Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-22Bitstream added on 2014-06-13T20:38:22Z : No. of bitstreams: 1 bedin_bh_me_sjrp.pdf: 519842 bytes, checksum: e719795aab77f431ee35d7bdf1177bfa (MD5) / Dentre os contaminantes ambientais mais produzidos no mundo estão os derivados do petróleo, que atingem e contaminam os ambientes aquáticos. Sendo o petróleo uma forma de energia não renovável, alternativas renováveis e menos poluentes como o biodiesel vêm sendo pesquisadas. Entretanto, apesar de ser considerado menos poluente, mais biodegradável e produzir menos gases de efeito estufa durante a queima, pouco se sabe ainda sobre os potenciais efeitos tóxicos do biodiesel para a biota aquática. Estes efeitos podem ser avaliados por meio da análise de biomarcadores de contaminação, tais como alterações metabólicas na atividade de enzimas de biotransformação e em parâmetros de estresse. Neste trabalho foram analisados os efeitos de duas concentrações (0,1 e 0,01 mL/L, com manutenção do tratamento a cada 5 dias) do biodiesel puro (B100) e da mistura de 20% de biodiesel com diesel de petróleo (B20), em comparação com os efeitos do diesel de petróleo contendo 5% de biodiesel (B5) e animais não expostos a nenhum dos combustíveis, em fígado e brânquias de tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) expostas por 15 e 30 dias. Foram avaliadas as atividades das enzimas de biotransformação etóxiresorufina-O-deetilase (EROD) e glutationa S-transferase (GST), das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) glutationa peroxidase (GPx) e níveis de peroxidação lipídica por meio da quantificação do produto malondialdeído. Testes de toxicidade foram também realizados para se estabelecer valores de LC50 para cada contaminante, de forma a melhor compararmos os efeitos dos contaminantes, os quais mostraram que o B5 foi o composto mais tóxico, seguido do B20 e em seguida o B100. Animais expostos ao B5 e ao B20 por 15 dias tiveram a atividade da EROD aumentada e suas enzimas... / Among the environmental contaminants most produced in the world are derived from petroleum, which reach and contaminate aquatic environments. Because oil is a form of non-renewable energy, renewable and less polluting alternatives such as biodiesel have been researched. However, despite being considered less polluting, more biodegradable and produce less greenhouse gases during the burning, little is known about the potential toxic effects of biodiesel on aquatic biota. These effects can be evaluated through the analysis of biomarkers of contamination, such as changes in metabolic activity of biotransformation enzymes and stress parameters. In this study, we analyzed the effects of two concentrations (0.1 and 0.01 mL / L, with maintenance treatment every 5 days) of pure biodiesel (B100) and the mixture of 20% biodiesel with petroleum diesel (B20), compared with the effects of diesel oil containing 5% biodiesel (B5) and animals not exposed to any fuel in liver and gills of tilapia (Oreochromis niloticus) exposed for 15 and 30 days. We evaluated the activities of biotransformation enzymes etóxiresorufina-O-deetilase-(EROD) and glutathione S-transferase (GST), of antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx) and lipid peroxidation levels through quantifying the product malondialdehyde. Toxicity tests were also conducted to establish LC50 values for each contaminant in order to better compare the effects of contaminants, which showed that B5 was the most toxic compound, followed by B20 and then B100. Animals exposed to B5 and B20 for 15 days had increased EROD activity of and their antioxidant enzymes significantly inhibited, which was not observed in animals exposed to B100. Nevertheless, despite the inhibition observed in the antioxidant defenses, the... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Eduardo Alves de Almeida / Banca: Carlos Roberto Ceron / Banca: Lilian Castiglioni / Resumo: Dentre os contaminantes ambientais mais produzidos no mundo estão os derivados do petróleo, que atingem e contaminam os ambientes aquáticos. Sendo o petróleo uma forma de energia não renovável, alternativas renováveis e menos poluentes como o biodiesel vêm sendo pesquisadas. Entretanto, apesar de ser considerado menos poluente, mais biodegradável e produzir menos gases de efeito estufa durante a queima, pouco se sabe ainda sobre os potenciais efeitos tóxicos do biodiesel para a biota aquática. Estes efeitos podem ser avaliados por meio da análise de biomarcadores de contaminação, tais como alterações metabólicas na atividade de enzimas de biotransformação e em parâmetros de estresse. Neste trabalho foram analisados os efeitos de duas concentrações (0,1 e 0,01 mL/L, com manutenção do tratamento a cada 5 dias) do biodiesel puro (B100) e da mistura de 20% de biodiesel com diesel de petróleo (B20), em comparação com os efeitos do diesel de petróleo contendo 5% de biodiesel (B5) e animais não expostos a nenhum dos combustíveis, em fígado e brânquias de tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) expostas por 15 e 30 dias. Foram avaliadas as atividades das enzimas de biotransformação etóxiresorufina-O-deetilase (EROD) e glutationa S-transferase (GST), das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) glutationa peroxidase (GPx) e níveis de peroxidação lipídica por meio da quantificação do produto malondialdeído. Testes de toxicidade foram também realizados para se estabelecer valores de LC50 para cada contaminante, de forma a melhor compararmos os efeitos dos contaminantes, os quais mostraram que o B5 foi o composto mais tóxico, seguido do B20 e em seguida o B100. Animais expostos ao B5 e ao B20 por 15 dias tiveram a atividade da EROD aumentada e suas enzimas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among the environmental contaminants most produced in the world are derived from petroleum, which reach and contaminate aquatic environments. Because oil is a form of non-renewable energy, renewable and less polluting alternatives such as biodiesel have been researched. However, despite being considered less polluting, more biodegradable and produce less greenhouse gases during the burning, little is known about the potential toxic effects of biodiesel on aquatic biota. These effects can be evaluated through the analysis of biomarkers of contamination, such as changes in metabolic activity of biotransformation enzymes and stress parameters. In this study, we analyzed the effects of two concentrations (0.1 and 0.01 mL / L, with maintenance treatment every 5 days) of pure biodiesel (B100) and the mixture of 20% biodiesel with petroleum diesel (B20), compared with the effects of diesel oil containing 5% biodiesel (B5) and animals not exposed to any fuel in liver and gills of tilapia (Oreochromis niloticus) exposed for 15 and 30 days. We evaluated the activities of biotransformation enzymes etóxiresorufina-O-deetilase-(EROD) and glutathione S-transferase (GST), of antioxidant enzymes superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx) and lipid peroxidation levels through quantifying the product malondialdehyde. Toxicity tests were also conducted to establish LC50 values for each contaminant in order to better compare the effects of contaminants, which showed that B5 was the most toxic compound, followed by B20 and then B100. Animals exposed to B5 and B20 for 15 days had increased EROD activity of and their antioxidant enzymes significantly inhibited, which was not observed in animals exposed to B100. Nevertheless, despite the inhibition observed in the antioxidant defenses, the... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-18Bitstream added on 2014-06-13T19:28:34Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_l_me_sjrp.pdf: 812757 bytes, checksum: f8e1a42703925b1c1417ab9fe35a4d02 (MD5) / Atualmente, combustíveis fósseis como o óleo diesel estão sendo gradualmente substituí-dos pelo biodiesel, uma fonte de energia renovável, mais barata e menos poluente. No entanto, pouco se sabe sobre os efeitos tóxicos desta nova fonte de energia e se é mais ou menos pre-judicial do que o diesel derivado do petróleo sobre os organismos aquáticos. No Brasil, desde janeiro de 2010, o biodiesel B5 está sendo obrigatoriamente utilizado como combustível e na composição de óleos lubrificantes no lugar do petrodiesel. Sendo assim, este trabalho analisou comparativamente as respostas bioquímicas que desencadeiam o estresse oxidativo e suas con-sequências, entre duas espécies de peixes, a tilápia do Nilo, Oreochromis niloticus, e o cascudo marrom, Pterygoplichthys anisitsi, após a exposição ao óleo diesel e ao biodiesel. Para isso os animais foram submetidos à exposição ao óleo diesel, biodiesel B5, B20 e B100 nas concentra-ções de 0,01 e 0,1 mL/L por dois e sete dias. Em seguida, amostras de fígado e brânquias foram retiradas para as análises da 7-etóxi-resorufina-O-deetilase (EROD), glutationa-S-transferase (GST), superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e níveis de malondialdeído (MDA). Para O. niloticus, na maioria das análises, o biodiesel B5 demonstrou ser a mistura que mais alterou a atividade das enzimas e aumentou a peroxidação lipídica e a mistura B20 foi menos prejudicial, pois alterou apenas a atividade da catalase e a atividade da EROD de forma mais discreta que os outros tratamentos. Já com P. anisitsi, as misturas B5 e B20 alteraram a maioria das enzimas testadas, e em alguns casos induziu mais a atividade enzimática que o óleo diesel. Contudo, o sistema antioxidante dos cascudos foi mais eficiente no combate às EROs, visto que apresentou apenas pequena peroxidação nas brânquias gerada pela exposição... / Currently, fossil fuels such as diesel are being gradually replaced by biodiesel, a renewa-ble energy source, cheaper and less polluting. However, little is known about the toxic effects of this new energy source and whether it is more or less harmful than petroleum-derived die-sel on aquatic organisms. In Brazil, since January 2010, B5 biodiesel is mandatorily used as fuel and in the composition of lubricating oils instead of diesel oil. Thus, this study compared the biochemical responses that trigger oxidative stress and its consequences among two spe-cies of fish, the Nile tilapia, Oreochromis niloticus, and the armored catfish, Pterygoplichthys anisitsi after exposure to diesel oil and biodiesel. Fish were exposed to diesel fuel, biodiesel, B5, B20 and B100 at concentrations of 0.01 and 0.1 mL/L for two and seven days. Then, samples of liver and gills were removed for analysis of ethoxyresorufin-O-deethylase (EROD), glutathione-S-transferases (GST), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione pe-roxidases (GPx) and malondialdehyde (MDA). For O. niloticus, in most of the analysis, B5 was the compound that most affected the activity of enzymes and increased lipid peroxidation, and B20 blend was less harmful, since it changed only the catalase activity and EROD. In the case of P. anisitsi, B5 and B20 blends changed most of the enzymes tested, and in some cases induced a higher enzyme activity than the diesel. However, the antioxidant system of the armored catfish was more effective in combating the ROS, since they presented only a small gills peroxidation generated by exposure to B20 and B100. Taking into account the fish species, exposure period and concentrations tested, biodiesel from animal tallow and its blends with diesel oil generated oxidative stress and enzymatic changes in O. niloticus and P. anisitsi as much as pure diesel. Therefore, even being a more... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by JULIANA POLLONI SILVA null (ju_polloni@yahoo.com.br) on 2017-05-05T15:55:40Z No. of bitstreams: 1 Tese_UNESPSorocaba_JulianaPolloniSilva_2017.pdf: 5158035 bytes, checksum: 4293a506e5ebdca8245dde20cdbecec4 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-05T16:08:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_jp_dr_soro.pdf: 5158035 bytes, checksum: 4293a506e5ebdca8245dde20cdbecec4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-05T16:08:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_jp_dr_soro.pdf: 5158035 bytes, checksum: 4293a506e5ebdca8245dde20cdbecec4 (MD5) Previous issue date: 2017-03-07 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Produtos químicos capazes de causar desregulação endócrina em vertebrados e invertebrados têm sido detectados a baixas concentrações em ambientes aquáticos do mundo. Desta maneira, tornou-se de interesse mundial a busca por metodologias de remoção mesmos nos ambientes aquáticos. Por isso pesquisa teve como objetivo investigar três materiais (carvão ativado em pós – PAC, zeólitas naturais em pó – ZP e substâncias húmicas aquáticas – AHS) na remediação química e ecotoxicológica de 17ß-estradiol (E2) e 17α-etinilestradiol (EE2) em água mediante ensaios químicos e biológicos in vitro e in vivo. Uma concentração ambientalmente relevante de hormônios (30 ng.L-1) foi utilizada durante os ensaios em laboratório. Os resultados obtidos por meio de uma extensa relação de parâmetros morfológicos, reprodutivos e histológicos adotados permitiram concluir o significativo impacto dos HSFs sobre o desenvolvimento e manutenção de peixes expostos. Comprovou-se a superior eficiência do PAC em relação aos demais substratos na remoção de interferentes endócrinos (IEs) em água. Não obstante, suas propriedades não garantiram o mesmo desempenho com relação a amostras ambientais e, tampouco possibilitou a recuperação das injurias biológicas monitoradas após período de depuração investigado. Um estudo adicional também permitiu a elaboração de um protocolo histoquímico capaz de identificar a produção de vitelogenina (VTG) incitada pela exposição ao esteróide sintético EE2. / Chemicals with potential to cause endocrine disruption in vertebrates and invertebrates have been detected at low concentrations in the world's aquatic environments. Therefore, the search for removal methodologies in aquatic environments became a worldwide interest. The aim of this research was to investigate three materials (powered activated carbon - PAC, powered natural zeolites - ZP and aquatic humic substances - AHS) in chemical and ecotoxicological remediation of 17ß-estradiol (E2) and 17α-ethinylestradiol (EE2) in water through chemical and biological tests in vitro and in vivo. An environmentally relevant concentration of hormones (30 ng.L-1) was used during laboratory tests. The results obtained through an extensive list of morphological, reproductive and histological parameters showed the significant impact of HSFs on the development and maintenance of exposed fish. The superior efficiency of PAC was verified in relation to the other substrates in the endocrine disrupting chemicals (EDCs) removal in water. Nevertheless, their properties did not guarantee the same performance to the environmental samples, neither allow biological injuries monitored to be recovered after the period of depuration investigated. An additional study also allowed the development of a histochemical protocol capable of identifying the production of vitellogenin (VTG) prompted by exposure to the synthetic steroid EE2. / FAPESP: 2012/24495-6 / FAPESP: 2014/22733-2

A qualidade da água é um fator importante para o bem-estar do ser humano, e equilíbrio dos ecossistemas naturais. Com o aumento populacional e a consequente industrialização, se intensificou a produção de esgoto doméstico e de efluentes industriais, os quais podem conter metais e acentuar a poluição ambiental. Alguns elementos-traço são considerados essenciais para o desenvolvimento e manutenção dos organismos, porém, se forem ingeridos em concentrações acima das recomendadas, podem ser tóxicos. O objetivo desse estudo foi avaliar o grau de contaminação de duas espécies de peixes (Poecilia reticulata e Hypostomus ancistroides) abundantes do Ribeirão Cafezal (Rolândia - PR) pelos elementos Zn, Cd, Cr e Pb. A coleta dos peixes foi realizada em três pontos ao longo do trecho superior da bacia do Ribeirão Cafezal, utilizando os métodos de pesca elétrica e manual, com esforço amostral de 40 min para cada método. Para a detecção dos elementos traço no material coletado, as amostras foram devidamente preparadas para emprego da técnica de Espectrometria de Emissão Óptica por Plasma Indutivamente Acoplado (ICP-OES). As concentrações apresentadas pelos indivíduos da espécie Poecilia reticulata (pontos 1 e 2) amostrados do ribeirão foram: Zn (107,63; 91,89 mg/kg) , Cd (0,12; 0,42 mg/kg), Cr (2,17; 4,96 mg/kg) e Pb (0,71; 0,44 mg/kg); enquanto que para a espécie Hypostomus ancistroides (pontos 2 e 3) foram: Zn (93,11; 76,97 mg/kg), Cd (2,22; 0,10 mg/kg), Cr (16,05; 2,23 mg/kg) e Pb (2,83; não determinado mg/kg). Todos os valores estão acima dos limites permitidos pela ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária). Não houve diferenças significativas nas concentrações dos metais entre os pontos de amostragem avaliados. Como se trata de um Ribeirão onde as pessoas utilizam a água para recreação e se alimentam dos peixes que colonizam o local, é preciso continuar a atividade de monitoramento, bem como realizar análises sistemáticas com diferentes espécies de peixes, água e sedimento. / Some trace elements are considered essential for the development and maintenance of living organisms. However, if those trace elements are ingested in higher concentrations than recommended can be toxic. The aim of this study was to evaluate the degree of contamination for two abundant species of fish from Ribeirão Cafezal (Poecilia reticulata and Hypostomus ancistroides) with Zn, Cd, Cr and Pb elements. The fish collection was performed at three points along the upper stretch of the basin of Ribeirão Cafezal using electric and manual fishing methods, with sampling effort of 40 minutes for each method. In order to detect the trace elements in the collected material, the samples were properly prepared to the Inductively Coupled Plasma by Atomic Emission Spectroscopy (ICP-OES). The concentrations presented by the species Poecilia reticulata in the two first points of the stream were: Zn (107.63; 91.89 mg / kg), Cd (0.12, 0.42 mg / kg), Cr (2.17; 4.96 mg / kg) and Pb (0.71, 0.44 mg / kg), sampled in 1 and 2 respectively. And individuals of Hypostomus ancistroides species sampled in points 2 and 3 had the following values: Zn (93.11; 76.97 mg / kg), Cd (2.22, 0.10 mg / kg), Cr (16.05; 2.23 mg / kg) and Pb (2.83; nd mg / kg). All values are higher than the limits allowed by ANVISA. There were no significant differences in the metals concentrations among the sampling points assessed. In consideration for Ribeirão Cafezal being a stream where people use water for recreation and feed on the existing fish, we need to continue monitoring it, as well as performing systematic analysis with different species of fish, sediment and water.

Orientador: Eduardo Alves de Almeida / Banca: José Maria Monserrat / Banca: Camilo Dias Seabra Pereira / Resumo: Atualmente, combustíveis fósseis como o óleo diesel estão sendo gradualmente substituí-dos pelo biodiesel, uma fonte de energia renovável, mais barata e menos poluente. No entanto, pouco se sabe sobre os efeitos tóxicos desta nova fonte de energia e se é mais ou menos pre-judicial do que o diesel derivado do petróleo sobre os organismos aquáticos. No Brasil, desde janeiro de 2010, o biodiesel B5 está sendo obrigatoriamente utilizado como combustível e na composição de óleos lubrificantes no lugar do petrodiesel. Sendo assim, este trabalho analisou comparativamente as respostas bioquímicas que desencadeiam o estresse oxidativo e suas con-sequências, entre duas espécies de peixes, a tilápia do Nilo, Oreochromis niloticus, e o cascudo marrom, Pterygoplichthys anisitsi, após a exposição ao óleo diesel e ao biodiesel. Para isso os animais foram submetidos à exposição ao óleo diesel, biodiesel B5, B20 e B100 nas concentra-ções de 0,01 e 0,1 mL/L por dois e sete dias. Em seguida, amostras de fígado e brânquias foram retiradas para as análises da 7-etóxi-resorufina-O-deetilase (EROD), glutationa-S-transferase (GST), superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e níveis de malondialdeído (MDA). Para O. niloticus, na maioria das análises, o biodiesel B5 demonstrou ser a mistura que mais alterou a atividade das enzimas e aumentou a peroxidação lipídica e a mistura B20 foi menos prejudicial, pois alterou apenas a atividade da catalase e a atividade da EROD de forma mais discreta que os outros tratamentos. Já com P. anisitsi, as misturas B5 e B20 alteraram a maioria das enzimas testadas, e em alguns casos induziu mais a atividade enzimática que o óleo diesel. Contudo, o sistema antioxidante dos cascudos foi mais eficiente no combate às EROs, visto que apresentou apenas pequena peroxidação nas brânquias gerada pela exposição... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Currently, fossil fuels such as diesel are being gradually replaced by biodiesel, a renewa-ble energy source, cheaper and less polluting. However, little is known about the toxic effects of this new energy source and whether it is more or less harmful than petroleum-derived die-sel on aquatic organisms. In Brazil, since January 2010, B5 biodiesel is mandatorily used as fuel and in the composition of lubricating oils instead of diesel oil. Thus, this study compared the biochemical responses that trigger oxidative stress and its consequences among two spe-cies of fish, the Nile tilapia, Oreochromis niloticus, and the armored catfish, Pterygoplichthys anisitsi after exposure to diesel oil and biodiesel. Fish were exposed to diesel fuel, biodiesel, B5, B20 and B100 at concentrations of 0.01 and 0.1 mL/L for two and seven days. Then, samples of liver and gills were removed for analysis of ethoxyresorufin-O-deethylase (EROD), glutathione-S-transferases (GST), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione pe-roxidases (GPx) and malondialdehyde (MDA). For O. niloticus, in most of the analysis, B5 was the compound that most affected the activity of enzymes and increased lipid peroxidation, and B20 blend was less harmful, since it changed only the catalase activity and EROD. In the case of P. anisitsi, B5 and B20 blends changed most of the enzymes tested, and in some cases induced a higher enzyme activity than the diesel. However, the antioxidant system of the armored catfish was more effective in combating the ROS, since they presented only a small gills peroxidation generated by exposure to B20 and B100. Taking into account the fish species, exposure period and concentrations tested, biodiesel from animal tallow and its blends with diesel oil generated oxidative stress and enzymatic changes in O. niloticus and P. anisitsi as much as pure diesel. Therefore, even being a more... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-10Bitstream added on 2014-06-13T19:17:19Z : No. of bitstreams: 1 martins_fcs_me_sjrp.pdf: 1282007 bytes, checksum: ba950494bfbca268de280c8ca01cef0c (MD5) / As substâncias húmicas aquáticas possuem grande importância ambiental por terem a capacidade de complexar íons metálicos presentes no ambiente influenciando a disponibilidade dos mesmos, tornando-os geralmente menos tóxicos para a biota. As Metalotioneínas (MT) apresentam a característica de regular metais nos organismos aquáticos, sendo induzidas na presença de metais e outros compostos e, portanto utilizadas como biomarcador ambiental. O benzo[a]pireno é oriundo de fontes biogênicas, pirogênicas e petrogênicas e seu efeito na indução de MT em tilápias é desconhecido. Neste contexto, foi avaliada a indução de MT em peixes expostos a metais tóxicos individualmente e na mistura, na ausência e presença de substâncias húmicas aquáticas (SHA), bem como na presença de benzo[a]pireno. Neste trabalho foram feitas a otimização e padronização do método para quantificação de metalotioneínas em fígado e brânquias de peixes empregando a técnica de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com Detector de Fluorescência (HPLC-FD). Também foi avaliada a influência do tempo de duração dos ensaios na indução de metalotioneínas em peixes expostos a metais de interesse ambiental durante 3, 7 e 14 dias. Tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) foram alocadas em aquários individuais e submetidas à exposição a concentrações regulamentadas pela resolução Conama 357/2005 para rios Classe 2, Classe 3 e 5 vezes Classe 3 de Cádmio, Cobre, Chumbo, Ferro e Benzo[a]pireno isoladamente, bem como a mistura dos metais na presença e ausência de SHA. A concentração de metal “livre” foi acompanhada durante os experimentos de exposição empregando o Sistema de Ultrafiltração com Fluxo Tangencial. Em todas as amostras de água dos experimentos de exposição e no tecido muscular dos peixes utilizados foram realizadas a... / The aquatic humic substances have great environmental importance to have the ability to complex metal ions present in the environment influencing their availability, making them generally less toxic to biota. Metallothioneins (MT) have the characteristic of regular metals on aquatic organisms being induced in the presence of metals and other compounds and therefore used as a biomarker environment. Benzo[a]pyrene is formed by biogenic sources, pyrogenic and petrogenic and its effect on the induction of MT in tilapia is unknown. In this context, we evaluated the induction of MT in fish exposed to toxic metals (Fe, Cu, Cd and Pb) individually and all these metal combined in the absence and presence of humic substances (SHA), as well as in the presence of benzo[a]pyrene. In this work we made the optimization and standardization of the method for quantification of metallothionein in liver and gills of fish employing the technique of High Performance Liquid Chromatography with Fluorescence Detector (HPLC-FD). We also evaluated the influence of the duration of the tests in the induction of metallothionein in fishes exposed to metals of environmental interest for 3, 7 and 14 days. Nile tilapia (Oreochromis niloticus) were placed in individual aquaria and subjected to exposure to concentrations regulated by CONAMA 357/2005 Resolution for rivers Class 2, Class 3 and 3 fold the concentrations to Class 3 for Cadmium, Copper, Lead, Iron and Benzo[a]pyrene separately, and all these metals combined in the presence and absence of SHA. The concentration of free metal was monitored during the exposure experiments using a Tangential Flow Ultrafiltration System (TFUS). In all samples of water exposure experiments and in the muscle tissue of fishes were quantified total metal employing a Graphite Furnace Atomic Absorption Spectrophotometer... (Complete abstract click electronic access below)