Orientador: Adriana Camargo Ferrasi / Banca: Maria Inês de Campos Moura Pardini / Banca: Juliana Garcia de Oliveira / Resumo: O câncer gástrico é um dos tipos de câncer mais comum e está associado com uma alta frequência de mortalidade. Embora nas últimas décadas tenha ocorrido um decréscimo na incidência mundial, o prognóstico desta patologia permanece ruim, principalmente quando o diagnóstico é feito em estágios avançados. A etiologia é complexa e multifatorial, onde a combinação de fatores genéticos e ambientais parecem estar envolvidos na carcinogênese e progressão da doença. Desta forma, o objetivo deste estudo foi determinar a frequência do polimorfismo rs12979860 C/T no gene IL28B em amostras de carcinoma gástrico provenientes de dois estados brasileiros, São Paulo e Ceará, associando às características clínicas e epidemiológicas desses pacientes. Os resultados demonstraram que 29,7% dos pacientes apresentam o genótipo CC, enquanto a frequência dos indivíduos heterozigotos e (CT) e homozigotos (TT) foram 56,3% e 9%, respectivamente. Em comparação com dados descritos na literatura e do dBSNP de populações usadas como controle, a frequência do alelo T foi mais alta nos pacientes acometidos por câncer gástrico (tumor difuso: 45,5%, tumor intestinal: 39%, literatura: 11 a 35 e dBSNP: 36%). Ainda neste contexto, encontramos uma significante menor frequência do genótipo CC entre os pacientes acometidos por tumores difusos (22,7%), quando comparados aos indivíduos saudáveis (44 a 51%). Nos casos provenientes da população cearense o alelo C foi significativamente mais elevado no tipo intestinal (67%) quando comparado ao tipo difuso (50%), ressaltando a maior frequência do alelo T nos casos difusos. Analisando-se a frequência do polimorfismo rs12979860 C/T e a genotipagem de Helicobacter pylori foi observada uma forte associação entre o genótipo e a infecção pela bactéria CagA+, onde pacientes portadores da cepa mais patogênica (CagA+) apresentaram frequência maior do genótipo menos protetor (TT), principalmente no... / Abstract: Gastric cancer is one of the most common types of cancer and is associated with a high mortality rate. Although in recent decades there has been a decrease in the global incidence, prognosis of this condition remains poor, especially when the diagnosis is made in advanced stages. The etiology is complex and multifactorial, where the combination of genetic and environmental factors appear to be involved in carcinogenesis and progression of the disease. Thus, the aim of this study was to determine the frequency of the polymorphism rs12979860 C / T in the IL28B gene in gastric carcinoma samples from two Brazilian states, São Paulo and Ceará, associating the clinical and epidemiological characteristics of these patients. The results showed that 29.7% of patients present with the CC genotype, while the frequency of heterozygotes and (TC) and homozygous (TT) were 56.3% and 9%, respectively. Compared to data reported in the literature and used as control populations of dbSNP, the frequency of the T allele was higher in patients affected by gastric cancer (diffuse tumor: 45.5%, intestinal tumor: 39%, literature: 11-35 and dbSNP: 36%). Also in this context, we found a significant lower frequency of the CC genotype among patients affected by diffuse tumors (22.7%) when compared to healthy subjects (44-51%). In cases from Ceará population the C allele was significantly higher in the intestinal type (67%) compared to the diffuse type (50%), emphasizing the greater frequency of the T allele in diffuse cases. Analyzing the frequency of polymorphism rs12979860 C / T and genotyping of Helicobacter pylori was observed a strong association between genotype and infection with CagA + bacteria, where patients with the most pathogenic strain (CagA +) had a frequency higher than genotype less protective (TT), particularly in diffuse histotype (p = 0.001). In addition, this same allele was significantly associated with the occurrence of metastases in ... / Mestre

Este trabalho consiste em um estudo detalhado do sistema digestivo de Phibalosoma phyllinum (Phasmida, Phasmatidae) num enfoque morfofuncional. Do ponto de vista anatômico, o seu sistema digestivo é constituído por um intestino anterior, um intestino médio e um intestino posterior. O intestino anterior é composto por uma cavidade bucal (onde se abre o ducto da glândula salivar bilobada), uma faringe, que se continua para o esôfago, terminando em um proventrículo, que forma uma válvula em seu interior. O intestino médio é formado por um ventrículo tubular, dividido em três regiões: ventrículo anterior (VA), ventrículo médio (VM) e ventrículo posterior (VP). Este último foi, ainda, subdividido em proximal (VPI) e distal (VPII). Na região do VPI, foi constatada a presença de estruturas denominadas de apêndices ventriculares, formadas por protuberâncias, que se inserem no tubo digestivo, e canalículos, que se projetam da região apical de cada uma delas e terminam em fundo cego. O intestino posterior é dividido em um íleo e um reto que termina no ânus. A análise histológica mostrou que o intestino anterior é formado por um epitélio simples, composto por células pavimentosas, revestido por uma cutícula, que se modifica na forma de pequenas espículas ao longo desta região. O proventriculo é composto por uma válvula muscular simples, que separa o intestino anterior e o intestino médio. Este último é formado por um epitélio simples, constituído por células do tipo colunar, chamadas de enterócitos, principais responsáveis pela secreção de enzimas digestivas e pela absorção dos nutrientes, por células regenerativas, que se apresentam reunidas em ninhos na base do epitélio, e por células endócrinas. Os apêndices ventriculares, por sua vez, possuem um epitélio simples e contínuo com o epitélio ventricular. As células das protuberâncias apresentam-se grandes e arredondadas, enquanto que os canalículos são compostos por um epitélio de células achatadas, semelhante ao dos túbulos de Malpighi. Na região de transição entre o epitélio ventricular e o intestino posterior se inserem os túbulos de Malpighi. O epitélio do intestino posterior é do tipo cúbico, simples, revestido por cutícula. A luz do intestino médio (ou ventrículo) é revestida por uma estrutura tubular, denominada de membrana peritrófica, cuja existência foi comprovada por microscopia de fluorescência com a utilização da técnica WGA-FITC (aglutinina do gérmen do trigo conjugada à fluoresceína). Com a finalidade de identificar regiões específicas do ventrículo onde ocorre a absorção ou secreção de água através do epitélio, foram realizados experimentos fisiológicos de ingestão e injeção do corante amaranto em solução. Verificou-se que, quando o corante é ingerido pelos insetos, o VA apresenta-se corado, tanto em animais em jejum quanto alimentados, indicando ser este o possível sítio de absorção de água no ventrículo. Por sua vez, a partir de experimentos com a injeção do mesmo corante na hemolinfa, foi constatada a sua tomada pelos túbulos de Malpighi, indicando serem estes os principais sítios de tomada de água da hemolinfa e de sua secreção para a luz do tubo digestivo. Tanto em animais em jejum, quanto alimentados, o corante injetado é encontrado na luz do intestino posterior. Entretanto, nos animais em jejum, o corante é capaz de se difundir, também, pelo ventrículo até a sua região anterior. A análise ultraestrutural do intestino médio revelou que a superfície apical dos enterócitos constituintes apresenta-se modificada na forma de microvilosidades. Nas membranas laterais, observam-se especializações juncionais na forma de desmossomos apicais, seguidos por junções septadas lisas. A membrana plasmática basal, por sua vez, exibe diversas invaginações, formando uma rede complexa de canais com mitocôndrias associadas. Nas células do VA e VM, essa rede exibe um número limitado de aberturas para a lâmina basal, o que indica um maior potencial de absorção de água pelo epitélio ventricular, a partir de sua luz. Nas células da região do VP, o número de aberturas é bem maior, o que sugere que pode ocorrer secreção de água e íons através desta região, não detectável nos experimentos com corantes. Por outro lado, as células regenerativas exibem características típicas de células indiferenciadas, com núcleo grande e poucas organelas. Células endócrinas, por sua vez, são, eventualmente, detectadas na base do epitélio, sem se prolongarem até a superfície apical do epitélio. Foi observado, ainda, que tanto os canalículos ventriculares, quanto os túbulos de Malpighi são formados por células achatadas, com microvilosidades apicais modificadas portando mitocôndrias em seu interior e membrana plasmática basal formando um labirinto complexo, com muitas aberturas para a lâmina basal e com muitas mitocôndrias associadas. Com relação a atividade secretora do epitélio ventricular, verifica-se a existência de grandes quantidades de retículo endoplasmático rugoso e diversas áreas de Golgi concentradas, principalmente, no citoplasma perinuclear. Nas regiões VA e VM, é detectado um grande número de vesículas secretoras, cujo mecanismo de secreção parece ser o merócrino. Ao longo de todo VP, por outro lado, vesículas secretoras estão, aparentemente, ausentes no citoplasma apical, mas pode ser constatada a presença de dilatações nas microvilosidades, algumas das quais apresentem pequenas vesículas em seu interior. Esta observação é sugestiva da ocorrência de secreção do tipo microapócrina nesta região. Devem ocorrer, portanto, dois mecanismos de secreção diferentes ao longo do ventrículo de P. phyllinum: o merócrino (no VA e no VM) e o microapócrino (no VP) O local de produção e secreção das enzimas amilase e tripsina pôde ser localizado através de experimentos de imunomarcação ultraestrutural com a utilização de anticorpos heterólogos. Ambas as enzimas foram detectadas na região do VA e do VM, podendo ser traçadas nas áreas de Golgi, nas vesículas secretoras e na luz do epitélio, junto às microvilosidades, seguindo, pois, a rota secretora. Ambas as enzimas foram identificadas no interior do mesmo tipo de vesículas de secreção, indicando que devem ser eliminadas conjuntamente através da mesma via secretora. Medidas de pH luminal revelaram grandes diferenças de pH ao longo do tubo digestivo nesta espécie. Enquanto que na região anterior o pH é mais ácido (5,3 no intestino anterior e 5,6 no VA), ele vai se tornando mais alcalino nas regiões mais posteriores do ventrículo (6,3 no VM anterior, 8,0 no VM posterior, 9,1 no VPI e 8,5 no VPII) e é neutro no intestino posterior (7,3). Foi determinado, ainda, o efeito do pH sobre a atividade das enzimas tripsina e amilase. A maior atividade para tripsina foi observada no pH 9,0. Já para amilase, a maior atividade foi observada em pH 5,0. No que diz respeito a atividade de enzimas digestivas, ficou evidente que a atividade de amilase e tripsina se concentra no conteúdo do intestino anterior e VA. / This work presents a detailed morphofunctional study of the digestive system of Phibalosoma phyllinum (Phasmida, Phasmatidae). From an anatomical point of view, the digestive system of this insect is formed by a foregut, a midgut and a hindgut. The foregut is composed by the buccal cavity (where the salivary gland\'s duct open), a pharynx and an aesophagus that ends in the proventriculus. The midgut consists of a tubular ventriculus and it can be divided in three regions: the anterior ventriculus (AV), the middle ventriculus (MV), and the posterior ventriculus (PV) which can be further subdivided in its proximal (PVI), and distal (PVII) sub-regions. The presence of a complex system of ventricular appendices was observed in the PVI sub-region, which are formed by protuberances, in the external ventricular surface, and by blind-ended canaliculi, which are connected to the protuberances. The hindgut is divided into an ileum and a rectum that ends in the anus. Seen by light microscopy, the foregut is made up by a simple epithelium, which is composed of squamous cells and covered by a cuticle layer. Through the whole foregut the cuticle forms spines. The proventriculus is formed by a simple muscular valve that separates the foregut from the midgut. The midgut itself is formed by a simple epithelium, which is made up of three different cell types: columnar cells (enterocytes), which are the main site of enzyme production and secretion, and nutrient absorption, the regenerative cells, which are clustered in nidi at the basal portion of the epithelium, and the endocrine cells. The ventricular appendices, in turn, are formed by a simple epithelium that is continuous with the ventricular epithelium. Cells from the protuberances are large showing a round shape, while canalicular cells are short, and very similar to the ones presented in the Malpighian tubules. In the transition between the midgut and the hindgut, several Malpighian tubes branch off. The hindgut is formed by a simple epithelium, lined by cuticle. The ventricular lumen is covered by a tubular structure called peritrophic membrane whose presence was confirmed by fluorescence microscopy, using chitin-binding lectin WGA (wheat germ agglutinin) coupled with FITC (fluorescein isothiocyanate). In order to identify specific ventricular regions where water absorption and secretion through the epithelium take place, physiological experiments, using amaranth dye solution were performed. This solution was either orally administered, or injected in the hemolinph of both fed and starved insects. These experiments revealed that, both in fed and starved animals, the AV is the main site of water absorption, whereas the Malpighian tubules are the main sites of water secretion into the ventricular lumen. Ultrastructural analysis showed that enterocytes present an apical surface modified into well-developed microvilli. In their lateral surface, the adjacent plasma membranes are linked by desmosomes and smooth septate junctions. The basal plasma membrane shows several infoldings, forming a labyrinth of channels with associated mitochondria. In the AV and MV, these infoldings present a limited number of openings to the basal lamina, which indicates a greater water absorption potential of these regions from the gut lumen. In the PV cells, the number of openings is greater, indicating that these regions may be involved in water secretion (although occurring in levels that are undetectable through dye experiments). Regenerative cells nidi, in turn, can be observed in the basal portion of the epithelium throughout the midgut. This cell type shows characteristics of undifferentiated cells, such as large nuclei and few organelles. Endocrine cells are confined to the basal portion of the epithelium. Both the ventricular canaliculi and the Malpighian tubules are made up by cuboidal cells with modified apical microvilli bearing mitochondria in their interior, and basal plasma membrane forming a labirinth with many well developed infolds and openings to the basal lamina, as well as many associated mitochondria. An intense secretory activity was observed along the entire midgut. Large amounts of rough endoplasmic reticulum, well developed Golgi areas were observed in the enterocytes. In the AV and MV a large number of secretory vesicles could be observed concentrated in the apical portion of the cells, and their contents are probably eliminated by a merocrine mechanism. Along the PV, secretory vesicles are apparently absent but microvilli display dilated tips frequently showing small vesicles in their interior. This observation may indicate the occurrence of a microapocrine secretory mechanism in this ventricular region. The enzymes amylase and trypsin were immunolocalized in the cells from the AV and MV. In these regions, the two enzymes were detected in Golgi areas, secretory vesicles and in the the ventricular lumen, between the microvilli. Thus, both enzymes seem to be produced and eliminated through the same secretory pathway. Luminal pH measurements revealed a great variation of the pH along the intestine of this species. While in its anterior region the pH is acid (5,3 in the foregut and 5,6 in the AV), it becomes gradually alkaline towards the posterior regions (6,3 in the anterior MV, 8,0 in the posterior MV, 9,1 in the PVI and 8,5 in the PVII); in the hindgut the pH is neutral (7,3). The effect of the pH on amylase and trypsin activities was also measured. It was determined that trypsin\'s optimal pH was 9,0, and amylase\'s optimal pH was 5,0. Biochemical assays of digestive enzymes revealed the presence of amylase and trypsin in the luminal contents, mainly in the foregut and AV. In spite of that, it is possible that trypsin\'s activity is greater in the MV and PV, where the alkaline luminal pH matches the optimal pH for this enzyme. Chymotrypsin is also present in the lumen of the foregut and AV, but, unlike amylase and trypsin, its major activity is found in the AV. Aminopeptidase is found in the ventricular epithelium, mainly in the MV and PV, and maltase is detected associated with the microvillar glicocalix in the AV and PV regions. The hindgut showed low levels of digestive enzyme excretion, both in fed and starved animals, suggesting that these enzymes are recovered during the digestive process. Thus, these results point to the occurrence of an endo-ectoperitrophic circulation of digestive enzymes in both fed and starved animals, in which the AV is the main absorption site of water and the Malpighian tubules, the main secretion site. Initial carbohydrates digestion should occur in the foregut and in the AV, in the endoperitrophic space, whereas its final digestion should take place in the epithelial surface. Protein digestion should take place in the MV and in the PV; initial digestion should occur in the luminal endoperitrophic space, whereas final digestion takes place in the epithelial surface of these regions. Carbonic anhydrase assays revealed a high activity of this enzyme in the ventricular appendices. This fact, along with the morphological similarity between ventricular canaliculi and Malpighian tubules suggest that the canaliculi and the Malpighian tubules are homologous structures. Along the evolutionary process, the canaliculi probably acquired the capability to promote the alkalization of the PV lumen (mainly in the PVI region) thus affecting the digestive process

Este trabalho consiste num estudo abrangente do sistema digestivo de espécies representativas da ordem Hemiptera, no qual dados de caráter morfológico foram integrados a informações bioquímicas e moleculares acerca das principais proteínas atuantes no processo digestivo destes animais. Para tanto, este projeto utilizou, como referência básica, um estudo prévio realizado com a espécie Bucephalogonia xanthophis (Hemiptera: Cicadellidae). As análises morfológicas desenvolvidas neste trabalho consistiram em um estudo comparativo ultraestrutural das espécies sugadoras de seiva Macugonalia leucomelas (subordem Auchenorrhyncha, Cicadellidae), Dalbulus maidis (subordem Auchenorrhyncha, Cicadellidae), Mahanarva fimbriolata (subordem Auchenorrhyncha, Cercopidae), Quesada gigas (subfamília Auchenorrhyncha, Cicadidae) e Diaphorina citri (subordem Sternorrhyncha, Psyllidae). Já a vertente molecular deste estudo buscou identificar, caracterizar e determinar a distribuição de transportadores de membrana, enzimas digestivas e outras proteínas atuantes no processo digestivo da espécie B. xanthophis. De um modo geral, as espécies da infraordem Cicadomorpha M. leucomelas, D. maidis, M. fimbriolata e Q. gigas apresentam uma organização anatômica do sistema digestivo muito semelhante ao descrito previamente para a cigarrinha B. xanthophis. Um esôfago conecta a boca ao intestino médio, que tem início na câmara de filtração (CF), que é composta pela aposição das porções anterior e posterior do intestino médio com as regiões proximais dos túbulos de Malpighi. Este órgão permite a excreção do excesso de água presente na seiva, permitindo a concentração dos nutrientes na porção mediana do intestino médio. O sistema digestivo segue por duas regiões anatomicamente distintas: o domínio cônico (DC) e o tubular (DT) do intestino médio. O intestino posterior é observado como um longo tubo livre pela hemocela a apresenta um reto dilatado, terminando em um ânus. De um modo geral, as espécies da família Cicadellidae (M. leucomelas e D. maidis) apresentam uma CF anatomicamente menos complexa do que se observa em M. fimbriolata e Q. gigas. Diferentemente das espécies da infraordem Cicadomorpha, o psilídeo D. citri exibe um sistema digestivo com uma CF relativamente ainda mais simples, sem a presença de túbulos de Malpighi. O intestino médio desta espécie também possui dois domínios distintos, mas apresentam caracteristicamente quatro apêndices de fundo cego que se projetam a partir do DT, cuja função ainda é desconhecida. Do ponto de vista ultraestrutural, as células da CF das espécies analisadas exibem adaptações relacionadas ao transporte de água e íons através da membrana, como microvilosidades apicais e invaginações da membrana plasmática basal associadas à mitocôndrias. As células da CF de D. citri possuem uma maior quantidade de organelas citoplasmáticas quando comparadas às espécies da infraordem Cicadomorpha., sugerindo uma menor atividade no processo digestivo Os enterócitos, principal tipo celular encontrado no DC e DT, exibem, em todas as espécies analisadas, microvilosidades apicais, invaginações da membrana plasmática basal associada a mitocôndrias e organelas associadas à rota intracelular de secreção. No caso particular de D. citri, as microvilosidades se mostram modificadas na forma de uma rede de lamelas, reforçadas entre si por trabéculas. Um complexo luminal de membranas pode ser observado associado às microvilosidades dos enterócitos de todas as espécies estudadas neste trabalho. Nas espécies da subordem Auchenorrhyncha, este complexo de membranas apresenta uma organização semelhante às membranas luminais em forma de chama (MLC). Este complexo se origina a partir de constrições do ápice das microvilosidades, que formam membranas que se projetam ao lúmen do intestino médio, delimitando compartimentos de acesso restrito. Por outro lado, na espécie D. citri, o complexo luminal de membranas observado é semelhante às membranas perimicrovilares modificadas (MPMm), descritos previamente em afídeos, que não forma compartimentos fechados. Os resultados apresentados neste trabalho, aliados às informações disponíveis na literatura, indicam que a organização do complexo luminal de membranas nos insetos da ordem Hemiptera é bem mais diversificada do que se presumia anteriormente, o que coloca em dúvida a visão tradicional sobre a origem evolutiva desse complexo. A compartimentalização do processo digestivo aparentemente deixou de existir no ancestral do grupo Paraneoptera, com a perda da membrana peritrófica. No entanto, o complexo luminal de membranas presente no lúmen do intestino médio de Hemiptera e Thysanoptera pode ter surgido ao longo da evolução desses grupos como um mecanismo alternativo que promova algum nível de compartimentalização da digestão. A análise do transcriptoma do intestino médio de B. xanthophis possibilitou a identificação de uma série de transportadores de nutrientes orgânicos, inorgânicos e água. A partir destes dados, foi criado um modelo para a absorção de aminoácidos baseado num cotransporte de H+ e aminoácidos através de toda a extensão do epitélio intestinal, que utiliza a energia de um gradiente eletroquímico de prótons, bombeados para o meio extracelular por V-ATPases. Tal modelo contrasta com o preconizado na literatura, que tem por base um cotransporte de aminoácidos com potássio. Os dados obtidos pelo transcriptoma também permitiram a identificação de transportadores de açúcar ao longo do intestino médio de B. xanthophis. Os açúcares absorvidos, provavelmente na forma de glicose, devem ser convertidos em trealose no citossol dos enterócitos antes de serem transportados para a hemolinfa. Os resultados apresentados neste trabalho também indicam a ocorrência de α-glicosidase no intestino médio de B. xanthophis, além de indícios de sua associação com as MLC. No entanto, sua função no processo digestivo desta espécie ainda não é conhecida. A identificação de proteinases digestivas ao longo de todo o intestino médio de B. xanthophis, principalmente catepsinas e quimotripsinas, foi surpreendente, considerando-se que sua dieta não apresenta proteínas em sua composição. Assim, estudos complementares são necessários para se averiguar a real função destas enzimas no processo digestivo desta cigarrinha. A análise molecular realizada neste trabalho permitiu uma melhor compreensão acerca do processo digestivo da espécie sugadora de xilema B. xanthophis. Os resultados obtidos sugerem a presença de diferenças funcionais significativas entre as diversas regiões do intestino médio que não se refletem na ultraestrutura dos enterócitos. A identificação de proteinases e transportadores de aminoácidos e açúcares na CF sugere que este órgão possua uma função bem mais abrangente no processo digestivo, indo além do transporte de água e concentração de nutrientes / This work presents a comprehensive study of the digestive system of representative species of the order Hemiptera, where morphological, biochemical, and molecular data are integrated for a better understanding of the digestive process occurring in these insects. This project is based on a previous study about the digestive system of the leafhopper Bucephalogonia xanthophis (Hemiptera: Cicadellidae). A comparative ultrastructural study is presented with the sap-sucking species Macugonalia leucomelas (suborder Auchenorrhyncha, Cicadellidae), Dalbulus maidis (suborder Auchenorrhyncha, Cicadellidae), Mahanarva fimbriolata (suborder Auchenorrhyncha, Cercopidae), Quesada gigas (suborder Auchenorrhyncha, Cicadidae), and Diaphorina citri (suborder Sternorrhyncha, Psyllidae). Moreover, a molecular analysis was performed regarding the identification, characterization, and distribution of significant proteins associated with the digestive process in B. xanthophis. The digestive system of the cicadomorphan species M. leucomelas, D. maidis, M fimbriolata, and Q. gigas is very similar to the one previosly described for the leafhopper B. xanthophis. The foregut is made up of a simple tube, the esophagus. The midgut starts at the filter chamber (FC) and progresses to a more posterior conical (CDM) and tubular regions (TDM). The FC is formed by the apposition between the anterior and posterior midgut, along withe the proximal segmentos of the Malpighian tubules, allowing the concentration of the nutrients in the middle midgut. The hindgut is formed by a long tube which presents a dilated rectum before ending in the anus. The FC of M. leucomelas and D. maidis are anatomically less complex than the observed in M. fimbriolata and Q. gigas. Unlike the cicadomorphan species, the CF of D. citri shows an even more simplified organization, lacking the Malpighian tubules. Although two domains of the midgut can be observed in the psyllid, four appendages with unknown function are identified projecting from the TDM. The FC cells of all studied species present ultrastructural adaptations related to the transport of ions and water, such as apical surfaces modified into microvilli, basal plasma membrane presenting several invaginations with associated mitochondria. However, the FC cells from D. citri exhibit more organelles compared to the cicadomorphan species, suggesting that its role in the digestive process is less relevant. The CDM and TDM regions are mainly formed by enterocytes, which shows, in all species, apical microvilli, basal plasma membrane infoldings with associated mitochondria and other organelles related to the secretory pathway. The microvilli of D. citri enterocytes form a complex network of lamellae, which are associated with one another through trabecullae. A luminal membrane complex can be observed associated with the microvillar tips of the enterocytes in all analysed species. The ones from the Auchenorrhyncha infraorder exhibit a membrane complex organization similar to the flame-like membrane complex. Such complex originates from constrictions of the microvillar apex which form membranes that project into the midgut lumen, delimitating restricted access compartments. Alternatively, the luminal membrane complex observed in D. citri is similar to the modified perimicrovillar membranes, previously described in aphids, which does not form closed compartments. The results presented in this work, along with available data in the literature, indicate that the organization of the digestive system in Hemipteran insects is more diverse than previously presumed, what makes the traditional view on the evolutionary origin of this complex questionable. The compartmentalization of the digestive process was apparently lost in the Paraneoptera ancestor, allied to the loss of the peritrophic membrane. However, the luminal membrane complex in the midgut lumen of Hemiptera and Thysanoptera would have evolved as an alternate mechanism promoting some degree of compartmentalization of the digestive process. The analysis of the transcriptome of B. xanthophis midgut allowed the identification of a series of organic, inorganic, and water transporters, leading to the proposal of an amino acid absorption model, based on a cotransport of H+ and amino acid. In this model, the active transport of amino acids occurs throughout the midgut and it is powered by an electrochemical gradient of protons, formed by a V-ATPase. This model is based on a different mechanism as the one proposed in the literature, which consists on a cotransport of potassium ions and amino acids. The transcriptome analysis also allowed the identification of sugar transporters along the midgut of B. xanthophis. Glucose is probably the main monosaccharide absorbed by the enterocytes, which are then converted into trehalose before being transported to the hemolymph. The results presented in this work still indicate the occurrence of α-glucosidase in the B. xanthophis midgut and show evidences of its association with the flame-like luminal membranes. However, the function of this enzyme in the digestive process of this species has yet to be discovered. The identification of digestive proteinases along the midgut of B. xanthophis, specially cathepsins and chymotrypsins, was surprising, considering that there are no proteins in xylem composition. Therefore, more studies are needed to verify the real function of those enzymes in the digestive process of this leafhopper. The molecular analysis performed in this work led to a better understanding of the digestive process in the xylem-sucker leafhopper B. xanthophis. Apparently, the detected functional differences among the midgut regions do not reflect on the enterocytes ultrastructure. The identification of proteinases and amino acid and sugar transporters in the FC suggests that this organ has a more general role in the digestive process besides the water transport and nutrient concentration

O presente trabalho apresenta um estudo detalhado da morfologia comparada do sistema digestivo de espécies representantes das ordens Hemiptera e Thysanoptera, numa perspectiva evolutiva, tendo como foco principal a análise da organização do complexo luminal de membranas existente no intestino médio dessas espécies, cuja presença no intestino médio constitui uma das características mais peculiares encontradas nestes grupos de insetos. As espécies das ordens Hemiptera e Thysanoptera compreendem o chamado grupo dos Condylognatha que reúne organismos com hábitos alimentares diversos, mas predominantemente sugadores. A grande maioria dos insetos apresenta, no interior do intestino médio, um estrutura luminal quitino-proteica denominada de membrana peritrófica, que, entre outras funções, compartimentaliza o processo digestivo. No entanto, nos membros do grupo Condylognatha esta estrutura está ausente, sendo substituída por um complexo membranoso bastante elaborado, associado às microvilosidades dos enterócitos, denominado de complexo luminal de membranas. Existem, basicamente, três tipos de complexos luminais descritos na literatura: as membranas perimicrovilares (MPM), as membranas perimicrovilares modificadas (MPMm) e as membranas luminais em forma de chama (MLC). As primeiras descrições deste complexo, do tipo MPM, foram feitas em hemípteros da subordem Heteroptera. No entanto, a presença deste tipo de complexo também foi notada em espécies de Thysanoptera, sugerindo uma origem evolutiva das MPM a partir de um ancestral comum dos Condylognatha, como uma adaptação ao hábito alimentar sugador de seiva. Estudos posteriores evidenciaram a ocorrência dos demais tipos de complexo em membros das outras subordens de Hemiptera, as MPMm em Sternorrhyncha e, mais recentemente, as membranas luminais em forma de chama MLC em Auchenorrhyncha, o que sugerem ser essa estrutura luminal muito mais diversa morfologicamente do que se acreditava inicialmente. Neste contexto, o foco principal deste trabalho foi realizar um estudo morfofuncional comparativo do sistema digestivo em representantes de Condylognatha, com o objetivo principal de se detectar os tipos de complexo luminal de membranas presentes e descrever detalhes de sua organização. Para isso, foram realizados estudos anatômicos, histológicos e ultraestruturais do sistema digestivo das espécies selecionadas, incluindo técnicas de microscopia eletrônica de transmissão, varredura e de fluorescência confocal. Assim, foram utilizadas três espécies de Hemiptera, subordem Auchenorrhyncha: Dalbulus maidis (Cicadellidae) e Mahanarva fimbriolata (Cercopidae) que pertencem à infraordem Cicadormorpha, e Peregrinus maidis (Delphacidae), da infraordem Fulgoromorpha. Além disso, foram estudados três representantes de Thysanoptera: Frankliniella schultzei (Thripidae), Franklinothrips vespiformes (Aeolothripidae), Leucothrips furcatus (Dendothripinae) e Liothrips sp. (Phlaeothripinae), sendo as três primeiras integrantes da subordem Terebrantia e a última, Tubulifera. Os resultados obtidos revelaram que as espécies M. fimbriolata e D. maidis possuem um complexo luminal muito semelhante ao do tipo MLC. Por sua vez, o complexo luminal membranas da espécie P. maidis revelou-se bastante diferente das outras espécies conhecidas de Auchenorrhyncha, que pode ser considerado uma modificação do modelo MLC. Neste caso, destaca-se a presença de uma camada membranosa eletrondensa aparentemente revestindo todo o complexo de membranas em sua face voltada para a luz do intestino. Diferenças significativas foram observadas na arquitetura do complexo luminal entre as espécies analisadas de Thysanoptera. Enquanto que nas espécies F. schultzei e F. vespiformes observa-se um complexo luminal de membranas similar ao tipo MLC, a espécie Liothrips sp. não apresenta um complexo luminal de membranas evidente, mas apenas algumas membranas curtas e raras associadas aos ápices das microvilosidades. Além disso, pequenas trabéculas são também observadas ao longo das microvilosidades dos enterócitos desta espécie, parecendo conectá-las lateralmente, talvez atuando numa função de reforço desta estrutura. Os resultados obtidos em Thysanoptera não apoiam a existência de um complexo luminal de membranas do tipo MPM como descrito na literatura. Assim, as informações levantadas neste trabalho dão suporte a um novo cenário para a evolução do sistema digestivo dos Hemiptera e Thysanoptera, no qual o ancestral comum não apresentaria uma organização do complexo luminal de membranas do tipo MPM, como correntemente descrito na literatura, mas sim do tipo MLC, sendo que o padrão MPM teria surgido nos Hemiptera apenas no grupo dos Heteroptera. A detecção de quitina no complexo luminal do intestino médio de D. maidis e M. fimbriolata por microscopia de fluorescência, utilizando-se um conjugado de WGA-fluoresceína, é um resultado surpreendente e não esperado uma vez ser a quitina, reconhecidamente, um componente importante da membrana peritrófica e não, a priori, de um complexo membranoso de natureza lipoproteica. Por outro lado, a não detecção de quitina em uma espécie de Heteroptera (Dysdercus peruvianis), que possui um complexo luminal de tipo MPM, usada como controle, mostra que a natureza do complexo luminal de membranas nos Condylognatha é muito mais complicada e elaborada do que se pensava inicialmente / This work presents a comprehensive study of the morphology of the digestive system of species of the orders Hemiptera and Thysanoptera, in an evolutionary approach. The main focus of the study is the analysis of the organization of the luminal complex of membranes in the midgut of these species whose presence constitutes one of the most peculiar characteristics found in the insects of the two orders. The species of the orders Hemiptera and Thysanoptera comprise the so-called group of Condylognatha, formed by insects showing variable feeding habits, but mostly sap-sucking ones. The vast majority of insects presents, in their midgut, a chitin-proteic luminal structure called peritrophic membrane which compartmentalizes the digestive process, among other functions. However, this structure is absent in the members of the group Condylognatha, which shows, instead, a very elaborated membranous complex associated to the microvilli of the enterocytes called luminal membrane complex. There are basically three types of luminal membrane complexes described in the literature: the perimicrovilar membranes (PMM), the modified perimicrovilar membranes (PMMm) and the flame-like membranes (FLM). The first descriptions of this complex, of the PMM type, were made in hemipteran insects of the suborder Heteroptera, but there are also some descriptions of PMM in species of the order Thysanoptera. These observations lead to the suggestion of an evolutionary origin of this type of complex from a common ancestral of Condylognatha as an adaptation to a sap-sucking habit. Further studies show the occurrence of the other types of luminal complex in members of the other hemipteran suborders - PMMm in Sternorrhyncha and, more recently, FLM in Auchenorrhyncha - which suggests that this luminal structure is much more diverse than previously expected. In this context, the main focus of this work was to perform a comparative morphofunctional study of the digestive system of species belonging to the group Condylognatha in order to detect and describe the different types of luminal membrane complex found in these insects. To achieve this goal, anatomical, histological and ultrastructural analysis were performed on the digestive system of selected species, using transmission and scanning electron microscopy, along with fluorescence confocal microscopy techniques. Three hemipteran species, belonging to the suborder Auchenorrhyncha, were studied: Dalbulus maidis (Cicadellidae) and Mahanarva fimbriolata (Cercopidae) of the infraorder Cicadormorpha, and Peregrinus maidis (Delphacidae), of the infraorder Fulgonomorpha. Three other species of the order Thysanoptera were also explored: Frankliniella schultzei (Thripidae), Franklinothrips vespiformes (Aeolothripidae) and Liothrips sp. (Phlaeothripinae), where the first two belong to the suborder Terebrantia and the last one to the suborder Tubulifera. The results presented in this work show that the species M. fimbriolata and D. maidis have a luminal membrane complex very similar to the FLM type. In contrast, the species P. maidis presented a very different organization when compared to the known species of the suborder Auchenorrhyncha, which should be considered to be a modification of the FLM model. In this case, a membranous electron-dense layer was detected, which apparently coats the entire membrane complex. Important differences were observed in the structure of the luminal complex among the analyzed thysanopteran species. In the midgut of F. schultzei and F. vespiformes there is a membrane complex similar to the FLM type. However, the species Liothrips sp. does not seem to present any type of membranous complex, displaying only a few short membranes associated to the microvilli. In addition to that, small structures, similar to trabeculae, can be observed along the microvilli of the enterocytes of this species, apparently connecting them laterally, reinforcing this structure. Thus, the results obtained in Thysanoptera do not support the existence of a PMM type of complex in this order, as described in the literature. Therefore, the data collected in this work present a new scenario to the evolution of the digestive system of Hemiptera and Thysanoptera, where the common ancestral would not display a membranous complex of the type PMM, but a FLM complex, with the PMM arising only in the Heteroptera group of Hemiptera. The detection of chitin in the luminal complex of D. maidis and M. fimbriolata by fluorescence microscopy, using a WGA-fluorescein conjugate, is an unexpected result since chitin is an important component of the peritrophic membrane and not, a priori, of a lipoproteic membranous complex. On the other hand, the negative detection of chitin in a heteropteran species (Dysdercus peruvianis), which has a PMM luminal complex and was used as control, indicate that the nature of the luminal membrane complex in the Condylognatha group is far more complicated and elaborate than previously thought

Este trabalho tenta colocar em evidência dois pontos dos mais atuais, tanto na área da Medicina como no Direito: a falha técnica e a correspondente reparação do dano por ela causado. Para o desenvolvimento deste trabalho, foram utilizados processos judiciais de primeira instância no período de 1995 a 2003 correlacionados às cirurgias do aparelho digestivo. Buscou-se definir os perfis dos médicos mais processados, que pagam maiores valores indenizatórios, bem como de outro lado os pacientes que mais processam e mais recebem valores indenizatórios, nos processos analisados. Os parâmetros, principais de análise foram as sentenças proferidas em primeira instância, em casos de condenação do médico e os respectivos valores envolvidos. Finalmente concluímos que: O perfil do paciente que mais processa médico: 41 a 60 anos, branco, feminino, católico com nível superior e detentor de justiça gratuita. O perfil do paciente recebe maiores valores médios indenizatórios: 41 a 60 anos, negro, feminino, católico, ensino fundamental e detentor de justiça gratuita. O perfil do médico que é mais processado por erro médico em Cirurgia do Aparelho Digestivo: 41 a 60 anos, branco, masculino, com título de especialista, formado entre 21 a 30 anos, no atendimento de convênio de plano de saúde, não possuindo seguro profissional, em atendimento de urgência/emergência e em equipe multidisciplinar. O perfil do médico que paga maiores valores indenizatórios em processos por erro médico em Cirurgia do Aparelho Digestivo: 21 a 40 anos, branco, masculino, residente, em atendimento em hospital público, não possuindo seguro profissional, em atendimento de urgência/emergência e em equipe multidisciplinar. / This works attempts to highlight two of the most current points, both in the fields of Medicine and Law: technical failure and the corresponding repair of the damage caused by it. For the development of this work, trial-court level proceedings in the period from 1995 to 2003 related to digestive system surgeries were used. The intention was to define the profile of the most prosecuted physicians, who pay the highest indemnification amounts, as well as, on the other hand, the patients that prosecute them most and receive indemnification amounts the most, in the reviewed proceedings. The main parameters for analysis were the judgments issued at trial-court level, in cases of conviction of the physician and the corresponding amounts involved. Finally, we concluded that: The profile of the patient who prosecutes the physician the most: 41 to 60 years old, Caucasian, female, catholic with higher education and entitled to free-of-charge justice. The profile of the patient who receives the highest average indemnity amount: 41 to 60 years old, black, female, catholic with primary education and entitled to free-of-charge justice. The profile of the physician who is prosecuted the most for medical error in a Surgery of the Digestive System: 41 to 60 years old, Caucasian, male, with a specialist degree, graduated between 21 and 30 years old, operating with health care insurance, and not holding professional insurance, in cases of urgency/emergency and in a multi-disciplinary team. The profile of the physician who pays the highest indemnity amounts in cases of medical error in a Surgery of the Digestive System: 21 to 40 years old, Caucasian, male, resident, working at a public hospital, not holding professional insurance, in cases of urgency/emergency and in a multi-disciplinary team.

Este trabalho aborda um estudo detalhado sobre o sistema digestivo da cigarrinha sugadora de xilema, Bucephalogonia xanthophis (Hemiptera: Cicadellidae), num enfoque morfofuncional. Sob o ponto de vista anatômico, o sistema digestivo é constituído, como na maioria dos insetos, por três regiões: o intestino anterior, o intestino médio e o intestino posterior. O intestino anterior é formado por um tubo simples, o esôfago, sem qualquer diferenciação anatômica. O intestino médio tem início na câmara de filtração (CF) e segue por um ventrículo com dois domínios, o cônico (VC) e o tubular (VT), retornando para a câmara de filtração. A CF é uma estrutura característica principalmente de insetos sugadores de xilema de uma infraordem da ordem Hemiptera, a Cicadomorpha, e consiste na aposição entre o intestino médio anterior com o posterior, além dos segmentos proximais dos quatro túbulos de Malpighi. A função da CF é permitir a passagem do excesso de água presente no xilema diretamente do intestino médio anterior para o posterior, concentrando, assim, seus nutrientes no ventrículo. O sistema digestivo continua por um intestino posterior, apresentando, antes de terminar no ânus, um reto dilatado, ao qual se associam as extremidades distais dos quatro túbulos de Malpighi, livres na hemocela. Análises por microscopia de luz revelaram que o intestino anterior é formado por um epitélio simples, composto por células pavimentosas revestidas por cutícula. O epitélio da CF é bastante fino e não há diferenças significativas entre as células do ventrículo e dos túbulos de Malpighi. O VC e o VT são compostos por células cúbicas, os enterócitos, e células regenerativas. A transição do intestino médio para o posterior, denominada de piloro, ocorre no interior da CF. Nesta região, inserem-se os quatro túbulos de Malpighi, órgãos do sistema excretor. O intestino posterior é formado por um epitélio pavimentoso, recoberto por uma camada de quitina. Observadas através da microscopia eletrônica de transmissão, as células da CF possuem sua superfície apical modificada em microvilosidades e a membrana plasmática basal com invaginações desenvolvidas associadas a mitocôndrias, além de um citoplasma bastante reduzido. Estas características sugerem que se trata de células especializadas no transporte de água e íons, provavelmente a partir do intestino médio para os túbulos de Malpighi. O VC e o VT são formados por enterócitos e células regenerativas. Estas últimas são raras, estão localizadas na base do epitélio, sem formar agrupamentos (ninhos), e possuem características típicas de células indiferenciadas, com núcleos grandes e poucas organelas. Os enterócitos, as células mais importantes no processo digestivo, possuem sua membrana plasmática apical modificada em microvilosidades e invaginações da membrana plasmática basal, menos desenvolvidas do que as das células do CF. No que diz respeito à atividade de secreção observada nos enterócitos de B. xanthophis, verifica-se a existência de grandes quantidades de retículo endoplasmático granular, diversas áreas de Golgi e algumas vesículas de secreção concentradas no citoplasma apical. Parece haver apenas um mecanismo de secreção, o merócrino, ao longo de todo o ventrículo. No lúmen do ventrículo de B. xanthophis, não foi constatada a presença de uma membrana peritrófica, comum em insetos de diversas ordens, exceto Hemiptera e Thysanoptera. Ao invés disso, nas regiões do VC e nos dois terços iniciais do VT (o ventrículo tubular anterior VTA e o médio VTM), se observa um complexo sistema luminal de membranas associado às microvilosidades dos enterócitos, formando padrões em forma de chama, sendo denominados de membranas luminais em forma de chama (MLC). Este sistema se origina, aparentemente, a partir de constrições das extremidades das microvilosidades que formando membranas que avançam pelo lúmen ventricular, mantendo-se associadas às microvilosidades. Originalmente, acreditava-se que os insetos das ordens Hemiptera e Thysanoptera possuíam um sistema luminal de membranas associadas às microvilosidades, denominado de membranas perimicrovilares (MPM). Este modelo foi considerado como padrão para a ordem Hemiptera, sendo descrito, principalmente, em espécies da subordem Heteroptera. Estudos posteriores com o afídeo Acyrthosiphon pisum, revelaram um sistema luminal de membranas diferente das MPM, que foi denominado, na ocasião, de membranas perimicrovilares modificadas (MPMm). A ocorrência de um novo tipo de organização deste sistema luminal de membranas, as MLC, evidencia uma possível diversidade de tipos de organização destas membranas em Hemiptera. Acredita-se, com base nas características destes sistemas luminais de membranas, que as MLC sejam equivalentes às MPM e às MPMm. Preparações deste material utilizando o lantânio como traçador, revelaram que o MLC forma, aparentemente, compartimentos fechados. A descoberta de um terceiro sistema de organização de membranas em B. xanthophis, que difere significativamente das MPM e das MPMm, abre uma nova discussão sobre o panorama atual da morfofisiologia digestiva da ordem Hemiptera, que pode fornecer subsídios importantes no sentido de melhor compreender as relações filogenéticas entre os grupos de espécies que compõem esta ordem. Com base nos resultados obtidos neste e em outros trabalhos sobre a organização do sistema digestivo dos Hemiptera, fica evidente a importância de estudos mais abrangentes, sob este ponto de vista, envolvendo outras espécies integrantes das diferentes subordens de Hemiptera. Do mesmo modo, um maior detalhamento das funções exercidas por estes sistemas luminais de membrana mostra-se de extrema importância para uma melhor compreensão dos processos digestivos que ocorrem nestes insetos. / This work presents a detailed study concerning the digestive system of the xylem-sucking sharpshooter Bucephalogonia xanthophis (Hemiptera: Cicadellidae), in a morphofunctional approach. In the majority of insects, three anatomical regions constitute the digestive system: the foregut, the midgut, and the hindgut. A simple tube, the esophagus, without any anatomical differentiation, forms the foregut. The midgut starts in the filter chamber (FC) and proceeds in a ventriculum with two domains, the conical one (CV) and the tubular one (TV), returning to the filter chamber. The FC is a structure normally found in the xylem-sucking insects of the infraorder Cicadomorpha. It is formed by the apposition between the fore-midgut and the hind-midgut, along with the proximal segments of the four Malpighian tubules. The function of the FC is to allow the passage of the excess of water in the xylem directly from the fore-midgut to the hind-midgut, concentrating its nutrients in the mid-midgut. The digestive system proceeds through a hindgut, presenting, before ending in the anus, a dilated rectum, to which the distal ends of the Malpighian tubules associate. Light microscopy analysis revealed that the midgut is formed by a simple epithelium, composed of flattened cells covered by a cuticle. The epithelium of the FC is very thin and there are no significant differences between ventricular cells and Malpighian tubule cells. Cubic enterocytes and regenerative cells compose the CV and TV. The transition between the midgut and the hindgut occurs inside the FC and is called pylorus, where four Malpighian tubules insert, presenting excretory function. The hindgut is made up by flattened cells, covered by a layer of chithin. Observed by transmission electron microscopy, the FC cells have a reduced cytoplasm with their apical surface modified into microvilli, whereas the basal plasma membrane presents several invaginations associated with mitochondria. These features suggest that these cells are specialized in the transport of water and ions, probably from the midgut to the Malpighian tubules. The CV and TV are formed by enterocytes and regenerative cells. The latter are very rare and are localized at the base of the epithelium, without forming clusters (nests or nidi), and have typical undifferentiated cell features, such as large nuclei and few organelles. The enterocyte, the most important cell type in the digestive process, have their apical plasma membrane modified into microvilli and basal plasma membrane showing infoldings, less developed than the FC cells. The B. xanthophis enterocytes exhibit signs of secretory activity, with large amounts of rough endoplasmic reticulum, many Golgi areas and some secretory vesicles mainly clustered in the apical cytoplasm. This secretory vesicles seems to be eliminated by a merocrine secretion process throughout the ventriculum. In the ventricular lumen of B. xanthophis, a peritrophic membrane, observed in most insects other than Hemiptera and Thysanoptera, is note presente. Instead, in the CV and the two initial thirds of the TV (the anterior tubular ventriculum ATV and the medium tubular ventriculum MTV), a complex luminal membrane system associated with the enterocyte microvilli can be detected, forming flame-like patterns, named flame-like luminal membranes (FLM). This system originates, apparently, from constrictions of the microvillar tips, which form membranes that projects into the ventricular lumen, keeping their association with the microvilli. Formerly, it was assumed that Hemiptera and Thysanoptera insects have a luminal membrane system associated with the microvilli, called permicrovillar membranes (PMM). This membrane system was considered as a structure present in the whole order Hemiptera, mainly in Heteroptera suborder species. Posterior studies with the aphid Acyrthosiphon pisum, revealed the occurrence of a luminal membrane system very different from the PMM model. This system was called modified perimicrovillar membranes (MPM). The occurrence of a new kind of luminal membranes system, the FLM, suggests the existence of a not yet described diversity in these luminal membranes organizations in Hemiptera. Thus, it is assumed that FLM, PMM and MPM are probably homologous luminal membranes systems with similar function roles. The use of lanthanum as a tracer revealed that the FLM forms, apparently, closed compartments, as postulated to PMM. The discovery of a third type of luminal membrane organization system in B. xanthophis, which differs significantly from PMM and MPM, opens a new discussion concerning the actual origin and function of these complex luminal membranes system in the digestive system of Hemiptera. More detailed studies of the occurrence of different types of luminal membranes systems in Hemiptera species, may improve the knowledge about the phylogenetic relationships among the several groups, which constitutes this order. Furthermore, the actual role of the luminal membranes system in the digestive process has to be investigated in detail.

A carne do bagre pintado neotropical é muito apreciada e apresenta grande potencial comercial no mercado de peixe brasileiro. Embora o conhecimento do desenvolvimento inicial do trato digestório de larvas de pintado seja muito importante para a estratégia de produção da criação de peixes, há pouca informação sobre este assunto. Neste trabalho estudamos as modificações estruturais e funcionais do trato digestório do pintado entre o 3º e o 16º dia após a eclosão. As lâminas histológicas foram coradas para estudar a morfologia e a secreção ácida e neutra do trato digestório do pintado. O alimento foi encontrado no intestino a partir do 3º após a eclosão. As células que secretam muco ácido e neutro foram observadas no esôfago e seu número aumentou com idade. O estômago estava revestido com epitélio de secreção ácida e neutra. Do 11º dia após a eclosão para frente, glândulas gástricas tubulares com células oxintopépticas granular formam identificadas na mucosa do estômago. Neste momento a fração neutra do muco epitelial aumentou e sua fração ácida foi reduzida. No 13º após a eclosão o muco foi exclusivamente neutro. O segmento proximal do intestino no 3º dia após eclosão da larva estava anteriormente dilatado, formando a bolsa intestinal. A bolsa é revestida por enterócitos e células caliciformes que produzem muco ácido e neutro. O tamanho da bolsa intestinal diminui com o tempo e é grandemente reduzida no 16º DPE. Notou-se que a partir do 11º DPE o segmento intestinal distal é enovelado e a mucosa formam várias pregas revestidas de enterócitos e células caliciformes que secretam muco neutro ou ácido. Um curto segmento retal foi observado. A larva de pintado ingere alimento no início do 3º DPE, mas seu trato digestório somente parece estar completamente preparado para eficientemente processar o alimento no estômago, após o surgimento das glândulas gástricas no 13º DPE, quando este órgão desenvolve as características do estômago químico / The meat of the neotropical spotted catfish ("surubim pintado", Pseudoplatystoma coruscans) is very appreciated and shows great commercial potential in Brazilian fish market. Although the initial development of the pintado larvae digestive system is very important to the production strategies of fish farms, there is little information about this subject. Here, we studied the structural and functional modifications of the digestive tract of pintado Pseudoplatystoma coruscans larvae between 3rd and 16rd days after hatching (DAH). Histological slides of larvae were stained by toluidine blue, Alcian blue and Schiff reactive-periodic acid (PAS) stains in order to study the morphology and the acidic and neutral mucins secretion, respectively. Food was found in the gut after 3rd DAH. Mucous cells secreting acidic and neutral mucins were observed in the esophagus and their number increased with age. The stomach was lined by a mucus secreting epithelium with acidic and neutral mucins. From 11 DAH onward, tubular gastric glands with granular oxyntopeptic cells were identified in the stomach mucosa. At this time the neutral fraction of the epithelial mucins increased and their acidic fraction was reduced. At 13 DAH the mucins were exclusively neutral. The proximal segment of 3rd DAH larvae intestine forms an anterior swelling, the intestinal bulb. It is lined by enterocytes and goblet cells that produces acidic and neutral mucins. The size of the intestinal bulb decreases with time and is greatly reduced by the 16rd DAH. The distal intestinal segment is coiled and its mucosa forms several folds lined by enterocytes and goblet cells which secretes either neutral or acidic mucins. A short rectal segment is observed. The pintado larvae ingest food as early as the 3rd DAH, but its digestive system only appears to be fully prepared to efficiently process the food in the stomach after the gastric glands arise at the 13rd DAH, when this organ develops the histological features of a chemical stomach

MUCDHL est une cadhérine atypique encore peu étudiée. Les données obtenues à ce jour suggèrent que ce gène joue un rôle suppresseur de tumeurs dans l’intestin, notamment par son interaction et son effet inhibiteur sur la β-caténine, et que son expression est fréquemment diminuée dans les cancers colorectaux (CCR). Parallèlement à cette fonction anti-oncogénique, d’autres travaux ont suggéré que MUCDHL est impliquée dans la structuration de la bordure en brosse (BB) intestinale, en contribuant à la formation d’un complexe d’interaction inter-microvillositaire. Notre objectif était de déterminer la fonction et le mode d’action de MUCDHL dans le système digestif. Par la caractérisation détaillée de l’interaction avec la β-caténine, nous avons montré que le mode d’action anti-oncogénique de MUCDHL est plus complexe qu’une simple séquestration membranaire de la β-caténine. De plus, nous avons confirmé le rôle suppresseur de tumeurs de MUCDHL sur une cohorte importante de CCR humains et montré pour la première fois que sa perte amplifie la tumorigenèse intestinale dans un model murin. Par ailleurs, l’étude phénotypique des souris Mucdhl-/- a démontré son importance dans l’homéostasie du système digestif. En effet, l’absence de MUCDHL cause des altérations morphologiques de la BB intestinale, mais également de nombreuses perturbations métaboliques. Ces travaux apportent donc des informations inédites sur la fonction et le mode d’action de MUCDHL dans le système digestif. / MUCDHL is an atypical cadherin that has been poorly studied. The data obtained so far suggest that this gene has tumor suppressive activity in the intestine, namely by its interaction and inhibitory effect on β-catenin, and that its expression is frequently decreased in colorectal cancers (CCR). In parallel to this anti-oncogenic function, other studies have suggested that MUCDHL is involved in the assembly of the intestinal brush border (BB), by contributing to the formation of an inter-microvilli interaction complex. Our objective was to determine the function and mode of action of MUCDHL in the digestive system, Through a detailed characterization of the interaction with β-catenin, we showed that the anti-oncogenic mode of action of MUCDHL is more complex than a simple membrane sequestration of β-catenin. In addition, we confirmed the tumor suppressive function of MUCDHL on a very large cohort of human CCR and showed for the first time that its loss amplifies intestinal tumorigenesis in a murine model. Moreover, the study of the phenotype of Mucdhl-/- mice allowed us to demonstrate the importance of MUCDHL in the homeostasis of the digestive system. Indeed, the absence of MUCDHL causes morphological alterations of the intestinal BB, but also numerous metabolic disturbances. Thus, this work provides new information on the function and mode of action of MUCDHL in the digestive system.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet, 2005. / Härtill 4 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv., 2003. / Härtill 5 uppsatser.