Introdução: A associação entre a presença de anticorpo anti-HLA doador específico (DSA), em pacientes com prova cruzada negativa por citotoxicidade dependente de complemento (CDC), e a ocorrência de episódios de rejeição mediada por anticorpos (RMA) e menor sobrevida do enxerto já foi demonstrada por diversos autores. Entretanto,estimar a relevância clínica da presença desses anticorpos, em um determinado receptor, é um grande desafio e portanto novas estratégias de monitorização imunológicas são necessárias. Objetivo: O objetivo desse estudo foi monitorar a presença de DSA, bem como a variação dos seus títulos durante o primeiro ano após o transplante renal e correlacionar com episódios de rejeição aguda e função do enxerto ao final desse período. Metodologia: Foram analisados 389 soros de 71 pacientes incluídos no estudo. A pesquisa de DSA foi realizada utilizando os testes LABScreen single antigenbeads nas amostras correspondentes aos tempos: pré-transplante, 14, 30, 90, 180 e 365 dias após o transplante. Episódios de rejeição aguda comprovados por biópsia foram analisados de acordo com a classificação de Banff 2007. A taxa de filtração glomerular (TFG) ao final do primeiro ano foi estimada utilizando a fórmula Modificationof Diet in Renal Disease (MDRD). Os pacientes foram inicialmente separados em 3 grupos de diferentes riscos imunológicos (pré-transplante): A) DSA-, B) DSA+ com MFI >1000 e < 5000 e C) DSA+ com MFI > 5000. Num segundo momento, foram novamente agrupados de acordo com o perfil de mudança nos valores de MFI (intensidade de fluorescência média) ao longo do primeiro ano. Resultados: DSA estavam presentes pré-transplante em 15 pacientes. RMA foi mais frequente no grupo C (p = 0,02). De acordo com a variação dos títulos de DSA pós-transplante os pacientes foram novamente agrupados: grupo I) permaneceu DSA- durante todo acompanhamento = 50 pacientes, II) diminuiu ou manteve títulos de DSA em relação ao tempo zero = 13 pacientes e III) aumentou títulos em relação ao tempo zero = 8 pacientes (6 foram DSA de novo). Três pacientes dos grupos I e um paciente do grupo II apresentaram episódios de rejeição aguda celular. Não foi observada oscilação significativa nos títulos de anticorpos durante esses eventos. Nenhum paciente desse grupo apresentou episódio de RMA. Episódio de RMA ocorreu em dois pacientes do grupo III. Em ambos os pacientes foi detectado aumento significativo nos valores de MFI dos DSA em relação ao tempo zero. Não foi observada diferença significativa na TFG entre os grupos analisados nesse estudo. Entretanto, observou-se uma diferença estatisticamente significativa na TFG entre os pacientes que apresentaram episódio de rejeição aguda em relação aos que não tiveram, sendo menor nos primeiros (p = 0,04). Conclusão: A monitorização prospectiva dos anticorpos pode ajudar a identificar pacientes em maior risco para ocorrência de RMA e o aumento nos valores de MFI DSA deve ser interpretado como um sinal de alerta, sobretudo em pacientes previamente sensibilizados. / Introdução: A associação entre a presença de anticorpo anti-HLA doador específico (DSA), em pacientes com prova cruzada negativa por citotoxicidade dependente de complemento (CDC), e a ocorrência de episódios de rejeição mediada por anticorpos (RMA) e menor sobrevida do enxerto já foi demonstrada por diversos autores. Entretanto,estimar a relevância clínica da presença desses anticorpos, em um determinado receptor, é um grande desafio e portanto novas estratégias de monitorização imunológicas são necessárias. Objetivo: O objetivo desse estudo foi monitorar a presença de DSA, bem como a variação dos seus títulos durante o primeiro ano após o transplante renal e correlacionar com episódios de rejeição aguda e função do enxerto ao final desse período. Metodologia: Foram analisados 389 soros de 71 pacientes incluídos no estudo. A pesquisa de DSA foi realizada utilizando os testes LABScreen single antigenbeads nas amostras correspondentes aos tempos: pré-transplante, 14, 30, 90, 180 e 365 dias após o transplante. Episódios de rejeição aguda comprovados por biópsia foram analisados de acordo com a classificação de Banff 2007. A taxa de filtração glomerular (TFG) ao final do primeiro ano foi estimada utilizando a fórmula Modificationof Diet in Renal Disease (MDRD). Os pacientes foram inicialmente separados em 3 grupos de diferentes riscos imunológicos (pré-transplante): A) DSA-, B) DSA+ com MFI >1000 e < 5000 e C) DSA+ com MFI > 5000. Num segundo momento, foram novamente agrupados de acordo com o perfil de mudança nos valores de MFI (intensidade de fluorescência média) ao longo do primeiro ano. Resultados: DSA estavam presentes pré-transplante em 15 pacientes. RMA foi mais frequente no grupo C (p = 0,02). De acordo com a variação dos títulos de DSA pós-transplante os pacientes foram novamente agrupados: grupo I) permaneceu DSA- durante todo acompanhamento = 50 pacientes, II) diminuiu ou manteve títulos de DSA em relação ao tempo zero = 13 pacientes e III) aumentou títulos em relação ao tempo zero = 8 pacientes (6 foram DSA de novo). Três pacientes dos grupos I e um paciente do grupo II apresentaram episódios de rejeição aguda celular. Não foi observada oscilação significativa nos títulos de anticorpos durante esses eventos. Nenhum paciente desse grupo apresentou episódio de RMA. Episódio de RMA ocorreu em dois pacientes do grupo III. Em ambos os pacientes foi detectado aumento significativo nos valores de MFI dos DSA em relação ao tempo zero. Não foi observada diferença significativa na TFG entre os grupos analisados nesse estudo. Entretanto, observou-se uma diferença estatisticamente significativa na TFG entre os pacientes que apresentaram episódio de rejeição aguda em relação aos que não tiveram, sendo menor nos primeiros (p = 0,04). Conclusão: A monitorização prospectiva dos anticorpos pode ajudar a identificar pacientes em maior risco para ocorrência de RMA e o aumento nos valores de MFI DSA deve ser interpretado como um sinal de alerta, sobretudo em pacientes previamente sensibilizados.

Introdução: A associação entre a presença de anticorpo anti-HLA doador específico (DSA), em pacientes com prova cruzada negativa por citotoxicidade dependente de complemento (CDC), e a ocorrência de episódios de rejeição mediada por anticorpos (RMA) e menor sobrevida do enxerto já foi demonstrada por diversos autores. Entretanto,estimar a relevância clínica da presença desses anticorpos, em um determinado receptor, é um grande desafio e portanto novas estratégias de monitorização imunológicas são necessárias. Objetivo: O objetivo desse estudo foi monitorar a presença de DSA, bem como a variação dos seus títulos durante o primeiro ano após o transplante renal e correlacionar com episódios de rejeição aguda e função do enxerto ao final desse período. Metodologia: Foram analisados 389 soros de 71 pacientes incluídos no estudo. A pesquisa de DSA foi realizada utilizando os testes LABScreen single antigenbeads nas amostras correspondentes aos tempos: pré-transplante, 14, 30, 90, 180 e 365 dias após o transplante. Episódios de rejeição aguda comprovados por biópsia foram analisados de acordo com a classificação de Banff 2007. A taxa de filtração glomerular (TFG) ao final do primeiro ano foi estimada utilizando a fórmula Modificationof Diet in Renal Disease (MDRD). Os pacientes foram inicialmente separados em 3 grupos de diferentes riscos imunológicos (pré-transplante): A) DSA-, B) DSA+ com MFI >1000 e < 5000 e C) DSA+ com MFI > 5000. Num segundo momento, foram novamente agrupados de acordo com o perfil de mudança nos valores de MFI (intensidade de fluorescência média) ao longo do primeiro ano. Resultados: DSA estavam presentes pré-transplante em 15 pacientes. RMA foi mais frequente no grupo C (p = 0,02). De acordo com a variação dos títulos de DSA pós-transplante os pacientes foram novamente agrupados: grupo I) permaneceu DSA- durante todo acompanhamento = 50 pacientes, II) diminuiu ou manteve títulos de DSA em relação ao tempo zero = 13 pacientes e III) aumentou títulos em relação ao tempo zero = 8 pacientes (6 foram DSA de novo). Três pacientes dos grupos I e um paciente do grupo II apresentaram episódios de rejeição aguda celular. Não foi observada oscilação significativa nos títulos de anticorpos durante esses eventos. Nenhum paciente desse grupo apresentou episódio de RMA. Episódio de RMA ocorreu em dois pacientes do grupo III. Em ambos os pacientes foi detectado aumento significativo nos valores de MFI dos DSA em relação ao tempo zero. Não foi observada diferença significativa na TFG entre os grupos analisados nesse estudo. Entretanto, observou-se uma diferença estatisticamente significativa na TFG entre os pacientes que apresentaram episódio de rejeição aguda em relação aos que não tiveram, sendo menor nos primeiros (p = 0,04). Conclusão: A monitorização prospectiva dos anticorpos pode ajudar a identificar pacientes em maior risco para ocorrência de RMA e o aumento nos valores de MFI DSA deve ser interpretado como um sinal de alerta, sobretudo em pacientes previamente sensibilizados. / Introdução: A associação entre a presença de anticorpo anti-HLA doador específico (DSA), em pacientes com prova cruzada negativa por citotoxicidade dependente de complemento (CDC), e a ocorrência de episódios de rejeição mediada por anticorpos (RMA) e menor sobrevida do enxerto já foi demonstrada por diversos autores. Entretanto,estimar a relevância clínica da presença desses anticorpos, em um determinado receptor, é um grande desafio e portanto novas estratégias de monitorização imunológicas são necessárias. Objetivo: O objetivo desse estudo foi monitorar a presença de DSA, bem como a variação dos seus títulos durante o primeiro ano após o transplante renal e correlacionar com episódios de rejeição aguda e função do enxerto ao final desse período. Metodologia: Foram analisados 389 soros de 71 pacientes incluídos no estudo. A pesquisa de DSA foi realizada utilizando os testes LABScreen single antigenbeads nas amostras correspondentes aos tempos: pré-transplante, 14, 30, 90, 180 e 365 dias após o transplante. Episódios de rejeição aguda comprovados por biópsia foram analisados de acordo com a classificação de Banff 2007. A taxa de filtração glomerular (TFG) ao final do primeiro ano foi estimada utilizando a fórmula Modificationof Diet in Renal Disease (MDRD). Os pacientes foram inicialmente separados em 3 grupos de diferentes riscos imunológicos (pré-transplante): A) DSA-, B) DSA+ com MFI >1000 e < 5000 e C) DSA+ com MFI > 5000. Num segundo momento, foram novamente agrupados de acordo com o perfil de mudança nos valores de MFI (intensidade de fluorescência média) ao longo do primeiro ano. Resultados: DSA estavam presentes pré-transplante em 15 pacientes. RMA foi mais frequente no grupo C (p = 0,02). De acordo com a variação dos títulos de DSA pós-transplante os pacientes foram novamente agrupados: grupo I) permaneceu DSA- durante todo acompanhamento = 50 pacientes, II) diminuiu ou manteve títulos de DSA em relação ao tempo zero = 13 pacientes e III) aumentou títulos em relação ao tempo zero = 8 pacientes (6 foram DSA de novo). Três pacientes dos grupos I e um paciente do grupo II apresentaram episódios de rejeição aguda celular. Não foi observada oscilação significativa nos títulos de anticorpos durante esses eventos. Nenhum paciente desse grupo apresentou episódio de RMA. Episódio de RMA ocorreu em dois pacientes do grupo III. Em ambos os pacientes foi detectado aumento significativo nos valores de MFI dos DSA em relação ao tempo zero. Não foi observada diferença significativa na TFG entre os grupos analisados nesse estudo. Entretanto, observou-se uma diferença estatisticamente significativa na TFG entre os pacientes que apresentaram episódio de rejeição aguda em relação aos que não tiveram, sendo menor nos primeiros (p = 0,04). Conclusão: A monitorização prospectiva dos anticorpos pode ajudar a identificar pacientes em maior risco para ocorrência de RMA e o aumento nos valores de MFI DSA deve ser interpretado como um sinal de alerta, sobretudo em pacientes previamente sensibilizados.

The use of hemocomponents from blood group "O" in transfusions among different blood groups may lead to transfusion reactions if the anti-A and anti-B agglutinins, present in the donor s serum / plasma, show high titers scores equal to or higher than 100. The transfusion reactions most reported with antibodies of high titers are caused by platelet concentrate, due to the presence of plasma in this hemocomponent. Considering the small number of studies on the anti-A and anti-B hemolysins and the importance of these antibodies in transfusion practice, the goal of this work was to verify the frequency of these hemolysins and their association to genre and Rh factor in 500 serum samples of type "O" registered donors at the Blood Center of Cruz Alta, RS. The results showed that the frequency of donor blood group "O" considered dangerous was 11.6% (58), and non-dangerous 88.4% (442). There was a predominance between the dangerous 50% (29) to reactive anti-A hemolysin , 37.9% (22) anti-B and 12.1% (7) for agglutinins anti-A and anti-B. Sampling of donors was not homogeneous regarding sex and not the type of blood factor, prevailing men 65% (325), Rh positive. There was no correlation between antibody screening Irregulars (PAI) with regular search antibody anti-A and anti-B. Also there was no assocation betwiin the prevalence in the variables gender, blood Rh factor anti anti-A and anti-B. It was noticed that the anti-A shows reaction under great in comparison with the anti-B thus both react in 100% of cases to1/16 however, the anti-Adecreas its percentage from1/128 whereas anti-B 1/32. The age prevalence of dangerous donors for anti-A was between 33 to 46 years, anti-B from 16 to 25 years and for both antibodies between 25 and 33 years. The results of this research can be used to measure the prevalence of these hemolysins and prevent risks of incompatible transfusion events, since in transfusion practice there is greater availability of group "O" donors and these are not classified as risk-donor "O" yet. Thus, in the search for excellence in transfusion practice and, above all, effectivenessly, it is essential to standardize the Regular Antibodies Research. / O uso de hemocomponentes do grupo sanguíneo O em transfusões nãoisogrupo pode acarretar reações transfusionais, caso as aglutininas anti-A e anti-B presentes no soro/plasma do doador, apresentem títulos elevados com escore igual ou superior a 100. As reações transfusionais mais relatadas com anticorpos de altos títulos são ocasionadas por concentrado de plaquetas, devido à presença de plasma neste hemocomponente. Considerando a pequena quantidade de estudos sobre as hemolisinas anti-A e anti-B e a importância desses anticorpos na prática transfusional, o objetivo deste trabalho foi verificar a freqüência dessas hemolisinas e a associação a gênero e fator Rh em 500 amostras de soros dos doadores tipo O cadastrados no Hemocentro de Cruz Alta,RS. Os resultados mostraram que a freqüência dos doadores de sangue do grupo O considerados perigosos foi de 11,6% (58), e de não-perigosos 88,4% (442). Constatou-se uma predominância entre os perigosos, de 50% (29) reativos para hemolisina anti-A, 37,9% (22) anti-B e 12,1% (7) para aglutininas anti-A e anti-B. A amostragem dos doadores não foi homogênea quanto ao sexo e nem quanto ao tipo de fator sanguíneo, prevalecendo homens 65% (325), Rh positivo 80,4% (402). Não houve correlação entre a Pesquisa de Anticorpos Irregulares (PAI) com a Pesquisa dos Anticorpos Regulares anti-A e anti-B. Também não existiu prevalência na associação entre as variáveis gênero, fator sanguíneo Rh e anticorpo anti-A e anti-B. Percebeu-se que o anticorpo anti-A apresenta título maior de reação em comparação com o anti-B pois, ambos reagem em 100% dos casos até 1/16 porém, anti-A diminui seu percentual de reação a partir de 1/128 enquanto que anti-B em 1/32. A faixa etária de prevalência de doadores perigosos para anti-A foi entre 33 a 46 anos, anti-B entre 16 a 25 anos e para ambos anticorpos entre 25 e 33 anos. Os resultados desta pesquisa podem servir para mensurar a prevalência destas hemolisinas e prevenir riscos de episódios transfusionais incompatíveis, visto que na prática transfusional ocorre maior disponibilidade de doadores do grupo O e estes ainda não são classificados como doadores O perigosos. Assim, na busca pela prática transfusional com excelência e, sobretudo, com eficácia, torna-se imprescindível a padronização da Pesquisa de Anticorpos Regulares.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JetheNOF_DISSERT.pdf: 2279868 bytes, checksum: 4d99a8a04626302078cb68e1b2a75887 (MD5) Previous issue date: 2013-02-01 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Leishmania infantum and Trypanosoma cruzi are trypanosomatids of medical importance and are, respectively, the etiologic agents of visceral leishmaniasis (VL) and Chagas disease (CD) in Brazil. People infected with L. infantum or T. cruzi may develop asymptomatically, enabling the transmission of pathogens through blood transfusion and / or organs. The assessment of the infection by T. cruzi is included among the tests performed for screening blood donors in Brazil, however, there is no availability of tests for Leishmania. Serological tests for T. cruzi are very sensitive, but not specific, and may have cross-reactions with other microorganisms. Thus, the aim of this study was to determine the prevalence of Leishmania infection in blood donors and assess whether the serological test for T. cruzi detect L. infantum. Among the 300 blood samples from donors, discarded in 2011, 61 were T. cruzi positive, 203 were from donors with other infections and 36 were from handbags with low blood volume, but without infection. We also assessed 144 samples from donors without infections and able to donate blood, totaling 444 subjects. DNA was extracted from blood samples of all to perform quantitative PCR (qPCR) to detect Leishmania DNA. The buffy coat obtained from all samples was grown in Schneider medium supplemented and NNN. All samples were evaluated for the presence of anti-Leishmania antibody. The serological results indicate a percentage of 22% of Leishmania infection in blood samples obtained from discarded bags. A total of 60% of samples positive in ELISA for T. cruzi were negative by IFI, used as confirmatory test, ie 60% false positive for Chagas. Among these samples false positive for Chagas, 72% were positive by ELISA for Leishmania characterizing the occurrence of cross reaction between serologic assays. Of the 300 cultures performed, 18 grew parasites that were typed by qPCR and specific isoenzymes, found the species Leishmania infantum crops. Among the 18 cultures, 4 were purged from scholarships for low volume and all negative serology blood bank, thus demonstrating that there is a real risk of Leishmania transmission via transfusion. It is concluded that in an area endemic for leishmaniasis in Brazil, serological diagnosis performed to detect infection by T. cruzi among blood donors can identify infection by L. infantum and although cause false positive for Chagas, this cross-reactivity reduces the risk of Leishmania infection via blood transfusion, since tests are not applied specific detection of the parasite. In this way, there remains the need to discuss the implementation of a specific serological screening test for Leishmania in endemic countries such as Brazil / Leishmania infantum e Trypanosoma cruzi s?o tripanossomat?deos de import?ncia m?dica e s?o, respectivamente, os agentes etiol?gicos da leishmaniose visceral (LV) e da doen?a de Chagas (DC) no Brasil. Pessoas infectadas por L. infantum ou por T. cruzi podem evoluir de forma assintom?tica, possibilitando a transmiss?o destes pat?genos atrav?s de transfus?o sangu?nea e/ou ?rg?os. A avalia??o da infec??o por T. cruzi est? contemplada entre os exames realizados para triagem de doadores no Brasil, no entanto, n?o h? disponibilidade de exames para Leishmania. Os testes sorol?gicos para T. cruzi s?o muito sens?veis, mas n?o espec?ficos, podendo apresentar rea??es cruzadas com outros microorganismos. Desta forma, o objetivo desse estudo foi determinar a preval?ncia da infec??o por Leishmania em doadores de sangue e avaliar se os teste sorol?gicos para T. cruzi detectam L. infantum. Dentre as 300 amostras de sangue de doadores, descartadas em 2011, 61 eram T. cruzi positivas, 203 eram de doadores com outras infec??es e 36 eram oriundas de bolsas com baixo volume de sangue, mas sem infec??o. Foram tamb?m avaliadas 144 amostras de doadores sem infec??es e aptos a doarem sangue, totalizando 444 volunt?rios. DNA foi extra?do do sangue de todas as amostras para realizar PCR quantitativa (qPCR) a fim de detectar DNA de Leishmania. O creme leucocit?rio obtido de todas as amostras foi cultivado em meio Schneider e NNN suplementado. Todas as amostras foram avaliadas quanto a presen?a de anticorpo anti-Leishmania. Os resultados sorol?gicos apontam um percentual de 22% de infec??o por Leishmania nas amostras de sangue obtidas das bolsas descartadas. Um total de 60% das amostras positivas no ELISA para T. cruzi foram negativas na RIFI, teste usado como confirmat?rio, ou seja, 60% falso positivos para Chagas. Dentre essas amostras falso positivas para Chagas, 72% foram positivas no ELISA para Leishmania caracterizando a ocorr?ncia de rea??o cruzada entre os ensaios sorol?gicos. Do total de 300 culturas realizadas, 18 cresceram parasitas que foram tipados por isoenzimas e qPCR espec?fica, sendo encontrada a esp?cie Leishmania infantum nas culturas. Dentre as 18 culturas, 4 foram provenientes de bolsas expurgadas por baixo volume e negativas em todas as sorologias do banco de sangue, demonstrando assim que h? um risco real de transmiss?o de Leishmania por via transfusional. Conclui-se que em ?rea end?mica para leishmanioses no Brasil, diagn?sticos sorol?gicos realizados para detectar infec??o por T. cruzi em doadores de sangue podem identificar a infec??o por L. infantum e, apesar de ocasionar resultados falso positivos para Chagas, essa reatividade cruzada reduz o risco de infec??o por Leishmania via transfus?o sangu?nea, visto que n?o s?o aplicados testes espec?ficos detec??o desse parasita. Desde modo, persiste a necessidade de se discutir a implementa??o de um teste de triagem sorol?gica espec?fico para Leishmania em pa?ses end?micos como o Brasil

Notícias de escassez no mundo inteiro, dada a crescente demanda e o rigor na triagem clínica, levaram a necessidade de investigar métodos que mensurem o comportamento de retorno do doador de sangue, sobretudo o indivíduo que manifesta a intenção voluntária em doar. Curvas de Sobrevivência entre outros métodos estatísticos são amplamente estudados na literatura com o intuito de obter uma estimativa da chance de um doador vir a realizar uma subseqüente doação, associado ao seu perfil. O objetivo do presente estudo é identificar modelos estatísticos capazes de descrever esse comportamento utilizan do os registros do Centro Regional de Hemoterapia de Ribeirão Preto. A cons trução de modelos de longa-duração, por exemplo, pode ser um meio de evidenciar possíveis subgrupos mais propensos a retornar, além de estimar a proporção de doadores que jamais retornarão. Entre os resultados, obser vamos que apenas 40% dos doadores voluntários retornaram após um ano decorrido da primeira doação, e 20% destes jamais retornarão. O ajuste do modelo longaduração possibilitou ainda indicar alguns subgrupos de doadores prováveis e improváveis de retornar, porém tais resultados reforçam as evidências de que a motivação intrínseca é o que leva o individuo a retornar. / Reports of worldwide shortages due the increased demand and rigor of clinical screening have led to the necessity to investigate methods that measure blood donor return behavior, mainly regarding individuals who manifest the voluntary intention to donate. Survival curves, among others statistical methods, have been extensively studied in the literature in order to estimate the likelihood of a donor to make another donation, associated with his profile. The aim of the present study was to identify statistical models describing this behavior using information from the Regional Hemotherapy Center of Ribeirão Preto. The construction of long-term survival model can be a useful instrument for determining the groups more likely to donate, as well as the proportion of donors who will never return. The results obtained revealed that only 40% of the volunteer primary donors return for a new donation one year after the first, with the estimate that 20% will never return. The construction of long-term survival model still facilitated to indicate some groups likely and unlike ly donors to donate, even so such re sults reinforce the evidences that the intrinsic motivation is what prompts a donor to return.

O endotélio vascular é responsável por várias funções como o controle do tônus vascular pela produção e/ou liberação de substâncias vasoconstritoras (EDCFs) e relaxantes (EDRFs). Na hipertensão arterial ocorre disfunção endotelial caracterizada pelo desequilíbrio entre EDCFs e EDRFs. Vários autores sugerem que essas alterações são decorrentes do aumento nas concentrações de espécies reativas de oxigênio (EROs). As EROs podem afetar a sinalização, produção e/ou biodisponibilidade do óxido nítrico (NO), principal EDRF, assim como aumentar os níveis de prostanóides como prostaglandinas e tromboxanos, EDCFs produtos da COX. O principal alvo para o NO é a ativação da guanilil ciclase solúvel (GCs) no musculo liso vascular causando vasorelaxamento. No modelo de hipertensão arterial dois rins um clipe (2R-1C), ocorre aumento nos níveis de EROs e ativação da NADH/NADPH-oxidase, principal enzima produtora de EROs em células endoteliais. Em nosso estudo, utilizamos o composto NCX2121, que é estruturalmente formado por um doador de NO e inibidor da COX (indometacina). O estudo teve por objetivo caracterizar farmacologicamente a resposta relaxante do NCX2121 na aorta de ratos hipertensos 2R-1C e investigar a contribuição do endotélio vascular e das EROs para essa resposta. Verificamos que o composto NCX 2121 produz relaxamento da aorta de ratos 2R e 2R-1C, que é reduzido pela remoção do endotélio e inibição da enzima NO-Sintase (NOS). O relaxamento do composto NCX 2121 deve ser promovido pelo NO, uma vez que em aortas sem endotélio esse relaxamento foi abolido pelo ODQ. Porém, foi apenas reduzido em aortas com endotélio, isoladas de ratos normotensos (2R) e não foi alterado nas aortas com endotélio, isoladas de ratos 2R-1C. O NCX 2121 não alterou a fosforilação dos sítios de ativação ou inibição da eNOS. O NO não foi detectado em solução por análise amperométrica. O composto NCX2121 aumentou a concentração citosólica de NO, medida pela sonda fluorescente sensível a NO (DAF-2DA), por microscopia confocal. Na aorta de ratos 2R-1C, o relaxamento estimulado com o composto NCX2121 foi inibido pelas EROs e os níveis de EROs em células endoteliais isoladas, foi reduzido pelo composto NCX2121. O composto NCX 2121 reduziu os níveis de tromboxano na aorta de ratos 2R e 2R-1C. Os nossos resultados demonstram que o composto NCX2121 promove relaxamento pela liberação intracelular de NO e inibição da COX por reduzir a produção de prostanóides vasoconstrictores como o tromboxano. O composto NCX2121 não interfere com a ativação da NOS, mas reduz as EROs nas células endoteliais. / The vascular endothelium plays multiple roles on the tone control by the production and/or release of contractile factors (EDCFs) and relaxing factors (EDRFs). There is an imbalance between EDCFs and EDRFs in hypertension that is defined by endothelial dysfunction. In accordance to several authors, these alterations are due to increased production of reactive oxygen species (ROS). The ROS can affect the nitric oxide (NO) signaling, production and bioavailability that is the major EDRF. ROS can also increase the levels of prostaglandins and thromboxane (TX) that are EDCFs products of COX. The main target for NO is the activation of soluble guanylyl-cyclase (sGC) in the vascular smooth muscle cells causing vasorelaxation. In renal hypertensive rats (2K-1C), there is an increased production of ROS by NADH-NADPH-oxidase in the rat aorta endothelial cells. In the present study we used the compound NCX2121, in which chemical structure there is a NO donor and a non-selective COX inhibitor indomethacin. This study aimed to pharmacologically characterize the NCX2121 relaxing effect in 2K-1C rat aorta, and to investigate the contribution of the endothelial factors and ROS for this response. We verified that the relaxation-induced by NCX2121 was impaired by the endothelium removal and NO-synthase (NOS) inhibition. The relaxation induced by NCX2121 is due to NO, since sGC inhibition by ODQ completely abolished its effect in denuded endothelium 2K-1C rat aorta. However, in intact endothelium normotensive 2K rat aorta, the relaxing effect of NCX2121 was only partially inhibited whereas in 2K-1C it was not changed. NCX2121 did not change the phosphorylation sites of activation or inhibition of NOS. NO was not detected by amperometry in the organ bath during the relaxation induced by NCX2121, but it was measured in the cell cytoplasm by confocal microscopy. The vasorelaxation was inhibited by ROS, and NCX2121 decreased the ROS in isolated endothelial cells. NCX2121 reduced TX in 2K and 2K-1C rat aortas. Therefore, our results indicate that the compound NCX2121 induces relaxation by intracellular NO release and COX inhibition by the reduced production of contractile prostanoids such as TX. The compound NCX2121 does not modulate NOS, but it decreases ROS in the endothelial cells.

Os nitrocomplexos de rutênio são estudados como agentes doadores de óxido nítrico (NO). Estes são atraentes como potenciais agentes terapêuticos porque apresentam baixa citotoxicidade, que pode ser decorrente da semelhança entre rutênio e ferro. Vários compostos de rutênio foram sintetizados em nosso laboratório, mas o complexo cis-[Ru(bpy)2(py)NO2] (PF6), (RuBPY) parece ser o mais promissor. Muitos doadores de NO tem como principal limitação clínica o desenvolvimento de tolerância, caracterizada pela perda rápida de seus efeitos anti-isquêmicos e hemodinâmicos. Os mecanismos e causas que levam à tolerância ainda são pouco conhecidos. Porém, acredita-se que a tolerância seja um processo multifatorial que envolva aumento da produção de espécies reativas de oxigênio (ERO), diminuição da atividade da enzima guanilil ciclase solúvel (GCs) e aumento da expressão e atividade das enzimas fosfodiesterases. O presente trabalho teve por objetivos avaliar se os compostos RuBPY e NaNO2, em diferentes concentrações e tempos de incubação, desencadeiam auto tolerância e tolerância cruzada à nitroglicerina (NTG). Além disso, avaliar se os receptores TRPV1 participam do relaxamento induzido pelo RuBPY, se o RuBPY libera NO ou nitrito e se é capaz de inibir a agregação plaquetária. O RuBPY e o NaNO2 são capazes de promover relaxamento total, de maneira dependente de concentração, em aortas com e sem endotélio, contraídas com fenilefrina. Estes resultados demonstram que o efeito vasodilatador destes compostos é independente do endotélio. Porém, o RuBPY é mais potente que o NaNO2. O RuBPY é capaz de induzir auto tolerância em aortas sem endotélio pré-expostas por 5 ou 10 min ao RuBPY e em aortas com endotélio, pré-expostas por 45 min ao RuBPY. A pré-exposição por 30 min ou 45 min ao RuBPY potencializa o seu efeito vasodilatador em aortas sem endotélio e com endotélio, respectivamente. A potencialização da resposta relaxante independe da ativação da GCs, mas pode estar relacionada ao aumento da liberação de NO em células do músculo liso vascular e aumento na fosforilação do resíduo de Thr495 da eNOS. O NaNO2 também induz o processo de auto tolerância em aortas sem endotélio, pela pré-exposição ao NaNO2 por 5 min ou 30 min. Não há indução de tolerância cruzada entre nitroglicerina e RuBPY. Neste trabalho demonstramos também que o novo complexo de rutênio RuBPY é um gerador de NO, e não de nitrito, capaz de inibir a agregação plaquetária. Os receptores TRPV1 não participam do relaxamento desencadeado pelo RuBPY. Um achado importante deste trabalho foi o efeito potencializador da vasodilatação induzida pelo RuBPY promovida pela sua pré-exposição. Este efeito poderia ser benéfico, considerando um potencial uso terapêutico deste composto gerador de NO / The ruthenium nitro-complexes are studied as nitric oxide (NO) donors. These complexes are attractive as potential therapeutic agents because they have low cytotoxicity, which can be due to the similarity between ruthenium and iron. Several ruthenium compounds were synthesized in our laboratory, but the complex cis-[Ru(bpy)2(py)NO2](PF6) (RuBPY) is the most promising. The main clinical limitation of NO donors is the development of tolerance that is characterized by the loss of its vasodilator and hemodynamic effects. The mechanisms and causes that lead to tolerance are still poorly understood. However, it is believed that tolerance is a multifactorial process that involves increased production of reactive oxygen species (ROS), decrease activity of thr enzyme soluble guanylyl cyclase (sGC) and increased expression and activity of phosphodiesterases enzyme. This study aimed to evaluate if the compounds RuBPY and nitrite (NaNO2) cause tolerance in different concentrations and exposure times and and cross-tolerance to nitroglycerin (NTG). In addition, to evaluate the involvement of the TRPV1 receptors in the relaxation induced by RuBPY, if RuBPY releases NO or nitrite and if RuBPY inhibits platelet aggregation. Both RuBPY and NaNO2 are able to induce complete relaxation in a concentration-dependent manner in intact endothelium or denuded contracted with phenylephrine. These results demonstrate that the vasodilation induced by these compounds is endothelium-independent. However, the RuBPY is more potent than NaNO2. The RuBPY is able to induce self-tolerance in the denuded aorta that was pre-exposed for 5 min or 10 min to RuBPY and in aorta with intact endothelium pre-exposed for 45 min to RuBPY. Pre-exposure for 30 min or 45 min to RuBPY potentiates its vasodilator effect in aorta without and with endothelium, respectively. The potentiated relaxation is independent of the GCs activation, but it is due to increased NO release in vascular smooth muscle cells and increased eNOS phosphorylation at the inhibitory residue Thr495. The NaNO2 also induces self-tolerance in denuded aortas by the pre-exposure to NaNO2 for 5 min or 30 min. It was not observed cross-tolerance between nitroglycerin and RuBPY. In this work, we have also shown that the new ruthenium complex RuBPY is a NO generator that inhibits platelet aggregation. The TRPV1 receptors do not participate in the relaxation induced by RuBPY. An important finding of this study was the potentiating effect of vasodilation induced by RuBPY promoted by its pre-exposure. This effect could be beneficial considering the potential therapeutic use of this compound NO generator.

A presente pesquisa teve, por principal objetivo, avaliar a viabilidade da desnitrificação autotrófica, empregando sulfeto como doador de elétrons, aplicada a efluentes de reatores anaeróbios tratando esgoto sanitário. Estudos anteriores indicam que o sulfeto presente na fase líquida de efluentes e no biogás pode ser utilizado como doador de elétrons para a desnitrificação. Porém, há poucas informações sobre as interações entre os ciclos do carbono, nitrogênio e enxofre neste processo que permitam a utilização prática dos fundamentos já conhecidos sobre a desnitrificação na presença de sulfeto. Neste trabalho, realizaram-se ensaios de desnitrificação na presença de sulfeto, a fim de se avaliar o potencial de uso desse composto como doador de elétrons. Inicialmente, foram utilizados frascos de 1 L contendo biomassa imobilizada em espuma de poliuretano, alimentados com meio sintético nitrificado contendo sulfeto como doador e nitrito e nitrato como receptores de elétrons. Variou-se a concentração de sulfeto, obtendo-se diferentes relações N/S. Constatou-se desnitrificação completa de ambos os receptores estudados; entretanto, isto só ocorreu com estabilidade para relações N/S inferiores à relação estequiométrica baseada nas reações químicas correspondentes, isto é, quando foi aplicado sulfeto em excesso. Os resultados mostraram que a oxidação total ou parcial dos compostos de enxofre no processo depende da relação N/S, e a velocidade de consumo de nitrato foi maior que a de nitrito. Posteriormente, realizaram-se novos ensaios semelhantes ao anterior, porém, a alimentação consistiu na mistura do efluente sintético nitrificado a efluente de reator anaeróbio tratando água residuária de abatedouro de aves, e o único receptor de elétrons aplicado foi nitrato. Neste caso, foi constatada desnitrificação completa na relação N/S correspondente à estequiometria relativa a sulfeto e nitrato. A cinética de remoção de nitrogênio seguiu modelo de decaimento exponencial de primeira ordem; entretanto, houve limitação à transferência de massa intraparticular e na fase líquida, fato que caracterizou os modelos ajustados como sendo de primeira ordem. As velocidades específicas aparentes obtidas na primeira fase foram próximas de 15 mgN/gSSV.h, tanto com a aplicação de nitrato, quanto de nitrito como receptores de elétrons. Na segunda fase, a máxima velocidade específica aparente de remoção de nitrato foi da ordem de 6 mgN/gSSV.h. / The feasibility of autotrophic denitrification of effluent from anaerobic reactor treating domestic sewage using sulfide as electron donor was evaluated. Prior researches reveals sulfide into liquid phase of effluents and biogas can be utilized as electron donor for denitrification. However, information about the interaction between carbon, nitrogen and sulfur cycles in this process are few to permit practice utilization of known fundamentals about denitrification in presence of sulfide. In this work, laboratory tests of denitrification in the presence of sulfide were carried out to evaluate potential employ of this compound as electron donor. Initially, 1 L flasks with immobilized biomass in polyurethane foam was fed with synthetic nitrified wastewater containing sulfide as donor and nitrite e nitrate as electron acceptors. Sulfide concentration was diversified to obtain different N/S ratios. Complete denitrification occurred with nitrate and nitrite; nevertheless, it was observed in a stable way only for N/S ratios smaller than stoichiometric rate based in the corresponding chemistry reactions, that is, when applied excess of sulfide. The results showed that total or partial sulfur compounds oxidation depends on N/S ratio and the nitrate removal rate was bigger than nitrite removal rate. Afterward, new assays were carried out in the same way. However, the flasks were fed with synthetic nitrified wastewater mixed to effluent from anaerobic reactor treating bird slaughterhouse wastewater, and nitrate was the only electron acceptor applied. In this case, complete denitrification was evidenced for stoichiometric N/S ratio relating to sulfide and nitrate. Nitrogen removal kinetic followed exponential decay model of first order; however, this behavior was due to mass transfer limitation in the liquid phase and intraparticular. Apparent specific rates of nitrogen removal found in the first phase were nearby 15 mgN/gSSV.h, with nitrate as well as nitrite application. In the second phase, maxima apparent specific rate of nitrogen removal in nitrate form was about 6 mgN/gSSV.h.

Introdução: Doador de rim em vida é uma importante fonte de órgão para os pacientes portadores de doença renal crônica (DRC). Os doadores experimentam uma redução abrupta da taxa de filtração glomerular (TFG) e adaptações ao metabolismo mineral demandam estudos nesta população. Nós avaliamos prospectivamente esta adaptação em doadores de rim em vida. Métodos: Entre janeiro de 2010 a agosto de 2011, no hospital das Clínicas de São Paulo e na Universidade de Miami, realizamos a avaliação prospectiva do metabolismo mineral e da função renal por 1 ano em 74 doadores de rim em vida. Medimos a taxa de filtração glomerular (TFG), fósforo (Pi), cálcio (Ca), paratohormônio (PTH), fibroblast Growth Factor 23 (FGF23) e a fração de excreção do fósforo (FePO4) no pré-operatório e nos dias 1, 2, 14, 180 e 360 do pós-operatório. Resultados: Observamos uma redução, aproximadamente, de 40% da TFG nos dois primeiros dias após a cirurgia. No décimo quarto dia após a nefrectomia, observamos o início da recuperação da TFG, chegando ao máximo da recuperação com 1 ano, quando se atingiu 68,6% da função renal se comparado com o dia anterior a doação (75,3 ml/min/1,73m2, p < 0,001). O cálcio sérico apresentou seu nadir no dia 1 (7,99 mg/dL; p < 0,01) e o Pi sérico atingiu seu nadir no dia 2 (2,61 mg/dL; p < 0,01). Já no dia 14, os valores de Ca e Pi retornaram aos valores basais tendo o fósforo evoluído novamente com valores inferiores ao basal no último dia de seguimento (3,36mg/dL; p < 0,001). FGF23 e PTH apresentaram elevação no D1 (111,0144,6 percentil 25-75: 16-63 RU/ml 64,9 30,3pg/mL; p < 0,01). Os valores de FGF23 se mantiveram elevados até o final do estudo enquanto que o PTH retornou aos valores de base no segundo dia e, a partir de então, manteve sem diferença do valores basais até o último dia de estudo. FePO4 elevou de 11,45,2% para 15,28,1% entre o pré-operatório e D365 (p < 0,01). Conclusão: A nefrectomia para doação de rim em 74 pacientes saudáveis elevou os valores de FGF23 durante todo o estudo juntamente com a FePO4. O fósforo, cálcio e PTH séricos apresentaram queda nos seus valores na primeira semana após a nefrectomia, e, com duas semanas após a cirurgia, retornaram aos valores basais mantendo-se estáveis até o final do estudo / Introduction: Living kidney donors (LKDs) experience an abrupt decline in glomerular filtration rate (GFR). Mineral metabolism adaptations in early CKD are still debated and not well studied in LKDs. We prospectively studied acute and long term mineral metabolism adaptation of LKDs. Materials and Methods: We measured renal function and mineral metabolites longitudinally for 1 year (days (D) 1, 2, 14, 180, & 365 post-operatively) in 74 healthy individuals who underwent kidney live donation. Results: eGFR (MDRD) decreased to 59% of its baseline on day 2 and started to increase at day 3, to its maximum at day 360 (75.3±15.6 ml/min/1.73m2, p < 0.01) wile FGF23 increased from 60.6 (25th-75th percentile 19-81 RU/mL) at baseline to 111.0±144.6 (p < 0.01) on day 1 and keep higher than baseline throwout the study. PTH rose maximally on day 1 (64.9 ± 30.3pg/ml) and returned to its base line on D2 and did not change after that. Total serum Calcium levels decreased from 9,40±0,48 mg/dL to a nadir of 7.99±0,51 mg/dL on day 1 (p < 0.001). Serum Phosphate levels reached their nadir on day 2 (2.61±0,52 mg/dL; p < 0.01). At D14 total calcium and phosphate levels had returned to baseline, but phosphate levels returned down on D360 (3.36±0,52 mg/dL; p < 0.001). Phosphate excretion fraction (FePO4) increased from base line (11.4±5.2%) up to 15.2±8.1% until D360 (p < 0.001). Conclusions: Abrupt reduction in eGFR induces physiological increases in FGF23 and PTH, and decreases in serum Ca and Pi in the first week. The changes in FGF23 and Pi urinary fractional excretion of Pi remain modestly yet significantly different from baseline throughout the first year after nephrectomy. Wile Ca, PTH and Pi serum levels are not significantly different from the baseline

Nesta tese foi desenvolvida uma nova classe de porfirinas supramoleculares contendo um grupo (4-nitrofenil)triazeno ligado na posição meso-aril do anel porfirínico. Suas propriedades estruturais e eletrônicas foram investigadas por espectrometria de massas, espectroscopia eletrônica de absorção e emissão, cálculos teóricos semi-empíricos, ressonância magnética nuclear de 1H e 13C, voltametria cíclica e espectroeletroquímica. Efeitos eletrônicos e estruturais diferenciados foram observados quando o grupo triazeno é inserido na porfirina, fazendo com que estes novos compostos apresentem novas propriedades quanto, por exemplo, às fragmentações no estado gasoso, deslocamento batocrômico nos espectros eletrônicos de absorção, variação das intensidades relativas e nos valores dos rendimentos quânticos de fluorescência, deslocalização eletrônica nos orbitais de fronteira evidenciando as transições de transferência de carga do ânion triazenido para o anel porfirínico e variações nos processos redox dos compostos até então estudados / In this thesis we has been developed a new class of supramolecular porphyrins containing (4-nitrophenyl)triazene group connected in the meso-aryl-position of the porphyrin ring. Their structural and electronic properties were investigated by mass spectrometry, absorption and emission electronic spectroscopy, semi-empirical theoretical calculations, nuclear magnetic resonance of 1H and 13C-NMR, cyclic voltammetry and spectroelectrochemistry. Different structural and electronic effects were observed when the unit is inserted into the triazene to porphyrin, so that these presents new properties such as, for example, to fragmentation in the gaseous state, bathocrimic shift in the electronic absorption spectra, relative intensity variation and values the fluorescence quantum yields, electron delocalization in the frontier orbitals showing the charge-transfer transitions from the triazenide anion to the porphyrin ring and changes in redox processes of compounds previously studied.