Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-06-13T19:02:47Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) FUNGOS ENDOFÍTICOS E EXTRATOS VEGETAIS NO CONTROLE ALTERNATIVO DA MANCHA-ALVO.pdf: 1834924 bytes, checksum: 559ecffd91838e06bc0c870d7174f04f (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-06-13T19:03:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) FUNGOS ENDOFÍTICOS E EXTRATOS VEGETAIS NO CONTROLE ALTERNATIVO DA MANCHA-ALVO.pdf: 1834924 bytes, checksum: 559ecffd91838e06bc0c870d7174f04f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-13T19:03:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) FUNGOS ENDOFÍTICOS E EXTRATOS VEGETAIS NO CONTROLE ALTERNATIVO DA MANCHA-ALVO.pdf: 1834924 bytes, checksum: 559ecffd91838e06bc0c870d7174f04f (MD5) Previous issue date: 2018-04-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Secondary metabolites present in endophytic fungi and medicinal plants have several biological properties, including antifungal activity. In this context, 141 endophytic fungi isolated from guaraná leaves and seeds (Paullinia cupana Kunth), crude aqueous extracts of leaves of Picrolemma sprucei Hook.f (caferana), Croton cajucara Benth. (sacaca), Piper marginatum Jacq. (caapeba) and rhizome of Curcuma zedoaria (Christin.) Rosc (curcuma) prepared at the concentrations of 0 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 % and 50 %, and hexanic, ethyl acetate and methanolic fractions phytopathogen Corynespora cassiicola. Thirteen endophytic isolates showed inhibition between the antagonist and the pathogen, whereas the isolates 3012 R1 and 3031 R2 presented the highest inhibition value, showing their potential for future studies on the biocontrol of fungi of the genus Corynespora. In vitro bioassays (mycelial growth, sporulation, spore germination, direct bioautography and minimal inhibitory concentration) and in vivo (effect of the crude aqueous extract of P. marginatum on tomato seedlings) showed that the hexane and ethyl acetate fractions of P. marginatum reduced mycelial growth, sporulation and germination of the pathogen, and that the crude extract of P. sprucei presented the highest percentages of inhibition of these variables. In direct bioautography, zones of inhibition of mycelial growth were detected in the hexanic and acetate-ethylic fractions of P. marginatum, which presented a minimum inhibitory concentration (MIC) of 2.5 mg.mL-1. The in vivo test showed that control of the target spot in tomato was not feasible under the tested conditions of the crude extract of P. marginatum. / Metabólitos secundários presentes em fungos endofíticos e em plantas medicinais apresentam várias propriedades biológicas, incluindo a atividade antifúngica. Neste contexto, foram testados 141 fungos endofíticos isolados de folhas e sementes de guaranazeiro (Paullinia cupana Kunth), extratos brutos aquosos de folhas de Picrolemma sprucei Hook.f (caferana), Croton cajucara Benth. (sacaca), Piper marginatum Jacq. (caapeba) e rizoma de Curcuma zedoaria (Christin.) Rosc (curcuma) preparados nas concentrações de 0 %, 10 %, 20 %, 30 %, 40 % e de 50 %, e frações hexânicas, acetato-etílicas e metanólicas contra o fitopatógeno Corynespora cassiicola. Treze isolados endofíticos apresentaram inibição entre o antagonista e o patógeno, sendo que os isolados 3012 R1 e 3031 R2 apresentaram o maior valor de inibição, mostrando seus potenciais para futuros estudos no biocontrole de fungos do gênero Corynespora. Bioensaios in vitro (crescimento micelial, esporulação, germinação de esporos, bioautografia direta e concentração inibitória mínima) e in vivo (efeito do extrato bruto aquoso de P. marginatum em mudas de tomate) mostraram que as frações hexânica e acetato-etílica de P. marginatum reduziram o crescimento micelial, a esporulaççao e a germinação do patógeno, e que o extrato bruto de P. sprucei apresentou as maiores porcentagens de inibição dessas variáveis. Na bioautografia direta, foram detectadas zonas de inibição de crescimento micelial nas frações hexânica e acetato-etílica de P. marginatum, que apresentaram concentração inibitória mínima (CIM) de 2,5 mg.mL-1. O teste in vivo mostrou que o controle da mancha-alvo em tomateiro não foi viável nas condições testadas do extrato bruto de P. marginatum.

Submitted by Marcela Carvalho (marcelaalfaia@hotmail.com) on 2016-09-02T13:46:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Hector Henrique Ferreira K..pdf: 10781404 bytes, checksum: b77c916692bb09c590eddb00b5454b78 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-15T16:03:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Hector Henrique Ferreira K..pdf: 10781404 bytes, checksum: b77c916692bb09c590eddb00b5454b78 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-15T16:05:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Hector Henrique Ferreira K..pdf: 10781404 bytes, checksum: b77c916692bb09c590eddb00b5454b78 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T16:05:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Hector Henrique Ferreira K..pdf: 10781404 bytes, checksum: b77c916692bb09c590eddb00b5454b78 (MD5) Previous issue date: 2011-04-08 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Endophytic fungi are a promising source of bioactive molecules that may be used in the treatment of diseases, it is estimated that only 16% of species known, and which are known only 5% of all species in the world. In this work we isolated 58 strains of endophytic fungi from the hosts Strychnos cf. toxifera and Mauritia flexuosa, of which 35 strains are from the genus Penicillium, all were grown on a small scale and their extracts tested for their anticancer activity front the lines HCT-8, HL-60, MB-435 and SF-295, besides being tested for their antioxidant and antiacetilcolinesterase activities. We selected three strains (two from Penicillium and one of Gliocladium) of its active extracts were isolated 15 substances, the alkaloids glandicolin B, cyclo-(glycyl-L-tyrosyl) 4,4-dimethylallyl ether and the phenolic compound α-naphthol showed antimicrobial activity against several strains of pathogenic bacteria, the latter being first reported as a natural product. The phytochemical study of the roots from Mauritia flexuosa gave 10, including the provisory new compound 3-epi-20,21-diidroxithurberogenin. Flavonoids were isolated and attributed as being responsible for the antioxidant activity of the methanol extract of M. flexuosa. Cultivated strains of Penicillium were selected from 23 different EtOAc extracts had their chemical profiles compared by direct insertion into the mass spectrometer, a few selected ions were subjected to MS / MS experiments , was proposed the presence of the anthraquinone questinol and the macrocycle brefeldin A, the data were compared with those obtained from the host Strychnos cf. toxifera, and the strain STSP C2.3/1-2c that showed a profile very similar to that of their host, the data were statistically treated by five different methods of multivariate analysis (Average of the Links, Link Complete, Simple Connection, and Centroid Ward), they all discussed. / Fungos endofíticos são uma fonte promissora de moléculas bioativas que possam vir a ser utilizadas no tratamento de doenças, estima-se que apenas 16% das espécies de fungos conhecidas, e que são conhecidas apenas 5% de todas as espécies do mundo. Neste trabalho foram isolados 58 linhagens de fungos endofíticos das hospedeiras Strychnos cf. toxifera e Mauritia flexuosa, destas sendo 35 linhagens do gênero Penicillium, todas foram cultivadas em pequena escala e seus respectivos extratos testados quanto suas atividades anticâncer frente as linhagens HCT-8 (cólon-humano), HL-60 (leucemia humano), MB-435 (mama humano) e SF- 295 (glioblastoma humano), além de serem testados quanto suas atividades antiacetilcolinesterase e antioxidante. Foram selecionadas três linhagens (duas de Penicillium e uma de Gliocladium) de seus extratos ativos foram isoladas 15 substâncias, destas os alcalóides glandicolina B, ciclo-(Glicil-L-tirosil) 4,4-dimetilalil éter e o composto fenólico β-naftol apresentaram atividade antimicrobiana frente diversas linhagens de bactérias patógenas, este último sendo relatado pela primeira vez como um produto natural. Foi realizado o estudo fitoquímico das raízes de Mauritia flexuosa aonde foram isoladas 10 substâncias, sendo o triterpeno 3-epi-20,21-diidroxithurberogenina de estrutura provisória inédito na literatura. Flavonóides isolados foram atribuídos como sendo os responsáveis pela atividade antioxidante do extrato metanólico de M. flexuosa. Das linhagens de Penicillium cultivadas foram selecionadas 23 diferentes extratos do meio em AcOEt que tiveram seus perfis químicos comparados por inserção direta em espectrômetro de massas, alguns íons selecionados foram submetidos a experimetos de MS/MS de modo que se propôs a presença da antraquinona questinol e do macrocíclo brefeldina A, os dados foram comparados com os obtidos da hospedeira Strychnos cf. toxifera, sendo a linhagem Stsp C2.3/1-2c a que apresentou um perfil muito semelhante ao de sua hospedeira, os dados foram tratados estatisticamente por cinco métodos de análise multivariada (Média das Ligações, Ligação Completa, Ligação Simples, Centróide e Ward), todos eles discutidos.

Submitted by Marcela Carvalho (marcelaalfaia@hotmail.com) on 2016-09-02T14:29:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese maria de fátima oliveira almeida.pdf: 7309300 bytes, checksum: d9dc1c54b844652eb4edaf34637f8f6c (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-15T19:48:14Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese maria de fátima oliveira almeida.pdf: 7309300 bytes, checksum: d9dc1c54b844652eb4edaf34637f8f6c (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-15T19:50:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese maria de fátima oliveira almeida.pdf: 7309300 bytes, checksum: d9dc1c54b844652eb4edaf34637f8f6c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T19:50:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese maria de fátima oliveira almeida.pdf: 7309300 bytes, checksum: d9dc1c54b844652eb4edaf34637f8f6c (MD5) Previous issue date: 2014-07-18 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CHEMICAL AND BIOLOGICAL STUDIES ON FUNGI endophytic from Gustavia sp. Endophytic fungi and bacteria are those living at least a period of their live into the intercellular spaces of plants colonizing all vegetal tissues without causing any apparent symptom. In order to obtain fungal metabolites in this work, the fungi were, first of all, collected, isolated, purified, identified (at least their genera) and preserved. From 384 plant-tissues fragments (leaf, stem, trunk and root) of Gustavia sp. 93 endophytic fungi had been isolated and 67 strains were preserved. Those strains were from seven genera (Fusarium, Xylaria, Pestalotiopsis, Penicillium, Cephalosporium, Aspergillus and Colletotrichum (Glomerella)) and some were ascomycetes. Chemical study began by chemical screening of 21 extracts of endophytic fungi representing each group isolated. On base in the bioassays of the extracts, four strains were selected to isolate bioactive metabolites. Three of thouse strains, Nectria setofusariae (400), Penicillium chrysogenum (401) and Xylaria adscendens (447), have been identified by rDNA sequencing. From their extracts, several chemical constituintes have been isolated: a mixture of piliformic acid and 5-carboxymelein from X. adscendens; the ergosterol peroxides in the endo and exo forms, a mixture of the bisorbicillinoids trichodimerol, dihydrotrichodimerol e tetrahydrotrichodimerol and the sterigmatocistin (STC), as well a mixture of fatty acids from P. chrysogenum; a mixture of the phenylacetic and 4-methoxyphenylacetic acids from Aspergillus sp.; and the fusaric and phenylacetic acids from N. setofusariae. Besides, mass spectrometry analysis have shown other sorbicillinoids components in an extract fraction from P. chrysogenum. 1D and 2D NMR spectroscopy and mass spectrometry have been used together with literature data for identify the metabolites. Citotoxic bioassays of the extracts, fractions and substances have shown high citotoxic potential against three tumoral strains form a fraction from N. setofusariae and the substance STC from P. chrysogenum. This work resulted in the discovery of a strain of P. chrysogenum producing metabolites of the class of bisorbicillinoids. This is the first report of these substances in studies of fungi from Brazilian Amazon and reveals the importance of such work to continue to operate this line. / ESTUDOS QUÍMICOS E BIOLÓGICOS DE FUNGOS ENDOFÍTICOS DE Gustavia sp. Fungos e bactérias endofíticas são os que vivem nos espaços intercelulares das plantas, pelo menos por um período de seu ciclo de vida, habitando todas as partes aéreas, mas também as raízes, sem lhes causar nenhum sintoma aparente. Para isolar os metabólitos de fungos endofíticos neste trabalho, foram realizados preliminarmente procedimentos de coleta, isolamento, purificação, identificação (pelo menos o gênero) e conservação dos mesmos. A partir de 384 fragmentos dos tecidos vegetais (folha, galho, caule e raiz) de Gustavia sp. foram isolados 93 fungos endofíticos dos quais foram conservados 67 linhagens pertencentes a sete gêneros (Fusarium, Xylaria, Pestalotiopsis, Penicillium, Cephalosporium, Aspergillus, Colletotrichum (Glomerella)) e linhagens de Ascomycetos. Os estudos químicos iniciaram com a prospecção química de 21 linhagens representantes de cada um dos sete gêneros identificados. Com base nos resultados de ensaios biológicos dos extratos obtidos nos screening, foram selecionadas quatro linhagens de fungos visando a obtenção de metabólitos bioativos. Por sequenciamento do rDNA foram identificadas três das quatro linhagens selecionadas: 400 (Nectria setofusariae), 401 (Penicillium chrysogenum) e 447 (Xylaria adscendens). Os estudos químicos dos extratos das quatro linhagens 400, 447, 455 e Aspergillus sp. resultaram na identificação de diversos constituintes: uma mistura do ácido pilifórmico e a 5-carboximeleina obtidos de X. adscendens; os peróxidos de ergosterol nas formas endo e exo, uma mistura dos bisorbicilinoides (trichodimerol, dihidrotrichodimerol e tetrahidrotrichodimerol) e a esterigmatocistina (STC), além de uma mistura de ácidos graxos, de P. chrysogenum; uma mistura dos ácidos fenilacético e 4-metoxifenilacético, de Aspergillus sp.; e os ácidos fusárico e fenilacético, de N. setofusariae. Além disso, estudos por espectrometria de massas revelaram outros componentes da classe dos sorbicilinoides em amostra oriunda do P. chrysogenum. Os constituintes foram identificados por RMN 1D e 2D e espectrometria de massas e por comparação com os dados da literatura. Ensaios de extratos, frações e substâncias indicaram elevado potencial citotóxico frente a três linhagens de células tumorais para uma fração de N. setofusariae e a STC obtidos de P. chrysogenum. Este trabalho proporcionou a descoberta de uma linhagem de P. chrysogenum produtora de metabólitos da classe dos bisorbicilinoides. Este é o primeiro relato dessas substâncias em estudos de fungos no Brasil e revelam a importância do referido trabalho e de se continuar a exploração desta linhagem.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-23T14:58:19Z No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-23T14:58:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-11-23T14:58:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-23T14:58:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Marcely C. A. Silva.pdf: 2249758 bytes, checksum: 999de4ddf49880ac3079a439f26c357a (MD5) Previous issue date: 2016-03-10 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Paullinia cupana (guarana) is a tropical plant originated from the forest of the Brazilian Amazon. However, guarana production has been declining in the state of Amazonas, in comparison with the production of the State of Bahia. The main limiting factor of production and expansion in the state of Amazonas is anthracnose, caused by Colletotrichum guaranicola, which is considered the most serious disease of guarana culture. This study aimed to characterize the isolates of C. guaranicola pathogenic and endophytic, from guarana, considering cultural, morphological, molecular, enzymatic and histological aspects, in order to determine differences between pathogenic and endophytic. In the present work, 9 endophytic and 14 pathogenic isolated from C. guaranicola were obtained through indirect isolation of healthy leaves and guarana anthracnose symptoms. The isolates were characterized by morphological and cultural characteristics. The molecular identification involved PCR analysis using primers GACA4, GTG5 and M13. The enzyme activity, the following enzymes were tested: lipase, amylase, protease, polyphenoloxidase, cellulase and pectinase. The pathogenicity test was conducted in order to select one isolated pathogenic and one isolated endophytic for analysis of the pre-penetration process and colonization of the pathogen in the tissues of susceptible leaves (clone 300) of guarana. About the Morphocultura characterization, pathogenic and endophytic isolates presented great variability. The color of the colony and size of conidia differed between endophytes and pathogens. It was not possible to make a correlation with Morphocultural and molecular analysis with pathogenic and endophytic isolates. Genotyping confirmed that all isolates belong to the genus Colletotrichum, however, it was not possible to identify the isolated species level to the genre. There was no difference between the enzyme and endophytic pathogens, it is not possible to find correspondence with the infection process in guarana leaves. The period of 48 hours after inoculation allowed to verify 100% germination and appressorium formation in the isolated pathogenic, in addition to colonization in tissues of the plant, by contrast to the endophyte which showed lower percentages for germination and formation of appressoria, and it was not observed colonizing tissues 48 hours after inoculation. / Paullinia cupana (guaranazeiro), é uma planta tropical que se originou a partir da floresta da Amazônia brasileira. No entanto, a produção de guaraná tem vindo a diminuir no Estado do Amazonas, quando comparado com a produção do Estado da Bahia. O principal fator limitante da produção e expansão no Estado do Amazonas é a antracnose, causada por Colletotrichum guaranicola, que é considerada a doença mais grave da cultura do guaraná. Este trabalho teve como objetivo caracterizar os isolados de C. guaranicola patogênicos e endofíticos, provenientes de guaranazeiro, quanto aos aspectos culturais, morfológicos, molecular, enzimático e histológico, visando determinar diferenças entre o patogênico e o endofítico. Neste trabalho, nove isolados endofíticos e quartoze isolados patogênicos de C. guaranicola foram obtidos através do isolamento indireto de folhas de guaranazeiro sadias e com sintomas de antracnose. Os isolados foram caracterizados por meio das características morfológicas e culturais. A identificação molecular compreendeu a análise de PCR utilizando os primers GACA4, GTG5 e M13. Quanto a atividade enzimática, foram testadas as seguintes enzimas: lipase, amilase, protease, polifenol-oxidase, celulase e pectinase. Foi realizado o teste de patogenicidade com a finalidade de selecionar um isolado patogênico e um isolado endofítico para análise do processo de pré-penetração e colonização do patógeno nos tecidos das folhas suscetíveis (clone 300) de guaranazeiro. Quanto à caracterização morfocultural, os isolados patogênicos e endofíticos apresentaram alta variabilidade. A coloração da colônia e tamanho dos conídios diferenciou entre os endofíticos e os patógenos. Não foi possível fazer uma correlação com as análises morfocultural e molecular com os isolados patogênicos e endofíticos. A genotipagem permitiu confirmar que todos os isolados pertencem ao gênero Colletotrichum, entretanto, não permitiu identificar os isolados a nível de espécie para o gênero. Não houve diferença enzimática entre os endofíticos e patogênicos, não sendo possível encontrar correspondência com o processo de infecção nas folhas de guaranazeiro. O período de 48 horas após inoculação permitiu verificar 100% de germinação e formação de apressórios no isolado patogênico, além da colonização nos tecidos da planta, ao contrário do endofitico que apresentou porcentagens inferiores quanto a germinação e formação de apressórios, e não foi observado colonização dos tecidos 48 horas após inoculação.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-07T14:13:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Emily M. S. Silva.pdf: 2118553 bytes, checksum: fb456947468dd022b648c7c49c3b3a0a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-07T14:13:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Emily M. S. Silva.pdf: 2118553 bytes, checksum: fb456947468dd022b648c7c49c3b3a0a (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-12-07T14:14:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Emily M. S. Silva.pdf: 2118553 bytes, checksum: fb456947468dd022b648c7c49c3b3a0a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-07T14:14:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Emily M. S. Silva.pdf: 2118553 bytes, checksum: fb456947468dd022b648c7c49c3b3a0a (MD5) Previous issue date: 2014-07-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Tuberculosis (TB) caused by Mycobacterium tuberculosisis one of the most lethal diseases in the world, causing millions of deaths every year. Due to the inadequate treatment and the emergence of multidrug-resistant strains, the search for new antimicrobial compounds have been often reported in the scientific literature. Drugs developed from natural products have been a frequent research target and promising results have been obtained with the discovery of antimicrobial compounds synthesized by endophytic microorganisms. Previous work demonstrated that an endophytic Aspergillus fumigatusspecies,isolated from Copaifera multijugaHayne (copaíba), produces antimicrobial compounds, which are released into the growth substrate. The direct use of this substrate (fermentation broth) in antibiosis assaysagainst M. tuberculosisin vitro allowed detectingantimicrobial activity against the pathogen when compared to the negative control. So, the objective of this work was the analysis and purification of these compounds by the fractionation of A. fumigatusmutant and non-mutantfermentation broth, aiming the selection of fractions with higher capacityfor inhibitM. tuberculosis. Mutants were obtained by the induction of the fungal culture to ultraviolet lightexposition. The wild and mutant derivatives isolateswere tested for antibiosis against the indicator organism, Staphylococcusaureusandthe antimicrobial activity has been evaluated by comparing in vitro antibiosis assaysand fungal extractson n-butanol by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). After, n-butanolextracts of wild isolates were subjected to fractionation by Medium PressureLiquid Chromatography (MPLC), and the fractions were evaluated against M. smegmatis. After this test, the fractions that showed antagonistic activity were selected for testing against M. tuberculosis, and analyzed in analyticalHPLC. Among 18 mutants selected, eight showed antagonismagainst S. aureus. A peak with less than a minute of retention was correlated with the antimicrobial activity. On the fractionation, 30 fractions were obtained and among these, only two (F4 and F13) showed activity against M. smegmatisandonly F4 showed antagonism against M. tuberculosiswith an MIC of 256µg/mL. The chromatograms of both F4 andF13 showedpeaks atthe beginning of the analysis. The F4chromatogram showedtwo peaks with retention times of 2.1 and 2.4 minutes. These data will be useful in future optimization and purification of compounds / A tuberculose (TB), causada por Mycobacterium tuberculosisé uma das enfermidades mais letais do mundo, causando milhões demortes todos os anos. Devido aos tratamentos inadequados e ao surgimento de cepas multirresistentes aos fármacos utilizados nos tratamentos, a busca por novos compostos antimicrobianos tem sido reportada com freqüência na literatura científica. Fármacos desenvolvidos a partir de produtos naturais têm sido um alvo frequente de pesquisa e dentre as perspectivas, resultados promissores têm sido obtidos com a descoberta de compostos antimicrobianos sintetizados por micro-organismos endofíticos. Trabalhos anteriores demonstraram que um fungo endofítico da espécie Aspergillus fumigatusisolado de Copaifera multijuga Hayne (copaíba), produz compostos antimicrobianos, os quais são secretadospara o substrato de crescimento. A utilização direta desse substrato (caldo de fermentação) em testes de antibiose in vitro contra M. tuberculosispermitiram detectar sua atividade antimicrobiana contra o patógeno, quando comparadaao controle negativo. Partindo desse resultado, foi objetivo do presentetrabalhoproceder à análise e purificação desses compostos, através do fracionamento do caldo de fermentação de A. fumigatusmutantes e não mutantes, visando à seleção de frações que apresentem maiorcapacidade de inibição contra M. tuberculosis.Induziu-sea mutação do isolado selvagempor meio da exposição da cultura fúngica à luz ultravioleta. O isolado selvagem e os mutantes derivados desse isolado foram testados quanto à antibiose contrao micro-organismoindicador,Staphylococccusaureus, tendo sido a atividade antimicrobianaavaliada por meio de comparações entre os testes de antibiose in vitroe os cromatogramas dos extratos fúngicos fracionados em n-butanolpor Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Após isso, extratos em n-butanolde isolados selvagens foram submetidos ao fracionamento químico por Cromatografia Líquida de Média Pressão (MPLC)e as frações obtidas foram avaliadas contra M. smegmatis. Após este ensaio, as frações que apresentaram antagonismo foram selecionadas para o ensaio contra M. tuberculosis, além de serem analisadasem CLAEAnalítica. Foram selecionadas 18 colônias mutantes e destas, oito apresentaram antagonismo contra S. aureus. A partir da análise dos cromatogramas dos isolados, correlacionou-se à atividade antimicrobiana um pico com menos de um minuto de retenção.No fracionamento químico, foram obtidas 30 frações e destas,apenas duas (F4 e F13)apresentaram atividade contra M. smegmatis.Das duas frações, apenas F4 apresentou antagonismo frente a M. tuberculosiscom CIM de 256µg/mL. Os cromatogramas, tanto de F4 quanto de F13, apresentampicos no início da análise. O cromatograma de F4 mostra dois picos, com tempos de retenção de 2,1 e 2,4 minutos. Esses dados iniciais auxiliarão na otimização e futurapurificação dos compostos.

Árvores evolutivas de espécies de Peperomia baseadas nas regiões de ITS e matK foram confrontadas com perfis metabólicos de extratos brutos obtidos por RMN 1H, HPLC-DAD e LC-ESI-MS. A análise de clusters (HCA) e a análise discriminante de componentes principais (DAPC) suportaram em parte os agrupamentos observados por ITS e matK. As principais classes de metabólicos secundários observadas foram policetídeos, meroterpenos, cromenos, fenilpropanoides e amidas, sendo que foram ainda isolados um policetídeo (malabaricona D) de P. megapotamica; o fenilpropanoide elemicina e a lignana tetraidrofurânica diyangambina de P. rotundifolia; e as flavonas 5,6,7-trimetoxiflavona e 4\',5,6,7- tetrametoxiflavona de P. sincorana. As PKS tipo chalcona sintase (CHS) de peperomias, diferiram daquelas de famílias filogeneticamente próximas como Myristicaceae (Virola) e Lauraceae (Aniba). Como muitos meroterpenos de espécies de Peperomia possuem como núcleo básico o ácido orselínico, produto típico de líquens e bactérias, o gene ácido orselínico sintase (OSAS) foi investigado nas plantas e nos 27 fungos endofíticos isolados de espécies de Peperomia (identificados pelas sequências de ITS1-5.8S-ITS2). Foram amplificadas pelo menos uma PKS (NR, HR e PR) em cada uma das linhagens e AOS em várias delas (UR1, UC3, UF1, UF2, UF3, UF4, GC3, NR1, NC1, NC2, NF1, AR1, AC1, AC4, OC1 e OF1). A homologia de 60% da OSAS amplificada de UR1 com a sequência de Streptomyces viridochromogenes é sugestivo de transferência horizontal de bactéria para fungos. / Phylogenetic tree of Peperomia species based on ITS and matK were compared to the metabolic profiling of crude extracts using 1H NMR, HPLC-DAD and LC-ESI-MS. Cluster analysis (HCA) and discriminant analysis of principal componentes (DAPC) supported significantly the clustering observed by ITS and matK. The major classes of secondary metabolites were polyketides, meroterpenes, chromenes, phenylpropanoids and amides and besides, one polyketide (malabaricone D) of P. megapotamica; the phenylpropanoid elemicin and the tetrahydrofuran lignan diyangambin from P. rotundifolia; and the flavones 5,6,7- trimethoxyflavone and 4\',5,6,7-tetramethoxyflavone were isolated from P. sincorana. The PKS chalcone synthase type (CHS) from peperomia, differed from phylogenetically related families Myristicaceae (Virola) and Lauraceae (Aniba). Since several meroterpenes from Peperomia species have the orsellinic acid as an aromatic core, typical of liquens and bacteria, the orsellinic acid (OSAS) was investigate in the plants and 27 endophytes isolated from Peperomia (identified based on ITS1-5.8S-ITS2 sequences). At least one PKS (NR, HR and PR) were isolated from each strains and AOS were isolated from several strains (UR1, UC3, UF1, UF2, UF3, UF4, GC3, NR1, NC1, NC2, NF1, AR1, AC1, AC4, OC1 and OF1). The 60% of homology observed for OSAS amplified from UR1 with that of Streptomyces viridochromogenes is suggestive of a horizontal transferring from bacteria to fungi.

O agroresíduo mais importante gerado no Brasil é o bagaço da cana de açúcar e seu excedente pode ser utilizado para a produção de etanol celulósico. O objetivo desse trabalho foi bioprospectar e identificar genes que codificam para enzimas lignocelulósicas. Para tanto, aproximadamente 42 linhagens de actinomicetos endofíticos e de solo, passaram por dois tipos de triagem (meio sólido e molecular). Como resultado, a maioria das linhagens apresentou bom desempenho em teste em meio sólido. Nenhuma linhagem foi capaz de hidrolisar igualmente todos os substratos testados. Na triagem molecular, os resultados indicam que os genes para as enzimas estão presentes. Como conclusão pode-se considerar que os actinomicetos são potencialmente bons produtores de enzimas lignocelulolíticas, O material biológico é relativamente pouco estudado e não foram encontrados dados na literatura sobre o tema, mas são interessantes para estudos de obtenção de bioetanol e outros segmentos biotecnológicos. / The most important agro waste generated from Brazil\'s sugarcane bagasse and its surplus can be used to produce cellulose ethanol. The aim of this study was bioprospected and identify genes encoding for lignocellulosic enzymes. Therefore, a batch of about 42 strains of endophytic actinomycetes and soil, passed through two types of screening (soild medium and molecular). The results demonstrated that the majority of the analysed strains presented good results when tested on solid medium. The strains presented better results for a restricted number of substrates, but no strain was able to hydrolyse all substrates. With regards to the results of molecular screening, strains had amplicons, indicating that the genes for the enzymes are present. As a conclusion, it can be considered that the actinomycetes are potentially good producers of lignocellulolytic enzymes. The biological material is relatively poor studied and no literature data e regarding the subject were found, but they can be considered appealing to be studied in order to obtain bioethanol and other biotech segments.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os fungos endofíticos do tipo dark septate podem ser promotores de crescimento vegetal. No entanto, ainda são poucos os estudos com este grupo de fungos. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar fungos DSEF obtidos a partir de plantas de Oryza glumaepatula coletadas em ambientes amazônicos. As raízes das plantas de doze amostras de O. glumaepatula foram seccionadas, desinfestadas e dispostas em placas com o meio ágar-malte suplementado com Cloranfenicol e Sulmametazol mais Trimetropina. Os isolados obtidos foram avaliados quanto às características de dark septate e armazenados em água destilada e água destilada adicionada de glicerol. Todos os isolados fúngicos considerados DSEF foram reinoculados em plantas de O. glumaepatula, sendo 5 inoculados em O. sativa e, também, caracterizados geneticamente através da amplificação e sequenciamento da região ITS1-5.8S-ITS2. O meio de cultura ágar-malte foi eficiente para a obtenção de DSEF, obtendo-se 46 isolados. O armazenamento em água destilada e em água destilada adicionada de glicerol mostrou-se eficiente para a manutenção das culturas fúngicas por pelo menos 12 meses. Todos 46 isolados fúngicos reinoculados foram capazes de colonizar raízes O. glumaepatula e 5 destes isolados foram capazes de colonizar O. sativa, não desencadeando sintomas de patogenicidade. A análise genética dos isolados mostrou que estes fungos apresentam baixa similaridade entre eles e não possuem similaridade com fungos DSEF já descritos e presentes no banco de dados do Genbank, indicando que a metodologia empregada permitiu a obtenção de espécies fúngicas diversas e que a espécie O. glumaepatula abriga alta diversidade deste grupo de fungos. / The endofophytic fungi such as dark septate or DSEF can be promoters of plant growth. However, there are few studies com this group of fungi. The objective of this study was to characterize DSEF fungi obtained fron plants collected in enviroments Oryza glumaepatula Amazon. The plant roots of twelve O. glumaepatula samples were sectioned, disinfected, and placed in plates with agar-malte medium added of chloramphenicol and trimethoprim sulmametazol more. The isolates were evaluated in relation of dark septate characteristics and stored in distilled water, and in distilled water added of glycerol. All fungal isolates considered DSEF were reinoculated in plants of O. glumaepatula, and inoculated in 5 in Oryza sativa and also genetically characterized by amplifying and sequencing the region ITS1-5.8S-ITS2. The agar-malte medium was efficient to isolate DSEF, resulting in more than 46 isolates. The distilled water and also distilled water added of glycerol were efficient to maintain the fungus culture at least 12 months. All 46 fungal isolates were reinoculated to colonize roots O. glumaepatula and 5 of these isolates were able to colonize O. sativa, not trigger symptoms of pathogenicity. Genetics analysis of isolates showed that these fungi have low similarity between them and have no similarity to fungi DSEF already described and present in the database of Genbank, indicating that the methodology allowed the acquisition of several fungal species and the species O. glumaepatula houses high diversity of this group of fungi.

Foram isolados 37 fungos endofíticos de Viguiera arenaria (VA1 a VA37), sendo 32 oriundos de folhas e 5 de raízes. Os fungos foram classificados por métodos de biologia molecular, sendo Glomerella cingulata a espécie predominante. Os fungos foram cultivados em culturas fermentativas em duas etapas, em pequena escala, para obtenção dos extratos em AcOEt, BuOH e MeOH. Os extratos em AcOEt foram avaliados em ensaios antimicrobianos, citotóxicos frente a células leucemia T humana (JURKAT) e frente às enzimas GAPDH de Trypanosoma cruzi e APRT de Leishmania tarentolae. Diversos extratos apresentaram atividades biológicas significativas. Os perfis químicos dos extratos em AcOEt foram avaliados através de CLAE-UV e RMN 1H. Os fungos VA1 (Glomerella cingulata) e VA17 (Fusarium sp.), selecionados após as triagens química e biológica, foram cultivados em escala ampliada. A partir do extrato AcOEt do fungo VA1 foram isoladas duas substâncias, nectriapirona (I) e tirosol (II). A nectriapirona apresentou atividade citotóxica significativa contra células de leucemia T humana (linhagens JURKAT) e melanoma (linhagens B16F10). Ergosterol (III) foi isolado do extrato micelial metanólico do fungo VA1. A partir do extrato micelial metanólico do fungo VA5 (G. cingulata), cultivado em pequena escala, foi isolado o manitol (IV). Após do cultivo em escala ampliada do fungo VA17 (Fusarium sp.) foram isolados três derivados dicetopiperazinícos, um oriundo do extrato AcOEt, substância V, ainda não relatada na literatura, e dois do extrato micelial MeOH, fusaperazina B (VI) e substância VII, também inédita na literatura. O isolamento das substâncias foi realizado através de técnicas cromatográficas, como CC, CCDP e CLAE. As estruturas químicas foram elucidadas com auxílio de técnicas espectroscópicas (RMN 1H e 13C, HMQC, HMBC, NOE-diff) e espectrométricas (ESI-MS). Experimentos de modelagem molecular foram realizados com a fusaperazina B (VI), que corroboraram com os dados de NOE-diff, indicando que a conformação dobrada do anel dicetopiperazínico é a mais predominante. Foi ainda realizada avaliação do perfil químico dos extratos obtidos em pequena escala dos fungos classificados como G. cingulata, via CLAE e RMN 1H, verificando-se diferenças químicas significativas, o que pode sugerir variabilidade genética entre as linhagens. O tirosol (II) foi detectado na maioria dos extratos de G. cingulata. / A total of 37 endophytic fungi were isolated from Viguiera arenaria (VA1 to VA37), 32 from the leaves and 5 from the roots. Endophytes were classified by means of molecular biology methods, and Glomerella cingulata was the predominant species. The endophytes were cultured in a two step fermentative process in small scale to give the EtOAc, BuOH and MeOH extracts. The EtOAc extracts were submitted to antimicrobial assays, citotoxic assays against human leukemia T cells (JURKAT) and assays against two enzymes, GAPDH from Trypanosoma cruzi and APRT from Leishmania tarentolae. Several extracts showed promising activities in the bioassays. The chemical profiles of the EtOAc extracts were obtained through HPLC and 1H NMR. Endophytes VA1 (Glomerella cingulata) e VA17 (Fusarium sp.) were cultured in large scale after chemical and biological screenings. Nectriapyrone (I) and tirosol (II) were isolated from the EtOAc extract from VA1. Nectriapyrone showed high citotoxicity against leukemia T human cells (JURKAT) and melanoma cells (B16F10). Ergosterol (III) was isolated from the micelial MeOH extract of VA1. Mannitol (IV) was isolated from the micelial MeOH extract from the fungus VA5 (G. cingulata). Extracts from VA17 (Fusarium sp.), obtained in large scale, yielded three diketopiperazine derivatives. A novel derivative was isolated from the EtOAc extract (compound V). Two derivatives were obtained from the micelial MeOH extract, fusaperazine B (VI) and a new diketopiperazine (VII). The isolation of the compounds was carried out using chromatography techniques (column, prep. TLC, and HPLC) and the identification was achieved by spectroscopic (1D and 2D NMR) and spectrometric methods (ESI-MS). Molecular modeling experiments were carried out with fusaperazine B (VI), showing that the diketopiperazine ring is predominantly in the folded conformation, in agreement with NOE-diff experiments. Significant differences were observed in the HPLC profiles and 1H NMR spectra of the extracts from the G. cingulata strains, which might be related to genetic variability among the strains. Tirosol (II) was detected in the majority of G. cingulata extracts

Fungos endofíticos constituem uma fonte promissora e ainda pouco explorada de novas substâncias potencialmente bioativas, que podem ter aplicações na medicina, agricultura e biologia química. Neste trabalho foram isolados cinco fungos endofíticos das folhas de Tithonia diversifolia, os quais foram cultivados em pequena escala e avaliados em diversos bioensaios. O fungo endofítico Phoma sorghina foi cultivado em escala ampliada, produzindo nove substâncias, sendo três derivados antraquinônicos inéditos na literatura. Três fungos endofíticos associados à Viguiera robusta foram estudados. De Colletotrichum gloeosporioides foram isoladas oito substâncias, sendo um derivado dicetopiperazínico e um derivado aminoaçúcar inéditos na literatura. Diaporthe phaesolorum produziu três derivados dicetopiperazinicos, um inédito na literatura. Chaetomium globosum produziu treze substâncias, sendo oito derivados azaphilônicos inéditos. Algumas linhagens endofíticas foram avaliadas em experimentos de biotransformação de três naftoquinonas e da 1-tetralona, catalisando reações de oxidação e redução. O fungo Diaphorte phaseolorum catalisou uma reação de metilação inédita na literatura de biotransformação. / Endophytic fungi are a promising and untapped source of potential biologically active compounds that might be useful as therapeutic and agrochemical agents, or chemical biology tools. In this thesis five endophytic fungi were isolated from the leaves Tithonia diversifolia. All the strains have been cultivated in small scale and the extracts submitted to bioassays. The culture of the endophyte Phoma sorghina was scaled up, affording six known compounds and three novel anthraquinone derivatives. Three endophytes from Viguiera robusta have also been studied as sources of natural products. Colletotrichum gloeosporioides produced six known compounds, one novel aminosugar and one new diketopiperazine derivative. Diaporthe phaesolorum biosynthesized three diketopiperazine derivatives, one novel in the literature. Five known compounds and eight novel azaphilone derivatives were isolated from Chaetomium globosum. Some endophytic strains have been evaluated in biotransformation experiments of three naphthoquinones and 1-tetralone, catalyzing oxidation and reduction reactions. The endophyte Diaphorte phaseolorum catalyzed a novel methylation reaction in the biotransformation literature.