Este estudo teve por objetivos: i) caracterizar o influxo leucocitário induzido pelo veneno de Bothrops insularis (VBi); ii) avaliar a liberação de PGD2 e PGE2, TXA2 e LTB4 e das quimiocinas MCP-1 e KC induzida pelo VBi; iii) analisar a ação do VBi quanto a expressão protéica das enzimas ciclooxigenases (COX -1 e -2) e iv) avaliar a participação dos metabólitos das COX-1 e -2 e 5-LO no influxo leucocitário. O VBi causou aumento de leucócitos circulantes e do influxo de leucócitos PMN e MN para o local de sua injeção. Ainda, veneno induziu a liberação de PGD2, PGE2, TXA2 e LTB4, da MCP-1, mas não da KC, além da expressão protéica de COX-2. O tratamento dos animais com indometacina, etoricoxibe ou zileuton inibiu o influxo de leucócitos induzido pelo VBi na 12ª h. Em conclusão, o VBi tem capacidade de induzir influxo de leucócitos e liberação de mediadores inflamatórios para o local de sua injeção. O influxo leucocitário relaciona-se aos metabólitos das COX -1 e -2, 5-LO, da MCP-1 e do aumento de leucócitos circulantes / In this study the effects of Bothrops insularis venom (BiV) on the leukocyte influx, on the circulating leukocyte numbers and release of mediators, such as PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 and KC into the local of its injection. Moreover, the role of eicosanoids in the BiV- induced leukocyte influx was assessed by selected pharmacological treatments. PMN were accumulated from 6 up to 24 h and MN cells from 3 up to 72 h when injected into the peritoneal cavity of mice. Moreover, BiV increased blood leukocyte at 3 h after injection and incresed the levels of PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 at distinct periods of time. In addition, BiV induced the protein expression of COX-2 from 1 up to 12 h and the BiV-induced leukocyte influx was reduced by indomethacin or etoricoxib or zileuton at 12 h after injection. In conclusion, BiV is able to induce leukocyte influx and increase of blood leukocyte numbers. Moreover, the ability of BiV to induce expression of COX-2 and release of inflammatory mediators is relevant for the leukocytes influx into the local of its injection

O glioblastoma multiforme (GBM) é um dos gliomas mais comuns, classificado como um glioma de grau IV (Organização Mundial da Saúde - OMS) e notoriamente difícil de ser tratado. O tratamento recomendado consiste na ressecção cirúrgica seguida de radio e quimioterapia, e a sobrevida média dos pacientes é de apenas 12 meses após o diagnóstico. Portanto, novas terapias que focam a redução do volume do tumor e o aumento da morte das células tumorais são urgentemente necessárias. Estudos pré-clínicos sugerem que a inibição de COX-1 e 2 com Anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs), como o Ibuprofeno (IBP), inibiram significantemente a proliferação e a migração celular em diferentes tumores. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar in vitro o efeito da inibição de COX-1 e COX-2 através do tratamento com IBP, e também com inibidores específicos como SC-560 e NS-398 respectivamente, na migração e na proliferação da linhagem celular de glioma humano U251-MG. O presente estudo demonstrou através de diversos ensaios que a inibição de COX-1 e COX-2 através do IBP, do SC-560 e do NS-398 inibiu significativamente a migração e a proliferação celular da linhagem celular U251-MG. Dessa maneira, concluímos que a PGE2 está envolvida na migração e proliferação celular das células desta linhagem celular. / Glioblastoma Multiforme (GBM) is the most common glioma, classified as grade IV (World Health Organization WHO) and notoriously difficult to treat. The recommended treatment consists of surgery followed by radiotherapy and chemotherapy, and the median survival is ten to twelve months. Preclinical studies suggest that inhibiton of cyclooxygenase-2 by treatment with non-steroidal anti-inflammatory drugs, such as ibuprofen, significantly blocked the proliferation of different tumors including gliomas. Thus this study aimed to evaluate the migration of glioma cell line U251-MG after inhibition of cyclooxygenases 1 and 2 by treatment with ibuprofen (IBP), and specifics inhibitors such as SC-560 for COX-1 and NS-398 for COX-2. The present study demonstrated by various assays where inhibition of COX-1 and COX-2 by IBP, SC-560 and NS-398, significantly inhibited migration and cell proliferation of U251-MG cell line. Thus, we conclude that PGE2 is involved in this cell line migration and cell proliferation.

O glioblastoma multiforme (GBM) é um dos gliomas mais comuns, classificado como um glioma de grau IV (Organização Mundial da Saúde - OMS) e notoriamente difícil de ser tratado. O tratamento recomendado consiste na ressecção cirúrgica seguida de radio e quimioterapia, e a sobrevida média dos pacientes é de apenas 12 meses após o diagnóstico. Portanto, novas terapias que focam a redução do volume do tumor e o aumento da morte das células tumorais são urgentemente necessárias. Estudos pré-clínicos sugerem que a inibição de COX-1 e 2 com Anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs), como o Ibuprofeno (IBP), inibiram significantemente a proliferação e a migração celular em diferentes tumores. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar in vitro o efeito da inibição de COX-1 e COX-2 através do tratamento com IBP, e também com inibidores específicos como SC-560 e NS-398 respectivamente, na migração e na proliferação da linhagem celular de glioma humano U251-MG. O presente estudo demonstrou através de diversos ensaios que a inibição de COX-1 e COX-2 através do IBP, do SC-560 e do NS-398 inibiu significativamente a migração e a proliferação celular da linhagem celular U251-MG. Dessa maneira, concluímos que a PGE2 está envolvida na migração e proliferação celular das células desta linhagem celular. / Glioblastoma Multiforme (GBM) is the most common glioma, classified as grade IV (World Health Organization WHO) and notoriously difficult to treat. The recommended treatment consists of surgery followed by radiotherapy and chemotherapy, and the median survival is ten to twelve months. Preclinical studies suggest that inhibiton of cyclooxygenase-2 by treatment with non-steroidal anti-inflammatory drugs, such as ibuprofen, significantly blocked the proliferation of different tumors including gliomas. Thus this study aimed to evaluate the migration of glioma cell line U251-MG after inhibition of cyclooxygenases 1 and 2 by treatment with ibuprofen (IBP), and specifics inhibitors such as SC-560 for COX-1 and NS-398 for COX-2. The present study demonstrated by various assays where inhibition of COX-1 and COX-2 by IBP, SC-560 and NS-398, significantly inhibited migration and cell proliferation of U251-MG cell line. Thus, we conclude that PGE2 is involved in this cell line migration and cell proliferation.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T05:33:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O objetivo desta tese foi gerar conhecimento sobre as exigências dietéticas em ácidos graxos para o jundiá. Para isto foram realizados três estudos. O primeiro objetivou avaliar o crescimento de juvenis com diferentes fontes lipídicas. Cinco dietas, cuja variação na concentração de ácidos graxos essenciais foi obtida com a adição de diferentes fontes de lipídios na dieta, foram oferecidas a juvenis (1,5 g) durante 70 dias. Observou-se um crescimento adequado do jundiá com concentrações de 4 g kg-1 de 18:3 n-3 e de 10 g kg-1 de 18:2 n-6. A relação ideal entre os ácidos graxos essenciais da série n-3 e n-6 na dieta foi de 0,7. Portanto, dietas para o jundiá podem conter somente óleos vegetais como fonte lipídica, sem que haja prejuízo ao seu crescimento. O segundo estudo objetivou avaliar o efeito da inclusão de diferentes fontes de lipídios na dieta sobre a sobrevivência e a fagocitose dos leucócitos de juvenis de jundiá, após desafio com Aeromonas hydrophila hydrophila. Cinco dietas, contendo 8% de óleo de peixe, óleo de girassol, óleo de linhaça, óleo de canola ou gordura de coco foram oferecidas a juvenis (2,1 g) durante 150 dias, antes do desafio. A mortalidade foi menor nos peixes alimentados com as dietas que continham óleo de peixe e gordura de coco e superior nos alimentados com a dieta contendo óleo de linhaça. Os resultados evidenciam a relevância de utilizar uma fonte lipídica balanceada na dieta para promover a resposta imune da espécie. O terceiro estudo objetivou determinar a composição de ácidos graxos dos ovários de jundiás selvagens nos diferentes estádios de maturação gonadal. Fêmeas (n = 36) foram capturadas e classificadas segundo o estado de maturação da sua gônada. Constatou-se que a concentração de ácido araquidônico (20:4 n-6) é maior no início da maturação gonadal, enquanto que os ácidos graxos altamente insaturados da série n-3 (20:5 e 22:6) o são no final da maturação. Portanto, dietas para reprodutores da espécie devem incluir fontes lipídicas que contenham estes ácidos graxos altamente insaturados.

Este estudo teve por objetivos: i) caracterizar o influxo leucocitário induzido pelo veneno de Bothrops insularis (VBi); ii) avaliar a liberação de PGD2 e PGE2, TXA2 e LTB4 e das quimiocinas MCP-1 e KC induzida pelo VBi; iii) analisar a ação do VBi quanto a expressão protéica das enzimas ciclooxigenases (COX -1 e -2) e iv) avaliar a participação dos metabólitos das COX-1 e -2 e 5-LO no influxo leucocitário. O VBi causou aumento de leucócitos circulantes e do influxo de leucócitos PMN e MN para o local de sua injeção. Ainda, veneno induziu a liberação de PGD2, PGE2, TXA2 e LTB4, da MCP-1, mas não da KC, além da expressão protéica de COX-2. O tratamento dos animais com indometacina, etoricoxibe ou zileuton inibiu o influxo de leucócitos induzido pelo VBi na 12ª h. Em conclusão, o VBi tem capacidade de induzir influxo de leucócitos e liberação de mediadores inflamatórios para o local de sua injeção. O influxo leucocitário relaciona-se aos metabólitos das COX -1 e -2, 5-LO, da MCP-1 e do aumento de leucócitos circulantes / In this study the effects of Bothrops insularis venom (BiV) on the leukocyte influx, on the circulating leukocyte numbers and release of mediators, such as PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 and KC into the local of its injection. Moreover, the role of eicosanoids in the BiV- induced leukocyte influx was assessed by selected pharmacological treatments. PMN were accumulated from 6 up to 24 h and MN cells from 3 up to 72 h when injected into the peritoneal cavity of mice. Moreover, BiV increased blood leukocyte at 3 h after injection and incresed the levels of PGD2, PGE2, TXA2, LTB4, MCP-1 at distinct periods of time. In addition, BiV induced the protein expression of COX-2 from 1 up to 12 h and the BiV-induced leukocyte influx was reduced by indomethacin or etoricoxib or zileuton at 12 h after injection. In conclusion, BiV is able to induce leukocyte influx and increase of blood leukocyte numbers. Moreover, the ability of BiV to induce expression of COX-2 and release of inflammatory mediators is relevant for the leukocytes influx into the local of its injection

O glioblastoma multiforme (GBM) é a forma mais maligna de tumor cerebral, originado de células astrocíticas e caracterizado pela intensa proliferação, angiogênese e invasão celular pelo parênquima cerebral normal. O ácido gama-linolênico (GLA) mostrou ter ações anti-tumorais, nos processos de proliferação, migração e angiogênese. Utilizou-se o modelo ortotópico de GBM de rato (C6) e o modelo ex vivo tratados com GLA para análise de migração e proliferação celular. Foi observada uma redução da imunomarcação do fator de crescimento para endotélio vascular (VEGF), seu receptor Flt-1 e da metaloproteinase-2 de matriz, com consequente diminuição de vasos após o tratamento com GLA. No modelo ex vivo observou que o GLA reduziu a distância de migração e a mitose das células tumorais e também causou aumento das células tumorais em processo de apoptose. Os resultados revelaram que o GLA foi capaz de modular a expressão de algumas proteínas envolvidas nos processos angiogênico, migratório e proliferativo do GBM, o que sugere a sua utilização no tratamento desta patologia. / Glioblastoma multiforme (GBM) is the most malignant form of brain tumour originating from astrocytes and is characterized by intense proliferation, angiogenesis and cell invasion through the normal brain parenchyma. Gamma-linolenic acid (GLA) has anti-tumour activities in the processes of proliferation, migration and angiogenesis. This study used the orthotopic GBM rat model (C6) and ex vivo model treated with GLA to analyze cell migration and proliferation. Decreased immunostaining was observed for vascular endothelial growth factor (VEGF), its receptor Flt-1 and matrix metalloproteinase-2, with consequent reduction of blood vessels after treatment with GLA. In the ex vivo model GLA reduced the migration distance and mitosis of tumor cells and increased tumour cell apoptosis. The results revealed that GLA was able to modulate the expression of several proteins involved in angiogenesis, migration and proliferation in GBM, supporting the use of GLA in the treatment of this disease.

A galectina-1 (Gal-1) pertence a uma família de lectinas endógenas que reconhecem ß-galactosídeos e atuam em vários processos biológicos. A Gal-1 pode modular a resposta imunológica por vários mecanismos incluindo o controle da liberação de citocinas pró e anti-inflamatórias e o direcionamento dessa resposta para um padrão do tipo TH2. Apesar da Gal-1 participar de vários processos fisiopatológicos, na literatura não existe relatos sobre o papel dessa lectina em infecções fúngicas. O objetivo deste trabalho foi investigar o impacto biológico da Gal-1 no modelo experimental de histoplasmose murina. Os camundongos (Gal-1-/- e Gal-1+/+) foram inoculados, por via intratraqueal, com uma carga fúngica sub-letal (5x105 leveduras) e a sobrevida desses animais foi avaliada até o 30o dia de infecção. Considerando que o início da mortalidade dos animais ocorreu após duas semanas de infecção, as demais análises foram realizadas em amostras obtidas no 15o dia. O grau de disseminação do H. capsulatum foi analisado pela contagem do número de unidades formadoras de colônia, em partes de pulmões ou baços dos animais infectados. Os cortes de pulmões foram corados por hematoxilina eosina ou por prata (GMS), para investigação histopatológica e quantificação de neutrófilos ou fungos, respectivamente. Nos fluídos bronco-alveolares (BAL) foram realizadas contagens globais e diferenciais de leucócitos. As dosagens de citocinas e de prostagladina E2 foram feitas por ELISA, em homogeneizados de pulmões. A coloração por tetróxido de ósmio foi usada na avaliação da capacidade da Gal-1 de induzir ou modular a formação de corpúsculos lipídicos, in vitro, por componentes do fungo. Nos soros dos animais de experimentação foi determinada a concentração total de nitrito, como indicador da produção de óxido nítrico. A análise dos resultados de sobrevivência indicou que 100% dos animais Gal-1+/+ resistiram à infecção por H. capsulatum; ao contrário, apenas 33% dos animais Gal-1-/- sobreviveram. Os números médios de unidades formadoras de colônias recuperadas no pulmão e no baço de camundongos Gal-1-/- foram de 2,7 e 3,8 vezes maiores do que os obtidos de animais Gal-1+/+, respectivamente. De modo semelhante, os números médios de neutrófilos e fungos no pulmão de animais Gal-1-/-, foram superiores aos valores encontrados nos pulmões de animais grupo Gal-1+/+. Curiosamente, nos homogeneizados pulmonares dos e o dobro da concentração de nitrito total sérico. Além disso, nos homogeneizados de pulmão dos animais Gal-1desafiados com o fungo, detectou-se elevadas concentrações de citocinas do tipo T1 e inflamatórias (IFN-, IL-1 e IL-12) em comparação com amostras de animais selvagens. Em ensaios in vitro, esta lectina não foi capaz de induzir corpúsculos em células do lavado peritoneal de camundongos Gal-1e Gal-1, entretanto inibiu parcialmente a formação induzida por F1 e -glucana. Finalmente, sugerimos que a Gal-1 pode participar da montagem de uma resposta imunológica protetora contra o Histoplasma capsulatum, por modular a liberação de citocinas inflamatórias, síntese de eicosanóides, geração de óxido nitrito; e por controlar a migração e/ou as funções de leucócitos. Além disso, os dados obtidos desse trabalho poderão auxiliar no melhor entendimento da fisiopatologia da histoplasmose e no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas envolvendo o reconhecimento de carboidratos na resposta imunológica. / Galectin-1 (Gal-1) belongs an endogenous lectins family that recognizes -galactoside and participates of various biological activities. This lectin can modulate the innate and adaptative immune responses. Although, Gal-1 participates of various pathophysiological processes, in literature we did not find reports related to the participation of Gal-1 in fungal infections. The aim of this work was to investigate the biological impact of Gal-1 in the experimental histoplasmosis. The mice (GAL-1-/- and GAL-1+/+) were injected (i.t.) with 5 x 105 yeast cell and at 15 days post-infection, BALF cells and lungs cytokine and PGE2 were measured by ELISA. The Recovery of H. capsulatum was made in lung and spleen and the fungal burden was assessed as the CFU per organ. The lung slices were stained by hematoxiline eosin or with Gomoris methanemine silver (GMS) and submitted to histopathological investigation and quantification of neutrophil or fungus, respectively. Total and differential cell counts of the bronchoalveolar lavage (BAL).were performed using diluting solution in Neubauer chamber and Rosenfeld-stained smear. The capacity of Gal-1 to induce or modulate the lipids bodies formation by fungus components was analyzed by staining treated cells with osmium tetroxide. The total nitrite (NO2) concentration in the animals serum was measured by Griess reaction. All H. capsulatum-infected wild type mice survived until 30 days post-infection, whereas only 33% of the Gal-1-/- infected mice died during of this period of observation. At 15 days post-infection, CFU were found to be higher in the spleens or lung from infected-Gal1-/- mice. The number of neutrophils in the lung of the infected-Gal-1-/- mice higher than infected Gal-1+/+ animals. Curiously, H. capsulatum infected Gal-1-/- mice, presented higher levels of PGE2 and TH1 inflammatory cytokines (IFN-, IL-1 e IL-12) in comparison with wild type infected-mice. Adherent peritoneal cells peritoneal derived from Gal-1+/+ and Gal-1-/- mice and treated with Gal-1 did not induce lipid bodies. However, the capacity of F1 e -glucan to induce lipid bodies on the peritoneal cells was inhibited by gal-1 treatment. We suggest that the Gal-1 could participate of the development of a protective immune response to H. capsulatum.

O glioblastoma multiforme (GBM) é a forma mais maligna de tumor cerebral, originado de células astrocíticas e caracterizado pela intensa proliferação, angiogênese e invasão celular pelo parênquima cerebral normal. O ácido gama-linolênico (GLA) mostrou ter ações anti-tumorais, nos processos de proliferação, migração e angiogênese. Utilizou-se o modelo ortotópico de GBM de rato (C6) e o modelo ex vivo tratados com GLA para análise de migração e proliferação celular. Foi observada uma redução da imunomarcação do fator de crescimento para endotélio vascular (VEGF), seu receptor Flt-1 e da metaloproteinase-2 de matriz, com consequente diminuição de vasos após o tratamento com GLA. No modelo ex vivo observou que o GLA reduziu a distância de migração e a mitose das células tumorais e também causou aumento das células tumorais em processo de apoptose. Os resultados revelaram que o GLA foi capaz de modular a expressão de algumas proteínas envolvidas nos processos angiogênico, migratório e proliferativo do GBM, o que sugere a sua utilização no tratamento desta patologia. / Glioblastoma multiforme (GBM) is the most malignant form of brain tumour originating from astrocytes and is characterized by intense proliferation, angiogenesis and cell invasion through the normal brain parenchyma. Gamma-linolenic acid (GLA) has anti-tumour activities in the processes of proliferation, migration and angiogenesis. This study used the orthotopic GBM rat model (C6) and ex vivo model treated with GLA to analyze cell migration and proliferation. Decreased immunostaining was observed for vascular endothelial growth factor (VEGF), its receptor Flt-1 and matrix metalloproteinase-2, with consequent reduction of blood vessels after treatment with GLA. In the ex vivo model GLA reduced the migration distance and mitosis of tumor cells and increased tumour cell apoptosis. The results revealed that GLA was able to modulate the expression of several proteins involved in angiogenesis, migration and proliferation in GBM, supporting the use of GLA in the treatment of this disease.

A galectina-1 (Gal-1) pertence a uma família de lectinas endógenas que reconhecem ß-galactosídeos e atuam em vários processos biológicos. A Gal-1 pode modular a resposta imunológica por vários mecanismos incluindo o controle da liberação de citocinas pró e anti-inflamatórias e o direcionamento dessa resposta para um padrão do tipo TH2. Apesar da Gal-1 participar de vários processos fisiopatológicos, na literatura não existe relatos sobre o papel dessa lectina em infecções fúngicas. O objetivo deste trabalho foi investigar o impacto biológico da Gal-1 no modelo experimental de histoplasmose murina. Os camundongos (Gal-1-/- e Gal-1+/+) foram inoculados, por via intratraqueal, com uma carga fúngica sub-letal (5x105 leveduras) e a sobrevida desses animais foi avaliada até o 30o dia de infecção. Considerando que o início da mortalidade dos animais ocorreu após duas semanas de infecção, as demais análises foram realizadas em amostras obtidas no 15o dia. O grau de disseminação do H. capsulatum foi analisado pela contagem do número de unidades formadoras de colônia, em partes de pulmões ou baços dos animais infectados. Os cortes de pulmões foram corados por hematoxilina eosina ou por prata (GMS), para investigação histopatológica e quantificação de neutrófilos ou fungos, respectivamente. Nos fluídos bronco-alveolares (BAL) foram realizadas contagens globais e diferenciais de leucócitos. As dosagens de citocinas e de prostagladina E2 foram feitas por ELISA, em homogeneizados de pulmões. A coloração por tetróxido de ósmio foi usada na avaliação da capacidade da Gal-1 de induzir ou modular a formação de corpúsculos lipídicos, in vitro, por componentes do fungo. Nos soros dos animais de experimentação foi determinada a concentração total de nitrito, como indicador da produção de óxido nítrico. A análise dos resultados de sobrevivência indicou que 100% dos animais Gal-1+/+ resistiram à infecção por H. capsulatum; ao contrário, apenas 33% dos animais Gal-1-/- sobreviveram. Os números médios de unidades formadoras de colônias recuperadas no pulmão e no baço de camundongos Gal-1-/- foram de 2,7 e 3,8 vezes maiores do que os obtidos de animais Gal-1+/+, respectivamente. De modo semelhante, os números médios de neutrófilos e fungos no pulmão de animais Gal-1-/-, foram superiores aos valores encontrados nos pulmões de animais grupo Gal-1+/+. Curiosamente, nos homogeneizados pulmonares dos e o dobro da concentração de nitrito total sérico. Além disso, nos homogeneizados de pulmão dos animais Gal-1desafiados com o fungo, detectou-se elevadas concentrações de citocinas do tipo T1 e inflamatórias (IFN-, IL-1 e IL-12) em comparação com amostras de animais selvagens. Em ensaios in vitro, esta lectina não foi capaz de induzir corpúsculos em células do lavado peritoneal de camundongos Gal-1e Gal-1, entretanto inibiu parcialmente a formação induzida por F1 e -glucana. Finalmente, sugerimos que a Gal-1 pode participar da montagem de uma resposta imunológica protetora contra o Histoplasma capsulatum, por modular a liberação de citocinas inflamatórias, síntese de eicosanóides, geração de óxido nitrito; e por controlar a migração e/ou as funções de leucócitos. Além disso, os dados obtidos desse trabalho poderão auxiliar no melhor entendimento da fisiopatologia da histoplasmose e no desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas envolvendo o reconhecimento de carboidratos na resposta imunológica. / Galectin-1 (Gal-1) belongs an endogenous lectins family that recognizes -galactoside and participates of various biological activities. This lectin can modulate the innate and adaptative immune responses. Although, Gal-1 participates of various pathophysiological processes, in literature we did not find reports related to the participation of Gal-1 in fungal infections. The aim of this work was to investigate the biological impact of Gal-1 in the experimental histoplasmosis. The mice (GAL-1-/- and GAL-1+/+) were injected (i.t.) with 5 x 105 yeast cell and at 15 days post-infection, BALF cells and lungs cytokine and PGE2 were measured by ELISA. The Recovery of H. capsulatum was made in lung and spleen and the fungal burden was assessed as the CFU per organ. The lung slices were stained by hematoxiline eosin or with Gomoris methanemine silver (GMS) and submitted to histopathological investigation and quantification of neutrophil or fungus, respectively. Total and differential cell counts of the bronchoalveolar lavage (BAL).were performed using diluting solution in Neubauer chamber and Rosenfeld-stained smear. The capacity of Gal-1 to induce or modulate the lipids bodies formation by fungus components was analyzed by staining treated cells with osmium tetroxide. The total nitrite (NO2) concentration in the animals serum was measured by Griess reaction. All H. capsulatum-infected wild type mice survived until 30 days post-infection, whereas only 33% of the Gal-1-/- infected mice died during of this period of observation. At 15 days post-infection, CFU were found to be higher in the spleens or lung from infected-Gal1-/- mice. The number of neutrophils in the lung of the infected-Gal-1-/- mice higher than infected Gal-1+/+ animals. Curiously, H. capsulatum infected Gal-1-/- mice, presented higher levels of PGE2 and TH1 inflammatory cytokines (IFN-, IL-1 e IL-12) in comparison with wild type infected-mice. Adherent peritoneal cells peritoneal derived from Gal-1+/+ and Gal-1-/- mice and treated with Gal-1 did not induce lipid bodies. However, the capacity of F1 e -glucan to induce lipid bodies on the peritoneal cells was inhibited by gal-1 treatment. We suggest that the Gal-1 could participate of the development of a protective immune response to H. capsulatum.

Dentro da perspectiva da utilização de compostos fenólicos como antioxidantes naturais para minimizar os efeitos in vitro e in vivo do processo oxidativo dos lípides insaturados, foi realizada a monitoração dietética de duas dietas ricas em lípides das séries ω3 e ω6 e a suplementação de um chá de uma mistura de especiarias, em ratos Wistar, com o objetivo de verificar a influência dos compostos fenólicos, presentes nas especiarias, sobre o metabolismo de ácidos graxos das séries ω3 e ω6. Extratos e frações das especiarias mostarda, canela e erva doce foram obtidos e tiveram suas atividades antioxidantes testadas em sistemas aquoso (cooxidação de substratos com o uso de ácido linoléico/β-caroteno) e lipídico (RANCIMAT) e o perfil de compostos fenólicos identificados e quantificados por CGMS. A partir de uma mistura de especiarias, foi elaborado um chá que foi fornecido aos animais de cada grupo dietético (ω3 e ω6). Após 45 dias de tratamento, os animais foram sacrificados e tiveram seus tecidos coletados para análise de TBARs e do perfil lipídico por CGMS. Todos os extratos das especiarias apresentaram atividade antioxidante equivalente ou superior ao BHT. Foram identificados por CGMS os ácidos fenólicos: catecol, salicílico e caféico. Foi obtido nos tecidos dos animais que o somatório do perfil de ácidos graxos saturados e dos insaturados apresentaram diferença entre os grupos testes e controles. Logo, no tecido cerebral, o EPA foi incorporado apenas no grupo ω3 que recebeu o extrato das especiarias. Já para o DHA, do mesmo grupo dietético, os tecidos hepático e renal também apresentaram incorporação aumentada em relação ao controle. No grupo dietético ω6, destaca-se um aumento no percentual de incorporação do ácido linoléico nos tecidos cardíaco e renal no grupo experimental. Enquanto, para o ácido araquidônico, houve diferença em todos os tecidos. Já, para os resultados da lipoperoxidação, observou-se que todos os tecidos dos animais que receberam o extrato das especiarias apresentaram baixos valores em comparação aos seus respectivos controles. Este estudo também avaliou a ação de compostos fenólicos do chá da mistura das especiarias mostarda, canela e erva doce sobre as enzimas lipoxigenase e cicloxigenase. O extrato da mistura das especiarias a 100 e 200 ppm foi adicionado no meio de reação contendo o substrato e a enzima lipoxigenase 1B da Sigma com 112.000 und/mg. A cicloxigenase foi obtida de vesículas seminais de carneiro e seguiu-se o mesmo protocolo de atividade para a lipoxigenase. Indometacina foi o inibidor utilizado como controle positivo da reação. Observou-se que a 200 ppm, como na concentração do chá (0,02%), a lipoxigenase foi inibida em aproximadamente em 90%. Já para a cicloxigenase, o extrato a 200 ppm resultou numa média de 75% de inibição da atividade da enzima, enquanto que a indomentacina apresentou uma média de 77% de inibição. A absorção aparente do chá das especiarias indicou que os fenólicos presentes na mistura foram absorvidos em média de 75%. O estudo histopatológico dos intestinos delgados dos animais não apresentou nenhuma diferença na área de absorção entre o grupo experimental e o controle. Estes dados sugerem, portanto, um efeito antioxidante das substâncias fenólicas identificadas nas especiarias sobre os ácidos graxos das séries ω3 e ω6, podendo agir diretamente: (1) no alimento (óleo), (2) com modificação do perfil lipídico, (3) proteção quanto à oxidação de tecidos e (4) inibição das enzimas da biossíntese dos eicosanóides. / Considering the perspective for the use of phenolic compounds as natural antioxidants to minimize in vitro and in vivo effects of oxidative processes on unsaturated lipids, this work monitored Wistar rats fed with two diets rich in ω3 and ω6 polyunsaturated lipids, supplemented with tea made from a blend of spices. The objective of the work was to study the influence of phenolic compounds present in spices on the metabolism of ω3 and ω6 fatty acids. Extracts and fractions of mustard, cinnamon and anise were obtained and had their antioxidant activity tested in aqueous (co-oxidation of substrates using linoleic acid/β-carotene) and lipidic systems (RANCIMAT). Their phenolic compounds profile was determined and quantified using CGMS. The rats of each diet group (ω3 and ω6) were given tea made from a blend of spices and sacrificed after 45 days. Their tissues were then collected and analyses of TBARS and lipid profile were performed using CGMS. Ali the extracts of spices showed equal or higher antioxidant activity than BHT. The following phenolic acids were identified using CGMS: cathecol, salicilic and cafeic. It was observed that the total amount of the profile of saturated and unsaturated fatty acids in the rat tissues were different in the test group and the control group. In brain tissue, EPA was found only in the ω3 diet group which was given the tea. Concerning DHA, liver and kidney tissues of the same diet group showed higher concentrations than the control group. In the ω6 diet group, an outstanding increase of linoleic acid in cardiac and kidney tissues was found. Concerning the arachidonic acid, a difference in concentration was observed in ali tissues. Ali the tissues from rats given the tea presented a lower level of lipid peroxidation than their respective control groups. The present research also evaluated the action of phenolic compounds found in the tea made from the blend of mustard, cinnamon and anise on the enzymes lipoxygenase and cycloxygenase. The extract of the blend of spices, in the concentrations of 100 and 200 ppm, was added to the substrate and Sigma lipoxygenase 112.000 units/mg. Cycloxygenase was obtained from sheep seminal bladders and underwent the same protocol as lipoxygenase. Indomethacin was the inhibitor used as the positive control of the reaction. It was observed that in the concentration of 200 ppm (that is 0.02%, the same concentration as in the tea), lipoxygenase presented an average 90% inhibition. The extract of cycloxygenase 200 ppm presented 75% inhibition of the enzyme activity, while indomethacin presented an average 77% inhibition. It was found that around 75% of the phenolic compounds present in the tea made from the blend of spices were absorbed, thus leading to the conclusion that apparent absorption of the tea took place. Histopathologic examinations on the small intestines of the rats did not reveal any difference in the absorption area between the experimental and the control groups. Such results suggest therefore an antioxidant effect of the phenolic substances identified in the spices on the ω3 and ω6 fatty acids, this effect being possible directly (1) on the food (oil) , (2) modification of the profile fatty acids, (3) oxidation protection tissues and, (4) inhibition of enzymes of eicosanoids biosinthesys.