Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El síndrome de ovario poliquístico (SOP) es una patología que afecta directamente la homeostasis endometrial, debido a la pérdida de la función normal del ovario. Se ha sugerido un aumento en la sensibilidad a la acción de los esteroides ováricos en mujeres con esta patología, lo cual podría llevar a que factores de crecimiento que responden a las hormonas esteroidales, como el factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), poderoso angiogénico, y el factor de crecimiento nervioso (NGF), por medio de su receptor trkA, alteren su expresión. Ambos factores participan en la angiogénesis y dada la gran vascularización del endometrio, participarían en la regulación de la función endometrial, junto a otras moléculas. El objetivo de este trabajo es determinar si existen diferencias en los niveles de VEGF, NGF y de su receptor de alta afinidad, trkA, en endometrios de mujeres con síndrome de ovario poliquístico, respecto a los endometrios de mujeres controles. Para esto, se evaluó la localización y tipo de tinción a través de inmunohistoquímica para VEGF, NGF y trkA con anticuerpos específicos y el mRNA, a través de RT-PCR de los transcritos de VEGF, NGF y rRNA18S en endometrios controles de fase proliferativa (ENp, n=9), fase secretora (ENs, n=6), endometrios SOP de fase proliferativa (ESOPp, n=8) y de fase secretora (ESOPs, n=4). Los resultados presentaron una tinción homogénea y de predominio citoplasmático para VEGF, NGF y trkA en todos los grupos estudiados. Junto a ello se observó un aumento significativo en la intensidad de la tinción en los ENs y en los ESOPp, en el epitelio y el estroma comparados con los ENp, en las tres proteínas analizadas. El nivel de mRNA de VEGF-189 fue mayor en ESOPs versus ENs y el transcrito VEGF-165 fue el mayormente expresado a través del ciclo menstrual. Los niveles de mRNA-NGF disminuyeron en ESOPp versus ENp. Las diferencias encontradas entre los endometrios controles y los SOP sugieren alteración en la vascularización del tejido endometrial de mujeres con SOP. Además, trkA y NGF podrían tener un papel funcional en la fase secretora del ciclo, y el aumento de estas tres moléculas en los ESOP podría indicar un rol de ellas en esta patología. / Proyectos FONDECYT 1050098 y 1095127

El cáncer de endometrio es actualmente la neoplasia más frecuente del tracto genital inferior en los países desarrollados. La estadificación es quirúrgico-patológica y se basa en el estudio de la pieza operatoria. El tratamiento estándar se realiza mediante laparotomía, si bien hay estudios que sugieren puede ser llevado a cabo mediante abordaje laparoscópico-vaginal, con igual radicalidad oncológica y sin mayor número de complicaciones.El propósito de este estudio fue describir la factibilidad y los resultados del abordaje quirúrgico laparoscópico en el tratamiento del cáncer de endometrio estadio I clínico, y compararlos con los obtenidos mediante laparotomía. El objetivo principal fue comparar los resultados en cuanto a supervivencia global, periodo libre de enfermedad y complicaciones. Otros objetivos fueron comparar los datos quirúrgicos, los ganglios retroperitoneales obtenidos y la estancia hospitalaria.La estadificación quirúrgica mediante ambos procedimientos incluyó la realización de citologías peritoneales, histerectomía extrafascial con salpingooforectomía bilateral, linfadenectomía pélvica bilateral ± paraaórtica y omentectomía y biopsias aleatorias en tipos histológicos de alto riesgo. La mayoría de datos se recogieron de forma prospectiva. Se incluyeron en el estudio todas las pacientes diagnosticadas de un cáncer primario de endometrio estadio I en el Hospital Materno-infantil Vall d'Hebron, en las cuales el primer tratamiento pretendió ser la cirugía. El análisis estadístico se realizó mediante el paquete SPSS 11.0. Se utilizaron pruebas de normalidad, pruebas no paramétricas, test de Kaplan y Meier para las estimaciones de supervivencia global y tiempo libre de enfermedad, log-rank test para la comparación univariante de las curvas de supervivencia y modelo de los riesgos proporcionales de Cox para el análisis multivariable. Entre enero/1995 y junio/2001 se incluyeron 371 pacientes con cáncer endometrial estadio I clínico. La estadificación se realizó mediante abordaje laparoscópico-vaginal en 55 pacientes (14,8%) y mediante laparotomía en 315 (84,9%). La edad media fue de 64,3 años y el índice de masa corporal medio de 30 (r, 18-57). Se realizó la cirugía de estadificación óptima en 367 pacientes (98,9%), sin diferencias significativas al comparar las dos vías de abordaje. La linfadenectomía (LND) pélvica se realizó en el 91,1% de las pacientes y la LND aórtica en el 50%. Hubo afectación ganglionar en 41 casos (11,1%) y 32 recurrencias a lo largo del seguimiento (8,6%). El tipo histológico más frecuente fue el endometrioide (74%), seguido del grupo de alto riesgo (seroso-papilar, célula clara y adenoescamoso) con un 16%. El 27,5% de los cánceres fueron mal diferenciados (G3). La distribución por estadios FIGO fue: estadio I (58%), II (24%), III (16%) y IV (2%). Con un seguimiento medio de 40,7 meses, la supervivencia global para el total de las pacientes fue del 92,2% (supervivencia media de 93 meses), siendo del 90,8% para las pacientes del grupo laparotómico y del 100% para las del laparoscópico. La comparación de las curvas de supervivencia entre las dos vías mostró un resultado estadísticamente no significativo (p=0,06). El tiempo libre de enfermedad para el total de pacientes fue del 91,4% (tiempo medio de 93,2 meses), siendo del 90,2% para el abordaje laparotómico y del 98,2% para el laparoscópico. Las curvas de tiempo libre de enfermedad tampoco difirieron (p=0,09).Diferenciando entre ambas vías de abordaje, se hallaron diferencias estadísticamente significativas (p<0,001) en cuanto a datos operatorios: el sangrado intraoperatorio medio, el número de transfusiones y la estancia hospitalaria media fueron menores en el grupo de laparoscopia. En cambio, el tiempo quirúrgico medio fue mayor en este grupo. El promedio de ganglios pélvicos y aórticos obtenidos fue superior en el grupo laparoscópico (p<0,001). El número de complicaciones fue similar con ambas vías (p=0,26). En el grupo laparoscópico no hubo ningún caso de conversión a laparotomía. Las dos poblaciones estudiadas fueron similares en características basales y en variables histopatológicas. En el análisis multivariable, ajustado para diferentes variables clínicas y morfológicas, las únicas variables con valor pronóstico independiente para supervivencia global fueron el grado mal diferenciado, la edad y el estadio IVa. Para tiempo libre de enfermedad lo fueron el tipo histológico de alto riesgo, la edad y el estadio IVa.Se concluye que la estadificación quirúrgica del cáncer de endometrio mediante abordaje laparoscópico-vaginal es factible y segura, con menor morbilidad y estancia hospitalaria. No obstante, se requiere un ensayo clínico que pueda confirmar estos resultados. / Endometrial cancer is currently the most frequent malignancy of the female lower genital tract in developed countries. Stratification of tumor extension is based on surgical findings and pathological examination of the resected specimen. Routine treatment is carried out through a standard laparotomy, although some studies have suggested that the operation can be performed by laparoscopic-vaginal approach with the same level of oncological radicality and without increasing the rate of complications.The purpose of this study was to assess the feasibility of laparoscopy in the surgical treatment of clinical stage I endometrical carcinoma and to compare and the results obtained with those of laparotomy. The primary objective of the study was the comparison between both procedures in terms of overall survival, disease-free survival, and rate of complications. Secondary objectives included a comparison of surgical data, retrieved retroperitoneal lymph nodes, and length of hospital stay.Surgical stratification in both procedures included peritoneal cytology, extrafascial hysterectomy with bilateral salpingoophorectomy, bilateral pelvic lymphadenectomy ± para-aortic lymphadenectomy and omentectomy, and random biopsies in high-risk histological types. Most data were recorded prospectively. All patients with a diagnosis of primary endometrical carcinoma, stage I, attended at the Hospital Materno-infantil Vall d'Hebron in whom surgery was indicated as the primary treatment modality were included. The SPSS, version 11.0, software computer progarm was used for the analysis of data. Tests of normality, non-parametric tests, the Kaplan-Meier test for the analysis of overall survival and disease-free survival with the long-rank test for the comparison of survival curves, and a Cox proportional regression analysis were used.Between January 1995 and June 2001, a total of 371 patients with clinical stage I endometrial cancer were included. Stratification of the disease was made by the laparoscopic-vaginal approach in 55 patients (14.88%) and by laparotomy in 315 (84.9%). The mean age of the patients was 64.3 years and the body mass index 30 kg/m2 (range 18-57). Optimal stratification surgery was achieved in 367 patients (98.9%), without significant differences between both surgical routes. A total of 91.1% of patients underwent pelvic lymphadenectomy and 50% para-aortic lymphadenectomy. Positive lymph nodes were found in 41 cases (11.1%) and a total of 32 relapses (8.6%) were documented at follow-up. Edometrioid carcinoma was the most frequent (74%) histological type followed by the high-risk group (serous papillary, clear cell, and adenosquamous) (16%). In 27.3% of cases, the tumor was poorly differentiated (G3). Distribution of cases according to FIGO stage included stage I in 58% of cases, stage II in 24%, stage III in 16%, and stage IV in 2%. After a mean follow-up of 40.7 months, the overall survival rate was 92.2% (mean survival 93 months), with 90% for the laparotomy group and 100% for the laposcopic group. Differences in survival between both groups were not statistically significant (P=0.06). Disease-free survival for all patients was 91.4% (mean 93.2 months), with 92% for the laparotomy approach and 98.2% for the laparoscopic group. Differences in disease-free survival between both procedures were not statistically significant (P=0.09).However, there were significant differences (P<0.001) between both surgical routes with regard to operative data: mean blood loss, number of blood transfusions required, and mean length of hospital stay, which were lower in the laparoscopic group. In contrast, the mean surgical time was significantly longer in this group. The mean number of pelvic and aortic nodes recovered was higher in the laparoscopic group (P<0.001). The number of complications was similar for both routes (P=0.26). In patients undergoing surgery through the laparoscopic approach, no case of conversion to laparotomy was necessary.The two study populations were similar in baseline characteristics and histopathological variables. In the multivariate analysis and after adjusting for different clinical and morphological parameters, independent variables significantly associated with survival were poorly differentiated histological grade, age, and stage IVa, whereas independent predictors of disease-free survival were high-risk histological type, age, and stage IVa.It is concluded that surgical stratification of endometrial cancer by means of laparoscopic-vaginal approach is feasible and safe, with lower morbidity and shorter length of hospital stay. However, these results should be confirmed in the framework of a clinical trial.

Objetivos Conocer el grado de crecimiento del endometrio, y el índice de resistencia de la arteria uterina bajo estimulo de nifedipino. Materiales y métodos: Se realizó un estudio prospectivo analítico experimental, comparativo doble ciego, con 30 pacientes con diagnóstico de infertilidad, que acudieron al servicio de Fertilidad del Hospital Loayza, durante Mayo y Junio 2007. Resultados: De 30 pacientes que iniciaron el estudio 5 no lo continuaron. No se encontró una diferencia significativa del grosor en mm del endometrio así como tampoco en el Indice de Resistencia de la arteria uterina, comparando nifedipino y placebo en cada paciente

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina el patrón de glicosilación del endometrio uterino de la perra, en las cuatro etapas del ciclo estral. Se utilizaron 19 úteros de perras (Canis lupus familiaris) que se sometieron a una ovariohisterectomía de rutina, en la Clínica de Animales Menores de la de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marco. Las perras pertenecían a diferentes razas y tamaños. Se tomaron muestras del cuerpo del útero y de ambos cuernos uterinos y se trabajaron con 14 lectinas con la técnica lectinhistoquímica, y de histoquímica con Reacción de Schiff-Acido Peryodico (PAS), Azul Alcián pH 1 y pH 2.5. Concluye que el patrón de glicosilación del endometrio normal de la perra durante el ciclo estral, mostró: en Proestro una fuerte presencia de αD-N-acetilgalactosamina, Galactosa β 1-4N-acetilglucosamina, Nacetilglucosamina, N-acetilneuraminidasa, fucosa, polisacáridos simples y polisacáridos complejos neutros; en Estro una fuerte presencia de α-D-Nacetilgalactosamina, Galactosa β 1-4N-acetilglucosamina, Nacetilglucosamina, N-acetilneuraminidasa, fucosa, galactosa, manosa, glicanos complejos, polisacáridos simples y polisacáridos complejos neutros; en Diestro fuerte presencia de α-D-N-acetilgalactosamina, Galactosa β 1-4Nacetilglucosamina, fucosa, N-acetilglucosamina y la N-acetilneuraminidasa; en Anestro fuerte presencia de α-D-N-acetilgalactosamina, fucosa, N-acetil glucosamina y la N-Acetilneuraminidasa. Lo que sugiere que los residuos de carbohidratos estudiados se encuentran en las cuatro etapas del ciclo estral, con mayor presencia en una o varias etapas del ciclo estral. / Tesis

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-31Bitstream added on 2014-06-13T19:25:55Z : No. of bitstreams: 1 miranda_sp_dr_botfm_prot.pdf: 863227 bytes, checksum: e9a7da6732cd70ea2d334bdfe537fd68 (MD5) / Fundação para o Desenvolvimento Médico e Hospitalar (Famesp) / O processo de carcinogênese implica a aquisição de alelos mutantes de genes supressores de tumor, aumento na proliferação celular e necessidade de angiogênese. Este estudo analisa a expressão das proteínas p53, Ki-67 e CD31 nos pólipos endometriais em mulheres na pós-menopausa usuárias de tamoxifeno. Métodos: Foram estudadas amostras de pólipos endometriais obtidas de mulheres em uso de tamoxifeno (n=20), pólipo sem uso de hormônios (n=20), endométrio atrófico (n=20) e câncer de endométrio (n=20) O material foi fixado em formol, incluído em parafina e processado para marcação imunohistoquímica para as proteínas p53, Ki-67 ce CD31. A comparação entre os grupos foi feita utilizando-se o qui-quadrado, teste t de Student e ANOVA. As diferenças com valor de p<0,05 foram consideradas significativas. Resultados: A idade das mulheres variou entre 55 e 85 anos (64,6l1,7 ano). Não houve diferença em relação à expressão da proteína p53 nos diferentes grupos (p=0,067). Uma expressão de Ki-67 em mais de 5% das células foi evidenciada em 40% dos pólipos cujas mulheres faziam uso de tamoxifeno e em 15% daquelas sem uso de hormônios (p=0,0047). A expressão da proteína CD31 foi maior em pólipos de usuárias de tamoxifeno em comparação ao endométrio atrófico (37,5l3,2 versus 22,2l1,3; p<0,001) e semelhante aos pólipos sem uso de hormônios (37,5l3,2 versus 33,7l2,0; p=0,319). Conclusão: A utilização de tamoxifeno parece estar associada a um aumento da proliferação celular nos pólipos endometriais, sem interferir na angiogênese ou inativação de proteínas supressoras de tumor. / The carcinogenesis process implies the acquisition of mutant alleles of tumor-supressor genes, increase in cell proliferation and need of angiogenesis. This study analyzes the expression of proteins p53, Ki-67 and CD31 in the endometrial polyps from post-menopausal women using tamoxifen. Methods: Samples of endometrial polyps from women using tamoxifen (n=20), polyps without hormone use (n=20), atrophic endometrium (n=20) and endometrium cancer (n=20) were studied. The material was fixed in formalin, included in paraffin and processed for imunohistochemical staining for p53, Ki67 and CD31 proteins. Comparison among the groups was done using the Chisquare, t test of Student and ANOVA. The differences with value p<0,05 were considered significant. Results: Women's age ranged from 55 to 85 years old (64,6l1,7 years). There was no difference about the expression of p53 protein in the different groups (p=0,067). One expression of Ki-67 in more than 5% of cells was showed up in 40% of polyps whose women were using tamoxifen and in 15% from without hormone use (p=0,0047). The expression of CD31 protein was higher in polyps from tamoxifen users in comparison to atrophic endometrium (37,5l3,2 x 22,2l1,3; p<0,001) and similar to polyps without hormone use (37,5l3,2 x 33,7l2,0; p=0,319). Conclusion: The use of tamoxifen seems to be associated to increase of cell proliferation in endometrial polyps, without interfering in angiogenesis or neutralizing the tumor-supressor protein.

Orientador: Rogério Dias / Banca: Jorge Nahás / Banca: Waldir Pereira Modotte / Banca: Reginaldo Guedes Coelho Lopes / Banca: Ilza Maria Urbano Monteiro / Resumo: As dosagens da leptina, da interleucina-6 (IL-6) e do fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) foram avaliadas no diagnóstico da endometriose peritoneal mínima e leve (estádios I e 11 - American Society for Reproductive Medicine). Participaram, deste estudo prospectivo e casocontrole, 29 mulheres, em idade reprodutiva, submetidas a videolaparoscopia. O grupo de estudo foi composto por 15 pacientes em investigação de esterilidade conjugal ou dor pélvica crônica (grupo E) e o grupo controle por 14 mulheres assintomáticas encaminhadas para realização de ligadura tubária (grupo C). Foram coletadas amostras de sangue periférico e líquido peritoneal para a dosagem laboratorial das citocinas determinadas por meio de testes ELlSA. No soro, não se observou diferenças significantes nas amostras de leptina, de IL-6 e do TNF-Q entre os grupos estudados (p>O,05). No líquido peritoneal, houve diferenças significantes nas dosagens da leptina e do TNF-Q entre os grupos estudados (p<O,05);não havendo diferenças significantes para as amostras de IL-6 (p>O,05). No líquido peritoneal, há evidências da possibilidade da utilização da leptina e do TNF-Q no diagnóstico da endometriose mínima ou leve, na amostra estudada. / Abstract: The levels of leptin, interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-o) were evaluated as a diagnostic tool for minimal and mild peritoneal endometriosis (stages I and II - American Society for Reproductive Medicine). lhe subjects of this prospective, case-control study were 29 women of reproductive age, who underwent laparoscopy. Subjects of the study-group were 15 women under investigation of infertility or chronic pelvic pain (E-group) and controls were patients with no symptoms in which tubal ligation would be performed (C-group). In ali these patients were collected samples of peripheral blood and peritoneal f1uid, in order to determine cytokine levels employing ELlSA tests. There were no statistical differences of the sera on the studied groups concerning the levels of leptin, IL-6 and TNF-o (p> 0.05). There were statistical differences in the peritoneal fluid of the studied groups, concerning the levels of leptin and TNF-o (p< 0.05) but not for IL-6 (p> 0.05). There is an evidence of using leptin and TNF-o in the peritoneal f1uid as a diagnostic tool for minimal and mild endometriosis. / Doutor

Orientador: Rogério Dias / Banca: Jorge Nahas Neto / Banca: Reginaldo Guedes Coelho Lopes / Resumo: Para o diagnóstico de pólipo endometrial, dispõe-se da ultrassonografia e da histeroscopia ambulatorial, sendo a última considerada padrão ouro. A ultrassonografia avalia a espessura do endométrio, sua alteração de ecogenicidade e seus limites. Os resultados de tal exame pode sugerir a doença. A histeroscopia ambulatorial, por sua vez, é um exame mais preciso, pois permite uma melhor identificação do pólipo endometrial. Além disso, ela permite a confirmação do diagnóstico através da biópsia, assim como o tratamento. Comparar a ultrassonografia e a histeroscopia ambulatorial como métodos propedêuticos dos pólipos endometriais nas mulheres menopausadas do Serviço de Endoscopia Ginecológica e Planejamento Familiar da Disciplina de Ginecologia do Departamento de Ginecologia e Obstetrícia da Faculdade de Medicina de Botucatu-Hospital das Clínicas (UNESP). Estudo analítico e retrospectivo cujos dados foram obtidos através de consultas a 323 prontuários de mulheres menopausadas submetidas a ultrassonografia e a histeroscopia ambulatorial no referido setor, no período de março de 2003 a março de 2009. Foram incluídas no estudo 281 mulheres menopausadas na faixa etária de 41 a 82 anos, que haviam sido submetidas à histeroscopia ambulatorial por apresentarem sangramento uterino e/ou ultrassonografia transvaginal alterada (EE≥5 mm), e que, por esses motivos, foram encaminhadas ao ambulatório. A idade média das pacientes foi de 61,3 anos, sendo que 27,6% apresentaram diabetes mellitus tipo II, 70,5% eram hipertensas, 5,7% eram tabagistas. A média do índice de massa corpórea (IMC) foi de 31,6 kg/m2, e 73% eram multíparas (com 3 ou mais partos). A média do tempo de menopausa (amenorreia) foi de 10,7anos, sendo que 15,3% das pacientes eram usuárias de terapia hormonal, e 6,8% estavam em tratamento de câncer de mama com tamoxifeno. Do total de pacientes, 38,1%... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ultrasonography and outpatient hysteroscopy are considered the "golden standard" for the diagnostic of endometrial polyp. Ultrasonography evaluates the endometrial thickness, the echogenicity and the limits. Its results can suggest the pathology. Outpatient hysteroscopy, on the other hand, is a more accurate exam, providing a better identification of the endometrial polyp and confirming the diagnostic through histological examination. It also may be used as a treatment. Comparison of the ultrasonography with the outpatient hysteroscopy as diagnostic methods for endometrial polyps in postmenopausal women from the Endoscopic and Gynecologic Service of the Medical School of Botucatu - UNESP. Analytical and retrospective study based on the files of 323 postmenopausal women submitted to ultrasonography and to outpatient hysteroscopy from March 2003 to March 2009, wich were performed in the Gynecologic and Obstetric Department of the Medical School of Botucatu (UNESP) - Gynecology Discipline of Botucatu Medical School. In this study, 281 postmenopausal women, with ages between 41 and 82 years, and that had been submitted to outpatient diagnostic hysteroscopy, were included. They had uterine bleeding and/or altered transvaginal ultrasound (EE≥5 mm). Patients mean age was 61,3 years; 27,6% had diabetes mellitus II; 70,5% had systemic arterial hypertension; and 5,7% were smokers. IMC was 31,6 kg/m2, and 73% were multiparae (3 or more deliveries). Average menopause time (amnorrhea) was 10,7 years; 15,3% were under hormonal therapy; and 6,8% were under breast cancer treatment with taximofen. From the 323 patients, 38,1% had uterine bleeding and 61,9% were asymptomatic. Ultrasonography detected endometrial polyp in 22,8% of the patients, endometrial thickness in 59,8%, being 10,5mm the mean thickeness. Comparing the ultrasonography with the histopathology, it was observed that endometrial... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Doctora en Bioquímica / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento hasta diciembre de 2015 / El endometrio es un tejido que requiere de la acción de los esteroides para su correcta función; de modo que patologías que alteren la concentración de esteroides inducen fallas en la fisiología endometrial, como es el caso del Síndrome de Ovario Poliquístico (PCOS). Los endometrios de mujeres con PCOS (PCOSE) presentan un incremento de los procesos de proliferación celular, caracterizados por altos niveles de proteínas ciclina D1, Ki67 y disminución de p27. En este contexto, se sabe que los estrógenos generan efectos pro-proliferativos en el tejido endometrial. Los esteroides pueden ser originados por la metabolización intratisular (origen intracrino) desde precursores como la DHEAS que son convertidos en esteroides con actividad estrogénica y/o androgénica. Para esto se requiere que los precursores sulfatados ingresen a las células a través de transportadores de las familias OATPs y OATs. Además, se necesita la expresión y actividad de enzimas que metabolizan los esteroides. Previamente, hemos reportado que en PCOSE existe un incremento en la metabolización de DHEA a androstenediol, un metabolito con actividad estrogénica. En el presente trabajo se propuso como objetivo general evaluar si el ingreso a la célula de esteroides sulfatados a través de transportadores y su metabolización intracelular está alterado en endometrio de mujeres con PCOS. Además, establecer si esto genera altas concentraciones intracelulares de esteroides que permitan el incremento del proceso de proliferación celular. Para ello, se propuso dos modelos, uno ex vivo y un modelo in vitro con células de la línea T-HESC, St-T1b y células endometriales obtenidas desde cultivo primario. Para el primer objetivo específico se determinó que existe un incremento de los niveles de androstenediol en PCOSE al compararlo con controles (CE) (p=0,002). Además, se evaluó la actividad de la enzima 3β-hidroxiesteroide deshidrogenasa (HSD) en los tejidos en estudio, no detectándose diferencias significativas. En el segundo objetivo específico se analizó la expresión y actividad de los transportadores OATP-B, D y E, y OAT4 en el modelo ex vivo e in vitro, por western blot, RT-PCR convencional y ensayo de captación de DHEAS. En el modelo in vitro se utilizó estímulos con androstenediol, testosterona y estradiol. Se determinó que los niveles proteicos de los transportadores OATP-B y OATP-E están incrementados en PCOSE versus CE (p=0,049 y p=0,007, respectivamente). Los ensayos in vitro de la actividad de transportadores nos permitieron determinar que existe un menor ingreso de DHEAS en células estimuladas con testosterona (p=0,02). Los niveles proteicos de OATP-E se ven disminuidos con los estímulos de androstenediol y testosterona (p=0,04 y p=0,04, respectivamente). El tercer objetivo tenía la finalidad de determinar si altas concentraciones de esteroides (androstenediol, testosterona y estradiol) por 48 h modifican los procesos de proliferación celular en células de la línea T-HESC y St-T1b. Para esto se utilizó las técnicas de western blot, inmunocitoquímica y citometría de flujo. Se determinó que estímulos con estradiol y androstenediol incrementan los niveles de ciclina D1 (p<0,05) y disminuyen los niveles del represor de ciclo celular p27 (p<0,05); además, androstenediol aumenta el porcentaje de núcleos positivos a Ki67 en células St-T1b (p=0,05). Por otro lado, el estímulo con testosterona por 48 h disminuye los niveles de Ki67 y de ciclina D1, e incrementa los de p27 (p<0,05). Sin embargo, estos estímulos no modifican el porcentaje de células en las distintas fases del ciclo celular, evaluado por citometría de flujo. Finalmente, con el cuarto objetivo se evaluó los posibles mecanismos involucrados que generarían los cambios en las moléculas reguladoras del ciclo celular dadas en el modelo in vitro. Para eso, mediante la técnica de western blot, se evaluó las vías de MAPK (ERK1/2) y PI3K/Akt, además se utilizó inhibidores de estas vías, antagonistas de receptores de estrógenos y andrógenos, y un inhibidor de RNA polimerasa II. Se determinó que androstenediol es capaz de incrementar los niveles de fosforilación de ERK1/2 y de Akt con los estímulos de 48 h (p<0,05), pero no así con estímulos de 20 min. Por otro lado, testosterona por 48 h disminuye la activación de la vía PI3K-Akt (p<0,05). La utilización de antagonistas de receptores de estrógenos (ICI 182,780 y MPP dihidrocloruro), nos permitió determinar que el efecto sobre p27 y ciclina D1 sería a través del receptor de estrógenos (ER) α (p<0,05). Adicionalmente, los cambios en las fosforilaciones desaparecen cuando está presente un inhibidor de la RNA polimerasa II (α-amanitina) (p<0,05), por lo que probablemente requiere de la transcripción de alguna o algunas proteína/s que permitan los cambios observados en los reguladores del ciclo celular. Para determinar si se requiere las vías de PI3K/Akt ó MAPK (ERK1/2), se utilizó inhibidores de PI3K (LY-194,002) y MEK1/2 (U-0126). La presencia de LY-194,002 inhibe los cambios dados por androstenediol en ciclina D1 y p27 (p<0,05), mientras que U-0126 evita solo el incremento de ciclina D1 dado por androstenediol (p<0,05). Por lo tanto, la fosforilación de Akt sería relevante para la modulación de ambas vías reguladoras del ciclo, mientras que la fosforilación de ERK1/2 sería necesaria solo para ciclina D1. El presente trabajo propone diversas metodologías para caracterizar a través de qué mecanismo se genera el incremento en la proliferación celular presente en PCOSE y el rol que tiene la intracrinología en estas alteraciones, donde androstenediol tendría un rol relevante. Los resultados obtenidos en los estudios in vitro nos permiten concluir que androstenediol potenciaría la proliferación celular, actuando como un estrógeno en nuestro modelo, a través del ER α, y que río abajo se activen las vías de MAPK (ERK1/2) y PI3K-Akt. Esto explicaría, en parte, la desregulación del proceso proliferativo ocurrido en PCOSE y la fisiopatología de la hiperplasia y adenocarcinoma endometrial de alta prevalencia en las mujeres con este síndrome / The endometrium is a tissue that requires the action of steroids for its adequate function; therefore, pathologies altering the concentration of steroids induced endometrial physiology failures, as seen in polycystic ovary syndrome (PCOS). Previous reports have indicated that the endometrium of women with PCOS (PCOSE) show increased cell proliferation processes, characterized by high levels of cyclin D1 protein, Ki67 and p27 decreased. In this context, it is known that estrogens enhance proliferation of endometrial tissue. The intratisular steroid metabolism (intracrine) from precursors such as DHEAS could convert into steroids with oestrogenic and/or androgenic activity. This requires sulfated precursors entering the cells through transporters OATs and OATPs families. Furthermore, expression and activity of steroid metabolizing enzymes is needed. We have previously reported in PCOSE an increased DHEA metabolism to androstenediol, a metabolite with estrogenic activity. In this work, it was proposed as a general objective to evaluate whether DHEAS entry the cell via sulfated steroid transporters and if intracellular metabolism is altered in the endometrium of women with PCOS. Furthermore, to establish whether this generates high intracellular concentrations of steroids that could allow the increased in the cell proliferation process. To achieve this, we proposed two models, an ex vivo and an in vitro cell line model of T-HESC and St-T1b and also, endometrial cells obtained from primary cultures. The results of the first specific objective show a significative increase in PCOSE androstenediol levels compared to controls (EC) (p=0.002). Moreover, no significant differences were detected in the activity of the enzyme 3β-HSD in the tissues under study. In the second objective, the expression and activity of transporters OATP-B, D and E, and OAT4 was tested in the model ex vivo and in vitro, western blot, RT-PCR and conventional DHEAS uptake assay. In the in vitro model, stimuli with androstenediol, testosterone and estradiol were used. It was determined that the protein levels of the transporters OATP-B and OATP-E are increased in CE versus PCOSE (p=0.049 and p=0.007, respectively). In vitro activity of transporters assays allowed us to determine that there is less uptake of DHEAS in testosterone stimulated cells (p=0.02). Protein levels of OATP-E are diminished with androstenediol and stimuli of testosterone (p=0.04 and p=0.04, respectively). The third objective aimed to determine whether high levels of steroid (androstenediol, testosterone and estradiol) for 48 h modified the cell proliferation process in T-HESC and St-T1b cell lines. To achieve this purpose, western blot, immunocytochemistry and flow cytometry techniques were used. It was determined that estradiol and androstenediol stimuli increase levels of cyclin D1 (p<0.05) and lower levels of the cell cycle repressor p27 (p<0.05); additionally, androstenediol increases the percentage of positive nuclei for Ki67 in St-T1b cells (p=0.05). On the other hand, stimulation with testosterone for 48 h affected negatively the levels of Ki67 and Cyclin D1 and positively p27 levels (p<0.05). However, these stimuli do not modify the percentage of cells in the different phases of the cell cycle assessed by flow cytometry. Finally, the fourth objective evaluated some possible mechanisms involved in changes in cell cycle regulatory molecules given in the in vitro model. For this, MAPK (ERK1/2) and PI3K/Akt levels and activity were evaluated by Western blotting. We used inhibitors of these pathways, estrogens and androgens receptors antagonists, and an inhibitor of RNA polymerase II. Androstenediol was able to increase the levels of ERK1/2 and Akt phosphorylation with the stimulus of 48 h (p<0.05), but not with stimuli of 20 min. Moreover, 48 h-testosterone stimulation decreased the activation of the PI3K-Akt (p<0.05) pathway. The use of estrogen receptor antagonists (ICI 182,780 and MPP dihidrocloruro), allowed us to determine that the effect on p27 and cyclin D1 would be through the estrogen receptor α (p<0.05). Additionally, those changes in phosphorylation disappeared when an inhibitor of RNA polymerase II (α-amanitin) was used (p<0.05). These data indicate requirement of transcription or some protein/s that allow the observed changes in cell cycle regulators. To determine whether PI3K/Akt or MAPK (ERK1/2) is required, PI3K (LY-194.002) and MEK1/2 (U-0126) inhibitors were used. The presence of LY-194.002 inhibits changes given by androstenediol in cyclin D1 and p27 (p<0.05), while U-0126 only prevents the increase of cyclin D1 given androstenediol (p<0.05). Therefore, the phosphorylation of Akt could be relevant for both modulation cycle regulatory pathways, while phosphorylation of ERK1/2 would be required only for cyclin D1. This paper proposes several methods to characterize the mechanism involved in the increased cell proliferation observed in PCOSE, where intracrinology has a role in these alterations, particularly androstenediol could have a significant role. The results obtained in the in vitro studies allow us to conclude that androstenediol could enhance cell proliferation, acting as an estrogen in our model, through estrogen receptor α, where MAPK (ERK1/2) and PI3K-Akt pathways are activated. This could explain, in part, the deregulation occurred in PCOSE proliferative process and the pathophysiology of high prevalence of endometrial hyperplasia and adenocarcinoma in women with this pathology / Conicyt Fondecyt

El documento digital no refiere asesor / Evalúa el efecto de la endometritis diagnosticada por la observación del flujo de fondo de vagina, usando el dispositivo comercial Metricheck® a los 35 días postparto, sobre los parámetros reproductivos a primer servicio en vacas lecheras de crianza intensiva en el departamento de Lima. Para esto se utilizaron 289 vacas provenientes de tres establos, las cuales formaron dos grupos de tratamiento: vacas sin endometritis y vacas con endometritis. Para el análisis de datos se utilizó el modelo lineal generalizado utilizando las variables independientes época de parto (verano, invierno), establo (1, 2 y 3), número de partos (primíparas, multíparas), época de servicio (verano, invierno) y endometritis (presencia, ausencia). Se halló que las vacas sin endometritis tuvieron un menor intervalo parto-primer servicio que las vacas que tuvieron endometritis (p<0.05) y que también las variables establo, época de parto y endometritis fueron significativas (p<0.05). Se determinó que las vacas sin endometritis tienen 2.4 veces más oportunidad de ser servidas antes de los 81 días postparto que las vacas que presentaron endometritis (p=0.01). No se encontró diferencia en la tasa de concepción de las vacas con o sin endometritis, siendo de 19% y 21%, respectivamente. Se encontró que las vacas sin endometritis tuvieron 1.33 más probabilidades de ser servidas por primera vez antes que las vacas con endometritis (p=0.04). Del mismo modo, las vacas paridas en invierno tuvieron 2.49 más probabilidades de ser servidas por primera vez que las vacas paridas en verano (p<0.01). En conclusión, las vacas con presencia de endometritis incrementan significativamente su intervalo parto - primer servicio, la endometritis disminuye la probabilidad de que las vacas sean servidas por primera vez y causa un menor porcentaje de vacas servidas durante los 81 primeros días postparto. Además, las vacas con presencia de endometritis no incrementan su tasa de concepción a primer servicio. / Tesis

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-27Bitstream added on 2014-08-13T18:01:18Z : No. of bitstreams: 1 000725292.pdf: 1356413 bytes, checksum: 9864b7ad4f4eb2a259a94c49faefdd28 (MD5) / A expressão das interleucinas no útero e das catelicidinas no plasma seminal podem ser responsáveis pela magnitude e persistência da resposta inflamatória uterina. Os objetivos desse estudo foram verificar a presença das catelicidinas no plasma seminal e caracterizar a resposta imune uterina pela expressão de interleucinas inflamatórias. O plasma seminal foi obtido por coleta de sêmen de 15 garanhões e submetido ao SDSPAGE e DOT-blotting. As éguas foram submetidas a um ciclo estral sem desafio uterino (T1), com infusão de plasma seminal (T2) e inseminação artificial (T3). Exame ultrassonográfico, citologia exfoliativa uterina e colheita de células para a expressão do RNAm das interleucinas por qPCR foram realizados durante 3 ciclos consecutivos aleatoriamente, 24 (M1), 48 (M2) e 72 horas (M3) após a indução da ovulação. A expressão do RNAm no endométrio das éguas resistentes e susceptíveis foi verificada para as interleucinas IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. A concentração total de proteínas no plasma seminal dos garanhões variou de 6,3 a 25,6 mg/mL. O SDS-PAGE revelou a existência de 3 bandas protéicas dentro do intervalo de peso molecular previamente citado na literatura para as catelicidinas equinas. Os garanhões avaliados mostraram quantidades de eCATH1 < 339,6ng, eCATH2 < 141,3ng e eCATH3 < 283,4ng. No momento M2 não foi possível diferenciar as éguas resistentes das susceptíveis pela citologia ou ultrassonografia independente da infusão com plasma seminal, inseminação artificial ou da ovulação, mas quando há presença de espermatozoides no útero a resposta inflamatória é mais intensa. Durante o momento M3, as éguas susceptíveis apresentaram maior volume de fluido uterino acumulado em todos os tratamentos com menor capacidade de limpeza uterina. Foi verificada maior expressão do RNAm das interleucinas pró-inflamatórias nas éguas susceptíveis e a expressão do RNAm da interleucina-10 é... / In the equine species, uterine interleukin expression and seminal plasma cathelicidins can modulate the magnitude and persistence of the post-breeding inflammatory reaction. The objectives were to verify the presence of cathelicidins in the stallion seminal plasma and characterize the uterine immune response by pro and anti-inflammatory interleukins. Seminal plasma was obtained by semen collection of 15 stallions and submitted to SDS-PAGE and DOT-blotting tests. Three experiments were designed to study interleukin expression during baseline (T1), after seminal plasma infusion (T2) and artificial insemination (T3). Endometrial cytology and cell collection as well as ultrassonographic evaluations were performed to access interleukin mRNA through qPCR during three randomly assigned consecutive estrous cycles, 24 (M1), 48 (M2) and 72 hours (M3) after an ovulation was induced. Endometrial mRNA expression in mares resistant and susceptible to persistent post-breeding endometritis was identified for the following pro-inflammatory cytokines: IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. Total seminal plasma protein concentrations ranged from 6.3 to 25.6 mg/mL. SDS-PAGE analysis identified the existence of three proteic bands with molecular weight similar to what was previously reported for equine cathelicidins. Evaluated stallions showed values < 339.6 ng for eCATH1, < 141.3 ng for eCATH2 and < 283.4 for eCATH3. At M2, resistant and susceptible mares could not be separated through cytology or ultrassonography, even though the presence of sperm strongly stimulates uterine inflammatory reaction. At M3, susceptible mares showed higher uterine fluid accumulation and lower uterine clearance. Pró-inflammatory mRNA expression was higher in susceptible mares and interleukin-10 mRNA expression was similar between resistant and susceptible mares