O Citocromo P450 (CYP) é responsável pela biotransformação de fármacos, poluentes e outros xenobióticos. O lercanidipino (LER), empregado na clínica como racemato no tratamento da hipertensão arterial, é biotransformado pelo CYP3A4. O etilbenzeno (EBZ), um solvente de ampla utilização industrial, é substrato e indutor do CYP3A em ratos. O estudo visa investigar a influência do EBZ na farmacocinética enantiosseletiva do LER administrado sob forma racêmica a ratos. Foram investigados ratos Wistar tratados com dose única de 3 mg kg-1 de LER racêmico administrado por gavagem. Os animais foram divididos em 3 grupos: controle, expostos ao EBZ 436 mg/m3 e expostos ao EBZ 876 mg/m3. Os animais foram expostos ao EBZ durante 6 horas, em câmara de exposição, do tipo somente pelo nariz, por 5 dias consecutivos. As amostras seriadas de sangue (n=6 animais por tempo de coleta) foram coletadas até 6 horas após a administração do LER. Os enantiômeros do LER em plasma de ratos foram analisados em coluna de fase quiral utilizando LC-MS/MS. A farmacocinética do LER é enantiosseletiva em ratos do grupo controle com acúmulo plasmático do distômero (-)- (R)-LER (AUC0-? = 19,23 vs 5,53 Ig min-1 mL-1) e razões enantioméricas de concentrações plasmáticas (-)-(R)/(+)-(S)-LER com mediana de 3,87. O clearance aparente (78,25 vs 277,08 mL min-1 kg-1) e o volume de distribuição aparente (16,63 vs 48,95 L kg-1) mostraram-se reduzidos para o distômero (-)-(R)-LER. A disposição cinética do LER para os animais dos grupos EBZ 436 mg/m3 e 876 mg/m3, à semelhança do grupo controle, foi enantiosseletiva com observação de acúmulo plasmático do enantiômero (-)-(R)-LER. O acúmulo plasmático do enantiômero (-)-(R)- LER, traduzido pelo parâmetro AUC0-?, respectivamente para os grupos EBZ 436 mg/m3 e 876 mg/m3 (34,06 vs 10,23 Ig min mL-1 e 23,79 vs 6,97 Ig min mL-1) foi decorrente do menor volume de distribuição (17,02 vs 57,79 L kg-1 e 23,11 vs 76,05 L kg-1) e do menor clearance aparente (44,87 vs 147,60 mL min-1 kg-1 e 65,57 vs 258,21 mL min-1 kg-1). Não foram observadas diferenças nas razões de AUC(-)/(+) entre os grupos controle (3,87), EBZ 436 mg/m3 (3,35) e EBZ 876 mg/m3 (4,26). Os parâmetros farmacocinéticos relativos aos enantiômeros do LER não mostraram diferenças significativas entre os animais do grupo controle e os animais expostos ao EBZ nas concentrações 434 e 868 mg/m3. / Cytochrome P450 (CYP) is responsible for biotransformation of drugs, pollutants and other xenobiotics. Lercanidipine (LER), clinically employed as quiral compound in the treatment of arterial hypertension, is biotransformed by CYP3A4. Etylbenzene (EBZ), a solvent of large industrial use, is substrate and inducer of CYP3A in rats. The present study investigated influence of EBZ in pharmacokinetics of racemic LER 3 mg kg-1 in rats. Animals were divided into 3 groups: control, exposed to EBZ 436 mg/m3 and exposed to EBZ 876 mg/m3. Animals were exposed to EBZ during 6 hours, in a chamber of exposition with nose only exposure system, 5 consecutive days. Serial blood samples (n=6, each time of collection) were collected up to 6 hours after LER administration. LER enantiomers were separated on a quiral phase column and analyzed by LC-MS/MS. LER pharmacokinetics was enantiosselective in control rats not treated with EBZ, with plasma accumulation of (-)-(R)-LER distomer (AUC0-? = 19.23 vs 5.53 Ig min-1 mL-1) and enantiomeric ratios of (-)-(R)/(+)-(S)-LER of 3.87. Apparent clearance (78.25 vs 277.08 mL min-1 kg-1) and apparent volume of distribution (16.63 vs 48.95 L kg-1) were decreased for (-)-(R)-LER distomer. Kinetic disposition of LER for animals exposed to EBZ 436 and 876 mg/m3, as for control group, was enantiosselective with plasma accumulation of (-)-(R)-LER enantiomer. Plasmatic accumulation of (-)-(R)-LER enantiomer for 436 mg/m3 and 876 EBZ mg/m3 groups (34.06 vs 10.23 Ig min mL-1 and 23.79 vs 6.97 Ig min mL-1, respectively) was consequent of lower volume of distribution (17.02 vs 57.79 L kg-1 and 23.11 vs 76.05 L kg-1) and lower apparent clearance (44.87 vs 147.60 mL min-1 kg-1 and 65.57 vs 258.21 mL min-1 kg-1). No differences were observed in AUC(-)/(+) ratios between the control group (3.87), 436 EBZ mg/m3 (3,35) and EBZ 876 mg/m3 (4.26). Pharmacokinetic parameters of LER enantiomers did not show significant differences between animals of control group and exposed animals to EBZ 434 and 868 mg/m3.

Considerando que o metoprolol é metabolizado preferencialmente pelos CYP3A e CYP2D e que o etilbenzeno é um indutor do CYP3A em ratos, o presente estudo visa investigar a influência da exposição ao etilbenzeno, por via inalatória, na disposição cinética e no metabolismo estereosseletivos do metoprolol. Foram utilizados ratos Wistar machos, tratados com dose única de 15 mg/kg ou 30mg/kg de metoprolol racêmico (gavagem). Os animais foram divididos em 4 grupos, sendo dois controles (15 e 30mg/kg) e dois expostos ao etilbenzeno em concentrações de 434mg/m3 e 1736mg/m3 e tratados com 15mg/kg de metoprolol. Os animais foram expostos ao etilbenzeno durante 6 horas/dia, por 5 dias consecutivos, em câmara de exposição do tipo somente pelo nariz. As amostras seriadas de sangue (n=6 animais por tempo de coleta) foram coletadas até 6 horas após a administração do metoprolol. Os enantiômeros foram analisados no plasma por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por fluorescência e a farmacocinética do metoprolol foi avaliada empregando modelo bicompartimental. O metoprolol na dose de 30mg/kg exibe farmacocinética não linear, com acúmulo plasmático de ambos os enantiômeros do metoprolol e redução do clearance do enantiômero R-(+)-metoprolol (39,91 vs 78,37 L/h/kg) quando comparado ao grupo de animais tratados com a dose de 15mg/kg. A farmacocinética do metoprolol na dose de 15mg/kg é linear e não enantiosseletiva. A exposição ao etilbenzeno inalado na concentração de 434mg/m3 (1 LEO) não altera a farmacocinética de ambos os enantiômeros do metoprolol. A exposição ao etilbenzeno inalado na concentração de 1736mg/m3 (4 LEO) aumenta o clearance de ambos os enantiômeros do metoprolol em aproximadamente 3 vezes (224,66 vs 78,37 L/h/kg e 213,62 vs 73,63 L/h/kg), respectivamente para os enantiômeros R-(+)- e S-(-)-metoprolol. O aumento do clearance de ambos os enantiômeros do metoprolol no grupo de animais expostos ao etilbenzeno inalado na concentração de 1736mg/m3 (4 LEO) pode ser explicado pelo aumento na formação de ambos os enantiômeros dos metabólitos O-desmetilmetoprolol (AUC0-122,84 vs 61,57 ng/h/mL e 92,33 vs 58,56 ng/h/mL, respectivamente para os enantiômeros R-(+)- e S-(-)-) e ácido O-desmetilmetoprolóico (AUC0- 8592,0 vs 6812,5 ng/h/mL e 8733,0 vs 6787,0 ng/h/mL respectivamente para os enantiômeros R-(+)- e S-(-)-). Os dados permitem inferir que ratos expostos durante 5 dias, 6h/dia, ao etilbenzeno na concentração de 4 vezes o LEO, mostram indução de maneira não enantiosseletiva no metabolismo de ambos os isômeros do metoprolol. / Metoprolol is mainly metabolized by CYP3A and CYP2D and ethylbenzene is an inducer of CYP3A in rats. In view of these considerations, the objective of the present study was to investigate the influence of low-level inhalation exposure to ethylbenzene on the kinetic dispo¬sition and metabolism of metoprolol enantiomers. Male Wistar rats were received a single dose of 15 or 30 mg/kg racemic metoprolol by gavage. The animals were divided into 4 groups: two control groups (15 and 30 mg/kg) and two groups exposed to ethylbenzene at concentrations of 434 and 1736 mg/m3. The animals were exposed to ethylbenzene in a nose-only exposure chamber for 6 h/day during 5 consecutive days. Serial blood samples (n=6 animals per sampling time) were collected during the first 6 h after metoprolol administration. The isomers of metoprolol and its metabolites were analyzed in plasma samples by high-performance liquid chromatography with fluorescence detection. Pharmacokinetic analysis was performed using a two-compartment model. Metoprolol administered at a dose of 30 mg/kg showed nonlinear pharmacokinetics, with plasma accumulation of both metoprolol enantiomers and a reduction in the clearance of R-(+)-metoprolol (39.91 vs 78.37 L/h/kg) when compared to the group receiving the dose of 15 mg/kg. The kinetic disposition of the enantiomers of metoprolol administered at a dose of 15 mg/kg was linear and non-enantioselective. Exposure to 434 mg/m3 ethylbenzene did not influence the pharmacokinetics of either metoprolol enantiomer. Exposure to 1736 mg/m3 ethylbenzene increased the clearance of both metoprolol enantiomers by approximately 300% (224.66 vs 78.37 L/h/kg and 213.62 vs 73.63 L/h/kg for the R-(+)- and S-(-)-metoprolol enantiomer, respectively). These changes in clearance might be explained by an increase in the formation of the enantiomers of the two metabolites O-demethylmetoprolol (AUC0-: 122.84 vs 61.57 ng/h/mL and 92.33 vs 58.56 ng/h/mL for the R-(+)- and S-(-)- enantiomer, respectively) and O-demethylmetoprolol acid (AUC0-: 8592.0 vs 6812.5 ng/h/mL and 8733.0 vs 6787.0 ng/h/mL). In conclusion, inhalation exposure of rats to ethylbenzene at a concentration of 1736 mg/m3 for 5 days, 6 h per day, resulted in the non-enantioselective induction of the metabolism of metoprolol.

A farmacocinética dos enantiômeros da ciclofosfamida (CPA) foi avaliada em pacientes portadores de nefrite lúpica distribuídos em dois grupos de acordo com o clearance da creatinina: Grupo 1 90,6-144,6mL/min/1,73m2 e Grupo 2 42,8-76,4mL/min/1,73m2. Os pacientes foram tratados com doses de 0,75 a 1,3g de ciclofosfamida racêmica sob forma de infusão com duração de 2h e com 1mg de midazolam (MDZ) administrado via endovenosa para a avaliação da atividade in vivo do CYP3A. As concentrações plasmáticas dos enantiômeros da CPA e do MDZ foram avaliadas por LC-MS/MS. Os enantiômeros da CPA foram resolvidos na coluna Chiralcel OD-R, com fase móvel constituída por mistura de acetonitrila e água (75:25, v/v) adicionada de 0,2% de ácido fórmico. Os enantiômeros da CPA foram extraídos do plasma com recuperações maiores que 95% e o limite de quantificação obtido foi de 2,5ng de cada enantiômero da CPA/mL plasma. As seguintes diferenças (teste de Wilcoxon, p<0,05) foram observadas nos parâmetros farmacocinéticos entre os enantiômeros (S)-(-)-CPA e (R)-(+)-CPA para os pacientes do Grupo 1: AUC do tempo 0 ao infinito 152,41 vs 129,25g.h/mL; Cl 3,28 vs 3,89L/h; Vd 31,38 vs 29,74L e t1/2 6,79 vs 5,56h e para os pacientes do Grupo 2: AUC do tempo 0 ao infinito 167,20 vs 139,08g.h/mL; Cl 2,99 vs 3,59L/h e t1/2 6,15 vs 4,99h. Não foi observada diferença (teste de Mann-Whitney, p<0,05) nos parâmetros farmacocinéticos de ambos os enantiômeros entre os grupos 1 e 2. Não foi observada corrrelação entre o clearance do MDZ (2,92-16,40ml/min.kg) e o clearance de cada enantiômero da CPA. Concluindo, a farmacocinética da CPA é enantiosseletiva em pacientes portadores de nefrite lúpica com acúmulo plasmático do enantiômero (S)-(-)-CPA e a farmacocinética de ambos os enantiômeros da CPA não é alterada pela agravamento da função renal. / The pharmacokinetics of cyclophosphamide (CYC) enantiomers was evaluated in patients with lupus nephritis distributed in two groups according to creatinine clearance; Group 1 - 90.6-144.6mL/min/1.73m2 and Group 2 - 42.8- 76.4mL/min/1.73m2. All patients were treated with 0.75 to 1.3g of racemic CYC as a 2-hour infusion and with 1mg intravenous midazolam as a drug marker. CYC enantiomers and midazolam concentrations in plasma were measured by LC-MS/MS. CYC enantiomers were separated on a Chiralcel OD-R column, with the mobile phase consisting of a mixture of acetonitrile and water (75:25, v/v) plus 0.2% formic acid. Recovery rates were higher than 95% and the quantification limit was 2.5ng/ml plasma for both enantiomers. The coefficients of variation and the relative errors obtained for the validation of intra- and interassay precision and accuracy were less than 10%. The following differences in the pharmacokinetic parameters (Wilcoxon test, p<0.05) were observed between the (S)-(-) and (R)-(+) enantiomers for Group 1 AUC from time 0 to infinity 152.41 vs 129.25g.h/mL, Cl 3.28 vs 3.89L/h, Vd 31.38 vs 29.74L and t1/2 6.79 vs 5.56h and for Group 2 AUC from time 0 to infinity 167.20 vs 139.08g.h/mL, Cl 2.99 vs 3.59 L/h and t1/2 6.15 vs 4.99 h. No differences (Mann-Whitney test, p<0.05) were observed between Groups 1 and 2 in the pharmacokinetics parameters of both enantiomers. No significant relationship was observed between midazolam clearance (2.92-16.40 ml/min.kg) and clearance of each CYC enantiomer. In conclusion, CYC kinetic disposition is enantioselective resulting in higher exposure of (S)-(-)-CYC in lupus nephritis patients and the pharmacokinetic parameters of both enantiomers are not altered by the worsening of renal condition.

Os enantiômeros de um fármaco administrado como mistura racêmica, podem manifestar diferentes efeitos farmacológicos e toxicológicos. A fluvastatina (FV), um inibidor da HMG-CoA redutase, é comercializada como mistura racêmica dos enantiômeros (-)-3S,5R e (+)-3R,5S (eutômero) e com eliminação no homem essencialmente dependente do CYP2C9. O metanol, amplamente usado como solvente, combustível e em processos de sínteses, é um inibidor do CYP2C9 em humanos. Diante do exposto, o estudo visou avaliar a influência do metanol na farmacocinética enantiosseletiva da fluvastatina administrada sob forma racêmica a ratos. Foram investigados ratos machos Wistar tratados com dose única de 5 mg/kg de fluvastatina racêmica administrada por gavagem. Os animais foram divididos em três grupos: controle e expostos a metanol em concentrações de 262 mg/m3 e 1048 mg/m3. A exposição ao metanol foi feita em câmara de exposição do tipo apenas pelo nariz, em sessões consecutivas de 6 horas com intervalos de 2 horas, durante o período de 30 horas de coletas seriadas de sangue. Os enantiômeros da FV foram analisados em HPLC com amostrador automático e detecção por fluorescência, operando em 305 nm para excitação e 390 nm para emissão. A análise farmacocinética foi realizada por modelo bicompartimental e cinética de primeira ordem. Os resultados são reportados como medianas, médias e respectivos intevalos de confiança (95%). A farmacocinética da fluvastatina é enantiosseletiva em ratos do grupo controle com acúmulo plasmático do enantiômero (-)-3S,5R, com AUC0-? (2,97 vs 0,99 ?g.h.mL-1), volume de distribuição (9,80 vs 44,60 L.kg-1) e clearance aparente (0,85 vs 2,52 L.h-1.kg-1). A disposição cinética da fluvastatina nos animais do grupo metanol 262 mg/m3, à semelhança do grupo controle foi enantiosseletiva com observação de acúmulo plasmático do enantiômero (-)-3S,5R. Não foram observadas diferenças nas razões enantioméricas entre os animais do grupo controle e metanol 262 mg/m3. As diferenças para o eutômero (+)-3R,5S entre os grupos controle e metanol (1048 mg/m3) foram respectivamente: Cl/F 2.52 (1.64- 3.40) vs 1.51 (1.01-2.06) L.h-1.Kg-1; Vd/F 44.60 (19.20-55.49) vs 10.45 (7.20-15.96) L.Kg-1; t1/2? 10.85 (5.92-14,47) vs 5.23 (4.22-6.27) h; ? 0.06 (0.04-0.11) 0.13 (0.10- 0.16)h-1, AUC 0-? 991.79 (689.57-1491.00) vs 1647.20 (1155.30-2391.60) ng.h.mL-1,e AUC(-)/AUC(+) 2.50 (2.03-4.06) vs 1.22 (0.96-1.56). Em resumo, os dados evidenciam que a exposição ao metanol (1048 mg/m3) resulta em perda da enantiosseletividade com inibição do metabolismo somente do eutômero (+)-3R,5S, alterando portanto de maneira enantiosseletiva a disposição cinética da FV administrada a ratos. / Dislipidemia is one of the main causes of cardiovascular illness and very frequent in the adults population. Fluvastatin, a racemic mixture of the (-)-3S,5R and (+)-3R,5S enantiomers, has been shown to be a potent competitive inhibitor of HMGCoA reductase used in the hypercholesterolemia treatment and with elimination in the man essentially dependent of the CYP2C9. Methanol is used by solvent and is an inhibitor of the CYP2C9 in human beings. The present study reports the influence of methanol inhalation on the enantiosselective pharmacokinetics of fluvastatin in rats. Fluvastatin was administrated by oral gavage (5 mg/Kg) to the animals (n=6/time) and blood samples were collected until 30 hours. The enantiomers were analysed by HPLC using Chiralcel® OD-H column and fluorescence detection. The pharmacokinetics parameters were analysed by Wilcoxon and Mann-Witney tests. The results are reported as mean (95% CI). Kinetic disposition of FV for animals exposed to methanol (262mg/m3), as for control group, was enantiosselective with plasma accumulation of (-)-3S,5R enantiomer. The following differences (p< 0.05) were observed between the control and methanol (1048 mg/m3), apparent total clearance (Cl/F) of 2.52 (1.64-3.40) vs 1.51 (1.01-2.06) L.h-1.Kg-1; apparent volume of distribution (Vd/F) of 44.60 (19.20-55.49) vs 10.45 (7.20-15.96) L.Kg-1; elimination half life (t1/2?) of 10.85 (5.92-14,47) vs 5.23 (4.22-6.27) h; elimination rate constant (?) of 0.06 (0.04-0.11) 0.13 (0.10-0.16) h-1, area under the plasma concentration versus time curve (AUC 0-?) of 991.79 (689.57-1491.00) vs 1647.20 (1155.30- 2391.60) ng.h.mL-1, and AUC(-)/AUC(+) 2.50 (2.03-4.06) vs 1.22 (0.96-1.56). The data demonstrated that methanol inhalation at 1048 mg/m3 results in loss of enantioselectivity with plasmatic accumulation of (+)-3R5S, modifying the enantioselective kinetic disposition of Fluvastatin in rats.

O citalopram (CITA), inibidor seletivo da recaptação da serotonina, é disponível na clínica como mistura racêmica dos enantiômeros (+)-(S) e (-)-(R) ou como enantiômero puro (+)-(S)-CITA. O CITA é metabolizado pelo CYP2C19, CYP2D6 e CYP3A ao desmetilcitalopram (DCITA) e pelo CYP2D6 ao didesmetilcitalopram. O estudo investiga a influência de inibidores enzimáticos no metabolismo enantiosseletivo do CITA em ratos e em voluntários sadios. Os ratos machos Wistar (n=6 para cada grupo) foram tratados com dose única de 20 mg/Kg de CITA (grupo controle) ou pré-tratados com 80 mg/Kg de quinidina (grupo quinidina), 10 mg/Kg de fluvoxamina (grupo fluvoxamina) ou 50 mg/Kg de cetoconazol (grupo cetoconazol). As amostras de sangue foram colhidas dos ratos até 20 h após a administração do CITA. Os voluntários sadios fenotipados como metabolizadores extensivos (EM) do CYP2C19 (omeprazol como fármaco marcador), EM do CYP2D6 (debrisoquina como fármaco marcador) e com atividade normal do CYP3A (midazolam como fármaco marcador) receberam dose única p.o. de 20 mg de CITA racêmico associado ou não ao omeprazol (20 mg/dia durante 18 dias). Os enantiômeros do CITA e do DCITA foram analisados no sistema LC-MS/MS, com a coluna quiral Chiralcel OD-R e fase móvel constituída por acetonitrila:metanol:água (30:30:40 v/v/v) contendo 0,05 % de dietilamina. O método foi linear no intervalo de concentrações de 0,1 20 ng de cada enantiômero do CITA e DCITA/mL de plasma humano e de de 0,1 500 ng de cada enantiômero do CITA e DCITA/mL de plasma de rato. Os coeficientes de variação obtidos nos estudos da precisão e a inexatidão foram inferiores a 15 % para plasma humano e plasma de ratos. A disposição cinética do CITA é enantiosseletiva nos ratos dos grupos controle (razão de AUCS/R de 0,4), quinidina (razão de AUCS/R de 0,5) e cetoconazol (razão de AUCS/R de 0,8). A inibição do CYP2D pela quinidina resultou em inibição do metabolismo do CITA e do DCITA de maneira não enantiosseletiva. A inibição do CYP2C pela fluvoxamina e do CYP3A pelo cetoconazol resultou em inibição somente do metabolismo do (+)-(S)-CITA. A disposição cinética do CITA em voluntários sadios é enantiosseletiva na ausência de tratamento com o omeprazol com observação de maior proporção plasmática do enantiômero (-)-(R)-CITA. A razão de AUCS/R obtida para o CITA foi de 0,56 e para o metabólito DCITA foi de 1,06. A administração de CITA racêmico a voluntários sadios em tratamento com o omeprazol exibe perda da enantiosseletividade na farmacocinética do CITA. A razão de AUCS/R foi de 0,96 para o CITA e de 0,92 para o DCITA. A administração de omeprazol em doses múltiplas a voluntários sadios inibe de maneira enantiosseletiva o metabolismo do eutômero (+)-(S)-CITA com aumento das concentrações plasmáticas em aproximadamente 140%. / Citalopram (CITA), a selective serotonin reuptake inhibitor, is available for clinical use as a racemic mixture of the (+)-(S) and (-)-(R) enantiomers or as the pure (+)-(S)-CITA enantiomer. CITA is metabolized by CYP2C19, CYP2D6 and CYP3A to demethylcitalopram (DCITA) and by CYP2D6 to didemethylcitalopram. The present study investigated the influence of enzyme inhibitors on the enantioselective metabolism of CITA in rats and healthy volunteers. Male Wistar rats (n=6 for each group) received a single dose of 20 mg/kg CITA (control group) or were pretreated with 80 mg/kg quinidine (quinidine group), 10 mg/kg fluvoxamine (fluvoxamine group), or 50 mg/kg ketoconazole (ketoconazole group). Blood samples were collected from the animals up to 20 h after the administration of CITA. Healthy volunteers phenotyped as extensive metabolizers of CYP2C19 (omeprazole as marker drug) and of CYP2D6 (debrisoquine as marker drug) and those with normal CYP3A activity (midazolam as marker drug) received a single oral dose of 20 mg racemic CITA combined or not with omeprazole (20 mg/day for 18 days). The CITA and DCITA enantiomers were analyzed by LC-MS/MS using a Chiralcel OD-R chiral column and a mobile phase of acetonitrile:methanol:water (30:30:40, v/v/v) containing 0.05% diethylamine. The method was linear in the concentration range of 0.1-20 ng of each CITA and DCITA enantiomer/mL human plasma and of 0.1-500 ng of each CITA and DCITA enantiomer/mL rat plasma. Accuracy and precision were below the acceptance limits of 15% for human and rat plasma. The kinetic disposition of CITA was enantioselective in rats of the control (AUCS/R ratio = 0.4), quinidine (AUCS/R ratio = 0.5) and ketoconazole (AUCS/R ratio = 0.8) groups. The inhibition of CYP2D by quinidine resulted in the non-enantioselective inhibition of the metabolism of CITA and DCITA. The inhibition of CYP2C by fluvoxamine and of CYP3A by ketoconazole only inhibited the metabolism of (+)-(S)-CITA. The kinetic disposition of CITA in healthy volunteers was enantioselective in the absence of treatment with omeprazole, with the observation of a higher plasma proportion of the (-)-(R)-CITA enantiomer. The AUCS/R ratio was 0.56 for CITA and 1.06 for the DCITA metabolite. The administration of racemic CITA to healthy volunteers treated with omeprazole showed a loss of enantioselectivity in the pharmacokinetics of CITA. The AUCS/R ratio was 0.96 for CITA and 0.92 for DCITA. The administration of multiple doses of omeprazole to healthy volunteers enantioselectively inhibited the metabolism of the (+)-(S)-CITA eutomer, with an approximately 140% increase of plasma concentrations

O nebivolol, um fármaco com quatro centros quirais, está disponível na clínica como mistura racêmica dos isômeros d-nebivolol (SRRR) e l-nebivolol (RSSS). A atividade -adrenérgica do nebivolol reside no isômero d-nebivolol, enquanto o l-nebivolol promove a liberação de óxido nítrico das células endoteliais. O nebivolol é eliminado por metabolismo dependente do CYP2D6. O estudo avalia a farmacocinética e a relação farmacocinética-farmacodinâmica (PK-PD) dos isômeros do nebivolol em voluntários sadios. Foram investigados 15 voluntários sadios (10 homens e 5 mulheres) fenotipados com metoprolol como metabolizadores extensivos (EM, n=13) ou metabolizadores lentos para o CYP2D6 (PM, n=2). Os voluntários sadios foram tratados com dose única oral de 10 mg de nebivolol racêmico. As amostras seriadas de sangue foram coletadas até 48 h após a administração do fármaco. Os isômeros do nebivolol foram resolvidos na coluna Chirobiotic® V e analisados nas amostras de plasma empregando LC-MS/MS. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados por modelo bicompartimental com lag time, empregando o programa WinNonLin. A farmacodinâmica do nebivolol foi avaliada empregando como parâmetro a variação da frequência cardíaca entre os períodos final e anterior ao teste de esforço isométrico durante 2 min utilizando o handgrip a 30% da contratilidade voluntária máxima. A análise PK-PD relacionando o efeito na variação da frequência cardíaca induzida pelo exercício isométrico com as concentrações plasmáticas do isômero d-nebivolol foi avaliada empregando o modelo Emax sigmóide inibitório. A disposição cinética do nebivolol é enantiosseletiva nos voluntários sadios EM, com razões isoméricas de AUCl/ AUCd de 1,41. Os valores de concentração plasmática máxima (1,46 vs 0,79 ng/mL), área sob a curva concentração plasmática versus tempo (6,45 vs 3,99 ng.h/mL), clearance aparente (774,51 vs 1252,70 L/h) e volume de distribuição aparente (10936 vs 19082 L) mostram diferenças com significância estatística (Teste de Wilcoxon, p<0,05) entre os isômeros l-nebivolol e d-nebivolol para os voluntários sadios EM. A disposição cinética do nebivolol não é enantiosseletiva nos voluntários sadios PM investigados, com razões isoméricas de AUCl/AUCd de 0,93 e 0,98. Os valores de clearance aparente obtidos para os voluntários PM (87-350 vs 81-344 L/h, respectivamente para o l-nebivolol e d-nebivolol) são menores do que para os EM (775 vs 1253 L/h). O modelo Emax sigmóide inibitório descreveu a análise PK-PD relacionando o efeito na variação da frequência cardíaca induzida pelo exercício isométrico com as concentrações plasmáticas do isômero d-nebivolol em voluntários sadios EM com valores de Emax de 4,47 bpm (IC 95% 1,37-7,57) e de EC50 de 222,16 pg/mL (IC 95% 96,29-540,60 pg/mL). / Nebivolol is a drug with four chiral centers. It is administered in clinical practice as a racemic mixture of the isomers d-nebivolol (SRRR) and l-nebivolol (RSSS). The - blocking activity of nebivolol is attributed to d-nebivolol, whereas l-nebivolol promotes the release of nitric oxide from endothelial cells. Nebivolol is eliminated by metabolism dependent on CYP2D6. The present study evaluates the pharmacokinetic and pharmacokinetic-pharmacodynamic (PK-PD) of nebivolol isomers in healthy volunteers (10 men and 5 women) phenotyped with metoprolol as extensive metabolisers (EM, n=13) or poor metabolisers for CYP2D6. The healthy volunteers receveid a single oral dose of 10mg of racemic nebivolol. Serial blood samples were collected from 0 to 48 h after the administration of nebivolol. The isomers of nebivolol were analyzed by LC-MS-MS on a Chirobiotic® V column and the pharmacokinetic parameters (bicompartment model, micro, lag time, first order) were calculated by the software Winnonlin. The pharmacodynamic of nebivolol was evaluated using the variation of heart rate as parameter between the end and one minute before the handgrip exercise. Thus, the patients were oriented to conduct the isometric exercise with handgrip for 2 min at 30% of their maximum voluntary contractility. The PK-PD analysis relating the effect on the variation of heart rate induced by the isometric exercise and the plasma concentrations of the isomer d-nebivolol were evaluated using the Inhibitory effect sigmoid Emax model. The kinetic disposition of nebivolol is enantioselective on healthy volunteers EM, with isomeric ratios of AUCl/ AUCd of 0,93 e 0,98. The values of maximum plasma concentration (1,46 vs 0,79 ng/mL), area under the concentration time curve (6,45 vs 3,99 ng.h/mL), apparent clearance(774,51 vs 1252,70 L/h) and volume of distribution (10936 vs 19082 L) show statistically significant differences (p<0.05, Wilcoxon test) between the isomers l-nebivolol and d-nebivolol for the healthy volunteers EM. The kinetic disposition of nebivolol is not enantioselective on the healthy volunteers PM investigated, with isomeric ratios of AUCl/ AUCd of 1,07. The values of apparent clearance obtained for the volunteers pm (87-350 vs 81-344 L/h, respectively to l-nebivolol and d-nebivolol) are smaller than that for EM (775 vs 1253 L/h). The Inhibitory effect sigmoid Emax model described the PK-PD analysis described the effect on the variation of heart rate induced by handgrip isometric exercise with the plasma concentrations of the isomer d-nebivolol in healthy volunteers EM with Emax values of 4,47 bpm (IC 95% 1,37-7,57) and EC50 of 222,16 pg/mL (IC 95% 96,29-540,60 pg/mL).

A venlafaxina é um fármaco usado no tratamento da depressão e dos transtornos de ansiedade generalizada. É disponível na clínica na forma de mistura racêmica dos enantiômeros S-(+) e R-(-) em formulação de liberação controlada. O enantiômero S-(+) inibe a recaptação da serotonina, enquanto o enantiômero R-(-) inibe a recaptação da serotonina e da norepinefrina. A venlafaxina é biotransformada pelo CYP2D6 e CYP2C19 em seu principal metabólito, O-desmetilvenlafaxina, o qual apresenta atividade farmacológica semelhante à venlafaxina. Outros metabólitos da venlafaxina, dependentes do CYP3A4, incluem a N-desmetilvenlafaxina e a N,O-di-desmetilvenlafaxina. A absorção e a distribuição da venlafaxina são moduladas pela ação da glicoproteina-P. O nifedipino, um fármaco da classe dos inibidores dos canais de cálcio, é descrito como inibidor da glicoproteina-P. O presente estudo investiga a influência do nifedipino na disposição cinética e no metabolismo da venlafaxina em voluntários sadios caracterizados como portadores de atividade normal do CYP3A (omeprazol como fármaco marcador) e fenotipados como metabolizadores rápidos do CYP2C19 (omeprazol como fármaco marcador) e do CYP2D6 (metoprolol como fármaco marcador). Os voluntários investigados receberam, em estudo cruzado e randomizado, dose única oral de 150 mg de venlafaxina racêmica (Fase 1) e 40 mg de nifedipino associada com dose única oral de 150 mg de venlafaxina racêmica (Fase 2). Foram coletadas amostras seriadas de sangue até 72 horas após a administração dos fármacos para o estudo farmacocinético. As concentrações plasmáticas dos enantiômeros da venlafaxina e de seus metabólitos foram determinadas por LC-MS/MS utilizando a coluna Chirobiotic V com fase móvel constituída de mistura de metanol: solução aquosa de acetato de amônio 15 mmol/L pH 6,0 (80:20, v/v). A farmacocinética da venlafaxina mostrou-se enantiosseletiva com acúmulo plasmático (AUC 526,0 vs 195,7 ng.h/mL) e menores valores de clearance (Cl/f 142,67 vs 408,01 L/h) para o enantiômero S-(+). A disposição cinética do metabólito ativo O-desmetilvenlafaxina apresentou enantiosseletividade apenas no parâmetro concentração plasmática máxima com observação de maiores valores para o enantiômero R-(-) (Cmax 69,33 vs 56,94 ng/mL). A disposição cinética da N,O-di-desmetilvenlafaxina também mostrou-se enantiosseletiva apenas para o parâmetro concentração plasmática máxima, mas com observação de maiores valores para o enantiômero S-(+) (Cmax 7,08 vs 4,61 ng/mL). A administração de dose única oral de 40 mg de nifedipino não alterou a farmacocinética de ambos os enantiômeros da venlafaxina e de seus metabólitos O-desmetilvenlafaxina e N,O-di-desmetilvenlafaxina, seja utilizando teste estatístico não paramétrico (teste de Wilcoxon para dados pareados, p < 0,05), seja avaliando o IC 90% das razões das médias geométricas de AUC e Cmax (Fase 2/Fase 1). Os dados obtidos evidenciam que o nifedipino na dose de 40 mg não age como um inibidor da P-gp / Venlafaxine is a drug used to treat depression and generalized anxiety disorders. It is available in clinical practice in the form of a racemic mixture of S-(+) and R-(-) enantiomers, in controlled release formulation. The S-(+) enantiomer inhibits the reuptake of serotonin, while the R-(-) enantiomer inhibits the reuptake of both serotonin and norepinephrine. Venlafaxine is biotransformed by CYP2D6 and CYP2C19 in its major metabolite, O-desmethylvenlafaxine, which has similar pharmacological activity when compared to venlafaxine. Other metabolites of venlafaxine, dependent of CYP3A4, include N-desmethylvenlafaxine and N, O-di-desmethylvenlafaxine. The absorption and distribution of venlafaxine are modulated by the action of P-glycoprotein. Nifedipine, a calcium channel blocker drug, is described as an inhibitor of P-glycoprotein. The present study investigates the influence of nifedipine on the kinetic disposition of venlafaxine enantiomers and its metabolites in healthy volunteers characterized as having normal activity of CYP3A (omeprazole as a probe drug) and phenotyped as rapid metabolizers of CYP2C19 (omeprazole as a probe drug) and CYP2D6 (metoprolol as a probe drug). The enrolled volunteers received, in a randomized, two-way study, a single 150 mg oral dose of racemic venlafaxine (Phase 1) and 40 mg oral dose of nifedipine associated with a single 150 mg oral dose of racemic venlafaxine (Phase 2). Serial blood samples were collected until 72 hours after drug administration to the pharmacokinetic study. Plasma concentrations of venlafaxine enantiomers and its metabolites were determined by LC-MS/MS using a Chirobiotic V column and a mobile phase constituted of methanol: aqueous 15 mmol/L ammonium acetate solution pH 6.0 (80:20, v/v). The venlafaxine pharmacokinetics is enantioselective with plasma accumulation (AUC 526.0 vs 195.7 ng h/mL) and lower clearance values (CL/f 142.67 vs 408.01 L/h) for the S-(+) enantiomer. The kinetic disposition of the active metabolite O-desmethylvenlafaxine exhibits enantioselectivity only in the maximum plasma concentration parameter with higher values for the R-(-) enantiomer (Cmax 69.33 vs 56.94 ng/mL). The kinetic disposition of N,O-di-desmethylvenlafaxine is also enantioselective only for the maximum plasma concentration parameter, but with higher values for the S-(+) enantiomer (Cmax 7.08 vs 4.61 ng/ml). Administration of a 40 mg single oral dose of nifedipine do not alter the pharmacokinetics of both enantiomers of venlafaxine and its metabolites O-desmethylvenlafaxine and N,O-di-desmethylvenlafaxine, using non-parametric statistical test (Wilcoxon test for paired data, p <0.05), or evaluating the 90% CI of the AUC and Cmax geometric mean ratios (Phase 2/Phase 1). The obtained data show that nifedipine in a 40 mg oral dose does not act as a P-gp inhibitor.

Orientadores: Cesar Costapinto Santana, Maria Helena Andrade Santana / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-23T22:47:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Guimaraes_CarlaAiolfi_D.pdf: 2218359 bytes, checksum: 4601d72639c63e8a3a04c5b06354c5bf (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O carcinoma adrenocortical (CAC) é uma neoplasia rara e maligna que surge no córtex das glândulas adrenais. A terapia mais utilizada é o tratamento com mitotano, um derivado do inseticida, que possui uma baixa solubilidade aquosa e permeabilidade intestinal. O mitotano é administrado como uma mistura racêmica composto de dois enantiômeros: R-(+) - o,p'-DDD e S-(-) - o,p'-DDD. Os carreadores lipídicos nanoestruturados (NLCs) são utilizados como suporte para a encapsulação de agentes ativos lipofílicos como é o caso do mitotano, ajudando a aumentar sua solubilidade. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os enantiômeros e preparar NLCs encapsulando a forma enantiomérica (S) - (-) - o,p'-DDD, pela técnica de homogeneização de alta pressão a quente, caracterizar a formulação, estudar sua estabilidade, avaliar a permeação intestinal ex vivo pelo modelo do saco intestinal invertido e a retenção do enatiômero (S) - (-)- o,p'-DDD nas NLCs expostas em diferentes valores de pH in vitro. Foi utilizado NLCs contendo mitotano racêmico como controle. NLCs encapsulando (S) - (-) - o,p'-DDD tiveram diâmetro médio 95,36 nm, polidispersidade 0,288 e potencial zeta baixo -20,9 mV com uma eficiência de encapsulação alta. Os resultados de absorção intestinal ex vivo indicaram que a absorção das NLCs encapsulando o (S) - (-) - o, p'-DDD foi maior em comparação com o (S) - (-) - o, p'-DDD na forma livre e com a NLCs encapsulando o mitotano racêmico. No entanto, o teste com pH mostrou que cerca de 70% do (S) - (-) - o, p'-DDD encapsulado ficou retido nas NLCs durante 3h. Estes resultados indicaram que a formulação de NLCs produzida foi eficiente como carreador da forma S(-)-o,p'-DDD, podendo ser explorada como uma possível formulação alternativa para o tratamento do CAC. / Abstract: The adrenocortical carcinoma (ACC) is a rare malignant neoplasm that appears in the adrenal cortex. The main pharmacological choice is mitotane, a insecticide derivative, which has low aqueous solubility and low intestinal permeability. Mitotane is administered as a racemic mixture composed of two enantiomers R-(+) - o, p'-DDD and S-(-) - o, p'-DDD. The nanostructured lipid carriers (NLCs) are used as support for the encapsulation of lipophilic actives such as mitotane to improve their solubility. The aim of this work was to characterize the enantiomers and prepare the NLCs encapsulating the enantiomeric form (S) - (-) - o, p'-DDD by high pressure homogenization method and than characterize, study the stability, evaluate the ex vivo intestinal permeation by gut sac model and the retention of enantiomer (S) - (-) - o, p'-DDD in the NLCs in different pH values in vitro. NLCs encapsulating racemic mitotane was used as a control. The mean diameter and polydispersity index of NLCs encapsulating (S) - (-) - o, p'-DDD was 95.36 nm and 0.288 with a low zeta potential -20.9 mV and Higher entrapment efficiency. The ex vivo intestinal absorption results indicated that the absorption of NLCs loading(S)-(-)- o,p'-DDD was greatly improved compared to micronized free powder and when compared to NLCs loading mitotano racemic. However, the pH test showed that about 70% of (S) - (-) - o, p'-DDD encapsulated was retained in the NLCs for 3h. These results indicated that the NLC produced was effective as S (-)-o, p'-DDD carrier and could potentially be exploited as a possible alternative formulation for the ACC treatment. / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutora em Engenharia Quimica

A ciclofosfamida (CPA) é um agente alquilante da classe das oxazafosforinas amplamente usada no tratamento de múltiplas formas de câncer e de doenças autoimunes em adultos e crianças. A CPA está disponível na clínica como racemato, no entanto, dados pré-clínicos demonstraram diferenças na eficácia e toxicidade dos seus enantiômeros, sendo o enantiômero (S)-(-)-CPA o de maior índice terapêutico. O presente estudo investigou a enantiosseletividade e a influência do CYP2B6, CYP2C9, CYP2C19 e CYP3A na disposição cinética da ciclofosfamida (CPA) em pacientes portadoras de câncer de mama. Foram incluídas na investigação 15 pacientes previamente submetidas ao procedimento de retirada do tumor e tratadas com CPA racêmica (900-1000 mg) e epirrubicina. A atividade in vivo do CYP3A foi avaliada empregando o midazolam como fármaco marcador. As amostras seriadas de sangue foram coletadas até 24 horas após a administração do primeiro ciclo da CPA. Os enantiômeros da CPA foram extraídos do plasma, usando mistura de acetato de etila:clorofórmio (75:25, v/v) e separados na coluna Chiralcel® OD-R com fase móvel constituída por acetonitrila:água (25:75, v/v), contendo 0,2% de ácido fórmico. Os enantiômeros da CPA foram analisados por LC-MS-MS, sendo que os íons protonados e seus respectivos íons-produtos foram monitorados nas transições 261>141 para a CPA e 189>104 para o padrão interno (antipirina). A recuperação foi maior que 95% para ambos os enantiômeros da CPA e o limite de quantificação foi de 2,5 ng/mL de plasma para cada enantiômero. Os coeficientes de variação e os erros relativos obtidos na avaliação da precisão e exatidão intra e inter-ensaios foram menores que 10%. Os parâmetros farmacocinéticos foram calculados empregando o programa WinNonlin e utilizando modelo monocompartimental e cinética de primeira ordem. Os parâmetros farmacocinéticos com razões enantioméricas diferentes da unidade foram avaliados com base no teste de Wilcoxon (P0,05). A disposição cinética da CPA é enantiosseletiva em pacientes com câncer de mama, com acúmulo plasmático do enantiômero (S)-(-)-CPA (AUC 195,00 vs 174,80 g.h/mL) em função do clearance preferencial do enantiômero (R)- (+)-CPA (5,13 vs 5,99 L/h). Os clearances de ambos os enantiômeros da ciclofosfamida não diferem em função dos genótipos CYP2B6, CYP2C9 e CYP2C19 e da atividade in vivo do CYP3A avaliada pelo clearance do midazolam. / Cyclophosphamide (CPA) is an alkylating oxazaphosphorine agent widely used in the treatment of multiple forms of cancer and autoimmunes disesases in adults and children. CPA is used as a racemic mixture, although preclinical data have demonstrated differences in the efficacy and toxicity of its enantiomers, with the (S)-(- )-CPA exhibiting a higher therapeutic index. The present study investigated the enantioselectivity and influence of CYP2B6, CYP2C9, CYP2C19 and CYP3A on the kinetic disposition of cyclophosphamide (CPA) in patients with breast cancer. Fifteen patients previously submitted to removal of the tumor and treated with racemic CPA (900-1000 mg) and epirubicin were included in the study. The in vivo activity of CYP3A was evaluated using midazolam as a marker drug. Serial blood samples were collected up to 24 h after administration of the first cycle of CPA. The CPA enantiomers were extracted from plasma using a mixture of ethyl acetate:chloroform (75:25, v/v) and separated on a Chiralcel® OD-R column, with the mobile phase consisting of acetonitrile:water (25:75, v/v) and 0.2% formic acid. The CPA enantiomers were analyzed by LC-MS-MS, and the protonated ions and their respective ion products were monitored at transitions of 261>141 for CPA and of 189>104 for the internal standard (antipyrine). Recovery was higher than 95% for both CPA enantiomers and the quantification limit was 2.5 ng/mL plasma for each enantiomer. The coefficients of variation and relative errors obtained for the evaluation of the intra- and interassay precision and accuracy were less than 10%. The pharmacokinetic parameters were calculated with the WinNonlin program using a monocompartmental model and first-order kinetics. The pharmacokinetic parameters presenting enantiomer ratios different from one were evaluated using the Wilcoxon test (P0.05). The kinetic disposition of CPA was enantioselective in patients with breast cancer, with plasma accumulation of the (S)-(-)-CPA enantiomer (AUC 195.00 vs 174.80 g.h/mL) due to the preferential clearance of the (R)-(+)-CPA enantiomer (5.13 vs 5.99 L/h). Clearances of both CPA enantiomers did not differ between the CYP2B6, CYP2C9 and CYP2C19 genotypes or as a function of in vivo activity of CYP3A evaluated by the midazolam clearance.

A diferença na atividade terapêutica, farmacocinética e / ou farmacodinâmica entre os enantiômeros de fármacos quirais impulsionou a necessidade de estudar e desenvolver métodos para determinação exata e precisa da pureza enantiomérica dos produtos farmacêuticos. Inicialmente, os enantiômeros foram separados em escala analítica. As condições analíticas foram adaptadas para a escala semi-preparativa para a obtenção enantiômeros puros. Os enantiômeros do bisoprolol foram separados através de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Foi adotado o sistema direto de separação, fase normal, utilizando coluna Chiralcel OD (250 x 4,6 mm id). A fase móvel foi composta por hexano: etanol: dietilamina (80:20:0.2, v / v / v), vazão de 1mL/min e detecção em UV a 273 nm. A separação dos enantiômeros (R)-bisoprolol e (S)-bisoprolol foi obtida com sucesso em escala analítica e semi-preparativa. Considerando as características de uma separação quiral, podemos concluir que os resultados são eficazes, por ser uma separação rápida e seletiva. / The difference in therapeutic activity, pharmacokinetics, and / or pharmacodynamics between enantiomers of chiral drugs has raised the need to study and develop methods for accurate and precise determination of enantiomeric purity of pharmaceutical products. Initially, the enantiomers were separation in analytical scale. The analytical conditions were scaled up to semi-preparative level to obtain pure enantiomers. The enantiomers of bisoprolol were separated with high-performance liquid chromatography. Direct separation system was adopted in normal phase mode using Chiralcel OD column (250 x 4.6 mm id). The mobile phase was composed of hexane:ethanol:diethylamine (80:20:0.2, v/v/v), flow rate of 1mL/min and UV detection was made at 273 nm. The separation of enantiomers, (R)-bisoprolol and (S)-bisoprolol was successfully obtained in analytical and semi-preparative scale. Considering the characteristics of a chiral separation, we can conclude that the results are effective, because it is a fast and selective separation.