A maioria das plantas transgênicas disponíveis atualmente possuem seus insertos regulados por promotores fortes que induzem uma transcrição intensa, permanente e generalizada, o que causa gastos energéticos desnecessários e dificulta a regeneração de um maior número de indivíduos transgênicos. O objetivo principal que norteou o presente trabalho foi desenvolver uma série de vetores plasmidiais contendo sequências promotoras projetadas e artificialmente sintetizadas para modular a expressão de genes de interesse em plantas. O promotor CaMV35S serviu como base para teste de elementos cis e geração de novos cassetes artificiais de expressão (CAEs). Os elementos cis TATA-box, CAAT-box e sítio de início da transcrição (TSS) originais da sequência de 90 pb do promotor mínimo CaMV35S foram substituídos pelos consensos já definidos para sequências promotoras de plantas, e a distância entre o TSS e o ATG de início da tradução, que originalmente era de 8 nucleotídeos, foi alterada para 75. Sítios de restrição para endonucleases foram introduzidos em posições estratégicas do promotor de forma a permitir a ligação dos elementos cis a serem testados e substituição de genes repórteres por genes de interesse. A distância entre o CAAT-box e o TATA-box, que originalmente era de 28 pb, foi alterada para 34 pb pela inclusão de um sítio para EcoRV na posição -46 do promotor artificial. Para compor o CAE, foram escolhidos o gene repórter tdTomato-ER e o terminador da nopalina sintase (Tnos). Foi desenvolvida, também, uma versão do CAE contendo o promotor CAMV35S (35S-CAE) integral para ser utilizada como controle positivo nesse trabalho. A partir de dados da literatura científica, foram selecionados os elementos cis W1, AC e RHE cujas atividades foram comprovadas como críticas à expressão regulada em sementes, tecidos vasculares e raízes respectivamente. Os elementos W1 e AC foram adaptados ao sítio de SmaI do CAE, dando origem às versões W1-CAE e AC-CAE. Não foram obtidas versões de RHE-CAE até o momento. Todas as versões do CAE obtidas nesse trabalho foram adaptadas ao vetor pKGW da série Gateway e empregadas para a transformação genética de Arabidopsis thaliana. Somente plantas transformadas com as versões CAE e 35S-CAE foram recuperadas. Sinais de fluorescências do gene repórter regulado pelas diferentes versões do CAE, necessários para validação da atividade promotora dos mesmos, não foram verificados em quaisquer das plantas recuperadas até o presente. / Most transgenic plants currently available have their inserts regulated by strong promoters that induce intense, permanent, and generalized transcription, which may cause unnecessary energy costs, preventing the regeneration of a larger number of transgenic events. The main purpose of this work was to develop a set of plasmid vectors containing designed promoter sequences, artificially synthesized to modulate the expression of genes of interest in plants. The CaMV35S was used as core promoter to test cis elements and to generate new artificial expression cassettes (AECs). Original-TATA box, CAAT-box and transcriptional start site (TSS) of the minimal 90 bp CaMV35S promoter sequence were replaced by already defined plant consensus sequences, and the distance between TSS and ATG, that was originally of 8 bp, was changed to 75 bp. Endonuclease restriction sites were introduced in strategic positions of the promoter in order to enable the cloning of cis elements and the replacement of reporter genes by genes of interest. The distance between CAAT-box and TATA-box, originally with 28 bp, was changed to 34 bp since one EcoRV site was included at position -46 of the artificial promoter. The reporter gene TdTomato-ER and the terminator of the nopaline synthase gene (Tnos) were chosen to compose the AEC. It was also developed an AEC version containing the CAMV35S promoter (35S-AEC) to be employed as positive control in this study. The W1, AC and RHE cis elements, whose activities were respectively proven as critical to the regulated expression in seeds, vascular tissues and roots, were selected from the scientific literature to be assayed. The W1 and AC cis elements were adapted to the SmaI site of the AEC, giving rise to the W1-AEC and AC-AEC versions. We did not obtain RHE-AEC versions. All AEC versions that were obtained in this study were ligated into pKGW vector of the Gateway series, and all vectors were employed to genetically transform Arabidopsis thaliana. Only plants transformed with the AEC and 35S-AEC versions were recovered. Fluorescence signals of the reporter gene regulated by AEC different versions, which were necessary for validation of promoter activity, were not observed in any of the recovered plants up to the present.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-01T22:32:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Hayana Millena de Arruda Azevedo.pdf: 6064909 bytes, checksum: 10bd5990f9b0024b2cb4fac0db7716f6 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-03T18:37:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Hayana Millena de Arruda Azevedo.pdf: 6064909 bytes, checksum: 10bd5990f9b0024b2cb4fac0db7716f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:37:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Hayana Millena de Arruda Azevedo.pdf: 6064909 bytes, checksum: 10bd5990f9b0024b2cb4fac0db7716f6 (MD5) Previous issue date: 2013-08-23 / FACEPE / O feijão-caupi (Vigna unguiculata) vem aumentando gradativamente seu potencial produtivo. Contudo, a área colhida, a produção e a produtividade oscilam muito em virtude das variações climáticas, bem como os ataques de pragas e patógenos. Estudos moleculares aliados a ferramentas biotecnológicas, como a transgenia e a mutagênese, podem contribuir na redução dos problemas gerados pelos estresses. O presente trabalho teve como objetivo inserir um gene ligado à defesa na cultivar BRS Tumucumaque de feijão-caupi, conferindo-lhe maior tolerância a estresses bióticos. Para obtenção dos resultados, foi utilizada a metodologia de transferência direta de genes via Biobalística. Foram bombardeados cerca de 700 embriões e cinco exemplares (0,7%) passaram por todas as etapas da pressão de seleção, chegando à aclimatação. Uma vez aclimatadas, realizou-se a análise por PCR. Para confirmação da transformação foi feito uso do conjunto de primers pAHAS 124/pAHAS 500. Os primersforam utilizados para amplificar uma sequência de 624 pb e, em conjunto com a sequência codificante, cerca de 750 pb. Em um segundo momento, também objetivou-se gerar mutantes com características de tolerância a estresse salino, fazendo uso da mutagênese in vitro através de irradiação por raios gama sobre o desenvolvimento in vitro da cv. BR14-Mulato.Inicialmente, foi estabelecido um protocolo apropriado para pressão de seleção in vitro das sementes irradiadas, fazendo-se uso das concentrações de 172 mM, 258 mM, 344 mM e 0 mM, chegando-se, então, à conclusão de que a concentração de 172 mM seria a mais apropriada. Por fim, sementes foram irradiadas com três doses de radiação gama (100 Gy, 150 Gy e 200 Gy), além do material controle (0 Gy), e seus tecidos foram isolados e inoculados, simultaneamente, em meios de cultura com e sem sal. Como resultado, foi obtido um possível variante somaclonal advindo de material não irradiado e inoculado em meio não seletivo, sendo transferido, posteriormente, para meio contendo NaCl, sobrevivendo a este. Outro resultado de grande importância foi a obtenção de um provável mutante sólido provocado pela dose de 150 Gy que, inicialmente, formou calo embriogênico na ausência de NaCl, sendo posto sob pressão de seleção na etapa conseguinte. / Cowpea (Vigna unguiculata) is gradually increasing its productive potential. However, the harvested area, production and productivity of this crop oscillate due to climate changes, as well as attacks by pests and pathogens. Molecular studies aiming the isolation of genes combined with biotechnological tools, such as transgenesis and mutagenesis, can contribute effectively in reducing the problems caused by stress. The present work aimed to insert a defense gene in thecowpea cultivar BRS Tumucumaque,conferring increased tolerance to biotic stresses. To obtain these results, we used the methodology of direct gene transfer via biolistic. About 700 embryos were bombarded and five samples (0.7%) went through all the stages of selection pressure, reaching acclimation. Once acclimated, they were analyzed by PCR. For confirmation of the transformation a set of primers (AHAS124/pAHAS500) were used. In conjunction with the coding sequence, the pair showed a band of approximately 750 bp.In a second moment, was also aimed to generate mutants with characteristics of salt stress tolerance, making use of in vitro mutagenesis through gamma irradiation on the development in vitro of the cv. BR14-Mulato, from determining the minimum concentration of sodium chloride (NaCl) capable of inhibiting in vitro regeneration of tissues and subsequent choice of the radiation level capable of generating genetic variation.Initially, was established an appropriate protocol for selection pressure of the irradiated seeds, making use of concentrations of 172 mM, 258 mM, 344 mM and 0 mM, coming then to the conclusion that the concentration of 172 mM would be more appropriate. Finally, seeds were irradiated with three doses of gamma radiation (100 Gy, 150 Gy and 200 Gy), and their tissues were isolated and inoculated simultaneously in culture media with and without salt. As a result, were obtained a possible somaclonal variation arising from non-irradiated materials and inoculated onto non-selective medium, being transferred later to medium containing NaCl, surviving this. Another was the achievementof a mutant caused by the dose of 150 Gy, which originally formed embryogenic callus in the absence of NaCl and later placed under selection pressure in the next step.

Orientador: Maria Isabel Rodrigues / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-27T07:39:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Armiliato_Luciano_M.pdf: 13776089 bytes, checksum: 606f32d6f46335198f71e529fb966a7d (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: o ácido cítrico (2-Hidroxi-1,2,3 ácido propano tricarboxílico) é o principal constituinte das frutas cítricas. Com o emprego de técnica de processos microbiológicos foi possível obter esse ácido por fermentação, reduzindo-se o custo de obtenção e possibilitando um grande aumento do uso em escala industrial, o que o diferencia de outros produtos que previamente foram elaborados por métodos microbiológicos e atualmente se produzem por via química. Atualmente o ácido cítrico é um dos mais importantes ácidos orgânicos produzidos por via microbiana. Sozinho, ele representa cerca de 60% do mercado de acidulantes nas indústrias de alimentos. No entanto, seu preço bastante elevado se deve, principalmente, ao fato de que sua produção industrial é feita por Aspergillus niger, um fungo que tem um tempo de fermentação muito grande, geralmente maior do que sete dias. Uma alternativa a esse método de produção é a utilização de leveduras em lugar dos fungos, o que tornaria o processo fermentativo mais atrativo economicamente devido às maiores facilidades operacionais (processo contínuo e com reciclo de células, por exemplo). Verificouse que leveduras do gênero Candida têm uma taxa de produção de ácido cítrico semelhante aos fungos. A maior desvantagem da levedura é a produção simultânea de altos teores de ácido isocítrico, um produto com baixo. valor comercial. A excreção de ácido isocítrico pode ser controlada através da manipulação dos meios de cultura e das condições de agitação e aeração. Neste trabalho foi realizado um planejamento experimental 2 com três ensaios no ponto central analisando-se as variáveis agitação e aeração estudadas numa faixa de 460 a 740 rpm e 0,4 a 0,9 vvm, respectivamente. A relação de ácido cítrico: isocítrico foi de 1 : 1, e as análises não revelaram nenhuma significância das variáveis na faixa estudada. Além da variação das condições operacionais do processo, também foram estudadas fontes alternativas de carbono e nitrogênio para o crescimento celular e também para a produção de ácido cítrico. Como alternativa à glicose, foram utilizados melaço de cana e sacarose, e em substituição ao NH4CI foram utilizados água de maceração de milho, sulfato de amônia e uréia. Os testes preliminares indicaram que a água de maceração de milho combinada com o melaço apresenta um bom crescimento celular, mas afetam significativamente a produção de ácido cítrico, levando esta a níveis muito baixos. / Abstract: Citric acid (2-hydroxy-1,2,3-propane tricarboxylic acid) is found in many citric fruits. Using microbiological techniques it has been possible to obtain this acid by fermentation using Aspergillus niger, increasing its industrial application, differencing of others products previously obtained by microbiological process and actually obtained by chemical method. Today, citric acid is one of the most important organic acids produced by microbiological technique, responding for 60% of the total acidulant used in food industries. Indeed, it is a very expensive product, especially because the long fermentation time required, more than seven days. A alternative method is to use yeasts instead of fungi in the fermentative process, reducing the citric acid cost due to the fact that it is easier to operate when compared to another using fungi. Yeasts belonging to the genus Candida have citric acid production rates similar to fungi. However, the yeasts produce simultaneously isocitric acid, depending on the culture conditions. In this work an Experimental Design 22 with 3 central points was accomplished, changing the agitation (from 460 to 740 rpm) and the aeration (from 0.4 to 0.9 vvm). The ratio citric : isocitric acid found was about 1 and the statistical analysis showed no significant effect of this variables in the ratio studied. Besides, alternative sources of carbon and nitrogen, such as sugar cane molasses and sucrose (carbon source) and urea, (NH4hSO4and com syrup (nitrogen source), were studied. The results showed that sugar cane molasses combined with com syrup present a high cellular growth but interfere in the citric acid production phase. / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientadores : Edi Lucia Sartorato, Denise Yvone Janovitz Norato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:03:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caldas_HeloisaCristina_M.pdf: 16831040 bytes, checksum: 18bbddcc1afb7e9b973df9e22e2bc68b (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: As doenças de depósito de glicogênio (GSD) incluem aproximadamente 12 tipos, onde existe falta de uma ou de diversas enzimas que metabolizam o glicogênio normal e são também chamadas de glicogenoses. Os acúmulos intracelulares do glicogênio afetam principalmente células hepáticas, renais, músculo cardíaco e esquelético. As diferentes formas de GSD foram classificadas de acordo com a ordem cronológica em que os defeitos enzimáticos foram identificados. A GSDI compreende um grupo de doenças raras, com padrão de herança autossômico recessivo apresentando grande heterogeneidade clínica e bioquímica. Existem dois principais subgrupos, GSDIa e Ib, confirmados em nível molecular. O subtipo Ia se refere à deficiência da enzima glicose-6-fosfatase (G6Pase), enzima responsável pela manutenção da glicose sanguínea; a GSDIb relacionada à deficiência da glicose-6-fosfato translocase (G6PTl) responsável pelo transporte da glicose-6-fosfato para o lúmen do retículo endoplasmático, onde a unidade catalítica da G6Pase está situada. Outros subgrupos menos comuns foram também identificados, tais como o subgrupo Ic que envolve o transporte de fosfato e pirofosfato e, finalmente, Id que envolve a enzima responsável pelo retomo da glicose do lúmen do retículo para o citosol, existindo, no entanto, controvérsia com relação à classificação desses últimos subtipos. A GSDID é causada pela deficiência da enzima bifuncional AGL, uma proteína monomérica com dois sítios catalíticos diferentes: oligo-l, 4-1,4 glucontransferase e amilo-1,6-glucosidase, e para o funcionamento normal, ambas as atividades são requeridas. A enzima AGL combinada à ação da fosforilase é responsável pela completa degradação do glicogênio. Devido à heterogeneidade clínica dos tipos I e m, durante a infância é difícil se diferenciar clinicamente as duas formas, ambas apresentando sintomas similares de hepatomegalia, hipoglicemia, hiperlipidemia,retardo de crescimento entre outros. Neste trabalho foram estudados 14 indivíduos com sinais clínicos sugestivos de GSDI onde não foram encontradas alterações no gene da G6Pase, responsável pelo subtipo Ia, esses pacientes são, portanto classificados como tipo I non-Q. O gene G6PTl foi seqüenciado completamente em todos os pacientes estudados e dois deles foram diagnosticados em nível molecular como sendo na verdade GSDIb. Foram estudados 6 exons do gene AGL, onde estão localizadas a maioria das mutações descritas até o momento no gene, e somente foram detectados polimorfismos em todos os indivíduos estudados. O protocolo molecular desenvolvido no presente trabalho mostrou-se adequado para o rastreamento de mutações, apesar de terem sido diferenciados molecularmente somente dois indivíduos com subtipo Ib / Abstract: There are 12 types of glycogen storage disease (GSD). There disease are characterized by the absence of one or many of enzymes called glycogenoses, which are responsible for normal glycogen metabolismo The intracelular increase of glycogen mainly affects hepatic, kidney, cardiac and squeletic muscle cells. GSDs have been classified according to the cronological order in which enzymatic defects were identified. GSDI includes a group of rare disease of autosomal recessive disorders and clinical and biochemical heterogeneity. There are two main subgroups GSDIa and Ib. A diagnosis can only be confirmed by molecular studies. Subtype Ia is caused by a deficiency glucose-6-phosphatase (G6Pase), is responsible for the mantainance of blood glucose homeostasis. Subtype Ib results trom a deficiency of the glucose-6-phosphate translocase enzyme. This enzyme transports glucose-6-phosphato into the lumen ofthe endoplasmic reticulum, where the G6Pase catalitic site situated. Such as Ic and Id have also been identified. Subtype Ic is related to phosphate and pyrophosphate transporter and Id is related to the enzyme responsable for glucose transport trom lumen to cytosol. GSDm is caused deficiency of bifunctional enzyme (AGL) is a monomeric protein, with both amylo-l,6-glucosidase and 0Iigol,4-1,4 glycosyl transferase activity at two separate catalytic sites. The AGL enzyme, together with phosphorylase, is responsible for degradation of glycogen. During infancy, type m disease may be almost indistinguishable from type I disease, as hepatomegaly, hypoglycemia, hyperlipidemia, and growth retardation are similar predominant features. In the present study, we report molecular and clinical finding in 14 patients with suggestive clinical symptoms of GSDI which didn't be found mutations in the G6Pase gene, responsable by subtype Ia, these patients are thus, classifieds as type I non-a. DNA sequencing of the exons ofthe G6PTl in 14 patients mutations in the G6PTl gene were found in two patients. Six exons of AGL gene were studied, which are found the majority of describe mutation, and just be found polymorphism in all studieds individuals. The molecular protocol that was studied, showed suitable to mutation screemng, whowever to be were find only two individuals with subtype Ib / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador : Angelica Zaninelli Schreiber / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-01T06:41:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_Marianeda_M.pdf: 21025254 bytes, checksum: a7e5a59fd73d90c501333923e09dc71d (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Infecções oportunistas causadas por espécies de Candida tem aumentado susbstancialmente nos últimos 15 anos, tornando-se um problema cada vez maior em pacientes com câncer, especialmente entre receptores de transplante de medula óssea. Esse aumento tem sido largamente atribuído a neutropenia prolongada, ruptura da barreira mucosa por intensiva quimioterapia, uso de cateteres e antibiótico de amplo espectro, terapia com ciclosporina,DECH, hiperalimentação e estendidos períodos de hoapitalização. C albicans é isolada em cerca de 70 a 80% dos pacientes infectados, enquanto que, o isolamento e outras espécies de Candida era pouco frequente. Entretanto, dados mais recentes, relatam um aumento no isolamento de espécies não albicans, especialmente C glabrata, C tropicalis (5 a 8%), C parapsilosis e C krusei. Neste estudo foi possível observar alguma variações na incidência de C albicans, com acentuado decréscimo nos anos de 1999 e 2000, que coincide com um aumento no isolamento de C glabrata, assim como de C krusei, no último ano. A colonização do trato gastrintestinal e outras regiões corpóreas de modo geral precedem as infecções sistêmicas. Sendo a colonização em múltiplos locais, em contraste à colonização em um único local altamente preditiva para candidíase invasiva em pacientes neutropênicos. Avaliando a colonização por espécies de Candida em pacientes hematológicos, submetidos ou não a transplante de medula óssea, no período de 1996 a 2000, foi possível observar um predomínio de C albicans em SOF, SANAL, ESC e SNF. C glabrata e C krusei foram mais frequentemente isoladas de SANAL e SOF. Cepas de C parapsilosis predominaram em SOF, SNF, SANAL e CAT, enquanto que C tropicalis em SOF, SANAL e SNF. Teste de suscetibilidade a antifiíngicos foram realizados pelo método de microdiluição em caldo, de acordo com NCCLS M27-A (1997). De modo geral frente a fluconazo4 94% das cepas de C. krusei e 46,8% das de C. glabratta podem ser consideradas resistentes. Cem por cento das cepas de C. lusitaniae e 66,7% das de C. tropicalis são SDD. Frente a itraconazo4 72,3% das cepas de C. glabrata e 29,4% das de C. krusei podem ser consideradas resistentes. Cinquenta por cento das cepas de C. lusitaniae e 47% de C. krusei são SDD. Com relação a anfotericina B, 29,4% das cepas de C. krusei podem ser consideradas resistentes / Abstract: Opportunistic infections caused by Candida species have increased substantially over the past 10 to 15 years, becoming a major problem in patients with hematologic malignancies and bone marrow transplant recipients. In this work we performed a retrospective study at HC- UNICAMP in order to evaluate the frequency of Candida species as colonizing microorganisms and/or pathogens in the Hematology and Bone Marrow Transplant Units; selected microorganisms strains to submit to antifungal susceptibility tests with the drugs commonly prescribed in these units and evaluate the possibility of observe correlation between in vitro data and clinical outcome. Evaluating colonizing Candida species isolated from hematological patients, submitted or not to bone marrow transplant between 1996 and 2000, we observed predominance of Candida albicans in oral, nasal and rectal swabs, and sputum. C. glabrata and C. krusei were more frequently isolated from oral and nasal swabs and catheter. Antifungal susceptibility testing were performed by the NCCLS microdilution method, and was possible to observe that 94% of C. krusei and 46.8% of C. glabrata strains presented resistance to fluconazole. For itraconazole, 72.3% of C. glabrata and 24,9% of C. krusei strains were resistant, and the other strains were susceptible or susceptible-dosedependent. Evaluating amphotericin B, 29% of the C. krusei strains could be considered resistant and all the other strains were susceptible. In this study was possible to identify some coincidences between colonizing microorganism and infection causative agent. However, to certificate that the infection occurred by the same strain, it will be necessary a molecular evaluation. We also evaluated the MICs of both strains (colonizing and infection causative agent) and therapeutic records were reviewed, but it was impossible to verify e therapeutic performance / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores : Yoko Bomura Rosato , Spartaco Astolfi Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T22:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Stripecke_Renata_M.pdf: 3003802 bytes, checksum: 8c424cedc5aad86a1d83c9a594fd7733 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: A bactéria Xanthomonas campestris é um fitopatógeno que produz a goma xantana, de grande importância econômica, devido ao seu variado potencial de utilização na Indústria e na agricultura. Com o objetivo de se verificar a expressão de um gene de amilase exógeno em X.campestris, estabeleceu-se um sistema de clonagem para esta bactéria. Este sistema constituiu-se no plasmídio promíscuo pMFY40 ao qual se inseriu o gene da alfa-emllese de Bacillus subtilis, resultando no plesmídio pAP1. Este plesmídio possui aproximadamente 14.0 Kb, á mobilizável por plasmídios ¿helper¿ e razoavelmente estável, em condições de fermentação, em X. campestris. O pAP1 foi introduzido por transformação e por conjugação em duas linhagens de campestris, uma delas originalmente amilolítica (REF) e outra não-amilolítica (280), mas que é uma boa produtora de goma. Após se verificar a secreção da enzima em meio sólido pelos recombinantes, analisou-se o consumo de amido e a produção de açúcar redutor em meto líquido. Verificou-se que a linhagem 280/pAPl foi capaz de degradar o amido do meio e que a linhagem REF/pAPl teve seu caráter amiolítico amplificado. A produção de xantana em meios contendo diferentes com posições de substratos foi verificada através da viscosidade da goma, para se analisar as potencialidades da substituição do substrato tradicional, que é a sacarose, pelo amido. Foi observado um acréscimo de produção nas linhagens contendo o pAPl em meio com 2X de amido e em meto com 1X de amido e IX de sacarose. Apesar da substituição total da sacarose pelo amido ser Inviável para a fermentação pela linhagem 280/pAP1, verificou-se que a composição de IX de sacarose e de 1X de amido Já fornece bons resultados / Abstract: Xanthomonas campestris Is a phytopathogenlc bacteria. Which produces the xanthan-gum a biopolimer of economical Importance due to lts great poss1b111tles of ut111zat1on ln the Industry and In the agriculture. A cloning system for the analysis of expression of the extracellular amylase was established. The alfa-amylase gene from Bacillus subtilis was introduced in the promiscuous plasmid pMFY40, giving rise to the hybrid plasmid pAP1. This plasmid contains approximately 14.0 Kb, is mobilizable by helper plasmid and is reasonably stable, in fermenting conditions, in X.campetris. The plasmid pAP1 has been introduced by transformation and by conjugation into two strains of X. campestris one of them originally amylolytlc (REF), and the other not amylolytic (280) but a very good gum producer. Besides the observation of the enzyme production by the recombinants in solid media, the starch consumption and the reducing-sugar production in liquid media were also analysed. It was verified that the strain 280/pAP1 was able to degradate the starch of the media and that the strain REF/pAP1 had its amylolytic character amplified. The xanthan production in media containing different substrates compositions was analysed to evaluate the potentialities of the substitution of the traditional substrate, sucrose, by starch. The strains bearing the plasmid pAP1 showed viscosity enhancement of the media containing 2% starch and also 1% starch plus 1% sucrose. Although the total substitution of sucrose by starch was not successful for the fermentation of 280/pAP1, good results were observed in the media containing 1% starch plus 1% sucrose / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências

Orientador: Aldo Focesi Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T01:57:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sekino_Tomhiko_D.pdf: 3085443 bytes, checksum: 87b6f74de5af9f66fb79a337fbe20342 (MD5) Previous issue date: 1974 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed / Doutorado / Doutor em Ciências

Orientador : Adilson Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T19:43:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Freitas_FernandoAugustode_M.pdf: 5604182 bytes, checksum: 36139078eef73266670afa05af18a0a9 (MD5) Previous issue date: 1993 / Mestrado / Genetica de Plantas / Mestre em Ciências Biológicas

Submitted by Dominick Jesus (dominickdejesus@hotmail.com) on 2016-02-11T17:48:37Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Daniel Lúcio Rodrigues Dutra.pdf: 623819 bytes, checksum: e27c559cf8e657f3868f5417b83e9c4d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-11T17:48:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_Daniel Lúcio Rodrigues Dutra.pdf: 623819 bytes, checksum: e27c559cf8e657f3868f5417b83e9c4d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2006-07-11 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / The main objective of this work was to isolate the ORFs CV0867 (sodB2) e CV2504 (sodB1) of C. violaceum and induce their expression in Escherichia coli cells harboring sod genes, to evaluate the increase in SOD activity in the recombinant cells exposed to oxidative stress conditions. The sodB1 gene was isolated by PCR, using specific primers, and cloned into pGEM ® -T Easy vector. The amplification reaction could not be optimized for the second set of primers, specific for sodB2 gene. In an attempt to obtain a vector suitable for the regulated heterologous expression of SOD, some strategies were proposed for the construction of vectors with expression under the control of a sterically repressed promoter – srp. The sodB1 gene was then subcloned into vectors pCR4-SRP and pUC-SRP, derived from pCR ® 4-TOPO ® e pUC72, respectively, both developed during this project. However, the obtaining of recombinant clones was not possible. Despite the fact that SOD is not a toxic protein for the cell, we tested the hypothesis of the lethality of recombinant clones caused by the overexpression of SOD. Thus, amy and pfu genes were cloned into pUC-SRP, although the clones harboring the gene of interest could not be obtained. We concluded that the expression mechanisms of pUC-SRP and pCR4-SRP vectors may have caused deletery effects to the host cells, and that modifications in their structure should be made for the minimizing of heterologous expression levels, reducing the risk of toxicity for the clones. / O principal objetivo do trabalho foi isolar as regiões estruturais dos genes sod correspondentes às ORFs CV0867 (sodB2) e CV2504 (sodB1) de C. violaceum e expressá- las em células de Escherichia coli portando os genes sod, para avaliar o incremento da atividade de SOD nas células recombinantes submetidas a condições de estresse oxidativo. O gene sodB1 foi isolado via PCR, utilizando iniciadores específicos, e clonado em vetor pGEM ® -T Easy. Para sodB2, não conseguiu-se otimizar a reação de amplificação. Com o intuito de obter um vetor para expressão heteróloga regulada de SOD foram traçadas estratégias para a construção de vetores com expressão controlada por um promotor estericamente regulado - srp. O gene sodB1 foi então subclonado nos vetores pCR4-SRP e pUC-SRP, derivados de pCR ® 4-TOPO ® e pUC72, respectivamente, ambos desenvolvidos a partir deste trabalho. No entanto, não foi possível a obtenção de clones recombinantes. Apesar de SOD não ser uma proteína tóxica para a célula, testou-se a hipótese de que a superexpressão desta proteína seria a causa da letalidade dos clones recombinantes. Assim, foram clonados os genes amy e pfu em pUC-SRP. Porém, mais uma vez não foram obtidos clones portando os genes de interesse. Conclui-se então que os mecanismos de expressão do vetor pUC-SRP, bem como de pCR4-SRP, devem ter ocasionado efeitos deletérios às células hospedeiras, e que alterações na sua estrutura devem ser feitas no sentido de minimizar os níveis de expressão heteróloga, reduzindo assim o risco de produção de toxicidade para os clones.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2006 / Inclui bibliografia / A proteção da propriedade intelectual das invenções biotecnológicas, não obstante seja objeto de inúmeras divergências políticas, éticas, ideológicas, dentre outras, é uma realidade mundial em decorrência de acordos e tratados internacionais. Destarte, es