As junções comunicantes são estruturas celulares que permitem o trânsito de moléculas entre as células, desempenhando funções de sinalização e transporte intercelular. São formadas por proteínas denominadas conexinas e representam estruturas-chave no funcionamento de tecidos altamente complexos e integrados, como o sistema nervoso central (SNC). O presente estudo avalia os efeitos da deleção da conexina 32 (Cx32) na inflamação e regeneração/cicatrização do SNC após 1, 3, 7, 10 e 20 dias pós-injeção intracerebral de brometo de etídio em camundongos deletados para Cx32 e camundongos normais. Para tanto, quantificou-se a expressão dos genes para fator de necrose tumoral alfa (TNFα), fator de crescimento transformador beta 1 (TGFβ), metaloproteinase 3 (MMP3), metaloproteinase 9 (MMP9) e inibidor tecidual de metaloproteinases 1 (TIMP1), através de PCR em tempo real. Os resultados indicam variáveis diferenças no padrão de expressão, incluindo variação na expressão de todos os genes pesquisados no período de 3 dias pós-injeção, ápice dos mecanismos de inflamação aguda. Estes resultados sugerem que a conexina 32 pode desempenhar funções importantes na sinalização molecular do processo inflamatório e regenerativo/cicatricial do sistema nervoso central. / Gap junctions are cellular structures that allow transit of molecules between cells, performing intercellular signaling and transportation. They are formed by proteins denominated connexins and represent key structures in highly complex and integrated tissues, such as the central nervous system (CNS). The present study evaluates the effects of connexin 32 (Cx32) deletion upon CNS inflammation and egeneration/cicatrization after 1, 3, 7, 10 and 20 days after intracerebral injection of ethidium bromide in Cx32 Knock Out and normal mice. To accomplish so, Real Time PCR gene expression quantification was performed uppon tumour necrosis factor alpha (TNFα), transforming growth factor beta 1 (TGFβ), metalloproteinase 3 (MMP3), metalloproteinase 9 (MMP9) and tissue inhibitor of metalloproteinases 1(TIMP1) genes. Results indicate variable differences in the expression pattern, including difference in expression of all evaluated genes in the 3 days after injection period, apex of the acute inflammation mechanisms. These results suggest that Cx32 may perform important functions on molecular inflammatory and regenerative/cicatrization signalling in the CNS.

As junções comunicantes são estruturas celulares que permitem o trânsito de moléculas entre as células, desempenhando funções de sinalização e transporte intercelular. São formadas por proteínas denominadas conexinas e representam estruturas-chave no funcionamento de tecidos altamente complexos e integrados, como o sistema nervoso central (SNC). O presente estudo avalia os efeitos da deleção da conexina 32 (Cx32) na inflamação e regeneração/cicatrização do SNC após 1, 3, 7, 10 e 20 dias pós-injeção intracerebral de brometo de etídio em camundongos deletados para Cx32 e camundongos normais. Para tanto, quantificou-se a expressão dos genes para fator de necrose tumoral alfa (TNFα), fator de crescimento transformador beta 1 (TGFβ), metaloproteinase 3 (MMP3), metaloproteinase 9 (MMP9) e inibidor tecidual de metaloproteinases 1 (TIMP1), através de PCR em tempo real. Os resultados indicam variáveis diferenças no padrão de expressão, incluindo variação na expressão de todos os genes pesquisados no período de 3 dias pós-injeção, ápice dos mecanismos de inflamação aguda. Estes resultados sugerem que a conexina 32 pode desempenhar funções importantes na sinalização molecular do processo inflamatório e regenerativo/cicatricial do sistema nervoso central. / Gap junctions are cellular structures that allow transit of molecules between cells, performing intercellular signaling and transportation. They are formed by proteins denominated connexins and represent key structures in highly complex and integrated tissues, such as the central nervous system (CNS). The present study evaluates the effects of connexin 32 (Cx32) deletion upon CNS inflammation and egeneration/cicatrization after 1, 3, 7, 10 and 20 days after intracerebral injection of ethidium bromide in Cx32 Knock Out and normal mice. To accomplish so, Real Time PCR gene expression quantification was performed uppon tumour necrosis factor alpha (TNFα), transforming growth factor beta 1 (TGFβ), metalloproteinase 3 (MMP3), metalloproteinase 9 (MMP9) and tissue inhibitor of metalloproteinases 1(TIMP1) genes. Results indicate variable differences in the expression pattern, including difference in expression of all evaluated genes in the 3 days after injection period, apex of the acute inflammation mechanisms. These results suggest that Cx32 may perform important functions on molecular inflammatory and regenerative/cicatrization signalling in the CNS.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-08-13T18:01:17Z : No. of bitstreams: 1 000726003.pdf: 183434 bytes, checksum: 6c614237435ca53868a5f9baea5ff364 (MD5) / Este projeto foi baseado na propriedade imunorreguladora da hsp65 micobacteriana. A proposta geral foi avaliar se a vacina gênica contendo o gene da hsp65 do Mycobacterium leprae (pVAXhsp65) pode ser utilizada como estratégia profilática ou terapêutica na encefalite autoimune experimental (EAE). Na primeira etapa desta investigação constatamos que camundongos previamente imunizados com pVAXhsp65 perderam menos peso e apresentaram sintomatologia clínica mais branda. Essa melhora clínica esteve associada com redução da produção de IL-10 por células esplênicas estimuladas in vitro com MOG ou ConA. A análise histopatológica revelou redução do processo inflamatório na medula lombar dos animais previamente vacinados em comparação com o grupo controle EAE. Na segunda etapa avaliamos o efeito terapêutico de 4 doses de pVAXhsp65 no desenvolvimento da EAE. A vacina foi capaz de induzir resposta imune específica para hsp65 em camundongos com EAE, o que foi constatado pela produção de IFN-g e IL- 10. Além disso, a terapia modulou a imunidade específica para MOG reduzindo a produção de IFN-g, IL-6 e IL-17 por células esplênicas. Essa modulação não foi, entretanto, capaz de alterar o decurso clínico da doença. O processo inflamatório no sistema nervoso central (SNC) e a frequência de células T reguladoras (Tregs) na periferia e no SNC também não foram alterados pelo tratamento. Na última etapa desse projeto avaliamos mais detalhadamente a participação da IL-17 no decurso clínico da EAE. Na fase aguda (19º dia) foram observados perda acentuada de peso e elevado escore clínico (média de 2,75) enquanto que na fase crônica os animais recuperaram o peso perdido e o escore clínico se estabilizou em torno de 1,5. A produção de citocinas por órgãos linfoides secundários caracterizou-se por níveis elevados de IFN-g na fase aguda e de IL-17 na fase crônica. Já os linfócitos infiltrantes do SNC estimulados in... / This project was mainly based on the immunoregulatory property of the mycobacterial hsp65. The proposal of this work was to evaluate if a DNA vaccine containing the hsp65 mycobacterial gene (pVAXhsp65) could be used as a prophylactic or therapeutic strategy to control experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) development. In the first part of this investigation we demonstrated that mice previously vaccinated with pVAXhsp65 lost less body weight and presented lower clinical score. Clinical improvement was associated with lower production of IL-10 by spleen cell cultures stimulated with MOG or ConA. Comparative histopathological analysis revealed less inflammatory process in the lumbar spinal cord of previously vaccinated mice in comparison to EAE control group. The second approach was designed to evaluate the possible therapeutic effect of pVAXhsp65 on EAE development. Even though this vaccine was immunogenic for mice with EAE and also able to downmodulate the induction of cytokines by MOG, it was not able to decrease the clinical severity of the disease. Vaccination did not decrease intensity of the inflammatory process neither the frequency of regulatory T cells (Tregs) in the central nervous system (CNS). Finally, we investigated the contribution of the peripheral and local IL-17 production to acute and chronic EAE stages. Mice submitted to EAE induction presented an initial acute phase characterized by accentuated weight loss and high clinical score, followed by a partial recovery when the animals reached normal body weight and smaller clinical scores. Spleen cells stimulated with MOG produced significantly higher levels of IFN-g during the acute period whereas similar IL-17 levels were produced during both Abstract disease stages. CNS infiltrating cells stimulated with MOG produced similar amounts of IFN-g but IL-17 was produced only at the acute phase of EAE. The percentage of Foxp3+ Treg cells, at the spleen and the CNS, was...

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-24Bitstream added on 2015-04-09T12:48:22Z : No. of bitstreams: 1 000813863.pdf: 676198 bytes, checksum: 4b21e81c2e5a200fc033bd9c6d6cc0e4 (MD5) / A cinomose canina é uma importante afecção contagiosa, com elevada taxa de letalidade e comprometimento multissistêmico, incluindo o sistema nervoso central. A leucoencefalite desmielinizante é a principal alteração neuropatológica observada, sendo sua patogênese pouco conhecida. A quebra da barreira hematoencefálica (BHE) com penetração viral e infiltração leucocitária são aspectos cruciais no desenvolvimento da encefalite desmielinizante. Em seres humanos e animais com alterações semelhantes, as metaloproteinases da matriz (MMPs), principalmente 2 e 9, vem sendo apontadas como os agentes desestruturantes da integridade da BHE. Assim, buscou-se estabelecer o envolvimento das MMPs 2 e 9 na quebra da BHE de cães com cinomose em fase neurológica. O presente estudo teve como escopo principal determinar e quantificar tais enzimas, pela técnica de zimografia, no soro e no liquor de cães hígidos (Gcon, n=10) e cães com cinomose na fase neurológica (Gcin, n=10). Além disso, foram determinados os parâmetros físico-químicos do liquor para a obtenção de maiores informações acerca da integridade da BHE. A análise estatística multivariada exploratória mostrou padrões distintos segundo as variáveis estudadas, sendo estas comparadas entre os grupos com o teste t / Canine distemper is an important contagious disease with high mortality rate and multisystem involvement including the central nervous system. The demyelinating leukoencephalitis is the main neuropathological alteration observed and its pathogenesis is not well known. The rupture of the blood brain barrier (BBB) with viral penetration and leukocyte infiltration are crucial for the development of demyelinating encephalitis. In humans and animals with similar disorders, matrix metalloproteinases (MMPs) especially 2 and 9 have been pointed as the agents that destabilize the integrity of the BBB. Thus, we sought to establish the involvement of MMPs 2 and 9 in BBB rupture of dogs with distemper at the neurological phase. The present study aimed to determine and quantify these enzymes by the technique of zymography in serum and cerebrospinal fluid of healthy dogs (Gcon, n=10) and dogs with distemper at neurological stage (Gcin, n=10). Furthermore, we determined the physicochemical parameters of liquor to obtain more information about the integrity of the BBB. Exploratory multivariate analysis showed distinct patterns according to the variants studied, which were compared between groups with t test

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Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-30Bitstream added on 2014-06-13T19:44:12Z : No. of bitstreams: 1 pedrazaordonez_fj_dr_jabo.pdf: 707975 bytes, checksum: 9868dbb427049fb448644457810a5e65 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O BoHV-5 é um alfa herpesvírus neurovirulento, que causa meningoencefalite fatal em bezerros. A morbidade é baixa contrastando com uma alta mortalidade, embora alguns animais possam-se recuperar. Varias pesquisas tem sido desenvolvidas para determinar a patogênese deste tipo de doença. No presente trabalho coelhos experimentalmente infectados com o Herpesvírus Bovino 5 (BoHV-5) foram submetidos a análise imuno-histoquímica e molecular, mediante a real time PCR, para descrever a resposta inflamatória em seis diferentes regiões do seu encéfalo. Todos os animais mostraram sinais neurológicos severos e foram eutanasiados vinte dias após a infecção inicial. Microscopicamente foi descrita uma meningoencefalite não supurativa, caracterizada por meningite, manguitos perivasculares mononucleares e malacia, mas não foram observados corpúsculos de inclusão viral. Os linfócitos T constituíram uma alta percentagem das células mononucleares envolvidas na neuroinflamação. Não foram encontradas diferenças significativas na resposta astrocitária quando comparados o grupo experimental e o grupo controle (p > 0,05). A quantificação viral pela qPCR permitiu achar partículas virais em todas as regiões encefálicas, de todos os animais do grupo experimental, sendo diretamente proporcional a quantidade de vírus e a visualização de lesões histológicas no encéfalo dos coelhos, assim como a imunodetecção do BoHV-5 pela imunohistoquímica. É possível suspeitar de um forte envolvimento do sistema imunitário do hospedeiro que fez a maioria dos animais reagir de maneira diferente ante a mesma quantidade do inóculo viral ministrado / The BoHV-5 is a neurovirulent alpha herpesvirus, which causes fatal meningoencephalitis in calves. The morbidity is low in contrast with a high mortality, although some animals can heal. Several surveys have been developed trying to better understand the pathogenesis of this type of disease. In this study rabbits experimentally infected with bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) were subjected to immunohistochemical and molecular analysis by real time PCR, to describe the inflammatory response in six different regions of his brain. All animals showed severe neurological signs and were euthanized twenty days after the initial infection. Microscopically was described a meningoencephalitis characterized by nonsuppurative meningitis, mononuclear perivascular cuffs and malacia, but were not observed viral inclusion corpuscles. T lymphocytes constituted a high percentage of mononuclear cells involved in neuroinflammation and there were no significant differences in astrocyte response when comparing the experimental and control groups (p> 0.05). The viral quantification by qPCR allowed found viral particles in all brain regions of all experimental animals, being directly proportional to the amount of virus and the visualization of lesions in the brain of rabbits, as well as immunodetection of BoHV-5 by immunohistochemistry. It is possible to suspect a strong engagement of the host immune system that made the majority of animals respond differently compared to the same administered amount of viral inoculum

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-02-18Bitstream added on 2014-06-13T19:44:14Z : No. of bitstreams: 1 vasconcelos_ro_dr_jabo.pdf: 1349333 bytes, checksum: 7eaa9b531ee75109ac659bcca081d17c (MD5) / A compreensão do comportamento da microglia frente a uma injúria viral contribui para o entendimento da dimensão da rede de comunicação celular, durante um processo degenerativo ou inflamatório no SNC. Pesquisas que utilizam modelos experimentais com o vírus da estomatite vesicular (VEV) têm colaborado com informações importantes sobre o comportamento e distribuição do agente no encéfalo, e também sobre o papel da resposta imune na resolução ou no agravamento das lesões nervosas. Neste estudo, foi comparada a evolução do quadro neurológico induzido pelo VEV, por meio de técnicas de imunoistoquímca, em cérebros de camundongos. Foi possível observar que o VEV causa severa degeneração e necrose do neurópilo, com lesão direta em neurônios, pois estes mostraram-se claramente positivos para o vírus, por meio da reação de imunoistoquímica no cérebro. A reação astrocitária foi intensa nos animais infectados, porém a densidade destas células reduziu com o aumento da gravidade das lesões. As células residentes (neurônios, astrócitos e microglia) e as células inflamatórias expressaram MIP-1a e, em menor proporção, MIP-1b. A microgliose reativa foi significativa nos animais com sintomatologia clínica. A diversidade morfológica da microglia foi grande, variando desde uma forma fusiforme a uma ramificada e a forma arredondada fagocítica das áreas necróticas. Foi possível observar que existe uma profunda interação entre as células residentes do SNC - neurônios, microglia, astrócitos, endotélio, frente ao estímulo viral. Baseado nos relatos da literatura é importante salientar que os astrócitos mantêm um controle ativo sobre a microglia tanto em repouso quanto ativada, via citocinas/quimiocinas. A densidade aumentada dessas células coincidiu com a redução do número de astrócitos, devido à necrose do neurópilo... / The comprehension of the microglial cell behavior in a viral injury colaborate for the understanding of the dimension of the cellular communication net, during a degenerative or inflammatory process in central nervous system (CNS). Experimental models with the vesicular stomatitis virus (VSV), has contributed with important information about the behavior and distribution of virus in the CNS. Such studies evaluated the role of the immune response in the resolution or in the damage of the nervous lesions. In this study, the evolution of the neurological signals and lesions induced by VSV infection in mice was studied, using imunohistochemical techniques. It was observed that VSV causes severe degeneration and necrosis of the neuropil and direct lesions to the neurons. The neurons were the most intensively stained cells for the virus in the brain. The reactive astrocitosis was intense in the infected animals, but the density of these cells reduced with the increase of the gravity of the lesions. The resident and inflammatory cells expressed MIP-1a and in smaller proportion MIP-1b, in different cellular types (neurons, astrocytes and microglia). The reactive microgliosis was significant in animals with clinical symptomatology and there was a great morphologic microglial diversity, varying from a fusyforme form and ramified form and the fagocitic round form of the around necrotics areas. It was possible to observe that a close interaction exists among the resident cells of SNC (neurons, microglia, astrocytes, endothelial cells) in face of the viral infection. Based on the reports of the literature it is important to point out that the astrocytes maintains an active control on the microglia (in resting or activated cells), through citokines/chemokines. The increased density of microglia coincided with the reduction of the astrocytes number, due to the necrosis of the neuropil... (Complete abstract, access undermentioned eletronic address)

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Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-22Bitstream added on 2014-06-13T20:35:29Z : No. of bitstreams: 1 bregano_lc_me_araca.pdf: 540539 bytes, checksum: 5989de4e2cf1d4911bd4e7adb7afaa77 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / No presente estudo foram avaliados 30 cerebelos de cães naturalmente infectados pelo vírus da cinomose canina, confirmados por meio da reação RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) com segmentação do gene do nucleocapsídeo viral, e por análise microscópica das lesões teciduais após a coloração Hematoxilina-Eosina e coloração de Shorr. A distribuição das subpopulações de linfócitos T foi evidenciada pela técnica de imunoistoquímica, empregando-se anticorpos monoclonais CD3+, CD8+ e CD4+. Da mesma forma, a detecção da expressão das metaloproteinases (MMP) -2 e -9 também foi conduzida pela técnica de imunoistoquímica e os resultados foram associados aos encontrados na imunofenotipagem. Foi possível evidenciar marcação mais expressiva de MMP-2 (86,67% de intensidade moderada a intensa) e uma alta proporção de linfócitos T CD4+ e CD8+. Nesse sentido, pode-se concluir que o vírus da cinomose canina se dispersa no sistema nervoso central, alterando a integridade estrutural da barreira hematoencefálica, provavelmente pela ação da MMP-2; e os infiltrados inflamatórios perivasculares presentes são constituídos predominantemente por subpopulações de linfócitos T CD4+ e CD8+ / The present study evaluated 30 cerebella of dogs naturally infected with canine distemper virus, confirmed by RT-PCR (Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction) to target the viral nucleocapsid gene, and by microscopic examination of tissue lesions after hematoxylin-eosin and Shorr staining. The distribution of subpopulations of T lymphocytes was demonstrated by immunohistochemistry using monoclonal antibodies against CD3 +, CD8 + and CD4 +. Similarly, detection of the expression of matrix metalloproteinases (MMP) -2 and -9 was also conducted by immunohistochemistry and the results were related to those found in immunophenotyping. The results revealing more expressive marking of MMP-2 (86.67% moderate to severe) and a high proportion of CD4 + and CD8 +. In conclusion, it can be infer that canine distemper virus is spread in the central nervous system, altering the structural integrity of the blood-brain barrier, probably by the action of MMP-2. Moreover, perivascular inflammatory infiltrates consisted predominantly of T lymphocyte subpopulations CD4 + and CD8 +