Todas as crianças (6/6) eram HIV negativas, tendo como agente causador o C. gattii (31,6%); já em adultos 71,1% das infecções eram causadas por C. neoformans, sendo a maioria HIV positivo. Os casos de óbito e de recidivas foram mais elevados entre os pacientes infectados por C. neoformans e a presença de sequelas foi mais frequente entre os pacientes infectados por C. gattii. Todos os isolados eram MAT α e houve a predominância de dois tipos moleculares: VNI (64,4%) e VGII (35,6%). Este estudo reforça que o estado do Pará é endêmico para a infecção por Cryptococcus spp., cuja forma de apresentação clinica principal, a meningoencefalite determina elevadas taxas de morbi-mortalidade. / Cryptococcosis is a fungal infection caused by an encapsulated yeast Cryptococcus genus that affects both humans and animals, and is considered as an opportunistic infection commonly associated with immunosuppression. This is one of human fungal infections cause significant morbidity and mortality in both immunocompetent and in immunocompromised individuals and appears mainly in the form of meningoencephalitis. The aim of this study was to characterize epidemiological, genotypic and phenotypic cryptococcosis in a reference unit in the state of Pará. The target population was composed of patients treated at the University Hospital João de Barros Barreto/UFPA, January 2010 to December 2011 with laboratory confirmed diagnosis of cryptococcosis. Personal, clinical and laboratory data were collected from a review of medical records file HUJBB and the isolates were identified and characterized morphologically and biochemically. The type sexed and genotype were identified by PCR using specific primers. From January 2010 to December 2011 were identified 59 cases of cryptococcosis. Most patients were men (36/59, 61%), aged 5-70 years, mean 30.8 years. The predominant age group was 34-43 years (39% of cases). The main signs and symptoms presented by them were headache (85.5%), vomiting (80%) and fever (76.4%). All children (6/6) were HIV negative, and as the causative agent C. gattii (31.6%), while in adults 71.1% of infections were caused by C. neoformans, most HIV positive. The cases of death and recurrence were higher among patients infected with C. neoformans and the presence of sequelae was more frequent among patients infected with C. gattii. All isolates were MAT α and there was a predominance of two molecular types: VNI (64.4%) and VGII (35.6%). This study reinforces that the state of Pará is endemic to infection by Cryptococcus spp., Whose main clinical presentation, meningoencephalitis determines high rates of morbidity and mortality.