O bocavirus humano (HBoV) é um parvovirus recentemente identificado em associação com a presença de sintomas de infecção do trato respiratório. Esse vírus possui um genoma de aproximadamente 5217 nucleotídeos que contém 3 open reading frames que codificam 4 proteínas (NS1, NP-1, VP-1 e VP-2). HBoV tem sido detectado em amostras respiratórias de diversas partes do mundo, incluindo Austrália, América do Norte, Europa, Ásia e África, o que sugere uma distribuição global desse vírus. Entretanto, nenhum estudo longitudinal de HBoV em amostras respiratórias foi realizado na América Latina. Dessa forma, nós realizamos um estudo prospectivo de HBoV em lavados nasofaríngeos (LFNs) coletados de pacientes com sintomas de infecção do trato respiratório (IRA) atendidos em um hospital universitário de Ribeirão Preto, SP e em um hospital universitário de Salvador, BA no período entre 2005 a 2007. 1288 LFNs de 1217 pacientes foram encaminhados ao laboratório de virologia e foram testados por PCR para HBoV. Desses pacientes, 962 eram menores de 5 anos e 177 eram maiores de 5 anos. Além disso, também foram analisados 50 LFNs de crianças menores de 5 anos que não tinham sintomas respiratórios. Todas as amostras positivas para HBoV foram testadas para todos os outros vírus respiratórios, incluindo o vírus sincicial respiratório (HRSV), rinovirus humano (HRV), influenza humano (HFLU), metapneumovirus humano (HMPV), parainfluenza humano (HPIV), coronavirus humano (HCoV) e adenovirus humano (HAdV). A carga viral de HBoV foi determinada por PCR em tempo real em todas as amostras positivas e o genoma completo de 19 amostras de HBoV foi seqüenciado. Com intuito, de fazer um levantamento sorológico e determinar sítios replicativos de HBoV, nós ainda clonamos e expressamos em S. cerevisae (Y258) o gene de VP2, que codifica uma das proteínas do capsídeo viral. A prevalência desse vírus foi de 4,8% em crianças menores de cinco anos e de 1% em pacientes maiores de cinco anos. HBoV não foi detectado em crianças sem sintomas. Dos 259 pacientes analisados em 2005, 25 (10%) foram positivos para HBoV. Esse vírus circulou mais frequentemente em abril, mês de maior incidência do HRSV. Em 2006, HBoV foi detectado em apenas 10 LFNs de 334 (3%) amostras testadas, sem qualquer pico de freqüência. Em 2007 HBoV foi detectado em 13 de 552 (2%) amostras, com uma freqüência de detecção um pouco maior em junho e julho. Os sintomas mais comumente observados foram rinorréia, tosse, febre e chiado, que foram observados geralmente em mais de 50% dos casos positivos para HBoV. Não houve uma diferença significativa na prevalência desses sintomas entre as crianças positivas e negativas para HBoV. Entretanto, foi observada uma maior freqüência de diarréia entre as crianças com esse vírus. Nesse estudo também foi documentado uma alta freqüência de co-infecções virais entre os pacientes com HBoV. Os vírus mais frequentemente associados com o bocavirus humano foram: HRSV, HRV e HAdV. Além disso, foi detectado uma maior carga viral media e uma maior freqüência de diarréia nos 15 pacientes com infecção exclusiva por HBoV do que nos pacientes com co-infecção. Esses resultados mostraram que HBoV pode alcançar títulos enormes (tão grandes como1014/mL) em LFNs de pacientes com sintomas respiratórios e que isso é associado a de diarréia. O seqüenciamento do genoma inteiro de HBoV realizado nesse estudo indica que a divergência genômica entre as amostras desse vírus é muito pequena. Como conclusão, nós demonstramos que HBoV circula e é detectado em associação com sintomas de infecção respiratória e diarréia no Brasil. Novos estudos, com um longo acompanhamento em diferentes populações serão necessários para determinar a sazonalidade e o real impacto clínico de HBoV em nosso país. / Human bocavirus (HBoV) is a parvovirus recently identified in association with respiratory tract infections. HBoV 5217 nt genome contains 3 open reading frames encoding four proteins (NS1, NP-1, VP-1 and VP-2). HBoV has been reported in respiratory samples from children in several parts of the world (including Australia, North America, Europe, Asia, and Africa), suggesting that the virus circulates worldwide. However, no longitudinal studies of HBoV in respiratory samples have been reported in Latin America. We report a prospective study of HBoV in nasopharyngeal aspirates (NPAs) collected from patients seen for acute respiratory tract infections (ARI) at the University of Sao Paulo Hospital in Ribeirao Preto, southeast Brazil and at the University Hospital in Salvador, Brazil. 1288 NPAs from 1217 patients was submitted to the virology lab for respiratory virus detection from 2005 to 2007 and were screened for HBoV by polymerase chain reaction (PCR), whom 962 were under 5 years of age and 177 were older than 5 years. In addition, NPAs from 50 children under 12 years without IRA was also tested to HBoV for PCR. All samples positive of HBoV was tested for others respiratory virus, including the human respiratory syncitial virus (HRSV), human rhinovirus (HRV), human influenza (HFLU), human metapneumovirus (HMPV), human parainfluenza virus (HPIV), human coronavirus (HCoV) and human adenovirus (HAdV). These samples had their HBoV viral load determined by real time PCR and the viral entire genome of nineteen HBoV sample was sequenced. We also cloned and expressed in S. cerevisae (Y258) the gene of VP2, one protein of viral capside. The prevalence of this virus was of 4,8% in children under 5 years and 1% in adults, both with IRA. HBoV was not found on the patients without symptoms. In 2005, of the 259 patients tested, 25 (10%) were positive for HBoV. Interestingly, the virus circulated more frequently in April, the month of peak activity of respiratory HRSV. In 2006 HBoV was detected in only 10 NPAs out of 334 samples (3%) tested, without any notable peak of frequency. In 2007 HBoV was detected in 13 out of 552 (2%) tested samples with little higher frequency of detection in June an July. Rhinorrhea, cough, and wheezing were observed in more than 50% of the HBoV-positive children, and no obvious respiratory clinical differences were noted between HBoV-positive and negative children. However, was noted a higher frequency of diarrhea on HBoV-positive patients. In this study was also observed a larger frequency (71%) of viral coinfections between the HBoV-positive patients. The respiratory viruses more frequently associated with human bocavirus were: HRSV, HRV and HAdV. Interestingly, on the 15 HBoV-alone patients was observed a higher viral load and a higher prevalence of diarrhea than HBoV-coinfection patients. These results showed that this virus can reach enormous titles (like 1014) in NPAs from patients with respiratory infection symptoms and this is associated with diahhrea. The entire genome sequencing of HBoV of our study indicates that the genetic divergence between the HBoV lineages is small. In conclusion, we demonstrated that HBoV circulates and is detected in association with respiratory symptoms and diarrhea in Brazil. Long term surveillance will be needed to determine whether or not an HBoV season occurs and what is the real clinical impact of this virus in our country.

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2017-05-11T15:29:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Marilia_Carvalho.pdf: 854756 bytes, checksum: 8b327668b2ab1f2615a6a8f3f2dd9304 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-05-12T12:17:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Marilia_Carvalho.pdf: 854756 bytes, checksum: 8b327668b2ab1f2615a6a8f3f2dd9304 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-12T12:17:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Marilia_Carvalho.pdf: 854756 bytes, checksum: 8b327668b2ab1f2615a6a8f3f2dd9304 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-05-20 / Sem bolsa / Esta dissertação está apresentada na forma de um artigo científico cujo o objetivo de estudo foi determinar a prevalência e incidência de Leucose Enzoótica Bovina (LEB) e Diarréia Viral Bovina (DVB), avaliando a dinâmica de transmissão de enfermidades virais em um centro de recria de novilhas leiteiras submetidas a Pastoreio Racional Voisin (PRV). Estas doenças virais têm grande impacto econômico na criação de bovinos leiteiros levando a queda na produção leiteira e imunossupressão pré-dispondo as novilhas a outras infecções. Para detecção de anticorpos contra Leucose Enzoótica Bovina foi realizado um teste de Imunodifusão em Agar Gel (IDGA) comercial. Nos animais soropositivos, foi realizado o leucograma pareado para a determinação de linfocitose persistente (LP). Para a determinação da prevalência do vírus da Diarréia Viral Bovina, foi realizado o teste de vírus neutralização(VN) com cepa citopática NADL (BVDV-1). A detecção de possíveis animais persistentemente infectados (PI) foi utilizada a técnica de RT-PCR. O lote experimental era composto por 179 animais de raças leiteiras e cruzas, divididos em cinco lotes por faixa etária e peso, não fixos, submetidos ao manejo pelo método do Pastoreio Racional Voisin (PRV). As taxas de prevalência iniciais para LEB e DVB foram de 3,91% e 51,98% respectivamente. Foram calculadas taxas de incidência para as duas doenças resultando em 21,51% para LEB e 11,77% para DVB. A dinâmica de transmissão da Diarréia viral Bovina foi relativamente, lenta justificada pela ausência de animais PI dentro do lote experimental. Constatou-se que dos 39 animais positivos para LEB ao final do período experimental, dez apresentaram linfocitose persistente (LP), ou seja, uma prevalência de 25,64%, considerada alta, elevando os riscos de transmissão do vírus para outros animais dentro do centro de recria. A intensificação do manejo das novilhas dentro do centro de recria aumenta os riscos de disseminação de destas doenças. Como formas de controle destas enfermidades no rebanho, sugeriu-se a identificação de animais LEB positivos com estratégias de manejo e utensílios separados dos animais negativos; quanto a DVB como não foram encontrados animais persistentemente infectados no rebanho a vacinação das novilhas na idade reprodutiva deve ser preconizada reduzindo o risco da ocorrência de animais PI nas unidades de produção após o retorno dos animais e evitando problemas reprodutivos. / This work is presented in the form of a scientific paper whose objective of the study was to determine the prevalence and incidence of Bovine Leukosis (LEB) and bovine viral diarrhea (DVB), evaluating the dynamics of transmission of viral diseases in a center for rearing dairy heifers Pastoreio Racional Voisin (PRV). These viral diseases have a significant economic impact on the creation of dairy cattle leading to reduced milk production and pre-arranging the heifers to other infections immunosuppression. For antibodies against Bovine Leukosis was carried out immunodiffusion test Agar Gel (AGID) commercial. In seropositive animals, was held the WBC paired for the determination of persistent lymphocytosis (PL). To determine the prevalence of bovine viral diarrhea virus, we performed the virus neutralization test (VN) with cytopathic strain NADL (BVDV-1). The detection of possible persistently infected (PI) animals was used for RT-PCR. The experimental plot consisted of 179 animals of dairy breeds and crosses, divided into five lots by age and weight, not fixed, subject to management by the method of grazing Rational Voisin (PRV). The initial prevalence rates for LEB and DVB were 3.91% and 51.98% respectively. Incidence rates were calculated for the two conditions resulting in LEB 21.51% and 11.77% for DVB. The dynamic transmission of bovine viral diarrhea was relatively slow explained by the absence of PI animals within the test batchIt was found that out of 39 animals positive for LEB the end of the trial, ten presented persistent lymphocytosis (LP), or a prevalence of 25.64%, which is considered high, increasing the risk of virus transmission to other animals within the center recreates. Intensified management of heifers in the center of growing increases the risk of spread of these diseases As ways to control these diseases in the herd, suggested the identification of positive LEB animals with separate management strategies and tools of negative animals; as the DVB as vaccination of heifers in the reproductive age persistently infected animals in the herd were not found to be recommended, reducing the risk of occurrence of animal IP in production units after the return of animals and avoiding reproductive problems.

Made available in DSpace on 2016-12-23T14:06:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wallace de Medeiros Cazelli.pdf: 2536965 bytes, checksum: fd72ec2332e1a2fa61b0e4bccb66708e (MD5) Previous issue date: 2013-01-30 / The modern connection between the basic attention to health and sanitation had the beginning with the Declaration of Alma Ata in 1978, when the proposal to establish local health services focusing on the real needs of the population had as one of its elementary actions the drinking-water supply and sewage collection and treatment. Thirty four years later the review of the literature demonstrates that the sanitation and health had been more theorized than actually combined to promote improvement in the health conditions of populations around the world. Considering these facts, the motivation to produce this study has been found, which is: knowing and researching its interfaces, its associations and how they contribute to the health of the population in the cities of Espírito Santo. To perform the study objectives, the methodology has been used was the statistical analysis of a variable dependent on health and sanitation indicators, on secondary data, referring to the State s municipalities in 2001, 2006 and 2011. The literature review indicates that in recent years the parasitic and infectious diseases caused by the lack of sanitation are decreasing in areas where interventions in primary health care can be found, making them good indicators in planning and monitoring of health services. The results indicated a strong connection between primary health care and the provision of water supply and sewage collection by collective network, over the variable rate of diarrhea in children under two years old, in 2001, 2006 and 2011 in the municipalities in Espírito Santo. The analysis indicate that, in areas where the teams of community health agents work and the family health strategy, good results in controlling diarrhea are presented in all years of the study. And these outcomes are increased when associated to more coverage of public water supply systems and sanitation. This complement confirms the requirement for greater investments in the actions planned and performed on a intersectorial way by the municipal public administrations / A moderna relação entre a atenção básica à saúde e o saneamento básico tem sua certidão de nascimento lavrada na Declaração de Alma Ata em 1978, quando a proposta de instituir serviços locais de saúde centrados nas necessidades reais da população trazia como suas ações essenciais elementares o abastecimento de água potável e a coleta e tratamento de esgoto sanitário. Passados 34 anos a revisão da literatura nos revela que a relação entre saneamento e saúde foi mais teorizada do que de fato conjugada para promover melhorias nas condições de saúde das populações mundo a fora. Daí a motivação do presente estudo: conhecer suas interfaces, suas associações e como estas contribuem para a saúde da população nos municípios capixabas. Para cumprir os objetivos a metodologia empregada consistiu na análise estatística de uma variável dependente e de indicadores de saúde e saneamento, utilizando dados secundários de fontes oficiais dos municípios capixabas nos anos de 2001, 2006 e 2011. A revisão bibliográfica aponta que nos últimos anos as doenças infecciosas e parasitarias causadas pela falta de saneamento básico estão diminuindo nos territórios onde encontramos intervenções de Atenção Primária à Saúde, tornando-as bons indicadores no planejamento das ações de saúde. Os resultados mostraram forte relação entre a Atenção Primária à Saúde e a oferta de abastecimento de água potável e da coleta de esgoto por rede coletiva, sobre a variável taxa de diarréia em menores de 2 anos, nos anos de 2001, 2006 e 2011 nos municípios capixabas. A análise mostra que, em áreas de atuação de equipes de Agentes Comunitários de Saúde e da estratégia de Saúde da Família, bons resultados no controle de diarréias são apresentados em todos os anos do estudo, sendo potencializados quando consorciados por maiores coberturas dos sistemas públicos de abastecimento de água e esgotamento sanitário. Esta complementaridade confirma a necessidade de maiores investimentos em ações planejadas e executadas de forma intersetorial pelas gestões públicas municipais

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T17:54:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OcorrenciaAnticorposContra.PDF: 1109270 bytes, checksum: c6ad182dbe76da3e60b8512f01c5f05a (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-22T13:59:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OcorrenciaAnticorposContra.PDF: 1109270 bytes, checksum: c6ad182dbe76da3e60b8512f01c5f05a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-22T13:59:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_OcorrenciaAnticorposContra.PDF: 1109270 bytes, checksum: c6ad182dbe76da3e60b8512f01c5f05a (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A leucose bovina, a diarréia viral bovina e a rinotraqueite infecciosa bovina estão entre as principais viroses que levam a perdas na produtividade e no desempenho reprodutivo de ruminantes. Embora bovinos e bubalinos sejam frequentemente criados em conjunto e apesar da comprovada ocorrência dessas enfermidades em bubalinos, trabalhos sobre ocorrência natural dessas viroses nessa espécie ainda são escassos. Deste modo, objetivou-se verificar a ocorrência de anticorpos contra os vírus da Leucose enzoótica bovina (LEB), Diarreia viral bovina (BVD) e Rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR) em bubalinos de criações localizadas nas Mesorregiões Nordeste Paraense, Metropolitana de Belém e do Marajó, no Estado do Pará, além de identificar os fatores de risco para a BVD em criações das Mesorregiões Nordeste Paraense e Metropolitana de Belém. No presente estudo foram avaliados 350 soros de bubalinos (Bubalus bubalis) procedentes de propriedades agropecuárias localizadas nas respectivas mesorregiões, que foram submetidos às técnicas de sorologia: imunodifusão para LEB e soroneutralização para BVD e IBR. A frequência para as respectivas doenças na população de estudo foram: 0% (0/350), 53,71% (188/350) e 91,71% (321/350). Bubalinos machos e animais com idade mais avançada apresentaram maior soropositividade para BVD. A frequência de bubalinos sororreagentes para BVD foi maior na Mesorregião do Marajó, em relação às Mesorregiões Nordeste Paraense e Metropolitana de Belém, enquanto para IBR foi maior nas Mesorregiões Nordeste Paraense e Metropolitana de Belém. Dentre as variáveis investigadas, o tipo de ordenha foi o único identificado como fator de risco para a ocorrência da BVD em bubalinos. / Bovine Leukosis, Bovine Viral Diarrhea and Infectious Bovine Rhinotracheitis are among the main viruses that lead to losses in productivity and reproductive performance of ruminants. Although cattle and buffalo are often created together, and despite the proven occurrence of these diseases in buffalo, papers about natural occurrence of these infections in this species are scarce. Thus, the objective of this study was to verify the occurrence of antibodies against the Bovine Leukosis Virus (BLV), Bovine Viral Diarrhea (BVD) and Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR) in buffalo creations located in the “Paraense” Northeast Mesoregion, Greater Metropolitan Belém and Marajó Mesoregion, Pará, in addition to identify the risk factors for BVD in creations located in “Paraense” Northeast Mesoregion and Greater Metropolitan Belém. In this study 350 buffaloes (Bubalus bubalis) sera were evaluated, coming from farms located in each mesoregion, that were subjected to serological techniques: immunodiffusion for (BLV) and serum neutralizing for BVD and IBR. Frequency of the respective diseases in the study population were: 0% (0/350), 53,71% (188/350) and 91,71% (321/350). Male buffaloes and older animals had higher seropositivity for BVD. The frequency of BVD seroreagents buffaloes was higher in Marajó Mesoregion compared to “Paraense” Northeast Mesoregion and Greater Metropolitan Belém, whereas for IBR the opposite occurred. Among the variables investigated, the type of milking was the only identified as a risk factor for the occurrence of BVD in buffaloes.

Orientador: Samir Issa Samara / Banca: Maria da Gloria Buzinaro / Banca: Fumio Honma Ito / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo verificar a variação da ocorrência da Rinotraqueíte Infecciosa Bovina (IBR) pela associação com duas doenças virais imunossupressoras: a Diarréia Viral Bovina (BVD) e a Leucose Enzoótica Bovina (LEB), em seis propriedades onde não se adota esquema de vacinação contra essas enfermidades. Amostras de soro sangüíneo foram analisadas no teste de virusneutralização (VN), para constatação de IBR e BVD, e Imunodifusão em Gel de Ágar (IDGA), para a LEB. Foram selecionados cinco rebanhos bovinos, em propriedades localizadas em municípios dos Estados de São Paulo e Minas Gerais, sendo três de exploração leiteira, um de gado de corte e um misto, com animais soropositivos ao BoHV-1, além de um rebanho controle, sem anticorpos contra essa enfermidade. Das 278 amostras analisadas, 54,68% (152/278) foram positivas ao BoHV-1, 69,70% (194/278) ao BVDV-1 e 34,33% (96/278) ao VLEB. Na análise estatística, ao relacionar cada enfermidade com o tipo de exploração do rebanho e a idade dos animais, houve diferença significativa, indicando que estas variáveis são fatores de risco para as enfermidades estudadas. Em relação ao tipo de exploração, os rebanhos leiteiros foram mais suscetíveis ao BoHV-1 e a LEB (81,31% e 49,53% respectivamente, (α = 1 ) enquanto no rebanho de gado de corte o BVDV-1 teve maior ocorrência (94,74%, α = 1). A idade foi fator de risco apenas para o BoHV-1 e a LEB, sendo os animais mais velhos os mais suscetíveis (α = 1). As associações entre o BoHV-1 e o BVDV-1, e o BoHV-1 e a LEB também foram significativas (α = 5 e α = 1 respectivamente), indicando que em rebanhos infectados por BVDV-1 e/ou LEB, a probabilidade de se encontrar o BoHV-1 é maior do que naqueles onde não ocorre essas duas enfermidades. / Abstract: The present research had as objective to verify the variation of the occurrence of Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR) by association with two viral infections that affect the immune system, Bovine Viral Diarrhoea (BVD) and enzootic bovine leukosis (EBL), in six farms where vaccination against these diseases was not adopted. Serum samples had been analyzed by the virus neutralization (VN) test for IBR and BVD diagnosis, and agar gel immunodiffusion (IDGA) test for EBL diagnosis. Five cattle herds with BoHV-1 seropositive animals had been selected in the states of São Paulo and Minas Gerais, three of them exploiting dairy cattle, one exploiting beef cattle and one exploiting mixed cattle, in addition to a control herd without seropositive animals. From 278 analyzed samples, 54.68% (152/278) reacted to the BoHV-1, 69.70% (194/278) to the BVDV-1, and 34.33% (97/278) to the EBLV. The statistic analysis showed a significant difference (α = 1) in infection occurrence according to the kind of exploitation and the age of the animals. Dairy cattle were more sensitive to the BoHV-1 (81.31%) and to the EBLV (49.53%) and less to BVDV-1 infection (45.79%). Among the beef herds, the major occurrence was BVDV-1 infection (94.74%), followed by BoHV-1(34.19%) and EBLV (3.95%). The age was a risk factor (α = 1) only for BoHV-1 and EBLV. The associations between BoHV-1 and BVDV-1 infections (α = 5) and between BoHV-1 and EBLV infections (α = 1) also indicated that among BVDV-1 and/or EBLV infected herds the probability of finding BoHV-1 is higher than among herds where these two infections does not occur. / Mestre

O bocavirus humano (HBoV) é um parvovirus recentemente identificado em associação com a presença de sintomas de infecção do trato respiratório. Esse vírus possui um genoma de aproximadamente 5217 nucleotídeos que contém 3 open reading frames que codificam 4 proteínas (NS1, NP-1, VP-1 e VP-2). HBoV tem sido detectado em amostras respiratórias de diversas partes do mundo, incluindo Austrália, América do Norte, Europa, Ásia e África, o que sugere uma distribuição global desse vírus. Entretanto, nenhum estudo longitudinal de HBoV em amostras respiratórias foi realizado na América Latina. Dessa forma, nós realizamos um estudo prospectivo de HBoV em lavados nasofaríngeos (LFNs) coletados de pacientes com sintomas de infecção do trato respiratório (IRA) atendidos em um hospital universitário de Ribeirão Preto, SP e em um hospital universitário de Salvador, BA no período entre 2005 a 2007. 1288 LFNs de 1217 pacientes foram encaminhados ao laboratório de virologia e foram testados por PCR para HBoV. Desses pacientes, 962 eram menores de 5 anos e 177 eram maiores de 5 anos. Além disso, também foram analisados 50 LFNs de crianças menores de 5 anos que não tinham sintomas respiratórios. Todas as amostras positivas para HBoV foram testadas para todos os outros vírus respiratórios, incluindo o vírus sincicial respiratório (HRSV), rinovirus humano (HRV), influenza humano (HFLU), metapneumovirus humano (HMPV), parainfluenza humano (HPIV), coronavirus humano (HCoV) e adenovirus humano (HAdV). A carga viral de HBoV foi determinada por PCR em tempo real em todas as amostras positivas e o genoma completo de 19 amostras de HBoV foi seqüenciado. Com intuito, de fazer um levantamento sorológico e determinar sítios replicativos de HBoV, nós ainda clonamos e expressamos em S. cerevisae (Y258) o gene de VP2, que codifica uma das proteínas do capsídeo viral. A prevalência desse vírus foi de 4,8% em crianças menores de cinco anos e de 1% em pacientes maiores de cinco anos. HBoV não foi detectado em crianças sem sintomas. Dos 259 pacientes analisados em 2005, 25 (10%) foram positivos para HBoV. Esse vírus circulou mais frequentemente em abril, mês de maior incidência do HRSV. Em 2006, HBoV foi detectado em apenas 10 LFNs de 334 (3%) amostras testadas, sem qualquer pico de freqüência. Em 2007 HBoV foi detectado em 13 de 552 (2%) amostras, com uma freqüência de detecção um pouco maior em junho e julho. Os sintomas mais comumente observados foram rinorréia, tosse, febre e chiado, que foram observados geralmente em mais de 50% dos casos positivos para HBoV. Não houve uma diferença significativa na prevalência desses sintomas entre as crianças positivas e negativas para HBoV. Entretanto, foi observada uma maior freqüência de diarréia entre as crianças com esse vírus. Nesse estudo também foi documentado uma alta freqüência de co-infecções virais entre os pacientes com HBoV. Os vírus mais frequentemente associados com o bocavirus humano foram: HRSV, HRV e HAdV. Além disso, foi detectado uma maior carga viral media e uma maior freqüência de diarréia nos 15 pacientes com infecção exclusiva por HBoV do que nos pacientes com co-infecção. Esses resultados mostraram que HBoV pode alcançar títulos enormes (tão grandes como1014/mL) em LFNs de pacientes com sintomas respiratórios e que isso é associado a de diarréia. O seqüenciamento do genoma inteiro de HBoV realizado nesse estudo indica que a divergência genômica entre as amostras desse vírus é muito pequena. Como conclusão, nós demonstramos que HBoV circula e é detectado em associação com sintomas de infecção respiratória e diarréia no Brasil. Novos estudos, com um longo acompanhamento em diferentes populações serão necessários para determinar a sazonalidade e o real impacto clínico de HBoV em nosso país. / Human bocavirus (HBoV) is a parvovirus recently identified in association with respiratory tract infections. HBoV 5217 nt genome contains 3 open reading frames encoding four proteins (NS1, NP-1, VP-1 and VP-2). HBoV has been reported in respiratory samples from children in several parts of the world (including Australia, North America, Europe, Asia, and Africa), suggesting that the virus circulates worldwide. However, no longitudinal studies of HBoV in respiratory samples have been reported in Latin America. We report a prospective study of HBoV in nasopharyngeal aspirates (NPAs) collected from patients seen for acute respiratory tract infections (ARI) at the University of Sao Paulo Hospital in Ribeirao Preto, southeast Brazil and at the University Hospital in Salvador, Brazil. 1288 NPAs from 1217 patients was submitted to the virology lab for respiratory virus detection from 2005 to 2007 and were screened for HBoV by polymerase chain reaction (PCR), whom 962 were under 5 years of age and 177 were older than 5 years. In addition, NPAs from 50 children under 12 years without IRA was also tested to HBoV for PCR. All samples positive of HBoV was tested for others respiratory virus, including the human respiratory syncitial virus (HRSV), human rhinovirus (HRV), human influenza (HFLU), human metapneumovirus (HMPV), human parainfluenza virus (HPIV), human coronavirus (HCoV) and human adenovirus (HAdV). These samples had their HBoV viral load determined by real time PCR and the viral entire genome of nineteen HBoV sample was sequenced. We also cloned and expressed in S. cerevisae (Y258) the gene of VP2, one protein of viral capside. The prevalence of this virus was of 4,8% in children under 5 years and 1% in adults, both with IRA. HBoV was not found on the patients without symptoms. In 2005, of the 259 patients tested, 25 (10%) were positive for HBoV. Interestingly, the virus circulated more frequently in April, the month of peak activity of respiratory HRSV. In 2006 HBoV was detected in only 10 NPAs out of 334 samples (3%) tested, without any notable peak of frequency. In 2007 HBoV was detected in 13 out of 552 (2%) tested samples with little higher frequency of detection in June an July. Rhinorrhea, cough, and wheezing were observed in more than 50% of the HBoV-positive children, and no obvious respiratory clinical differences were noted between HBoV-positive and negative children. However, was noted a higher frequency of diarrhea on HBoV-positive patients. In this study was also observed a larger frequency (71%) of viral coinfections between the HBoV-positive patients. The respiratory viruses more frequently associated with human bocavirus were: HRSV, HRV and HAdV. Interestingly, on the 15 HBoV-alone patients was observed a higher viral load and a higher prevalence of diarrhea than HBoV-coinfection patients. These results showed that this virus can reach enormous titles (like 1014) in NPAs from patients with respiratory infection symptoms and this is associated with diahhrea. The entire genome sequencing of HBoV of our study indicates that the genetic divergence between the HBoV lineages is small. In conclusion, we demonstrated that HBoV circulates and is detected in association with respiratory symptoms and diarrhea in Brazil. Long term surveillance will be needed to determine whether or not an HBoV season occurs and what is the real clinical impact of this virus in our country.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_ana_berne.pdf: 2199093 bytes, checksum: 8e27f9fa1c22e061e919175c81aa8bb3 (MD5) Previous issue date: 2007-03-30 / The enteroparasitosis remains as an important public health problem in children in the Brazil, showing variable prevalence, according to the State and evaluated population. Studies with day-care center children are scarce, however, already knows that the exposure of the children in these places increased the susceptibility to parasitosis. Among the parasitosis the protozoary Giardia lamblia is responsible for severe diarrhea cases in children and the routine diagnosis methods presents many false negative results. The aim of this study was investigate the enteroparasitosis prevalence in children from a day-care public center of Rio Grande county, Rio Grande do Sul State and compare diagnosis techniques in samples of their fecal material to Giardia lamblia , the ELISA immunoassay and the centrifugal-sedimentation methods. 165 fecal samples where evaluated and processed by centrifugal-sedimentation and centrifugal-flotation methods, stained by trichromium and Kinyoun after the concentration by centrifugal-sedimentation. The general prevalence of enteroparasitosis was 64,2% (106/165). The most prevalent nematods species founded was Trichuris trichiura (24,2%) and Ascaris lumbricoides (22,4%) and the the most prevalent protozoary specie was Giardia lamblia (30,3%). The presence of opportunists coccids where also registered Cryptosporidium spp. (2,4%) and Isospora belli (0,6%). Among the positives 56,6% (60 samples) showed simple infection and 43,4% (46 samples) showed associated infection. The presence of non pathogenic protozoary like Entamoeba coli (15,2%), Endolimax nana (3,6%) and Enteromonas hominis (4,8%), indicated environmental fecal source contamination. The higher prevalence of nematods and protozoary in the studied population suggests the necessity of implementation of educational measures to prevent these enteroparasites. In the evaluation of comparative diagnosis of G. lamblia a higher positivity was verified in the ELISA technique 57% (90/158), followed by the centrifugal-sedimentation method 27,8% (44/158). The obtained results in this study suggests that is higher the prevalence of nematods and protozoary in the evaluated children and the ELISA technique to detect antigen in fecal sample showed higher efficiency to giardiasis diagnosis. / As enteroparasitoses ainda constituem um importante problema de saúde pública em crianças no Brasil, com prevalências bastante variáveis, conforme a região e população avaliada. Estudos com crianças que freqüentam creches são escassos, entretanto, sabe-se que nestes ambientes, as crianças estão mais expostas as parasitoses, dentre as quais o protozoário Giardia lamblia que é responsável por quadros graves de diarréia em crianças e os métodos de rotina utilizados no diagnóstico levam a muitos casos de falso-negativos. O objetivo deste trabalho foi investigar a prevalência de enteroparasitos em crianças de uma creche pública do Rio Grande, cidade portuária, localizada na região sul do estado do Rio Grande do Sul e comparar a técnica de ELISA (kit comercial Giardia II) com os métodos de centrífugo-flutuação e centrífugo- sedimentação para o diagnóstico de G. lamblia em fezes de crianças. Primeiramente foram avaliadas 165 amostras de fezes de processadas pelo método de centrífugo-sedimentação e centrífugo-flutuação e pelas colorações de tricrômio e de Kinyoun. A prevalência geral de enteroparasitos foi de 64,2% (106/165). Os nematódeos mais prevalentes foram Trichuris trichiura (24,2%) e Ascaris lumbricoides (22,4%) e o protozoário mais prevalente foi G. lamblia (30,3%). Também foram registradas as presenças dos coccídeos oportunistas Cryptosporidium (2,4%) e Isospora belli (0,6%). Dentre os positivos, 56,6% (60) apresentaram infecção simples e 43,4% (46) associadas. Constatou-se também a presença de protozoários não patogênicos, como Entamoeba coli (15,2%), Endolimax nana (3,6%) e Enteromonas hominis (4,8%), que indicou contaminação de origem fecal do ambiente. A alta prevalência de nematódeos e protozoários na população estudada sugere a necessidade de implementação de medidas educacionais, visando a prevenção destes enteroparasitos. Na avaliação do diagnóstico comparativo de G. lamblia foi verificado maior positividade para a técnica de ELISA, 57% (90/158), seguido do método de centrifugo-flutuação, 30,3% (48/158) e centrífugo-sedimentação, 27,8% (44/158). A partir dos resultados obtidos no presente estudo pode-se concluir que é alta a prevalência de nematódeos e protozoários nas crianças avaliadas e que a técnica de ELISA para detectar antígenos nas fezes é mais eficiente que os métodos de centrífugo-flutuação e centrifugo-sedimentação, podendo, portanto, ser utilizada, tanto no diagnóstico individual como em estudos epidemiológicos da giardíase.