Made available in DSpace on 2014-10-09T12:41:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:59:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Orientador: Francisco Leydson Formiga Feitosa / Banca: Flávia de Almeida Lucas / Banca: Roberto Calderon Gonçalves / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a maturidade pulmonar de cordeiros, por meio do teste de Clements, da análise citológica pela coloração de Azul de Nilo e Shorr, e da contagem de corpos lamelares no líquido amniótico de ovelhas. Para tanto, foram utilizados 56 animais (24 ovelhas e 32 cordeiros), divididos em três grupos, a saber : Grupo I: constituído por oito ovelhas, com gestação em torno de 145 dias, e por 10 cordeiros nascidos de partos normais; grupo II: composto por oito ovelhas, com 138 dias de gestação, e por onze cordeiros nascidos de cesarianas; e, grupo III : constituído por oito ovelhas com 138 dias de gestação e que receberam 16mg/ovelha de dexametasona, por via intramuscular, 36 horas antes da cirurgia eletiva, e por 11 cordeiros delas nascidos. Na coloração de azul de Nilo observou-se diferença significativa entre os grupos I e III, porém esta técnica não foi satisfatória. Entretanto, a citologia utilizando a coloração de Hematoxilina-Shorr mostrou-se confiável, onde o grupo I diferiu estatisticamente do grupo III. Cerca de 20% dos cordeiros do grupo I possuíam maturidade pulmonar pelo teste de Clements. Contudo, o grupo II foi o que apresentou menor quantidade de bolhas (9,1%). O grupo III teve maior porcentagem de animais com maturidade pulmonar (36,4%), quando comparados aos grupos I e II. Os corpos lamenares apresentavam tamanhos variando entre 0,019 a 0,590 micrometros. A avaliação da maturidade pulmonar e fetal na neonatologia veterinária visa determinar o nascimento de paciente com alto risco, bem como o imediato estabelecimento de terapia de suporte ao recém-nascido, minimizando possíveis complicações e melhorando as taxas de sobrevivência / Abstract: The aim of this study was to determine pulmonary and fetal maturity of lambs by means of cytological tests using Nile Blue and Hematoxilin-Shorr staining, Clements' test and amniotic fluid lamellar body count. Amniotic fluid samples were collected from 24 sheep in order to evaluate pulmonary and fetal maturity of their 32 lambs, which were divided into three groups: Normal group included 10 lambs born at term, after 145 days of gestation; Caesarean group included 11 lambs delivered by caesarean section, after 138 days of gestation; and Caesarean+Dexamethasone group included 11 lambs born from sheep submitted to caesarean section, after 138 days of gestation, and dexamethasone 16 mg/animal (IM) administration two days prior to the surgical procedure.. A significant difference was observed between Normal and Caesarean+Dexametasone groups using Nile Blue staining. However, this technique was not effective. Hematoxilin-Shorr staining was reliable and it was possible to verify that the Normal group differed statistically from the group submitted to Caesarean+Dexamethasone. In Clements' test, aiming to observe the presence of surfactant, which is characterized by the formation of bubble rings, approximately 20% of animals in the Normal group presented pulmonary maturity. However, the Caesarean group showed the least amount of bubbles (9.1%). The Caesarean+Dexamethasone group showed higher percentage of animals with pulmonary maturity (36.4%) when compared to the Normal and Caesarean groups The lamellar bodies were then measured to verify their size, which varied between 0.019 and 0.590 micrometers / Mestre

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:41:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:59:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A grandeza produto kerma-área (PKA) é importante para estabelecer níveis de referência em exames de radiologia diagnóstica. Essa grandeza pode ser obtida por meio de medidores do PKA. O uso desses medidores é fundamental para avaliar a dose de radiação em procedimentos radiológicos, além de ser um bom indicador para que os limites de dose na pele do paciente não sejam excedidos. Algumas vezes, esses medidores vêm acoplados a equipamentos de radiação X, o que dificulta sua calibração. Neste trabalho foi desenvolvida uma metodologia de calibração de medidores do PKA. O instrumento utilizado para este fim foi o Patient Dose Calibrator (PDC). Ele foi desenvolvido para ser utilizado como referência na verificação da calibração de medidores do PKA e kerma no ar usados na dosimetria de pacientes e para verificação da consistência e do comportamento de sistemas de controle de exposição automáticos. Por se tratar de um equipamento novo, que, no Brasil, ainda não é utilizado como equipamento de referência para calibração, foi realizado, também o controle de qualidade deste equipamento, com testes de caracterização, a calibração e a avaliação da dependência energética. Após os testes, ficou provado que o PDC pode ser utilizado como instrumento de referência para a calibração a ser realizada in situ, de forma que as características de cada equipamento de radiação X onde os medidores do PKA são utilizados sejam consideradas. A calibração foi, então, realizada com medidores do PKA portáteis e em um equipamento de radiologia intervencionista que possui um medidor do PKA acoplado. Os resultados foram bons e ficou provada a necessidade de calibração desses medidores e a importância da calibração in situ com um medidor de referência. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

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A raiva é uma encefalomielite aguda causada por um vírus da ordem Mononegavirales, família Rhabdoviridae, gênero Lyssavirus e espécie Rabies virus (RABV). É um vírus RNA de fita simples, senso negativo que acomete todas as espécies de mamíferos. Seu diagnóstico é obtido de modo definitivo por técnicas laboratoriais. A imunofluorescência direta (IFD) é uma prova de triagem rápida, considerada padrão ouro pela OMS e OIE, pois possui alta sensibilidade e especificidade diagnóstica. Esta técnica utiliza como teste confirmatório o isolamento viral em camundongos (IVC) ou em cultura de células (IVCC). Uma vez que o RABV não infecta todas as estruturas do sistema nervoso central (SNC) de modo uniforme, a detecção deste agente pode ter resultados variáveis. Algumas situações exigem o desenvolvimento e implantação de metodologias alternativas, tais como transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR), RT-PCR em tempo real (RT-qPCR) e imunohistoquímica (IHQ), que possuem vantagens e apresentaram resultados bastante promissores. Para tanto, foram utilizadas amostras de SNC[tálamo, córtex, hipocampo, cerebelo, tronco encefálico (bulbo, ponte e mesencéfalo) e medula cervical]de 127 bovinos provenientes da Seção de Diagnóstico da Raiva do Instituto Pasteur, durante o período de março de 2015 a abril de 2016. As diferentes regiões do SNC dos animais foram identificadas e alíquotas foram separadas para a realização das técnicas de identificação viral, totalizando 689 fragmentos. A presença viral foi observada pela IFD e confirmada tanto pelo IVC quanto pelo IVCC. A distribuição do vírus pelas diferentes porções do SNC foi observada pelas técnicas de IFD, IHQ e RT-PCR para detecção do gene N em 40 animais que foram considerados positivos. Os 40 bovinos positivos na IFD confirmaram sua positividade na IHQ e IVC, apresentando concordância de 100% dos resultados. Entretanto houve diferença em relação aos resultados dos isolamentos virais, uma vez que, dos 38 animais positivos que foram submetidosaambas as técnicas, três foram negativos para a presença do RABV no IVCC, indicando uma concordância de 92,1%, (3538) quando comparado ao IVC. Em relação às técnicas moleculares houve diferenças, a RT-PCR apresentou positividade de 100% (4040), enquanto que a RT-qPCR observou-se que 97,5% (39/40) dos bovinos foram positivos. Na IFD, de modo geral, não houve disparidade entre os fragmentos em relação à positividade, porém ocorreu diferença quando se analisou a intensidade de fluorescência entre os fragmentos. Quando comparadas, a IHQ e a IFD apresentaram resultados semelhantes, embora a IHQ tenha apresentado positividade em 100% fragmentos (209209) e a IFD em 99,51% dos fragmentos (205206). Conclui-se, pelos resultados obtidos, diferenças na intensidade da distribuição viral e na concentração de RNA viral nas diferentes porções do SNC (padrões de neuroinvasividade) em bovinos; fato este que poderia interferir nos resultados obtidos no diagnóstico de rotina da raiva. / Rabies is an acute encephalomyelitis caused by a virus belonging to the Mononegavirales order, Rhabdoviridae family, Lyssavirus genus and Rabies virus (RABV) species. It is a single-stranded RNA virus, negative sense that affects all species of mammals. The definitively diagnosis is obtained by laboratory techniques. Direct fluorescent antibody test (dFAT) is a rapid screening, considered the gold standard by WHO and OIE, as it has high diagnostic sensitivity and specificity. However, it´s recommended the mouse inoculation test (MIT) or rabies tissue culture infection test (RTCIT) as a confirmatory test. Once RABV does not infect all central nervous system (CNS) structures uniformly, the detection of this agent may have varying results Some situations require the development and implementation of alternative methods such as RT-PCR, RT-qPCR and immunohistochemistry (IHC), which have advantages and showed very promising results. Therefore, CNS structures [thalamus, cortex, hippocampus, cerebellum, brainstem (medulla, pons and midbrain) and cervical cord] from 127 cattle were selected from the Rabies Diagnostics Section of the Instituto Pasteur during the period March 2015 to April 2016. The different CNS structures were identified and aliquots were separated for carrying out the viral identification techniques, totalizing 689 structures. The viral presence was observed by dFAT and confirmed by both the MIT and the RTCIT. The distribution of the virus by different portions of the CNS was observed by dFAT, IHC and RT-PCR for detection of the N gene in 40 animals considered positive. The 40 positive cattle in the dFAT confirmed their positivity on IHC and MIT, with agreement of 100% of the results. However there was a difference from the viral isolation since the 38 positive animals tested in both techniques, three were negative for the presence of RABV in RTCIT indicating an agreement of 92.1% (35/38) when compared to MIT. The dFAT, in general, showed no disparity among the fragments relative to their positivity, however, a difference was observed when analyzing the fluorescence intensity between the fragments. When compared IHC and dFAT presented similar results, although the IHC has presented a 100% positivity in the fragments (209/209) and 99.51% in dFAT (205/206).Regarding the molecular techniques, RT-PCR showed positivity of 100% (40/40), meanwhile RT-qPCR showed 97,5% (39/40) among the positive animals studied. In conclusion, the results suggest that there is variability in the intensity of virus distribution and in the virus concentration in different parts of the CNS (neuroinvasiveness patterns) in cattle. This fact could affect the results obtained in the diagnosis of rabies routine.

O objetivo deste estudo clínico aleatório, boca dividida e duplo cego foi avaliar por meio de mensurações radiográficas lineares, o tratamento de defeitos infra-ósseos de 2 ou 3 paredes com retalho de espessura total reposto (RET) associado ou não à proteína derivada da matriz do esmalte (PME) após 24 meses. Foram avaliados 10 pacientes com periodontite crônica apresentando 2 ou mais defeitos infra-ósseos, totalizando 43 defeitos. As tomadas radiográficas foram realizadas antes do procedimento cirúrgico e após 24 meses. Foram confeccionados registros oclusais individualizados para padronização das radiografias. As películas radiográficas foram digitalizadas (500dpi/8bits) em um escaner (SprintScan 35 Plus scanner-Polaroid). O software AxioVision (version 3.0-Carl Zeiss) foi utilizado para mensurar as distâncias da junção esmalte-cemento (JEC) à crista óssea alveolar (CO), JEC ao fundo do defeito (FD) e o ângulo do defeito infra-ósseo. Uma escala milimétrica foi adquirida através da calibração de uma tela radiográfica de 1x1mm. Um examinador cego e calibrado realizou todas as mensurações radiográficas. A análise estatística utilizou nível de significância p=0,05. Após 24 meses, foi observada uma significante perda da crista óssea (JEC-CO) para PME (1,01mm; p=0,049), mas não para RET (0,14mm; p=0,622), no entanto, sem diferenças estatisticamente significantes entre os grupos (p=0,37). A redução da profundidade do defeito ósseo (JEC-FD) foi significante para RET (0,70mm; p=0,005), mas não para PME (-0,04mm; p=0,86), sem diferenças detectadas entre os grupos (p=0,87). Ambos PME (0,69; p=0,82) e RET (5,71; p=0,24) demonstraram um aumento nas medidas do ângulo do defeito, mas sem diferenças após 24 meses ou entre os grupos (p=0,35). Nesta amostra, a análise por meio de medidas radiográficas lineares computadorizadas não foi capaz de demonstrar superioridade do tratamento de defeitos infra-ósseos de 2 e 3 paredes com a aplicação da PME em comparação ao RET após 24 meses. / The aim of this randomized, double-blind, split-mouth clinical trial was evaluate, using linear radiographic measurements, infra-bony defects treated with enamel matrix protein (EMP) or repositioned flap (RF), after 24 months. Ten healthy patients with chronic periodontitis presenting 2 or more defects were selected, totalizing 43 defects. Radiographic data were collected just before surgery and after 24 months. An individualized film holder was used to take standardized radiographs. Images were digitized (500dpi/8bits) with the SprintScan 35 Plus scanner (Polaroid). The AxioVision (version 3.0) software (Carl Zeiss) was used to measure the distances from the cemento-enamel junction (CEJ) to the alveolar crest (AC), CEJ to the bottom of the defect (BD) and infra-bony defect angle. A milimetric scale was achieved after calibration with a 1x1mm grid. A blind calibrated examiner performed all radiographic measurements. Statistical analysis used a level of significance of p=0,05. After 24 months, a significant crestal bone loss (CEJ-AC) was observed for EMP (1,01mm; p=0,049) but not for RF (0,14mm; p=0,622), however, no differences were detected between groups (p=0,37). Reduction of the bone defect depth (CEJBD) was significant for RF (0,70mm; p=0,005) but not for EMP (-0,04mm; p=0,86), while no differences were detected between them (p=0,87). Both EMP (0,69; p=0,82) and RF (5,71; p=0,24) showed an improvement in defect angle measurements but no significant differences were observed after 24 months or between them (p=0,35). In this sample, the linear radiographic analysis was not able to demonstrate the superiority of EMP treated infra-bony defects when compared to RF alone after 24 months.

A sífilis é uma doença infecciosa, cujo agente etiológico é o Treponema pallidum. Pode ser transmitida sexualmente ou verticalmente, via placenta. Seus estágios variam entre sífilis primária, sífilis secundária, sífilis latente e sífilis congênita. Dentre os diagnósticos mais eficazes, encontram-se os testes sorológicos, porém os falsos positivos e falsos negativos no estágio primário levam à procura de uma forma mais eficaz de se determinar, precocemente, a doença. Além disso, por várias razões, nem sempre o profissional clínico suspeita das lesões presentes na mucosa oral, cogitando de outras hipóteses diagnósticas. O objetivo deste trabalho foi avaliar imuno-histoquimicamente e histoquimicamente lesões bucais biopsiadas cujo aspecto histológico levou à suspeita de sífilis, buscando identificar os microorganismos, bem como correlacionar o quadro sorológico quando positivo. Para o estudo foram incluídas 34 lesões suspeitas de sífilis, que foram submetidas à reação imuno-histoquímica com o anticorpo anti-treponema e técnica histoquímica de coloração pela prata. Dos 34 casos avaliados 13 foram positivos para o anticorpo anti-treponema, todos posteriormente diagnosticados como sífilis secundária, com positividade sorológica, exceto por um caso em que a sorologia não foi realizada. Quando se comparou os métodos de diagnóstico, a técnica de coloração por prata obteve sensibilidade de 46,15% e a de imuno-histoquímica foi de 92,3%. Os aspectos histológicos variaram em um grande número de achados, dentre eles: intensa exocitose, infiltrado inflamatório predominantemente plasmocitário (justaepitelial e perivascular), áreas de ulceração, epitélio paraqueratinizado, edema, espongiose e hiperplasia epitelial. A marcação imuno-histoquímica dos treponemas foi, principalmente, epitelial (61,5%) e esse método se mostrou um meio de diagnóstico rápido, simples e eficiente no diagnóstico de lesões orais de Sífilis. / Syphilis is an infectious disease, whose etiologic agent is Treponema pallidum. It can be transmitted sexually or vertically via the placenta. Its stages include primary syphilis, secondary syphilis, latent syphilis and congenital syphilis. Among the diagnoses most effective are the serological tests, but false positives and false negatives in the primary stage lead to demand for a more effective way to determine the disease earlier. In addition, for various reasons, not always the professional clinical suspicion of lesions present in the oral mucosa, thinking in other possible diagnoses. The objective of this study was to identify microorganisms and set the best way forward to a diagnostic framework confirmed positive serology. The results for syphilis lesions in the oral mucosa corresponded to 13 cases, all of secondary iinjuries,with positive serology for syphilis and in only one of them serology had not been held. In a comparison of diagnostic methods, the technique of silver staining achieved sensitivity of 46.15% and immunohistochemistry was 92.3%. The histological features varied in a large number of findings, including: intense exocytosis, inflammatory infiltrate, predominantly plasmacytic (banda-like and infiltrate perivascular), areas of ulceration, parakeratinized epithelium, edema, spongiosis and epithelial hyperplasia. The immunohistochemical staining of treponemes was mainly epithelial (61.5%) and this method was a rapid, simple and efficient means in the diagnosis of oral lesions of syphilis.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os conhecimentos fundamentais sobre neoplasias estão aumentando rapidamente, no entanto, poucos avanços estão sendo obtidos na clínica para terapia e diagnóstico de tumores. Por este motivo o desenvolvimento de drogas alternativas é de extrema importância na tentativa de melhorar o prognóstico da doença e aumentar a sobrevida dos pacientes. Peçonhas de serpentes constituem fontes naturais de substâncias bioativas com grande potencial terapêutico. O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar o efeito antitumoral da peçonha de Crotalus durissus terrificus (PC) e seus polipeptídeos, Crotoxina e Crotamina, sobre linhagens de tumores cerebrais, bem como avaliar seu potencial radiossensibilizador e sua aplicabilidade para detecção de tumores in vivo. Os resultados obtidos demonstraram que PC possui potente efeito antitumoral sobre tumores benigno, adenoma de pituitária (GH3), e maligno, glioblastoma multiforme (RT2), com IC50 de 0,96μg/mL e 2,15μg/mL, respectivamente. Este efeito antitumoral ocorre via apoptose, é ciclo específico e dependente de cálcio extracelular, um importante fator para a atividade fosfolipásica A2 do principal componente da PC, Crotoxina. PC também apresentou um importante efeito radiossensibilizador, tornando os tumores até 66% mais sensíveis à radioterapia. O efeito antitumoral da PC pode ser atribuído, pelo menos parcialmente, aos polipeptídeos Crotoxina e Crotamina, que também induziram apoptose das células de tumores cerebrais. Estes componentes da PC interagiram de maneira específica com tumores sólidos malignos in vitro e foram capazes de detectar foco tumoral in vivo. Apesar da conhecida nefrotoxicidade e neurotoxicidade da PC, o tratamento agudo com a dose antitumoral da PC estabelecida in vitro não foi tóxico para os animais analisados. Estes resultados indicam o potencial biotecnológico da PC como fonte de moléculas moldes para o desenvolvimento de fármacos e radiofármacos para a terapia e/ou diagnóstico do câncer. / The neoplasms basic knowledge is increasing quickly, however, few advances have been reached in clinical therapy and diagnosis of tumours. For this reason, the development of alternative drugs is relevant in the attempt to improve prognosis and to increase the patients survival. Snake venoms are natural sources of bioactive substances with therapeutically potential. The objective of this work was to identify and to characterise the antitumoral effect of Crotalus durissus terrificus venom (PC) and its fractions, Crotoxin and Crotamine, on brain tumours, as well as, to evaluate its radiosensibilising potential and its applicability for tumours detection in vivo. The results demonstrated that PC possess a powerful antitumoral effect for benign (pituitary adenoma) and malignant (glioblastoma multiforme) tumours with IC50 values of 0,96μg/mL and 2,15μg/mL, respectively. This antitumoral effect is mediated by apoptosis induction; it is cell cycle specific and dependent of extracellular calcium, an important factor for Crotoxin phospholipase A2 activity. Besides being a powerful antitumoral agent, PC also presented an important radiosensibilising effect, increasing in 66% the tumour radiotherapy sensitivity. The PC antitumoral effect can be ascribed, at least partially, to the polypeptides Crotoxin and Crotamine that also induced brain tumours apoptosis. These PC polypeptides specifically interacted with malignant tumours in vitro and demonstrated to be capable to detect tumoral focus in vivo. In spite of the PC known nephrotoxicity and neurotoxicity, acute treatment with its antitumoral dose estabilished in vitro was not found to be toxic for the analysed animals. These results indicate the biotechnological potential of PC as source of templates for pharmaceutical and radiopharmaceutical design for cancer therapy and diagnosis.