This thesis is focused on evaluation of the compatibility of entomopathogenic fungus Isaria fumosorosea with different species of entomopathogenic fungi and mycoparasitic fungi at different temperatures. The strains of species Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, Lecanicillium muscarium, Coniothyrium minitans and Clonostachys rosea f. catenulata were selected for experiments base on compatibility. The results showed that combination of I. fumosorosea with species L. muscarium is compatible. The species do not limit to each other in the environment at all temperatures (15, 23 and 25 °C). On the other side, fungus I. fumosorosea in combination with other species have affected their growth and spore production. The efficacy of entomopathogenic fungi against larvae Tenebrio molitor was evaluated. The most effective species against larvae were species I. fumosorosea, B. bassiana and M. anisopliae. On the contrary, the smallest effective was observed after infection larvae by L. muscarium. Mycoparasitic fungus C. rosea f. catenulata was not able to directly infect larvae of T. molitor. This species did not infect healthy larvae. However it is able to infect weakened individuals or is growing as saprotrophs on the cadavers.

Diploma Thesis concerns with usage of entomopathogenic fungi in system of biological control against greenhouse whitefly Trialeurodoes vaporariorum and sweetpotato whitefly Bemisia tabaci. The Aim of diploma thesis was through in vivo and in vitro experiments determinated the basic evolutional and vegetative characteristics of selected entomopathogenic fungi and compare their effectivity in completed system {\clqq}plant - pest - pathogenic``. All experiments and results are demonstrated in the tables and the graphs. The photo-documentation of the method used during founding and interpretation of experiments is the part of the thesis.

No sistema alternativo de produção, a utilização de agentes de controle biológico pode ocorrer conjuntamente com o uso de produtos naturais. Contudo, as informações a respeito do efeito de produtos naturais sobre agentes de controle biológico são escassas. Assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar a compatibilidade dos fungos entomopatogênicos Beauveria bassiana e Isaria sp. com produtos naturais utilizados no sistema alternativo de produção, bem como a seletividade destes ao parasitoide de ovos Trichogramma pretiosum Riley (Hymenoptera: Trichogrammatidae). Para isto foram utilizados os isolados B. bassiana e Isaria sp. e, os produtos naturais Topneem, Baicao, Orobor®, Compostonat e Rotenat, nas concentrações recomendada pelo fabricante (CR), na metade (½CR) e no dobro desta (2CR). Para a avaliação da compatibilidade entre os produtos naturais e os fungos entomopatogênicos foram analisados os parâmetros: germinação, unidades formadoras de colônia (UFC), crescimento vegetativo e número de conídios por colônia. A associação dos produtos naturais com os fungos (B. bassiana e Isaria sp.) foi avaliada quanto a patogenicidade sobre lagartas de 3º ínstar de Anagasta kuehniella Zeller (Lepidoptera: Pyralidae), na concentração de 1,0 X 108 con./mL. Foi avaliada diariamente a mortalidade de A. kuehniella, por um período de 10 dias. Para avaliar a seletividade dos produtos naturais a T. pretiosum estes foram pulverizados sobre ovos de A. kuehniella disponibilizados para o parasitismo por T. pretiosum. Para isto foram realizados dois testes: (a) com chance de escolha, avaliando-se a porcentagem de ovos parasitados por T. pretiosum quando este pode escolher entre ovos pulverizados com o produto ou pulverizados com a testemunha; e (b) sem chance de escolha, que consistiu em pulverizar os ovos de A. kuehniella com os produtos naturais previamente ou posteriormente ao parasitismo. Avaliou-se o número de ovos parasitados, porcentagem de emergência, longevidade e duração do período ovo-adulto. Verificou-se que para o fungo Isaria sp. a germinação foi afetada apenas pelo produto Compostonat. As UFCs não foram afetadas pelo produto Rotenat. Para a produção de conídios os produtos Topneem, Rotenat e Baicao reduziram este parâmetro. Já para o fungo B. bassiana a germinação de conídios foi reduzida apenas pelo Orobor®. Os produtos Orobor® e Baicao reduziram o diâmetro de colônia. Para a produção de conídios por colônia, todos os produtos reduziram este parâmetro. No entanto, os produtos não afetaram a patogenicidade dos fungos sobre A. kuehniella. Para a seletividade a T. pretiosum os produtos Baicao e Topneem afetaram negativamente o parasitismo para o teste com chance de escolha, como para o teste sem chance de escolha. Para a emergência apenas o produto Baicao afetou este parâmetro. Conclui-se que os produtos naturais testados, apesar de interferirem sobre alguns parâmetros biológicos dos fungos Isaria sp. e B. bassiana, se mostraram compatíveis em todas as concentrações. Os produtos naturais Orobor® e Topneem são seletivos ao parasitoide T. pretiosum. Já o produto natural Baicao foi classificado como levemente nocivo quanto à toxicidade a adultos do parasitoide. / In alternative system for production, the use of biological control agents may occur together with the use of natural products. However, information about the effect of natural products on biological control agents are scarce. The objective of this study was to evaluate the compatibility of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and Isaria sp. with natural products used in alternative system of production as well as the selectivity of the egg parasitoid Trichogramma pretiosum Riley (Hymenoptera: Trichogrammatidae). For this we used the strains B. bassiana and Isaria sp. and natural products Topneem, Baicao, Orobor®, Compostonat and Rotenat at concentrations recommended by the manufacturer (CR), half (½ CR) and double this one (2CR). To evaluate the compatibility between natural products and entomopathogenic fungi were analyzed parameters: germination, colony forming units (CFU), vegetative growth and number of conidia per colony. The association of natural products with fungi (B. bassiana and Isaria sp.) was evaluated for pathogenicity on the 3rd instar larvae of Anagasta kuehniella Zeller (Lepidoptera: Pyralidae) in a concentration of 1.0 X 108 con./mL. was evaluated daily mortality of A. kuehniella, for a period of 10 days. To evaluate the selectivity of natural products to T. pretiosum these were sprayed on eggs of A. kuehniella available for parasitism by T. pretiosum. For this two tests were performed: (a) free choice, by assessing the percentage of eggs parasitized by T. pretiosum when it can choose from eggs sprayed with the product or sprayed with the witness, and (b) no choice, which consisted of spraying the eggs of A. kuehniella with natural products previously or subsequently to parasitism. We evaluated the number of eggs parasitized, percentage of emergence, longevity and duration of the egg-adult. It was found that for the fungus Isaria sp. germination was affected only by the product Compostonat. The UFCs were not affected by the product Rotenat. For conidia production Topneem products, Rotenat and Baicao reduced this parameter. As for the fungus B. bassiana conidial germination was reduced by only Orobor®. Orobor® products and Baicao reduced the diameter of the colony. For conidia production per colony, all products have reduced this parameter. However, the products did not affect the pathogenicity of the fungus on A. kuehniella. Selectivity for the T. pretiosum products and Baicao Topneem negatively affected parasitism for the free-choice test, how to test no choice. For emergency only product Baicao affected this parameter. It is concluded that natural products tested, although on some biological parameters interfere fungi Isaria sp. and B. bassiana, proved compatible in all concentrations. Natural products Orobor® and Topneem are selective to the parasitoid T. pretiosum. Already Baicao the natural product was classified as slightly harmful for toxicity to the parasitoid adults.

The potential synergism between chosen species of entomopathogenic nematodes (Steinernema arenarium, Steinernema feltiae) and entomopathogenic fungi (Beauveria bassiana, Isaria fumosorosea, Lecanicillium lecanii) is investigated in this study. It is theoretically possible to expect increasing of their efficiency at the collective introduction into environment. Creating of uniform laboratory method which will be possible to use at the research of this interaction system is a part of this study.

Beauveria bassiana is used in biological control against the economically significant pests. Detection of morphological and genetic polymorphism between different species and strains isolated in the natural environment is important to study the distribution and effects in the ecosystem. The aim of this study was to determine in which links are "local tribes" with ecological aspects of biological control in protected zone and assess the polymorphism of the sections by using molecular markers. Were analyzed 36 strains collected in the National Park Šumava in the Czech Republic. Polymorphism of these strains was determined according to a sequence of LSU (28S Large Subunit Ribosomal DNA). It is observed that the populations from National Park is closed, "the local tribes" because these methods can be very well characterized and compared with other strains from different parts of the Czech Republic and other countries. Populations from National Park showed no differences in polymorphism. Through this analysis, the sample Bba I101 was aligned. This preparation is re-used for bark beetle occurring in the National Park Šumava in the Czech Republic. This study was supported by grants GACR 521/08/H042, MSM 60076658-06, MGA SP/2d1/41/08.

O Brasil é o maior produtor de cana-de-açúcar (Saccharum officinarum L.) do mundo e a cultura continua em expansão na safra 2014/15. A expansão das áreas de plantio de cana-de-açúcar e o sistema de colheita mecanizada de cana crua tem levado ao aumento proporcional de inúmeras pragas da cultura, destacando-se o bicudo da cana, Sphenophorus levis, considerado praga primária e limitante da cultura. Inicialmente, essa espécie foi considerada restrita a região de Piracicaba, mas desde 2010 foi encontrada nos estados de São Paulo, Minas Gerais, Paraná, Mato Grosso do Sul, Mato Grosso e Goiás. Suas larvas abrem galerias nos rizomas, causando danos diretos nos tecidos dos colmos, sobretudo nas épocas mais secas do ano, o que ocasiona a morte das touceiras, falhas na rebrota, além de promover danos indiretos, como o aumento do número de plantas invasoras que competem com a cultura. Os métodos químico, mecânico, cultural e biológico já foram testados até o momento, no entanto, o sucesso no seu controle ainda não foi obtido e a população dessa praga continua crescendo e se tornando mais constante nos canaviais pelo Brasil. Dessa forma, estudar estratégias para a melhoria do manejo de S. levis é fundamental para o estabelecimento de métodos de controle eficientes no contexto do MIP. Diante disso, objetivou-se com esse trabalho: 1) Determinar a distribuição espacial e a flutuação populacional de S. levis; 2) Testar o manejo da palha pós-colheita nas linhas de plantio na ocorrência de S. levis e; 3) Avaliar a eficácia da aplicação de Beauveria bassiana na população de S. levis. Em relação à flutuação populacional de S. levis foi observada uma elevação linear da última quinzena de outubro para a primeira de novembro, com queda subsequente e, aumento populacional maior à partir da última quinzena de dezembro. O pico populacional se deu no mês de março, seguido por uma rápida redução a partir de abril. A proporção de fêmeas foi similar a de machos em todos os tratamentos. Os dados sugerem que não houve efeito dos tratamentos na distribuição de adultos do bicudo. Os resultados da flutuação populacional, da distribuição de frequência e distribuição espacial se complementam, pois, em hipótese, a distribuição dos adultos está diretamente relacionada com a flutuação populacional, uma vez que em altas densidades a distribuição foi agregada. Além disso, as estratégias de afastamento da palha da linha de plantio não interferiram nos níveis de infestação de S. levis, quando comparado ao tratamento que não houve manejo da palha e, essa tática utilizada conjuntamente à aplicação de B. bassiana também não influenciou na densidade populacional de adultos de S. levis no período avaliado. Diante disso, concluiu-se que a distribuição de S. levis em cana-de-açúcar apresenta o padrão agregado em altas densidades populacionais; o manejo da palha entre as linhas de cana-de-açúcar não reduz a densidade populacional de S. levis em locais com elevado histórico de infestação e, são necessários mais estudos para ajustar a dose de B. bassiana adequada e eficaz no controle de S. levis. / Brazil is the world\'s largest sugarcane producer and the cultivated area continues to expand in 2014/2015 season. This expansion, along with the mechanical harvesting of green sugarcane leads to a proportional increase in the number of crop pests, especially the sugarcane weevil, Sphenophorus levis, considered a primary and limiting pest in this crop. Initially, this species was restricted to the Piracicaba region, however, since 2010 it has been found in several regions of São Paulo State, and also in other states in the country, such as Minas Gerais, Paraná, Mato Grosso do Sul, Mato Grosso and Goiás. The larvae penetrate the basal part of the plants and the rhizomes, building irregular galleries and causing damage to stem tissues, mainly in the driest season, leading to the death of clumps, failures in regrowth and, consequently, indirect damage due to the increase in the incidence of invasive plants that compete with the crop. Chemical, mechanical, cultural and biological methods have already been tested, however, the success in pest control has not yet been achieved and the population of S. levis continues to grow, becoming more constant in Brazilian sugarcane fields. Thus, the study of strategies to enhance the management of S. levis is essential to adopt effective control methods in the IPM framework. In this sense, this study aims to: 1) Determine the spatial distribution and population dynamics of S. levis; 2) Evaluate the postharvest management of straw on planting rows in occurrence of S. levis and; 3) Evaluate the efficacy of B. bassiana application in the S. levis population in sugarcane. Concerning population dynamics of S. levis, it was observed a linear increase beginning in the last quarter of October until November, with a subsequent decrease and, a highest population increase was observed in the last half of December. The population peak occurred in March, followed by a fast decline in early April. The proportion of females to males was similar in all treatments. The data suggest that there was no effect of treatments on the distribution of adult weevils. The results of population dynamics, frequency distribution and spatial distribution are complementary, because, hypothetically, the distribution of adults is directly related to population dynamics, since at high densities the distribution was aggregated. In addition, strategies for straw management in the planting row did not affect the infestation levels of S. levis and this procedure along with the addition of B. bassiana did not influence population density of adults during the study period. Hence, it is concluded that the distribution of S. levis in sugarcane exhibits an aggregated pattern at high population densities. Straw management between the cane rows does not reduce population density of S. levis in areas with high historical infestation. Therefore, further studies are needed to adjust the appropriate and effective concentration of B. bassiana in the control of S. levis.

Avaliou-se em laboratório a patogenicidade de 52 isolados de fungos entomopatogênicos a Brevipalpus phoenicis e a produção, em meio sólido, de quatro isolados de Hirsutella spp.. Utilizando-se microscópio eletrônico de varredura, estudou-se as etapas do ciclo biológico de Hirsutella sp. (isolado 1269) em adultos de B. phoenicis, além da ocorrência de transmissão horizontal deste patógeno para adultos do ácaro a partir de cadáveres esporulados e de substrato contaminado. Todos os isolados de Hirsutella sp. foram patogênicos para o ácaro causando mortalidade de adultos superiores a 90% após seis dias da inoculação. Comprovou-se também que em meio de cultura completo (M.C.) que o isolado 1269 foi o que apresentou maior crescimento vegetativo e esporulação, sendo selecionado como o mais promissor. O ciclo biológico completo de Hirsutella sp., desde a adesão dos conídios ao ácaro até sua extrusão, ocorreu em 120 horas após a aplicação. A transmissão horizontal do patógeno a partir de cadáveres e do substrato contaminado ocasionou mortalidade superior a 50% em ambas as situações, comprovando que o fungo foi capaz de infectar novos hospedeiros. Contatou-se que Hirsutella sp. é um patógeno eficiente no controle de B. phoenicis podendo ser utilizado em campo em estratégias de introdução inoculativa, inundativa, incremento e conservação. / In this research, the patogenicity of 52 isolates of entomopathogenic fungi against Brevipalpus phoenicis and the production of four isolates of Hirsutella spp. in solid medium (M.C.) were evalueted under laboratory condition. The stages of the biological cycle of Hirsutella sp. (isolated 1269) on adults of B. phoenicis were evalueted with the use of an electron scan microscope, besides the occurrence of horizontal transmission of this fungi from cadavers and from an inoculate substract to new hosts. The isolates of Hirsutella sp. tested were pathogenic to the mite, with high mortality (>90%) after six days of the inoculation. The isolate 1269 showed high levels of vegetative growth and sporulation and was selected as the most promising one. The complete biological cycle of Hirsutella sp. ocurred after 120 hours of the inoculation, from adhesion to extrusion processes. The horizontal transmission of fungi from cadavers and inoculate substract ocurred by causing levels mortality superior to 50% in both cases, showing that the fungi was capable to infect new hosts in these situations. Hirsutella sp. was an efficient pathogen in the control of B. phoenicis and could be exploited in field control strategies through an inoculative introduction, increment or conservation.

O controle de Hypothenemus hampei é realizado basicamente com uso de inseticidas químicos, especialmente aqueles a base de endossulfan, cuja comercialização será proibida no Brasil a partir de julho de 2013. Diante disso, outras estratégias devem ser integradas buscando-se o controle desta praga com menor impacto ao ambiente. Nesse contexto, o fungo Beauveria bassiana destacase como um dos agentes de controle biológicos mais promissores. Neste estudo, buscou-se a associação da técnica de impregnação de tecido têxtil com B. bassiana associado à armadilha contendo a mistura de alcoóis metanol: etanol (1:1 v/v) como atraentes químicos para H. hampei, visando a auto-inoculação e disseminação do fungo pelo inseto, visando o seu controle. Inicialmente foi determinado em laboratório, a virulência de nove isolados de B. bassiana, através da pulverização de suspensões de 107 conídios.mL-1, diretamente sobre adultos de H. hampei. Todos os isolados apresentaram baixa virulência ao inseto, com mortalidade máxima de 38,5%. O isolado ESALQ-PL63 foi escolhido para dar continuidade aos estudos por possuir registro de comercialização. Posteriormente, sete tecidos têxteis sintéticos foram avaliados quanto à produção do isolado selecionado sobre sua superfície em duas condições de luz (fotofase de 0 e 12 horas). O tecido sintético Lã \"Sherpa\" foi selecionado por permitir uma maior produção de conídios nas duas condições testadas, atingindo até 5,44 × 108 conídios.cm-2. A exposição de H. hampei ao tecido com o fungo por apenas 5 segundos foi suficiente para causar 88,5% de mortalidade dos insetos. Em área de café sombreado foram conduzidos dois experimentos para avaliar uma armadilha de auto-inoculação contendo o patógeno produzido sobre o tecido. Foram usadas duas armadilhas controle, sendo uma armadilha de autoinoculação sem fungo e uma armadilha de eficiência reconhecida (modelo IAPAR). A eficiência de coleta da armadilha de auto-inoculação com o fungo foi menor do que a armadilha IAPAR, mas esta se mostrou eficiente na contaminação e mortalidade dos insetos pelo fungo. No primeiro experimento, a mortalidade confirmada pelo patógeno no último dia de avaliação (151 dias) foi de 64,7%. A viabilidade dos conídios passou de 98,3%, logo após a montagem das armadilhas, para 86,9% após 65 dias. Após160 dias a viabilidade reduziu para 44,0%. No segundo experimento, a última avaliação foi realizada após 40 dias, sendo nesta data observada mortalidade confirmada de 89,9% e viabilidade dos conídios de 78,1%. Em ambos os experimentos a concentração de conídios reduziu-se ao longo do tempo. O sistema de auto-inoculação apresentou resultados promissores, mas sendo necessárias alterações na armadilha para aumentar a captura de insetos e estudos epizootiológicos para avaliar a capacidade de disseminação da doença no campo pelos insetos que passaram pela armadilha. / The control of Hypothenemus hampei is accomplished primarily with the use of chemical insecticides, mainly endossulfan, whose commercialization will be prohibited in Brazil in July 2013. Therefore, other strategies must be integrated seeking control of this pest with less impact on the environment. In this context, the fungus Beauveria bassiana stands out as one of the most promising biological control agents. In this study, we associated the technique of fabric impregnated with B. bassiana with a trap containing a mixture methanol: ethanol (1:1 v/v) as an attractive chemical for H. hampei, aiming the self-inoculation and fungus dissemination by the insect, therefore their control. Initially, we determined in the laboratory, the virulence of nine isolates of B. bassiana using a spray suspension of 107 conidia.mL-1 directly on adults of H. hampei. All isolates showed low virulence to insects, with maximum mortality of 38.5%. The isolate ESALQ-PL63 was chosen to continue the studies for having a market register. Subsequently, seven synthetic fabrics were evaluated for the production of the selected isolate on its surface under two light conditions (photofase of 0 and 12 hours). The synthetic fabric Lã \"Sherpa\" was selected because it allows greater conidia production under the two conditions tested, reaching 5.44 × 108 conidia.cm-2. Exposure of H. hampei to the fabric impregnated with the fungus for only 5 seconds was enough to cause 88.5% of insect mortality. In an area of shaded coffee, two experiments were conducted to evaluate a self-inoculation trap containing the pathogen. We used two control traps without fungus: one self-inoculation trap without the fungus and a widely recognized efficient trap (IAPAR model). The collection efficiency of the self-inoculation trap with the fungus was lower than that of the IAPAR trap, however, it proved effective in contamination and insect mortality caused by the fungus. In the first experiment, mortality caused by the pathogen at the last evaluation day (151 days) was 64.7%. The viability of the conidia surpassed 98.3% after the assembly of the traps and 86.9%, after 65 days. After 160 days, the viability decreased to 44.0%. In the second experiment, the last evaluation was performed after 40 days, when we observed mortality of 89.9% and conidia viability of 78.1%. In both experiments, the conidia concentration reduced over time. The self-inoculation system showed promising results, but changes are needed to increase insect catches and further epizootiological studies to assess the possibility of disease spread in the field by insects that crossed the trap.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES

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Metropolitan Goiânia had the highest incidence of this arbovirose in Central Brazil between 2010 and 2011. Improved integrated control strategies are necessary in order to face vector resistance to chemicals. The entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae is effective against A. aegypti eggs, larvae and adults under laboratory conditions. There is still little knowledge on specific formulation and application techniques to control this mosquito with this and other fungi. The present study reports on the impact of substrates, previously treated or not with vegetable oil, diatomaceous earth and/or M. anisopliae IP 46 conidia on oviposition and survival of A. aegypti under laboratory conditions. In addition, the study presents results on field tests carried out in the city of Goiânia with adapted ovitraps. Laboratory reared adult A. aegypti females and males were exposed in cages to oviposition devices equipped with water, mud or filter paper. Moistened or dry filter paper treated with additives (vegetable oil Graxol® or diatomaceous earth KeepDry®) and/or M. anisopliae s. l. IP 46 conidia were tested as mono or poly-optional assays. Mortality and quantitative oviposition were assessed up to 15 days of exposure and eclosion of larvae after submersion of eggs in water up to 10 days. Field tests were run with adapted ovitraps treated with conidia of IP 46 formulated with water or oil-water. Females never laid eggs on dry filter paper and few eggs on water. Quantitative oviposition decreased at higher oil concentrations and gravid females laid eggs on fungus-treated filter paper regardless of the conidial concentration (poly-optional tests). Adult mortality reached 42.1% at a 15 day incubation when testing filter paper treated with oil-in-water conidia and this formulation reduced larval eclosion (mono-opcional tests). Under field conditions, eggs were detected on filter paper treated or not with water or oil-in-water formulated conidia. Gravid females detected gradient of humidity and oil but they were not influenced by the presence of the conidia. Toxicity of vegetable oil and virulence of IP 46 increased with time of exposure. M. anisopliae applied in a simulated breeding device and formulated in oil showed to be promising against A. aegypti under laboratory and Aedes sp. under field conditions. / Aedes aegypti é o principal vetor do vírus da dengue nos trópicos. A cidade de Goiânia teve a maior incidência dessa arbovirose no Centro-Oeste do Brasil entre 2010 e 2011. Melhores estratégias de controle integrado são necessárias para enfrentar a propagação da resistência desse vetor a produtos químicos. O fungo entomopatogênico Metarhizium anisopliae é efetivo contra ovos, larvas e adultos de A. aegypti em condições de laboratório. Entretanto, há pouco conhecimento sobre formulações e técnicas de aplicação específicas para controlar esse mosquito com esse e outros fungos. O presente estudo reporta o impacto de substratos previamente tratados ou não com óleo vegetal, terra diatomácea e/ou conídios de M. anisopliae s. l. IP 46 sobre a oviposição e sobrevivência de A. aegypti em condições de laboratório e apresenta resultados sobre testes de campo realizados na cidade de Goiânia em 2010 e 2011 com ovitrampas adaptadas. A. aegypti adultos colocados em laboratório foram expostos em gaiolas e expostos a dispositivos para oviposição equipados com água, lama ou papel filtro. Papel filtro úmido ou seco tratado com aditivos (óleo vegetal Graxol® ou terra diatomácea KeepDry®) e/ou conídios de IP 46 foram testados em ensaios de escolha poli ou mono-opcional. A mortalidade e oviposição quantitativa foram avaliadas até 15 dias de exposição e eclosão de larvas após submersão de ovos em água, até 10 dias. Os testes de campo foram executados com ovitrampas tratadas com conídios formulados em água ou óleo-água. Fêmeas ovipuseram mais sobre lama e papel filtro úmido, pouco sobre água e não ovipuseram sobre papel filtro seco. A oviposição quantitativa decresceu em concentrações mais elevadas do óleo, e fêmeas grávidas ovipuserm sobre papéis filtro tratados independente da concentração de conídios (testes poli-opcionais). A mortalidade de adultos alcançou até 42,1% em 15 dias de incubação ao testar papel filtro tratado com IP 46 formulado em óleo-água, e esse formulado reduziu a eclosão larval (testes mono-opcionais). Em condições de campo, ovos foram encontrados sobre papel filtro tratado ou não com conídios formulados em água ou óleo-água. Fêmeas grávidas de A. aegypti detectaram um gradiente de umidade e de óleo, mas não foram influenciadas pela presença de conídios. A toxicidade do óleo vegetal e a virulência de IP 46 aumentaram com o tempo de exposição. M. anisopliae formulado em óleo e aplicado em criadouro simulado mostrou ser promissor contra A. aegypti em condições de laboratório e contra e Aedes sp. em condições de campo.