Made available in DSpace on 2015-03-05T18:24:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 10 / Nenhuma / Este trabalho busca entender o modo pelo qual os portais de informação criam estratégias para diferenciarem-se perante a audiência. A Teoria do Meio, de Marshall McLuhan, é tomada como centro para discutir a constituição da gramática de comunicação da Web, que irá se refletir na construção da interface dos portais. Silverstone é tomado para discutir as temporalidades detectadas naquele ambiente, assim como o conceito de Emergência, de Johnson, auxilia a compreender a natureza das mudanças pelas quais passam as interfaces. A partir de conceitos de Kilpp, Bolter & Grusin e Vilches, entre outros, procura-se mapear, nas capas dos portais UOL e Globo.com, os procedimentos técnicos-estéticos que evidenciam a forma de cada portal criar suas próprias significações / This work seeks to understand the way for which the information portals create strategies to be differentiated before the hearing. Marshall McLuhan's theory of the medium is taken as center to discuss the constitution of Web's grammar of communication, what will reflect itself in the construction of the portal's interface. Silverstone is taken to argue temporalities detected in that environment, as well as Johnson's concept of Emergence assists to understand the nature of changes for which interfaces pass. Concepts of Kilpp, Bolter & Grusin and Vilches, among others, are used to map, in the layers of UOL and Globo.com's portals, the technician-aesthetic procedures that evidence the form of each portal creates its proper signification

A formação do artista denomina, neste trabalho, um espaço conceitual e um modo de referenciação particulares. Ela não diz respeito, portanto, em primeira instância, ao processo pelo qual alguém se torna artista, nem ao problema das escolas para artistas. Trata-se de um plano de desterritorialização entre o Ensino da Arte e as práticas artísticas, de uma maneira de se vincular a esses lugares para confrontá-los, por meio de principalmente dois conceitos: diferenciação e dessubjetivação. Ela é, desse modo, o que pergunta: A que arte se refere o Ensino da Arte? A que educação se referem as práticas artísticas? Da mesma maneira, interroga um território intermediário a esses dois registros: a mediação educacional da arte. Alguns shifters são propostos como ferramentas de avaliação e redisposição dos modos pelos quais cada um desses lugares pensa e opera relações entre arte e educação. Desse modo, o Ensino da Arte terá sido diferenciado pelo ensino em arte, a mediação educacional da arte pela mediação contemporânea da arte, as práticas artísticas pela arte educacional. Essas manobras são mobilizadas por planos específicos de referência e atualidade: o Saber da Arte, a norma do anônimo-comum, a potência da não-governabilidade; que testemunham a disposição do que se põe à espreita de paixões inapropriadas. Concebese a formação do artista como a clareira na qual se identificam, sem qualquer acomodação, as conjunções e as disjunções entre arte e educação. Tal é sua incidência estético-política. Em tese: tanto o argumento geralmente sustentado pelo Ensino da Arte de que arte se ensina, quanto o argumento geralmente sustentado pelas práticas artísticas de que arte não se ensina, são conceitualmente insuficientes, porque dessa forma ambos advogam em causa própria. / The education of the artist designates here a particular conceptual space and way of referencing. Thus it is not concerned, at first instance, with the process through which someone becomes an artist, neither with the issues related to the art schools. It is a deterritorialisation plane in between Art Education and artistic practices, a way of getting bound to these sites in order to confront them, by means of especially two concepts: differentiation and desubjectivation. It raises this way the following questions: What art does the Art Education refer to? What education does the artistic practices refer to? The same way it questions an intermediate territory in relation to these two sites; the educational mediation of art. Some shifters are proposed as tools that enable us to assess and reframe how each of these sites conceives and operates relations between art and education. So the Art Education will have been differentiated by the education within art, the educational mediation of art by the contemporary mediation of art, the artistic practices by the educational art. These manoeuvres are ignited by specif planes of reference and currentness: the Art Savoir, the norm of the commonanonymous, the strength of non-governability. They testify the tone of what stalks unappropriated passions. This is their aesthetic-political way of attacking. The education of the artist is then conceived as the clearing in which, without any accommodation, the conjunctions and disjunctions between art and education are made alike. As the thesis proposes, both the argument generally held by the Art Education that you can teach art and the argument generally held by the artistic practices that you cant teach art are conceptually insufficient, because this way both only plead for their own cause.

Neuroblastoma (NB) é a forma mais indiferenciada de tumores neuroblásticos e a principal causa de morte por câncer pediátrico. Alterações epigenéticas interagem em todas as etapas do desenvolvimento do câncer, promovendo a progressão tumoral. A remodelação da cromatina é influenciada pela acetilação de histonas e a metilação de DNA. Acetiltransferases de histona (HATs), desacetilases de histonas (HDAC) e metiltransferase de DNA (DNMTs) são alvos de estratégias terapêuticas em tumores. Os retinoides agem nas vias de diferenciação celular, anti-proliferação e pró-apoptose. Nesse trabalho, é proposto que a combinação desses moduladores epigenéticos e de diferenciação em linhagens de células de NB humano é mais efetiva que os agentes isolados. Os tratamentos induziram mudanças na expressão de marcadores de diferenciação e indiferenciação, como c-Myc, β-3tubulina, NeuN e Bmi1, e alterações morfológicas nas duas linhagens celulares utilizadas, SK-N-BE(2) e SH-SY5Y. Os dados encontrados podem contribuir para uma melhor compreensão dos mecanismos moleculares dos moduladores retinoides e epigenéticos em NB capazes de acrescentar melhorias nas atuais estratégias terapêuticas. / Neuroblastoma (NB) is the most undifferentiated form of neuroblastic tumors and the leading cause of death from pediatric cancer. Epigenetic changes interact at all stages of cancer development, promoting tumor progression. Chromatin remodeling is influenced by histone acetylation and DNA methylation. Histone acetyltransferases (HATs), histone deacetylases (HDAC), and DNA methyltransferase (DNMTs) are targets for therapeutic strategies in cancer. Retinoids act on cell differentiation pathways and display anti-proliferation and pro-apoptotic actions. In the present research we examined the effects of combining epigenetic modulators and a retinoid receptor agonist in human NB cells. The retinoid all trans-retinoic acid (ATRA) combined with inhibitors of either histone deacetylases (HDACs) or DNA methyltransferase was more effective than any drug given alone in impairing the proliferation of SH-SY5Y and SK-N-BE(2) NB cells. In addition, the treatments induced differential changes in the expression of differentiation markers including c-Myc, β-3tubulin, NeuN and Bmi1, and morphological changes in SK-N-BE(2) e SH-SY5Y cell lines. The data contribute to a better understanding of the molecular mechanisms of retinoid modulators and epigenetic in NB able to add improvements in current therapeutic strategies.

O Osteossarcoma é o tipo mais comum de câncer ósseo em cães e em seres humanos. Os osteossarcomas caninos representam um modelo único para o estudo desse tipo de câncer em humanos, devido a incidência relativamente alta, semelhanças no comportamento biológico, na apresentação clínica e características moleculares. Estudos envolvendo o desenvolvimento do fenótipo de osteoblastos em osteócitos terminalmente diferenciados, oferecem as bases para o entendimento do curso da transformação neoplásica. Neste sentido, a rápida expansão do conhecimento a respeito do processo de diferenciação óssea, em última análise pode conduzir ao desenvolvimento de marcadores diagnóstico e prognóstico, bem como terapias dirigidas para pacientes caninos e humanos portadores deste tipo de câncer. Este estudo teve por objetivos avaliar alguns dos aspectos relacionados ao processo de diferenciação induzida de osteoblastos caninos após o tratamento com três diferentes agentes descritos como tendo possível potencial antineoplásico. Para tanto, avaliou-se, em cultura celular em três dimensões, duas linhagens de osteossarcoma após tratamento com a Arctigenina, a Genisteína e a Tricostatina-A. inicialmente, foi realizado o estabelecimento e caracterização de uma nova linhagem celular de osteossarcoma canino. Em seguida deu-se inicio aos trabalhos de avaliação dos marcadores de diferenciação por diferentes técnicas. Foram também utilizados estudos de viabilidade celular, ensaios de proliferação e morte celular induzida, assim como de invasão. Os resultados mostraram que todos os três tratamentos foram capazes de induzir diferenciação parcial nas linhagens de osteossarcoma, visto a heterogeneidade dos dados coletados, assim como, pela expressão parcial de marcadores tardios da transição osteoblasto/osteócito. Associado a isso se verificou que existe um decréscimo da viabilidade celular, porem sem ação diretamente ligada a caspase3. Notou-se ainda que mesmo com diferenças entre as linhagens, os princípios ativos foram capazes de inibir a capacidade de invasão nos ensaios de Transwell. Conclui-se, desta maneira, que os compostos utilizados induzem diferenciação parcial, porém, com efeito, antineoplásico importante. Em conjunto, estes resultados destacam a importância do processo de diferenciação, tumorigênese e terapia através da diferenciação. / Osteosarcoma is the most common type of bone cancer in dogs and humans. Due to the fact that canine osteosarcoma is similar to human osteosarcoma in its high occurrence rate, biological behavior, clinical signs and molecular characteristics, this naturally occurring canine disease represents an important model for the study of osteosarcoma in humans. Studies regarding the development of the osteoblast phenotype into terminally differentiated osteocytes provide an understanding of the neoplastic transformation in bone cancer. For this reason, further studies of bone differentiation may lead to the discovery of bone-tumorspecific markers used for disease detection and prognosis, and the development of drugtargeted therapies. The focus of this study is the process of induced bone differentiation after treatment with three different drugs that have a potential anti-neoplastic activity against osteosarcoma. Two osteosarcoma cell lines in three-dimensional culture were evaluated after being treated with Arctigenin, Genistein, and Trichostatin-A. Initially, we performed the establishment and characterization of a novel canine osteosarcoma cell line. Then the work on the evaluation of differentiation markers by different techniques has been initiated. Studies were also used for cell viability, proliferation assays and induced cell death, as well as invasion. The results showed that all three treatments were able to induce partial differentiation in osteosarcoma cell lines, since the heterogeneity of the data collected, as well as the partial expression of markers of late transition osteoblast / osteocyte. Associated with this it was found that there is reduced cell viability, but without acting directly connected to caspase3. It is further noticed that even with differences between strains, the active principles were able to inhibit the invasiveness in Transwell assay. The conclusion is thus that the partial differentiation inducing compounds used, but with important antineoplastic effect. Together, these results highlight the importance of the process of differentiation, tumorigenesis and differentiation therapy.

Avaliou-se os efeitos do β-caroteno e da vitamina A sobre o processo de proliferação de células ovais em modelo de diferenciação celular hepática. Para tanto, ratos machos Wistar foram tratados com β-caroteno (grupo BC - 70 mg/kg de peso corpóreo [pc]), vitamina A (grupo VA - 10 mg/kg pc) ou óleo de milho (CO - grupo controle) por via intragástrica e em dias alternados, durante 4 semanas consecutivas. Após este período, os animais foram submetidos ao modelo AAF/PH (6 x 20 mg AAF [2-acetilaminofluoreno] / kg pc e hepatectomia parcial) e sacrificados em diferentes dias após a cirurgia (HP). Foram colhidas amostras de fígado para determinação das concentrações de β-caroteno, retinol e palmitato de retinila (por CLAE - cromatografia líquida de alta eficiência); para análises histológica (hematoxilina e eosina) e imuno-histoquímica (com anticorpos anti-GST-P), bem como para avaliação das expressões gênicas (por northern blot) para as conexinas (cx) 43 e 32. Observou-se, através das análises histológica e imuno-histoquímica, que o pico de proliferação das células ovais foi deslocado para dias mais tardios após HP, de forma análoga nos grupos BC e VA, quando comparados ao grupo controle. Além disso, foi constatado que o pico de expressão gênica para cx 43 foi também deslocado para dias mais tardios pós-HP, de forma similar nos grupos BC e VA, e que houve um aumento na expressão gênica para cx 43 entre o 10º e 16º dias após HP no grupo VA, em relação ao controle. Não foi observada diferença na expressão gênica para cx 32 entre os grupos. Conclui-se que o β-caroteno modulou a proliferação de células ovais e a expressão gênica para cx 43, retardando ambos os fenômenos, e que esta ação foi mediada em parte via retinóides ativos. Ainda, o carotenóide mostrou uma tendência em induzir, de forma intrínseca, a diferenciação das células ovais em hepatócitos. / The aim of this work was to investigate the β-carotene and vitamin A effects in the process of oval cells proliferation at hepatic cellular differentiation model. Wistar male rats were treated with β-carotene (BC group - 70 mg/kg body wt), vitamin A (VA group - 10 mg/kg body wt) or com oil (CO - control group) administrated by gavage, on alternate days, during 4 consecutive weeks. Since, the animals were submitted to a AAF/PH model (6 x 20 mg AAF [2-acetylaminofluorene] / kg body wt and partial hepatectomy - PH) and sacrified at different days after PH. Liver samples were picked for analysing β-carotene, retinol and retinyl palmitate concentration (by HPLC); for histology (HE) and immunohistochemistry (with antibody anti-GST-P), and for evaluating connexins 43 and 32 gene expression (by northem blot). Histological and immunohistochemical analysis showed that the oval cells proliferation peak was delayed to the late days after PH, by similar way in the BC and VA groups, when compared with control group. Northem blot evaluation revealed that the cx 43 gene expression was also delayed to the late days after PH, by analogue way in the BC and VA groups, and vitamin A enhanced cx 43 gene expression in the late days after PH. Connexin 32 gene expression did not change among the experimental groups. Thereby, the β-carotene and vitamin A delayed the oval cells proliferation and the cx 43 gene expression. Moreover, β-carotene showed a tendency to induce the oval cells differentiation to hepatocytes.

Seleção balanceadora é definida como aquela que aumenta a variabilidade genética de populações em relação ao esperado sob neutralidade. Uma expectativa sobre seus efeitos é a redução da diferenciação populacional nos genes onde atua. Contudo, regimes que mantêm conjuntos distintos de alelos em diferentes populações poderiam resultar em aumento de diferenciação populacional. Com o objetivo de compreender melhor os efeitos da seleção balanceadora sobre a distribuição da variação genética entre populações, investigamos a diferenciação populacional em genes dos Antígenos Leucocitários Humanos (HLA, do inglês, Human Leukocyte Antigen), que são os genes mais polimórficos do genoma humano e o exemplo mais clássico de seleção balanceadora em humanos. As proteínas HLA são responsáveis pela apresentação de peptídeos aos linfócitos T, mediando uma etapa crítica da resposta imune. A vantagem da manutenção de variação nesses genes está possivelmente associada à capacidade de resposta a uma maior diversidade de patógenos. Neste estudo, analisamos dados do projeto 1000 Genomas (1000G), que sequenciou indivíduos de diferentes populações usando sequenciamento de nova geração (NGS, do inglês, Next Generation Sequencing). Essa técnica de sequenciamento é conhecidamente problemática quando aplicada a regiões altamente polimórficas, como os genes HLA. Por isso, avaliamos a confiabilidade dos genótipos e frequências alélicas estimados a partir dos dados do 1000G nos genes HLA, utilizando como padrão ouro dados de sequenciamento Sanger de 930 das 1092 amostras do 1000G. Encontramos um viés de superestimativa da frequência do alelo referência em alguns polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs, do inglês, Single Nucleotide Polimorphisms), indicando que viés de mapeamento é uma causa importante de erros nos dados do 1000G. Esses resultados são relevantes para a compreensão dos desafios do uso de dados de NGS em outras regiões de alta diversidade. Usando os resultados dessa análise, excluímos de nosso estudo de diferenciação populacional sítios com estimativas de frequências alélicas pouco confiáveis nos dados do 1000G. Em uma segunda etapa de controle metodológico, demonstramos o efeito do uso de dados ricos em variantes raras em estudos de diferenciação populacional. Controlando para esse efeito, e usando apenas sítios que demonstramos ser confiáveis em nossos dados, descobrimos que a diferenciação populacional de SNPs nos genes HLA é menor que a diferenciação de SNPs em outras regiões do genoma. Esse resultado aponta para um papel predominante de pressões seletivas globais na distribuição da variação genética de HLA entre populações. Contudo, apresentamos também evidências de que a diferenciação populacional de haplótipos nos genes HLA pode ser maior do que a observada no nível dos SNPs, sugerindo que pressões locais podem influenciar a distribuição de haplótipos entre populações. Nossos achados indicam que é possível reconciliar baixa diferenciação populacional em SNPs com maior diferenciação em haplótipos, possivelmente sujeitos a pressões seletivas locais. / Balancing selection is defined as any kind of selective regime that increases genetic variability in populations relative to what is expected under neutrality. Theory predicts that balancing selection reduces population differentiation. However, balancing selection regimes in which different sets of alleles are maintained in different populations could increase population differentiation. To better understand the effects of balancing selection on the distribution of genetic variation among populations, we investigated population differentiation at the Human Leukocyte Antigen (HLA) genes, which are the most polymorphic genes in the human genome, and constitute the most striking example of balancing selection in humans. The HLA molecules are responsible for the presentation of peptides to T cells, thus mediating a critical step of the immune response. The advantage of maintaining variation in those genes through balancing selection is possibly related to the increased ability of the immune system to respond to a wider variety of pathogens. In this study, we analysed the public dataset of the 1000 Genomes project (1000G), which sequenced 1092 individuals from different populations using Next Generation Sequencing (NGS) technologies. These sequencing techniques are known to be problematic when applied to highly polymorphic genomic regions, such as the HLA genes. Therefore, we evaluated the reliability of genotype calls and allele frequency estimates of the SNPs reported by 1000G at HLA genes, using Sanger sequencing data of 930 of the 1092 1000G samples as a gold standard. We found a bias towards overestimation of reference allele frequency for some single nucleotide polymorphisms (SNPs), indicating mapping bias is an important cause of error in frequency estimation in the 1000G data. These results provide insights into the challenges of using of NGS data at other genomic regions of high diversity. Using the results of this analysis, we selected a list of sites that have reliable allele frequency estimates in the 1000G data to be used in our population differentiation study. In another methodological control, we demonstrate the effect of using a dataset rich in rare variants in population differentiation studies. Controlling for this effect, and using only the sites which we demonstrated that were reliable, we found that population differentiation of single nucleotide polymorphisms (SNPs) at the HLA genes is lower than that of SNPs in other genomic regions. This suggests a predominant role of global selective pressures in shaping the distribution of variation at the HLA genes among populations. However, we also show evidence that population differentiation of HLA haplotypes may be higher than what we observe at the SNP level, suggesting that local selective pressures may influence the distribution of haplotypes among populations. Altogether, our results indicate that it is possible to reconcile low population differentiation at the SNP level - as predicted by theory - to higher differentiation at haplotypes, which are possibly under local selective pressures.

A dieta pode regular a proliferação e diferenciação no epitélio gástrico de ratos durante o período pós-natal. Avaliamos o efeito tardio do desmame precoce na massa corpórea, proliferação (imunomarcação para Ki-67) e diferenciação celular (immunoblot de Mist 1 e pepsinogênio C) aos 15, 18, 30 e 60 dias. Ratos Wistar foram divididos nos grupos: desmame precoce (DP) aos 15 dias e desmamados aos 21 dias (A). Os resultados mostraram: massa corpórea aos 18 (p<0,01) e 21 (p<0,05) dias no grupo DP menor do que no A. Aos 60 dias, os valores se equiparam, porém há diferença entre machos e fêmeas. O índice de proliferação, a espessura da mucosa e profundidade da glândula foram superiores aos 18 dias no grupo DP (p<0,05), havendo resultado oposto aos 30 dias e nenhuma resposta aos 60 dias; houve variação no conteúdo de Mist 1 (p<0,05) e pepsinogênio C (p<0,01) nos animais DP aos 18 dias. Assim, O DP alterou o ganho de peso corporal e crescimento do estômago logo após o início da ingesta de ração, e tal reposta foi compensada na idade adulta. / Diet can regulate proliferation and differentiation in gastric epithelium of rats during the postnatal period. We evaluated the late effects of early weaning on body mass, cell proliferation (Ki-67 immunolabeling) and differentiation (Mist 1 and pepsinogen C by immunoblot) at 15, 18, 30 and 60 days. Wistar rats were divided into groups: early-weaned (EW) at 15 days, and suckling and weaned at 21 days (S). The results showed that: at 18 (p<0,01) and 21 (p<0,05) days, body mass was lower in EW than in S. At 60 days, values were similar between S and EW, however we registered a difference between males and females. The proliferation index, mucosal thickness and gland depth were higher in EW (vs. S) at 18 days (p<0,05), being reversed at 30 days, whereas no change detected at 60 days. We found a variation in Mist 1 (p<0,05) and pepsinogen C (p<0,01) at 18 days. Thus, EW altered body weight gain and stomach growth soon after its onset, and part of responses were compensated in adulthood.

A Doença de Alzheimer (DA) é uma desordem neurodegenerativa caracterizada por um declínio cognitivo global, incluindo uma perda progressiva de memória, orientação e raciocínio, associada com a degeneração especifica de neurônios colinérgicos. As alterações histopatológicas que definem a DA são protéicos de β-amilóide e tau hiperfosforilada em placas senis e emaranhados neurofibrilares, respectivamente. Porém, os mecanismos moleculares que levam a DA não estão bem caracterizados e ainda não há nenhum tratamento eficaz para prevenir ou reverter os seus sintomas. Parte dessa dificuldade se deve à escassez de modelos experimentais adequados. Previamente nosso grupo estabeleceu condições experimentais para a diferenciação do neuroblastoma humano SH-SY5Y em neurônios dopaminérgicos a partir da adição de ácido retinóico (AR). Alguns estudos sugerem que esta linhagem, quando tratada com AR e fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), apresenta uma mudança para um fenótipo colinérgico. Dessa forma, este trabalho tem por objetivo caracterizar a diferenciação colinérgica desta linhagem e estabelecer as melhores condições de tratamento com ácido ocadáico (AO), que promove a hiperfosforilação e deposição da proteína tau, em combinação com oligômeros solúveis de β-amilóide (Aβ1-42), para uso como modelo in vitro ao estudo da DA. As células proliferativas foram cultivadas em meio DMEM/F12 com 10% de soro fetal ( FB). A diferenciação foi induzida com 10μM de AR em meio a cultura com 1% de SFB durante sete dias, sendo o BDNF (10 nM) acrescentado a partir do quarto dia. Determinamos a atividade da Acetilcolinesterase (AChE), da Colina Acetiltransferase (ChAT) e o imunoconteúdo de ChAT como marcadores colinérgicos. O co-tratamento com BDNF resultou em células com notável morfologia neuronal, apresentando aumento na densidade e comprimento de neuritos e nos marcadores colinérgicos. Após o estabelecimento do modelo colinérgico, as células diferenciadas da linhagem de neuroblastoma SH-SY5Y foram desafiadas com uma curva de dose das neurotoxinas Aβ1-42 ou AO, e a neurotoxicidade foi avaliada pelo ensaio do brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2il)-2,5-difeniltetrazolium (MTT) em combinação com a densidade de neuritos. A partir desses resultados, doses subletais das toxinas foram selecionadas para estabelecer o modelo in vitro da Doença de Alzheimer. Esses resultados fazem dessa linhagem celular uma ferramenta útil no campo da neurociência, podendo torná-la um modelo adequado para o estudo da Doença de Alzheimer. / Alzheimer's disease (AD) is a neurodegenerative disorder characterized by a global cognitive decline, including progressive loss of memory, orientation and reasoning associated with a specific degeneration of cholinergic neurons. Histopathological changes that define AD are amyloid-β hyperphosphorylated tau deposits in senile plaques and neurofibrillary tangles, respectively. However, the leading molecular mechanisms are not well elucidated and still there is no effective treatment to prevent or reverse the symptoms. Part of this difficulty is due to the lack of suitable experimental models. Our group previously established experimental conditions for the differentiation of human neuroblastoma SH-SY5Y cells into dopaminergic neurons-like with retinoic acid (RA) addition. Some studies suggested that when treated with RA and brain-derived neurotrophic factor (BDNF) this cell line has a shift to a cholinergic like phenotype. Thus, this study aims to characterize the cholinergic differentiation of SH-SY5Y cell line and to determine the best conditions for okadaic acid (OA) treatment, which promotes the deposition and hyperphosphorylation of tau protein, in combination with solubleoligomers of β- myl (Aβ - 42). Thereby we established a suitable AD in vitro model. Exponentially growing SH-SY5Y cells were maintained in DMEM / F12 medium with 10% fetal bovine serum (FBS). Differentiation was triggered by the combination of 10 μM of RA plus medium with 1% of FBS during 7 days, BDNF was added on 4th day. We determined Acetylcholinesterase (AChE) and Choline Acetyltransferase (ChAT) enzymatic activities and the ChAT immunocontent as cholinergic markers. Once the cholinergic like in vitro model was established, the differentiated SH- Y5Y cells were challeng with of Aβ -42 or AO dose curve, and neurotoxicity was evaluated by an 3-(4,5-dimethylthiazol-2il)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay in combination with neurite density. Hence, sublethal doses of neurotoxins were selected to determine the in vitro model of Alzheimer's disease. Taken together, these results suggested SH-SY5Y cell line as a useful and suitable model in Alzheimer's disease research.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivos: este trabalho objetivou estudar a expressão gênica da família das interleucinas-1 em células células-tronco embrionárias indiferenciadas de camundongos e avaliar se ela se altera após a diferenciação celular. Métodos: Pesquisou-se a expressão gênica dessas substâncias em células-tronco (CT) indiferenciadas e durante a diferenciação celular em cardiomiócitos de camundongos. Colônias na 5a , 10a , 15a , 20a e 25a passagens em meios de cultivo foram removidas para a pesquisa de RT-PCR utilizando-se o kit SuperScript™ III CellsDirect cDNA Synthesis System. A amplificação do DNAc através do PCR foi realizada com a enzima Platinum® Taq DNA Polymerase. Foram utilizados os primers da interleucina-1β (IL- 1F2), antagonista do receptor de IL-1 (IL-1F3) e receptor tipo 1 de IL-1 (IL-1RI). Para estudo da IL-1 em estado diferenciado, foram utilizados corpos embrionários de três e cinco dias de cultivo e cardiomiócitos derivados de CT. Resultados: todas as 45 colônias indiferenciadas de CT mostraram-se negativas para IL-1F2; uma entre 45 (2,2%) foi positiva para IL-1F3 e também para marcadores de ectoderma (FGF5) e endoderma (Gata6) primitivos; uma entre 45 (2,2%) foi positiva para IL-1RI e também para ectoderma e mesoderma. Nenhum dos quatro corpos embrionários estudados foram positivos para IL-1F2. Um deles foi positivo para IL-1F3 e dois positivos para IL-1RI. Todas as quatro biópsias de cardiomiócitos mostraram-se positivas para IL- 1F2 e também para IL-1F3. Duas delas foram positivas para IL-1RI. Pelo que se pôde observar, este é o primeiro estudo que descreve a expressão genética da família da IL-1 em colônias individuais de células-tronco embrionárias de camundongos. Conclusão: as células-tronco indiferenciadas de camundongos estudadas não produziram genes da família da IL-1. / Purpose: this work objectived to study the IL-1 family gene expression in undifferentiated mouse embryonic stem (ES) cells and during diferentiation into cardiomyocytes. Methods: Colonies at 5, 10, 15, 20 and 25th passages were taken to perform RT-PCR using SuperScript™ III CellsDirect cDNA Synthesis System. PCR amplification of cDNA was done with Platinum® Taq DNA Polymerase. We used Interleukin-1β (IL-1F2), IL-1 receptor antagonist (IL-1F3) and IL-1 receptor type I (IL-1RI) primers. Results: all 45 undifferentiated ES cells were negative for IL-1F2; one out of 45 (2,2%) was positive for IL-1F3 and also for primitive ectoderm (FGF5) and endoderm (Gata6) markers; one out of 45 (2,2%) was positive for IL-1RI and also for ectoderm and mesoderm. To further study IL-1 at a late stage of cell differentiation, we used embroyd bodies (EB) at day 3 and 5 and ES cell derived cardiomyocytes. None of four embroid bodies studied were positive for IL-1F2. One out of four EB was positive for IL-1F3 and two out of four EB were positive for IL- 1RI. Four out of 4 ES cells derived cardiomyocytes were positive for IL-1F2 and also for IL-1F3. Two out of 4 ES cells derived cardiomyocytes were positive for IL-1RI. Two out of 4 ES cells derived cardiomyocytes were positive for IL-1RI. To our knowledge this is the first time to describe an IL-1 family gene expression study in undifferentiated single mouse ES cells. Conclusion: undifferentiated mouse ES cells studied didn’t produce major components of IL-1 family. / CAPES: BEX 1475/03-7 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Luciane Willcox (luwillcox@gmail.com) on 2016-09-01T16:51:25Z No. of bitstreams: 1 TESE AXEL.pdf: 13901759 bytes, checksum: 6f744b4d3c67d9fcc80db57c1c5944a7 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciane Willcox (luwillcox@gmail.com) on 2016-09-01T17:02:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE AXEL.pdf: 13901759 bytes, checksum: 6f744b4d3c67d9fcc80db57c1c5944a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T17:02:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE AXEL.pdf: 13901759 bytes, checksum: 6f744b4d3c67d9fcc80db57c1c5944a7 (MD5) / Messenger ribonucleoprotein particles (mRNPs) são complexos formados por RNA mensageiro (mRNA) e um pool de diferentes proteínas que se ligam diretamente ou indiretamente ao mRNA. Proteínas diferentes podem formar diferentes mRNPs com diferentes funções. Agregação de mRNPs formam grânulos que são visíveis ao microscópio. Dois desses grânulos comumente encontrados em células eucarióticas são os processing bodies (PB) e os grânulos de estresse (GE) possuem função fundamental na regulação pós-transcricional, mais especificamente, na degradação (PB) e na estocagem (PB e GE) do mRNA. Enquanto os PB são constitutivamente encontrados, GE são vistos somente em condições de estresse. TTP e RCK são componentes presentes em ambos os grânulos enquanto que TIA1 e TIAR são exclusivos de GE e DCP2 exclusivo de PB. Human Adipocyte Derived Stem Cells (ADSCs) são células-tronco adultas multipotentes com capacidade de autorrenovação e diferenciação em células de diversos tecidos. Desde que pouco se sabe sobre a função dos PB e dos GE durante a diferenciação das células-tronco, nosso objetivo é elucidar a dinâmica e função desses grânulos nestas celulas. Foram utilizadas ADSCs derivadas de cirurgia bariátrica e lipoaspiração. Diversos componentes de PB e de GE foram analisados por Imunofluorescência após 1, 4, 7 e 12 dias de diferenciação adipogênica. Oligos de RNA de interferência (siRNA) específicos para RCK, DCP2, TTP, TIAR e TIA1 foram transfectados concomitantemente com a indução à diferenciação adipogênica e as culturas mantidas por 1, 4, 7 e 14 dias de diferenciação. A diferenciação foi mensurada por intensidade de fluorescência após marcação com AdipoRed. GE são ausentes em ADSCs indiferenciadas e durante a diferenciação como determinado por imunomarcação com TIAR que se localiza predominantemente no núcleo. Interessantemente imunomarcação com TIA1/R mostrou que ADSCs possuem grande quantidade de grânulos contendo TIA1/R em células indiferenciadas e não estressadas. Sob estresse oxidativo há um aumento de PB em ADSCs e a formação de GE. Esses grânulos parecem variar de composição, uma vez que eIF4E é ausente e GE imunomarcados com eIF4B são mais perinucleares do que GE imunomarcados com TIAR. PB variam em número e tamanho em células diferenciadas. Notavelmente, em ADSCs possuem poucos PB e até mesmo ausente em algumas células, além disso, TIA1/R e PB significativamente aumentam após 24 horas de diferenciação e após 12 dias o número de PB é similar a células diferenciadas enquanto que os grânulos de TIA1/R praticamente desaparecem. siRNA de componentes essenciais de PB e GE em ADSCs indiferenciadas (tempo 0) mostrou que há um aumento significativo na diferenciação em adipócito após 4, 7 e 12 dias de diferenciação adipogênica. Interessantemente esse aumento se deu pela maturação do adipócito, i.e. tamanho da vesícula de lipídio e não pelo aumento da quantidade de células diferenciadas. Nossos dados mostram que PB estão em baixo número e que existem grânulos de TIA1/R citoplasmárico nunca antes mostrados em ADSCs indiferenciadas. Ainda, esses grânulos aumentam durante a diferenciação e parecem exercer um papel importante na maturação dos adipócitos uma vez que ensaios de siRNA de componentes de PB e GE levam a uma diferenciação mais acelerada. Também, os GE são formados após indução a estresse oxidativo e esses grânulos são praticamente ausentes de eIF4E mostrando que a composição desses grânulos varia em relação a células diferenciadas.