Os receptores purinérgicos são divididos em receptores P1 e P2 de acordo com o seu agonista endógeno, os receptores metabotrópicos P1 são ativados por adenosina, enquanto os metabotrópicos P2Y e ionotrópicos P2X são estimulados através do ATP e outros nucleotídeos. Além de sua função bem estabelecida na neurotransmissão, a sinalização purinérgica tem despertado crescente interesse científico devido à sua importância nas funções no metabolismo celular, incluindo os processos de desenvolvimento embrionário e reparação de tecidos. Isso ocorre especialmente no sistema nervoso central, onde eles controlam a proliferação, diferenciação, apoptose e a liberação de fatores neurotróficos. Nesse trabalho nós focamos nas ações sinérgicas entre a sinalização purinérgica e o fator de crescimento de nervos (NGF), tendo em vista três formas conhecidas de interação entre o NGF e os receptores purinérgicos, a potencialização dos efeitos do NGF através de uma ligação cruzada entre as vias, a regulação da expressão dos receptores purinérgicos pelo NGF e regulação da liberação de NGF pela adenosina. Com o objetivo de investigar estes processos sinérgicos na regulação da proliferação, migração e determinação fenotípica, células precursoras neurais foram obtidas do telencéfalo de embriões de rato e cultivadas na forma de neuroesferas, sendo então submetidas a tratamentos com agonistas e antagonistas dos receptores purinérgicos, em associação com o NGF, ao longo da diferenciação. Os efeitos desses tratamentos foram analisados por citometria de fluxo. Nós mostramos que o NGF age sobre as células aumentando a proliferação, migração e população de células indiferenciadas e diminuindo a apoptose. A ativação dos receptores P1 levou à diminuição da gliogênese e ao aumento da proliferação e da migração. A estimulação de receptores P2 resultou em aumento da proliferação e redução da taxa de apoptose. Os receptores purinérgicos potenciaram a proliferação mediada por NGF, resultando assim num aumento da população de células indiferenciadas. Neste último efeito percebemos a participação do receptor P2Y2 na sinergia. Os resultados aqui apresentados revelam novos mecanismos para a interação entre o NGF e a sinalização purinérgica na biologia de células tronco neurais / Purinergic receptors are divided into P1 and P2 receptors according to agonist selectivity, G-protein- coupled P1 receptors are activated by adenosine, while metabotropic P2Y and ionotropic P2X subtypes are stimulated by ATP and other nucleotides. In addition to its well-established function in neurotransmission, purinergic signaling has raised increasing scientific interest due to its importance in essential cellular functions and metabolism including embryonic developmental processes and tissue repair, specially in the central nervous system, where they control proliferation, differentiation, apoptosis and the release of neurotrophic factors. Here we focus on synergistic actions between purinergic P1 and P2 receptor-mediated signaling and the nerve growth factor (NGF), in view of three recognized forms of interaction between NGF and purinergic signaling, the potencialization of NGF-mediated effects through a crosstalk, the regulation of purinergic receptor expression by NGF and the regulation of NGF release by adenosine. With the objective to investigate such synergistic processes in regulating proliferation, neural migration and phenotype determination, neurospheres obtained as proliferating neural stem and progenitor from rat embryonic telencephalon were subjected to treatments with purinergic receptor agonists and antagonists in association with NGF along differentiation. Effects of these treatments were analyzed by flow cytometry. We show that NGF acted on cells by increasing the population of undifferentiated cells, proliferation, migration and reducing apoptosis. P1 receptor activation led to decreased gliogenesis, increased proliferation and migration. Stimulation of P2 receptors resulted in increased proliferation and decreased apoptosis rates. Purinergic receptors potentiated NGF-mediated proliferation, thereby resulting in increased population of undifferentiated cells, in this latter effect, the P2Y2 receptor subtype participated in synergistic processes. The herein presented results reveal novel mechanisms for the interaction of NGF and purinergic signaling in neural stem cell biology

Submitted by DANILA BLANCO DE CARVALHO null (28472552810) on 2016-04-12T17:41:32Z No. of bitstreams: 1 Tese - Dr. Danila Blanco de Carvalho.pdf: 6148040 bytes, checksum: 510e83862caa6edf09797bb1e816f80b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-04-13T16:58:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carvalho_db_dr_arafcf.pdf: 6148040 bytes, checksum: 510e83862caa6edf09797bb1e816f80b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-13T16:58:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carvalho_db_dr_arafcf.pdf: 6148040 bytes, checksum: 510e83862caa6edf09797bb1e816f80b (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doença de Chagas é uma das principais parasitoses que ocorrem na América Latina, cujo agente etiológico é o protozoário Trypanosoma cruzi, que é veiculado por triatomíneos. Estima-se que entre oito milhões de pessoas estejam infectadas. Rhodnius é um dos gêneros que pode veicular T. cruzi e inclui espécies estreitamente relacionadas com baixos níveis de diferenciação morfológica. Atualmente, existem 19 espécies conhecidas, entre elas, Rhodnius montenegrensis que é considerada a fim de Rhodnius robustus. Para investigar as diferenças genéticas interespecíficas dessas duas espécies utilizou-se a metodologia de larga escala RNA-seq. Por essa técnica foram geradas quatro bibliotecas de RNA total de cabeças e glândulas salivares de machos de R. montenegrensis e R. robustus. Após filtrar pela qualidade, foram realizadas montagens de novo de cada uma das espécies. Esse processo resultou em 64952 contigs para R. montenegrensis e 70894 para R. robustus com N50 de 2100 para as duas espécies aproximadamente. Com base na montagem de R. robustus, foi feita uma procura por SNPs e foram encontrados 3055 polimorfismos interespecíficos fixados. Foram selecionados 216 transcritos com alta divergência contendo apenas polimorfismos fixados entre as duas espécies. O teste de enriquecimento nesses transcritos revelou uma sobrerepresentação de oito termos relacionados ao complexo da proteína clatrina. Os resultados obtidos mostram que R. montenegrensis e R. robustus apresentam uma quantidade substancial de polimorfismos interespecíficos fixados o que sugere um alto grau de divergência genética entre as duas espécies. / Chagas disease is one of the main parasitic diseases found in Latin America infecting an estimated eight million people worldwide. The protozoan Trypanosoma cruzi, its etiological agent, uses triatomines as a disease vector, among them the genus Rhodnius. This genus includes species that have been difficult to differentiate because they show low amounts of morphological differentiation. Despite that, there are currently 19 known species described, one of them Rhodnius montenegrensis, which has been confounded with Rhodnius robustus. Here we generated Large-scale RNA-sequencing data from heads and salivary glands to investigate genetic differences between these two species. We produced a total of four RNAseq libraries from heads and salivary glands of males of R. montenegrensis and R. robustus. de novo transcriptome assemblies produced for each species resulted in 64,952 contigs for R. montenegrensis and 70,894 contigs for R. robustus, with N50 of approximately 2100 for both species. We performed a search for SNPs based on the more complete R. robustus assembly and found 3,055 fixed interspecific differences. We identified two hundred and sixteen transcripts with high levels of divergence which contained fixed polymorphisms found between the two species. A Gene Ontology enrichment analysis revealed that these highly differentiated transcripts were enriched for the following terms: clathrin coat of endocytic vesicle, AP-2 adaptor complex, clathrin-coated endocytic vesicle, clathrincoated endocytic vesicle membrane, clathrin coat of coated pit, endocytic vesicle membrane, clathrin vesicle coat, and coated pit. The results reveal that R. montenegrensis and R. robustus show a substantial quantity of fixed interspecific polymorphisms, a finding which suggests a high degree of genetic divergence between the two species, which likely corroborates their species status. / CAPES: 23038.005285/2011-12

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-17Bitstream added on 2014-06-13T20:40:04Z : No. of bitstreams: 1 desuo_ic_me_rcla.pdf: 959937 bytes, checksum: d107c29f203623584bfa1329d44dc149 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A família Vespidae é um grupo chave para o entendimento da origem do comportamento social nos Hymenoptera, pois inclui desde espécies solitárias que não apresentam qualquer grau de socialidade até espécies que são altamente sociais como os Epiponini (Hymenoptera:Vespidae). A separação em castas é uma das pedras fundamentais da evolução dos insetos sociais, pois a presença de uma grande diferenciação entre as castas indica um maior grau de socialidade. Neste contexto, as vespas neotropicais pertencentes à tribo Epiponini despertam grande interesse em estudos de evolução de castas, pois além de apresentarem colônias poligínicas pode se observar um grande espectro de variação ocorrendo desde espécies com castas morfologicamente incipientes até distintas. Além disso, para uma dada espécie, o perfil de diferenciação morfológica entre as castas pode variar ao longo do ciclo colonial, evidenciando uma grande flexibilidade adaptativa frente às diferentes situações enfrentadas pela colônia ao longo de seu desenvolvimento. Diferenças morfofisiológicas entre as castas de 6 colônias em diferentes fases do desenvolvimento colonial de Polybia (Trychothorax) ignobilis foram analisadas. Para determinar as diferenças morfológicas entre as castas, foram medidas 13 varíaveis corporais externas provenientes da cabeça, mesossoma, metassoma e asa. Os ovários foram fotografados e esquematizados, a inseminação, idade relativa, a quantidade de tecido gorduroso e a condição morfológica da glândula de Richards foram analisadas. As fêmeas apresentaram uma seqüência gradual no padrão de desenvolvimento ovariano, desde ovaríolos... / The Vespidae family is a key group in evolutionary studies of sociality in Hymenoptera due to the occurrence of every step of social organization including species whose do not present any degree of sociality until those which are highly social, such as the Epiponini (Hymenopter: Vespidae). The separation into castes is one of the most important features of social insects and the presence of a higher level of caste differentiation indicates a well defined reproductive division of labor and consequently a higher degree of sociality. Morphological studies of caste differentiation in Neotropical social wasps concentrate mainly in the Epiponini tribe, once it’s ecologically abundant in Neotropics and presents a wide spectrum of variability of caste systems ranging from species with a slightly caste differentiation to those with conspicuous body differences. Besides, patterns of caste differentiation may vary according the colony cycle mainly in response to environmental changes which may affect the colony dynamics. Morphological and physiological differences between castes of 6 colonies of Polybia (Trychothorax) ignobilis were analyzed. Measurements were taken from 13 morphometric variables regarding the head, metasoma, mesosoma and wing... (Complete abstract click electronic access below)

Os receptores purinérgicos são divididos em receptores P1 e P2 de acordo com o seu agonista endógeno, os receptores metabotrópicos P1 são ativados por adenosina, enquanto os metabotrópicos P2Y e ionotrópicos P2X são estimulados através do ATP e outros nucleotídeos. Além de sua função bem estabelecida na neurotransmissão, a sinalização purinérgica tem despertado crescente interesse científico devido à sua importância nas funções no metabolismo celular, incluindo os processos de desenvolvimento embrionário e reparação de tecidos. Isso ocorre especialmente no sistema nervoso central, onde eles controlam a proliferação, diferenciação, apoptose e a liberação de fatores neurotróficos. Nesse trabalho nós focamos nas ações sinérgicas entre a sinalização purinérgica e o fator de crescimento de nervos (NGF), tendo em vista três formas conhecidas de interação entre o NGF e os receptores purinérgicos, a potencialização dos efeitos do NGF através de uma ligação cruzada entre as vias, a regulação da expressão dos receptores purinérgicos pelo NGF e regulação da liberação de NGF pela adenosina. Com o objetivo de investigar estes processos sinérgicos na regulação da proliferação, migração e determinação fenotípica, células precursoras neurais foram obtidas do telencéfalo de embriões de rato e cultivadas na forma de neuroesferas, sendo então submetidas a tratamentos com agonistas e antagonistas dos receptores purinérgicos, em associação com o NGF, ao longo da diferenciação. Os efeitos desses tratamentos foram analisados por citometria de fluxo. Nós mostramos que o NGF age sobre as células aumentando a proliferação, migração e população de células indiferenciadas e diminuindo a apoptose. A ativação dos receptores P1 levou à diminuição da gliogênese e ao aumento da proliferação e da migração. A estimulação de receptores P2 resultou em aumento da proliferação e redução da taxa de apoptose. Os receptores purinérgicos potenciaram a proliferação mediada por NGF, resultando assim num aumento da população de células indiferenciadas. Neste último efeito percebemos a participação do receptor P2Y2 na sinergia. Os resultados aqui apresentados revelam novos mecanismos para a interação entre o NGF e a sinalização purinérgica na biologia de células tronco neurais / Purinergic receptors are divided into P1 and P2 receptors according to agonist selectivity, G-protein- coupled P1 receptors are activated by adenosine, while metabotropic P2Y and ionotropic P2X subtypes are stimulated by ATP and other nucleotides. In addition to its well-established function in neurotransmission, purinergic signaling has raised increasing scientific interest due to its importance in essential cellular functions and metabolism including embryonic developmental processes and tissue repair, specially in the central nervous system, where they control proliferation, differentiation, apoptosis and the release of neurotrophic factors. Here we focus on synergistic actions between purinergic P1 and P2 receptor-mediated signaling and the nerve growth factor (NGF), in view of three recognized forms of interaction between NGF and purinergic signaling, the potencialization of NGF-mediated effects through a crosstalk, the regulation of purinergic receptor expression by NGF and the regulation of NGF release by adenosine. With the objective to investigate such synergistic processes in regulating proliferation, neural migration and phenotype determination, neurospheres obtained as proliferating neural stem and progenitor from rat embryonic telencephalon were subjected to treatments with purinergic receptor agonists and antagonists in association with NGF along differentiation. Effects of these treatments were analyzed by flow cytometry. We show that NGF acted on cells by increasing the population of undifferentiated cells, proliferation, migration and reducing apoptosis. P1 receptor activation led to decreased gliogenesis, increased proliferation and migration. Stimulation of P2 receptors resulted in increased proliferation and decreased apoptosis rates. Purinergic receptors potentiated NGF-mediated proliferation, thereby resulting in increased population of undifferentiated cells, in this latter effect, the P2Y2 receptor subtype participated in synergistic processes. The herein presented results reveal novel mechanisms for the interaction of NGF and purinergic signaling in neural stem cell biology

Orientador: Marcilda Palandi de Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T17:47:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fabbri_HelenaCampos_M.pdf: 5693726 bytes, checksum: f3da0b3f4f94d25ac46393e9f831a748 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O termo Distúrbio da Diferenciação do Sexo (DDS) caracteriza-se pelo desenvolvimento genital ou gonadal incompleto ou desordenado. Os DDS com cariótipo 46,XY são caracterizados por genitália externa ambígua ou feminina, em alguns casos com gônadas disgenéticas, e presença ou ausência de derivados de Müller. Os mais frequentes são a insensibilidade androgênica, deficiência da 5-alfa-redutase tipo 2, disgenesia gonadal e DDS ovário-testicular. Vários são os genes que participam dos processos de determinação e diferenciação do sexo. Alterações no gene NR5A1, que codifica o fator de transcrição SF- 1, é responsável por diferentes fenótipos de DDS. A proteína SF-1 é expressa principalmente em tecidos esteroidogênicos (gônadas, adrenais e placenta), nas células de Sertoli, nas células de Leydig e nos ovários; é o principal regulador do metabolismo do colesterol nas células esteroidogênicas. Além disso, regula a atividade de outros genes, como os CYPs, HSD3B, StAR, SOX9, DAX1, entre outros. Na literatura são descritas alterações no gene NR5A1 associadas à DDS 46,XY, anorquia bilateral, amenorréia primária, falência ovariana precoce, hipospádia, infertilidade masculina, e alguns casos de tumores adrenais e endometrioses. Neste trabalho foi realizada a análise molecular do gene NR5A1 em 86 pacientes com DDS 46,XY, incluindo-se disgenesia gonadal completa (n = 7), disgenesia gonadal parcial (n = 18), DDS 46,XY idiopático (n = 41) e outros (n = 20). Doze alterações foram identificadas neste trabalho, sendo: sete na região codificante (p.Ser32Asn, p.Arg39Cis, p.Lis38*, p.Cis65Tir, p.L80Wfs*8, p.Cis247*, and p.Asp364Trefs*18), uma em sítio de splicing (c.1138+1G>T), duas no exon 1 nãocodificante (c.-133G>A e c.-156_-136ins18pb), três na região 5'UTR (c.-413G>A, c.- 208C>A, e c.-762C>T) e uma na região 3'UTR (c.*1286C>T). As variações aqui descritas, não foram identificadas em controles saudáveis. As análises in silico demonstraram o possível efeito deletério de cada alteração e, suas relações com o fenótipo dos indivíduos. Embora estes resultados demonstrem a importância de cada alteração para o fenótipo, haverá ainda a necessidade de se investigar os efeitos funcionais in vitro. As alterações com potencial deletério foram identificadas em maior frequência nos casos dos distúrbios da diferenciação gonadal (20%) e DDS 46,XY idiopático (22%) / Abstract: The term Disorders of Sex Differentiation (DSD) characterize incomplete or disorganized genital or gonadal development. The DSD with 46, XY karyotype may present either ambiguous or female genitalia and also dysgenetic gonads in some cases, with presence or absence of Müllerian derivatives. The most frequent are androgen insensitivity, 5-alpha-reductase type 2 deficiency, gonadal dysgenesis and ovarian-testicular DSD. There are several genes that participate in both sex determination and differentiation processes. Mutations in NR5A1 gene, which encoding SF-1, a transcription factor, are responsible for different phenotypes of DSD. The protein SF-1, which is expressed mainly in steroidogenic tissues (gonads, adrenal glands and placenta), is also express in Sertoli and Leydig cells, in the ovaries, and is the major regulator of cholesterol metabolism in steroidogenic cells. Moreover, it regulates the activity of other genes, such as CYPs, HSD3B, StAR, SOX9, DAX1, among others. The literature describes the association of changes in NR5A1 gene with 46, XY DSD, bilateral anorchia, primary amenorrhea, premature ovarian failure, hypospadias, male infertility, and some cases of adrenal tumors and endometriosis. The present work involved the molecular analysis of NR5A1 gene in 86 patients with 46, XY DSD including complete gonadal dysgenesis (n = 7), partial gonadal dysgenesis (n = 18), idiopathic 46, XY DSD (n = 41) and others (n = 20). Twelve variations had been identified: seven in the coding region (p.Ser32Asn, p.Arg39Cis, p.Lis38*, p.Cis65Tir, p.L80Wfs*8, p.Cis247*, and p.Asp364Trefs*18), one at a splice site (c.1138+1 G>T), two in the noncoding exon 1 (c.-133G>A and c.-156_-136ins18pb), three in the 5'UTR region (c.- 413G>A, c.-208C>A and c.-762C>T) and one in the 3'UTR (c.*1286C>T). The variations herein described, have not been identified in healthy controls. In silico analysis showed possible deleterious effects for each change and its correlations to individual phenotypes. Although those results demonstrate the importance of each change for the phenotype, there in vitro functional effects must be investigated. The potentially deleterious changes were identified more frequently in cases of disorders of gonadal development (20%) and idiopathic 46, XY DSD (22%) / Mestrado / Genetica Animal e Evolução / Mestra em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Fernanda da Cruz Landim-Alvarenga / Resumo: As células-tronco mesenquimais extraídas da medula óssea ou tecido adiposo são utilizadas em abordagens terapêuticas, em vista das suas propriedades anti-inflamatórias, imunomoduladoras e regenerativas. Estas células são consideradas uma nova alternativa para o tratamento de enfermidades em diversas espécies, incluindo as dos equinos. Dessa forma, com o intuito de investigar a possível utilização das células estromais de mini-horses em tratamentos de cavalos, nesse estudo foi realizada a colheita, isolamento, expansão, caracterização imunofenotípica e diferenciação em duas linhagens mesenquimais: osteogênica e adipogênica de células estromais de mini-horses (Equus ferus caballus), objetivando a formação de um banco celular. Foi ainda realizada a análise transcricional comparativa dessas células, com as células estromais oriundas de cavalos (Equus caballus), produzidas e caracterizadas nas mesmas condições. Os parâmetros analisados foram o perfil de genes relacionados à angiogênese, regulação negativa da proliferação de células T, regulação negativa da ativação de células T, proliferação negativa de linfócitos reguladores, regulação negativa da proliferação de células mononucleares, regulação negativa da adesão célula-célula de leucócitos, regulação negativa da proliferação de leucócitos, regulação negativa da adesão célula-leucócito, regulação negativa da ativação de linfócitos. Também foram pesquisados os principais genes up e down regulados comparando mini-horses aos cavalo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mesenchymal stem cells extracted from bone marrow or adipose tissue are used in therapeutic approaches in view of their anti-inflammatory, immunomodulatory and regenerative properties. These cells are considered a new alternative for the treatment of diseases in several species. In order to investigate the possible use of mini-horses stromal cells in horse treatments, in this study was performed the collection, isolation, expansion, immunophenotypic characterization and differentiation in two mesenchymal lines were performed: osteogenic and adipogenic stromal cell mini-horses (Equus ferus caballus), aiming the formation of a cellular bank. We also performed the comparative transcriptional analysis of these cells, with stromal cells from horses (Equus caballus), produced and characterized under the same conditions. The parameters analyzed were the profile of genes related to angiogenesis, negative regulation of T cell proliferation, negative regulation of T cell activation, negative proliferation of regulatory lymphocytes, negative regulation of mononuclear cell proliferation, negative regulation of cell-cell adhesion leukocytes, negative regulation of leukocyte proliferation, negative regulation of cell-leukocyte adhesion, negative regulation of lymphocyte activation. We also searched the top 10 genes up and down regulated comparing mini-horses to horses. For cell bank formation tests were performed that demonstrated the characteristics of stromal cells in the cells obtained ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Mecanismos redox estão envolvidos em diversos processos, como sobrevivência, proliferação e diferenciação celular, pela modulação da atividade de quinases, fosfatases e fatores de transcrição, entre outros, através da modificação oxidativa e reversível de resíduos de cisteína. Neste trabalho, nós estudamos processos redox subjacentes a diferenciação osteogênica induzida por BMP2, utilizando linhagens de células MC3T3-E1. Nosso objetivo foi investigar modificações redox como possíveis moduladores do processo de diferenciação osteogênica. Para isso, nós primeiramente caracterizamos a diferenciação osteogênica nas células MC3T3-E1 após o tratamento com BMP2, através da expressão do marcador osteogênico Osteocalcina, da fosforilação do complexo Smad 1/5/8 e da deposição de matriz extracelular calcificada. Análises de expressão gênica por qPCR mostraram que o tratamento com BMP2 resultou no aumento de expressão de NOX4, o que provavelmente leva ao aumento na produção de peróxido de hidrogênio intracelular. Nós investigamos também a modulação de peroxiredoxinas nesse processo e análises de expressão gênica mostraram que não há alterações nos níveis de expressão de Prx1 e 2 durante a diferenciação, mas os ensaios de western blot redox indicam que a Prx1 pode ser oxidada após o tratamento com BMP2, de maneira dose dependente. Outras análises in vitro mostram que células expostas a N-acetilcisteína (NAC) e PEG-catalase apresentam diferenciação osteogênica prejudicada, detectada por baixos níveis de deposição de matriz extracelular calcificada, comparado com células não-tratadas. Além disso, a fosforilação de Smad 1/5/8 são reduzidas nessas condições. Nossos dados sugerem que processos redox podem modular a sinalização celular durante o processo de diferenciação osteogência / Redox mechanisms are involved in several processes, such as cell survival, proliferation and differentiation, among other ways by modulating kinases, phosphatases and transcription factors activity that can occur through reversible and oxidative modification of cysteine residues. We were interested in studying redox processes underlying osteogenic differentiation induced by BMP-2, using MC3T3-E1 cell lineage. Our objective was to investigate redox modifications as possible modulators of the osteogenic differentiation process. We first characterized osteogenic differentiation in MC3T3-E1 cells upon BMP2 treatment, through gene expression of the osteogenic marker Osteocalcin, Smad 1/5/8 (belonging to the BMP-2 pathway) protein phosphorylation and extracellular matrix calcification. Gene expression analysis by qPCR showed that BMP2 treatment resulted in NOX4 upregulation, which probably also leads to hydrogen peroxide production. We have investigated peroxiredoxin modulation in this process, and gene expression analysis shows no significant change in peroxiredoxin 1 and 2 expression levels, but redox western blotting assays indicate that Prx1 can be oxidized after BMP2 treatment, in a dose dependent manner. In vitro analysis shows that cells exposed to N-acetyl-L-cysteine (NAC) and PEG-catalase display impaired osteogenic differentiation, detected by lower levels of calcified extracellular matrix deposition compared with non-treated cells. Moreover, phosphorylation of Smad 1/5/8 complex is reduced under these redox treatments. Our data suggest that redox pathways can modulate cell signaling during the osteogenic differentiation process

Vanzosaura rubricauda e Micrablepharus maximilian são duas espécies de lagartos microteídeos (Gymnophthalmidae) com ampla distribuição na \"grande diagonal\" de formações abertas da América do Sul. Ao longo de suas distribuições, as espécies estão sujeitas a condições ambientais muito variáveis, em região com complexa história geomorfológica. Representam bons modelos para estudo de variação geográfica. Com o uso de técnicas de biometria e análise espacial, estudei os padrões de variação geográfica em morfometria em V. rubricauda e M. maximiliani. Ambas as espécies apresentaram dimorfismo sexual e variação geográfica significante em morfometria e contagem de escamas. A variação geográfica em V. rubricauda é concordante entre os sexos e pode ser definida por um contraste entre alongamento do corpo e tamanho dos membros. Populações do \"Cerrado leste\" se destacam por possuir menor tamanho, troncos mais curtos, membros longos e baixo número de subcaudais lisas. Os padrões de coloração são grandemente variáveis em nível local, havendo polimorfismo em populações da Caatinga e em uma do Chaco. Em M. maximiliani a variação geográfica observada é menos evidente, porém populações do \"Cerrado oeste\" se destacam pelo maior tamanho e maiores contagens de escamas, enquanto do grupo \"Nordeste\" apresentam troncos mais curtos e pés proporcionalmente maiores. Em relação aos padrões geográficos, é destacada a heterogeneidade morfológica entre populações das duas espécies na região do Cerrado, e sua diferenciação em relação às populações do semiárido e restingas litorâneas. O modelo ecogeográfico que melhor explica a variação em V. rubricauda é aridez, determinando um contraste em morfologia entre populações do Cerrado em relação a outras regiões. Para M. maximiliani, temperatura, sazonalidade e geografia tiveram maior poder explanatório, no entanto, o padrão geografico é afetado por autocorrelação espacial. Modelos de paleodistribuição sugerem que flutuações climáticas podem ter causado isolamento de populações em climas pretéritos mais secos que o atual. O grau de diferenciação intraespecífica em V. rubricauda sugere a necessidade de uma reavaliação taxonômica do gênero. / Vanzosaura rubricauda and Micrablepharus maximilian are two species of microteiid lizards (Gymnophthalmidae) widespread in the \"great diagonal\" of open formations in South America. Throughout their distribution, the species are subject to highly variable environmental conditions, in a region with complex geomorphological history. Therefore, represent good models for a study of geographic variation. With the use of biometry techniques and spatial analysis I studied the patterns of morphological variation in V. rubricauda and M. maximiliani. Both species showed sexual dimorphism and significant geographical variation in morphometry and scale counting. Geographic variation in V. rubricauda is consistent between the sexes and can be defined by a contrast between body elongation and length of limbs. Populations of \"Eastern Cerrado\" are distinguished by having smaller body size, shorter trunks, longer limbs and low number of smooth subcaudal scales. The color patterns are highly variable at the local level, with polymorphism in populations of the Caatinga and Chaco. In M. maximiliani geographical variation observed is less clear however, populations of the \"Western Cerrado\" are larger and possess higher scale counts, while the group \"Northeast\" present shorter trunks and proportionately larger feet. Regarding geographic patterns, the morphological heterogeneity among populations of both species in the Cerrado region is highlighted, and its differentiation from the populations of the \"Northeast\" group. The ecogeographical model that best explains the variation in V. rubricauda is aridity, due a contrast in morphology between populations of the Cerrado in relation to other regions. For M. maximiliani, temperature, seasonality and geography had greater model selection; however, the geographical pattern is affected by spatial autocorrelation. Paleodistributional models suggest that climatic fluctuations may have caused isolation of population during past climates with drier conditions than current. The degree of intraspecific differentiation in V. rubricauda suggests the need of a taxonomic reassessment for the genus.

Tratamentos pulpares conservadores, como as pulpotomias de dentes decíduos, requerem a utilização de materiais capeadores que respeitem as propriedades biológicas da polpa dentária remanescente, preservando sua vitalidade, estimulando sua capacidade de defesa e favorecendo sua regeneração. Conhecer as respostas de células-tronco pulpares a esses materiais são de particular interesse. Acredita-se que um material capeador que estimule a regeneração pulpar permitirá a diferenciação de células-tronco pulpares em odontoblastos, induzindo a formação de nova dentina e selando biologicamente a câmara pulpar. Portanto, o objetivo deste trabalho é avaliar os efeitos biológicos do MTA, hidróxido de cálcio (HC) e Biodentine sobre células-tronco de dentes decíduos exfoliados humanos (SHED). Para isso, as SHED foram cultivadas em meio de cultura MEMα condicionado com um dos materiais capeadores (MTA, HC ou Biodentine) e submetidas a ensaios de proliferação, migração e diferenciação através da análise de expressão gênica para DMP-1. Os três materiais na concentração de 1 mg/mL induziram um aumento na taxa de proliferação celular, sendo que aos 7 dias foi observado maior número de células para o grupo do HC. Além disso, observou-se maior migração celular em direção ao meio condicionado por Biodentine, seguida pela migração ao MTA e ao HC. Quanto à diferenciação, os resultados sugerem que todos os materiais testados induzem a diferenciação de células-tronco em odontoblastos, sendo o MTA o material com maior potencial odontogênico, visto que a expressão de DMP-1 foi observada a partir do dia 7 e foi mais intensa quando comparado aos demais grupos ao longo do tempo. Portanto, os três materiais permitem proliferação, e induzem migração e diferenciação, características desejáveis para materiais de capeamento pulpar em pulpotomias de dentes decíduos. A possibilidade de induzir células-tronco a se diferenciar em um tipo celular através de uma indução guiada é muito importante, pois possibilita a sua utilização em várias terapias de regeneração e engenharia tecidual. / Conservative pulp treatments, such as the pulpotomies of primary teeth, require the use of capping materials that respect the biological properties of the remaining dental pulp, thus preserving its vitality, stimulating its defensive ability and enhancing its regeneration. Knowing the responses of dental pulp stem cells to these materials is of particular interest. It is believed that a capping material that stimulates pulp regeneration will allow differentiation of dental pulp stem cells into odontoblasts, inducing the formation of new dentin and sealing the pulp chamber biologically. Therefore, the aim of this study is to evaluate the biological effects of MTA, calcium hydroxide (CH) and Biodentine on stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED). Thus, SHED were cultured in MEMα culture medium conditioned with one of the capping materials (MTA, Biodentine or CH) and tested for proliferation, migration and differentiation through the analysis of DMP-1 gene expression. The three materials at a concentration of 1 mg/mL induced an increase in the rate of cell proliferation, with a greater number of cell observed for CH group at the 7th day. Besides, greater cell migration toward Biodentine conditioned medium was observed, followed by the migration toward MTA and CH. Regarding differentiation, the results suggest that all the tested materials induce stem cell differentiation into odontoblasts, with MTA presenting the greatest odontogenic potential, since DMP-1 expression was observed from day 7 and was more intense when compared to the other groups over time. Therefore, the three materials induce proliferation, migration and differentiation, which are desirable features for pulp capping materials in pulpotomy of primary teeth. The possibility of inducing stem cells to differentiate into a cell type through a guided induction is very important because it enables their use in various regenerative therapies and tissue engineering. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O Osteossarcoma é o tipo mais comum de câncer ósseo em cães e em seres humanos. Os osteossarcomas caninos representam um modelo único para o estudo desse tipo de câncer em humanos, devido a incidência relativamente alta, semelhanças no comportamento biológico, na apresentação clínica e características moleculares. Estudos envolvendo o desenvolvimento do fenótipo de osteoblastos em osteócitos terminalmente diferenciados, oferecem as bases para o entendimento do curso da transformação neoplásica. Neste sentido, a rápida expansão do conhecimento a respeito do processo de diferenciação óssea, em última análise pode conduzir ao desenvolvimento de marcadores diagnóstico e prognóstico, bem como terapias dirigidas para pacientes caninos e humanos portadores deste tipo de câncer. Este estudo teve por objetivos avaliar alguns dos aspectos relacionados ao processo de diferenciação induzida de osteoblastos caninos após o tratamento com três diferentes agentes descritos como tendo possível potencial antineoplásico. Para tanto, avaliou-se, em cultura celular em três dimensões, duas linhagens de osteossarcoma após tratamento com a Arctigenina, a Genisteína e a Tricostatina-A. inicialmente, foi realizado o estabelecimento e caracterização de uma nova linhagem celular de osteossarcoma canino. Em seguida deu-se inicio aos trabalhos de avaliação dos marcadores de diferenciação por diferentes técnicas. Foram também utilizados estudos de viabilidade celular, ensaios de proliferação e morte celular induzida, assim como de invasão. Os resultados mostraram que todos os três tratamentos foram capazes de induzir diferenciação parcial nas linhagens de osteossarcoma, visto a heterogeneidade dos dados coletados, assim como, pela expressão parcial de marcadores tardios da transição osteoblasto/osteócito. Associado a isso se verificou que existe um decréscimo da viabilidade celular, porem sem ação diretamente ligada a caspase3. Notou-se ainda que mesmo com diferenças entre as linhagens, os princípios ativos foram capazes de inibir a capacidade de invasão nos ensaios de Transwell. Conclui-se, desta maneira, que os compostos utilizados induzem diferenciação parcial, porém, com efeito, antineoplásico importante. Em conjunto, estes resultados destacam a importância do processo de diferenciação, tumorigênese e terapia através da diferenciação. / Osteosarcoma is the most common type of bone cancer in dogs and humans. Due to the fact that canine osteosarcoma is similar to human osteosarcoma in its high occurrence rate, biological behavior, clinical signs and molecular characteristics, this naturally occurring canine disease represents an important model for the study of osteosarcoma in humans. Studies regarding the development of the osteoblast phenotype into terminally differentiated osteocytes provide an understanding of the neoplastic transformation in bone cancer. For this reason, further studies of bone differentiation may lead to the discovery of bone-tumorspecific markers used for disease detection and prognosis, and the development of drugtargeted therapies. The focus of this study is the process of induced bone differentiation after treatment with three different drugs that have a potential anti-neoplastic activity against osteosarcoma. Two osteosarcoma cell lines in three-dimensional culture were evaluated after being treated with Arctigenin, Genistein, and Trichostatin-A. Initially, we performed the establishment and characterization of a novel canine osteosarcoma cell line. Then the work on the evaluation of differentiation markers by different techniques has been initiated. Studies were also used for cell viability, proliferation assays and induced cell death, as well as invasion. The results showed that all three treatments were able to induce partial differentiation in osteosarcoma cell lines, since the heterogeneity of the data collected, as well as the partial expression of markers of late transition osteoblast / osteocyte. Associated with this it was found that there is reduced cell viability, but without acting directly connected to caspase3. It is further noticed that even with differences between strains, the active principles were able to inhibit the invasiveness in Transwell assay. The conclusion is thus that the partial differentiation inducing compounds used, but with important antineoplastic effect. Together, these results highlight the importance of the process of differentiation, tumorigenesis and differentiation therapy.