O método empregado na produção de fungos entomopatogênicos teve poucas alterações em mais de 40 anos de utilização no Brasil. A produção adotada nas biofábricas em larga escala é basicamente através da fermentação sólida em arroz com elevado uso de mão de obra e longo tempo de produção. Assim, o presente estudo consistiu em desenvolver estratégias que possam ser implementadas nas diferentes etapas do sistema de produção de Metarhizium anisopliae ESALQ1037, como adição ao arroz de materiais inertes (bagaço de cana-de-açúcar, maravalha, esponja vegetal e palha de arroz) e outros substratos (milheto, flocos de arroz e sagu) para separação dos grãos de arroz e aumento da aeração, uso de blastosporos como inóculo em sistemas bifásicos tendo como substrato sólido o arroz ou mistura de farelos (trigo, milho, aveia, arroz, soja e algodão) ou suportes de crescimento e esporulação (bagaço de cana-de-açúcar, vermiculita, tecido de lã, palha de arroz e maravalha). Foi testado o uso da esterilização por fervura em substituição à autoclavagem e recuperação de conídios por extração em água como substituto ao peneiramento, além de armazenamento em condições de alta e baixa temperatura e umidade: 97%UR e 22ºC; 97%UR e 4ºC; 0%UR e 22ºC; 0%UR e 4ºC. O meio líquido M11 (a base de 45g L-1 glicose e 36g L-1 extrato de levedura) foi o mais adequado para produção de blastosporos (3,0 x 108 blastosporos/mL) e biomassa. A inoculação de blastosporos em arroz resultou em produção maior e mais rápida de conídios (4,51 x 108 conídios/g) em 7 dias de crescimento fúngico. O farelo de trigo inoculado com blastosporos produzidos em meio M11 resultou em maior produção de conídios (1,2 x 109 conídios/g) quando comparado aos farelos e arroz inoculados com suspensão de conídios (máximo de 7,8 x 108 conídios/g). O bagaço de cana-de-açúcar autoclavado seco foi o suporte que resultou em maior produção do fungo quando associado ao meio líquido. A adição ao arroz de bagaço de cana-de-açúcar umedecido, maravalha e esponja vegetal não umedecidas promoveu incremento na produção de conídios (> 3,3 x 109 conídios/g) quando comparado ao arroz somente (1,00 x 109 conídios/g). A exposição do arroz à fervura por 10 e 15 minutos resultou em produção de conídios semelhante à produção em arroz autoclavado, sem a presença de contaminantes. Farelo de trigo foi o substrato mais promissor para produção do fungo especialmente quando misturado ao farelo de arroz (1,75 x 109 conídios/g) na fermentação sólida. Conídios extraídos do arroz por peneiramento ou lavagem em água e recuperados com ou sem a adição de argilas, terra de diatomácea e caulim apresentaram viabilidade superior a 92% após armazenamento por 60 dias a 22°C e 97% UR. A 22°C e 0% UR, somente os conídios extraídos do arroz por peneiramento e os extraídos em água e recuperados com a adição de argila preta e caulim apresentaram viabilidade superior a 92% após armazenamento por 60 dias. Estratégias testadas neste estudo para produção e extração de conídios de M. anisopliae são alternativas viáveis para serem incorporadas na produção em larga escala e reduzir o tempo de fermentação e mão de obra, aumentando a eficiência de conversão de substrato em conídios. / The method used in the production of entomopathogenic fungi had few changes in more than 40 years of use in Brasil. The production of large-scale biofactories is basically through solid fermentation in rice with high labor and long production time. Thus, the present study consisted in developing strategies that could be implemented in the different stages of the production system of Metarhizium anisopliae ESALQ1037, as addition to rice of inert materials (sugarcane bagasse, shavings, vegetable sponge, rice straw) and other substrates (millet, rice flakes and sago) for separation of rice grains and increased aeration, use of blastospores as inoculum in biphasic systems having as a solid substrate the rice or mixture of bran (wheat, corn, oats, rice, soybean and cotton) or growth and sporulation supports (sugarcane bagasse, vermiculite, wool, rice straw and shavings). The use of boiling sterilization to replace autoclaving and recovery of conidia by water extraction as a substitute for sieving was tested, as well as storage under high and low temperature and humidity conditions: 97% RH and 22 ºC; 97% RH and 4°C; 0% RH and 22°C; 0% RH and 4°C. The M11 liquid medium (the base of 45g L-1 glucose and 36g L-1 yeast extract) was the most suitable for the production of blastospores (3.0 x 108 blastospores / mL) and biomass. The inoculation of blastospores in rice resulted in larger and faster production of conidia (4.51 x 108 conidia / g) in 7 days of fungal growth. The wheat bran inoculated with blastospores produced in M11 medium resulted in higher conidia production (1.2 x 109 conidia / g) when compared to the bran and rice inoculated with conidial suspension (maximum of 7.8 x 108 conidia / g). The dried autoclaved sugarcane bagasse was the carrier that resulted in higher fungus production when associated with the liquid medium. The addition of moistened sugarcane bagasse and non-moistened shavings and vegetable sponges promoted increase in the production of conidia (> 3.3 x 109 conidia / g) when compared to rice only (1.0 x 109 conidia / g). Exposure of the boil rice for 10 and 15 minutes resulted in conidial production similar to the production in autoclaved rice without the presence of contaminants. Wheat bran was the most promising substrate for the fungus production especially when mixed with rice bran (1.75 x 109 conidia / g) in solid fermentation. Conidia extracted from rice by sieving or washing in water and recovered with or without the addition of clays, diatomaceous earth and kaolin showed viability higher than 92% after storage for 60 days at 22 °C and 97% RH. At 22 °C and 0% RH, only the conidia extracted from the rice by sieving and those extracted in water and recovered with the addition of black clays and kaolin had viability higher than 92% after storage for 60 days. Strategies tested in this study for the production and extraction of conidia of M. anisopliae are viable alternatives to be incorporated in the large scale production and to reduce the time of fermentation and manpower, to increasing the efficiency of conversion of substrate in conidia.

Avaliou-se o efeito de Hirsutella thompsonii ao ácaro da leprose dos citros (Brevipalpus phoenicis). Em laboratório, adultos foram mantidos em arenas sobre folhas de citros em placas contendo ágar-água solidificado. Foram avaliadas a patogenicidade e virulência do fungo ao ácaro, bem como sua persistência e compatibilidade com acaricidas. No campo, os ácaros foram confinados em arenas sobre frutos de laranja pré-infestados com adultos, sendo estes mantidos em plantas de citros. O isolado Esalq-1269 de H. thompsonii foi inoculado em populações do ácaro provenientes de diversas regiões do Estado de São Paulo. Para se verificar o efeito combinado da temperatura e umidade relativa do ar, o patógeno foi aplicado e os ácaros mantidos em condições controladas. A eficiência de Esalq-1269 foi comparada com isolados do banco de patógenos do Cenargen/Embrapa, os quais foram identificados. Além destes testes, determinou-se o efeito de Esalq-1269 em ovos de B. phoenicis. As avaliações da virulência e persistência foram realizadas a partir do patógeno produzido em meio de cultura completo e sólido (MC-S); meio completo e líquido (MC-L); arroz pré-cozido (APC) e arroz pré-cozido seco e moído (APC-SM). Nos bioensaios com os acaricidas, determinou-se a compatibilidade com agrotóxicos registrados para B. phoenicis phoenicis em citros. O efeito de sub-concentrações de H. thompsonii e de Propargite (Omite 720 SC) foram avaliadas, isoladamente e em mistura, para o ácaro. Em todos os bioensaios, as suspensões contendo propágulos do fungo foram preparadas em diferentes concentrações e após a pulverização avaliou-se a mortalidade durante quatro dias. No experimento de campo o patógeno foi aplicado em diferentes concentrações. O primeiro experimento constou da testemunha e H. thompsonii produzida em APC (6kg/ha). O segundo experimento constou: testemunha, H. thompsonii produzida em APC (20kg/ha e 10kg/ha) e H. thompsonii produzida em MC-L (5L/ha). As avaliações foram realizadas após 10 e 20 dias das aplicações, verificando a sobrevivência de adultos e o número de ovos e ninfas. Esalq-1269 foi patogênico a adultos de B. phoenicis provenientes de todas as regiões do Estado avaliadas, porém com diferenças quanto suscetibilidade. Todos os isolados testados foram patogênicos a B. phoenicis, sendo Esalq-1269 o mais virulento. Nos testes de temperatura x umidade, observou-se que Esalq-1269 apresentou alta atividade a 30°C, independentemente da umidade relativa. Porém, baixas temperaturas prejudicaram o desenvolvimento da doença. O patógeno não apresentou efeito em ovos do ácaro. Nos testes de virulência, a menor CL25 obtida foi para o fungo produzido em MC-S (1,9x105con/mL), já as CL25 para o patógeno produzido em APC e APCSM foram semelhantes. O fungo produzido em MC-L foi o que apresentou maior persistência em relação aos demais, sendo capaz de causar mortalidade devido ao efeito indireto. Quanto à toxicidade, a exceção de Dicofol e Cihexatina, todos os acaricidas foram compatíveis com o fungo. Observou-se efeito sinérgico entre a mistura patógeno x propargite, com alta mortalidade de B. phoenicis em sub-concentrações. Em campo, houve diferenças dos tratamentos com o fungo em relação à testemunha, havendo redução no número de adultos e de ovos. / This study aimed to evaluate the effect of Hirsutella thompsonii on the false spider mite (Brevipalpus phoenicis). In laboratory bioassays, adults were confined to arenas prepared with citrus leaves in acrylic dishes containing water-agar. The pathogenicity and virulence of the fungus against B. phoenicis adults, the persistence in citrus leaves and the compatibility with acaricides were studied. Adults were maintained in arenas prepared with fruits which were placed in plants in the field. The H. thompsonii isolate Esalq-1269 was inoculated on mite populations from different regions of São Paulo state. Also, the combined effect of temperature and humidity was measured on the fungus performance when mites were maintained in controlled conditions. The efficiency of Esalq-1269 was compared to isolates from Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Besides these bioassays, the effect of Esalq-1269 isolate in eggs of B. phoenicis was determined. The virulence and persistence tests were conducted using the fungi produced on complete solid culture medium (MC-S); complete liquid culture medium (MC-L); rice (APC) and rice powder (APC-SM). Compatibility of acaricides registered for B. phoenicis control with Esalq-1269 was evaluated and the combined effect of Propagite (Omite 720 SC) with sub-doses of H. thompsonii was determined. Mortality of mites was observed during four days after application of conidial suspensions. In field tests, the pathogen was applied in different concentrations. In the first assay, fungi were produced in APC (6kg/ha). In the second test, three treatments were applied: H. thompsonii cultured on rice (APC) at two concentrations (20Kg/ha and 10 Kg/ha) and H. thompsonii produced by liquid fermentation (MC-L) (5L/ha). Observations were performed after 10 and 20 days after application and adult survival, number of eggs and nymphs per fruit were observed. The isolate Esalq-1269 caused high mortality in all populations of B. phoenicis tested. Also, this strain was the most virulent against the mite and it was negatively affected by low temperatures. At 30°C, high mortality of adults was observed regardless of humidity levels. B. phoenicis was not pathogenic to eggs of B. phoencis . The lowest LC25 value calculated was from pathogen produced in MC-S (1,9x105 conidia/mL). The LC25 values calculated to APC and ACP-SM did not differ statistically. The pathogen produced by liquid fermentation was the most persistent in citrus leaves, causing higher levels of adult mortality. The acaricides Dicofol and Cyhexatin were toxic to Esalq-1269. Synergism between Propargite and H. thompsonii was observed resulting in high adult mortality under low concentrations. In field, results showed differences on concentration and time to death between treatments and control. Field applications resulted in reduction of adult and eggs.

O objetivo da pesquisa foi selecionar isolados de Metarhizium anisopliae patogênicos para cigarrinha-da-raiz, Mahanarva fimbriolata, e caracterizá-los morfológica e geneticamente, por meio de técnicas de análise de DNA (RAPD). A seleção foi feita em laboratório, utilizando ninfas coletadas a campo que foram pulverizadas com o fungo e mantidas nas raízes de mudas de cana-de-açúcar. A mortalidade corrigida, ao quinto dia após a inoculação, variou de 10,5 a 60%. Verificou-se que todos os isolados apresentaram coloração das colônias variando de verde acinzentado ao verde escuro, com crescimento de 28mm para o isolado IBCB-353 à 38mm para o isolado IBCB-348. O comprimento dos conídios não teve influência na patogenicidade e variou de 5,465µm para o isolado IBCB-345 a 7,970µm para o isolado ESALQ 1301 sendo que todos pertencem à subespécie anisopliae. Constatou-se a presença de RNA de fita dupla em onze dos vinte isolados, mas não houve relação entre a presença desta banda e sua patogenicidade para M. fimbriolata. Foi possível separar os isolados em dois grupos (A e B) com 72,5% de similaridade, sendo observada a composição de dois subgrupos (B1 e B2), com 77,5% de similaridade, dentro do grupo B. A alta similaridade entre os dois grupos e dentro de cada um deles, indicou que os isolados pertencem à mesma subespécie, reforçando o que foi concluído com a caracterização morfológica. O método utilizado confirma a grande diversidade genética da espécie M. anisopliae, porém, não reflete sua similaridade de patogenicidade a ninfas de M. fimbriolata, pois os dois isolados mais patogênicos (IBCB-384 e ICBC-348) foram dispostos em grupos diferentes. Não se observou um padrão específico de agrupamento entre isolados oriundos da mesma região ou hospedeiro, ou seja, a diversidade genética parece ser independente do local de origem do fungo, como seria esperado com um patógeno que, em geral, tem revelado alto grau de especialização ao hospedeiro. / This research was carried out to evaluate the pathogenicity of isolates of the entomopatogenic fungus Metarhizium anisopliae against the spittlebug, Mahanarva fimbriolata, and to characterize them morphologically and genetically through RAPD method. The selection was made under laboratory condition, using nymphs collected at field. The fungus was sprayed on the nymphs by a Potter tower (15 pounds/pol2) and then, they were maintained in roots of sugar-cane seedlings. The mortality was evaluated 5 days after the inoculation, ranging from 10.5 to 60%. The colonies’ color varied from grayish green to dark green and the colonies diameter ranged from 28mm (isolate IBCB-353) to 38mm (isolate IBCB-348). The conidia length ranged from 5.465µm for the isolate IBCB-345 to 7.970µm for the isolate ESALQ 1301. With those results it could be concluded that all the studied strains belong to the subspecies anisopliae. The size did not have influence in the pathogenicity of the isolate. It was evidenced presence of double-stranded RNA (virus) in eleven out of the twenty isolates tested, but it did not have relation between the presence of the virus and its pathogenicity for M. fimbriolata. It was possible to separate isolates in two groups (A and B) with 72.5% of similarity, being observed the composition of two sub-groups (B1 and B2), with 77.5% of similarity, inside of group B. The high similarity between the two groups and inside of each one indicated that the isolates belong to the same subspecies, confirming what it was concluded with the morphologic characterization. The used method confirms the great genetic diversity of species M. anisopliae, however, does not reflect its similarity of pathogenicity the nymphs of M. fimbriolata, therefore the two isolated most pathogenic (IBCB-384 and ICBC-348) were located in different fenetic groups. In the present study a specific standard of grouping between isolated deriving of the same region or host was not observed, or either, the genetic diversity seems to be independent on the fungus origin, as it would be expected from a pathogen that, in general, shows high degree of specialization to the host.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-28T13:09:10Z No. of bitstreams: 1 Marco Aurelio Paes de Oliveira.pdf: 649606 bytes, checksum: 1014053255cef5243152ce143dc1a9b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-28T13:09:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marco Aurelio Paes de Oliveira.pdf: 649606 bytes, checksum: 1014053255cef5243152ce143dc1a9b7 (MD5) Previous issue date: 2006-07-04 / The sugarcane borer Diatraea saccharalis F. is considered one of the main pests in America, being responsible for direct and indirect damages to this culture. The use of entomophatogenic fungi for the control of pests has been a lot intensified in the last decades, and the fungi Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. and Metarhizim anisopliae (Metch.) Sorok were the most used. The objective of this research was to analyze the effects of these fungi, in different concentrations, on biological parameters of D. saccharalis and to analyze morphologically and quantitatively the types of hemocytes of that insect, on larvae of the 3th instar, challenged immunologically by the studied fungi, in different concentrations. It was analyzed period and viability larval and pupal, fecundity, viability of eggs and longevity of males and females of D. saccharalis, being sprayed concentrations of 103, 104, 105 conidia mL-1 on larvae. In relation to B. bassiana, the results showed that there was no difference for the larval and pupal period and pupal viability. The larval viability was reduced in the concentration of 105 conidia mL-1(56.6%). the fecundity, the viability of eggs and the longevity of males and females were affected, mainly in the concentration 105 conidia mL-1, where they presented averages of 237 eggs, 48.60%, 2.17 and 2.50 days, respectively. For M. anisopliae differences were observed in relation larval viability (56.67%), pupal period (7.86 days)pupal viability (53.33%), viability of eggs (52.34%) and longevity of males and females (2.17 and 2.50 days), in the concentration 105 conidia mL-1. The results relating to the analysis of the hemocytes revealed that the most frequent cells were the spherulocytes, plasmatocytes and granulocytes, with rates of 34.75%, 29.66% and 22.16%, respectively, while the least frequent hemocytes were the prohemocytes (8.33%), adipohemocytes (2.58%) and oenocytoids (2.41%). After inoculation with the fungus B. bassiana it was verified that differences happened only to the granulocytes in the concentration of 107 conídios mL-1 (24 and 36h) and to the plasmatocytes in the concentrations 105 conidia mL-1 (60h) and 107 conidia mL-1 (24 and 36h), where there was an increase of the granulocytes and a decrease of the plamatocytes in the largest concentration, and an increase of the plasmatocytes in the concentration 105 conidia/mL-1. M. anisopliae didn't interfere in the granulocytes and plasmatocytes. Relating to the spherulocytes a larger tendency to reduction of those cells was verified at an interval of 36h for both fungi. However a signicant difference only happened in the concentration of 105 conidia/mL-1 at an interval of 60h resulting in the smallest average for that type of hemocyte when challenged by the M. anisopliae. The obtained results indicated that B. bassiana and M. anisopliae, even being used in low concentrations, they have potential to be used in programs of control, considering that the same ones affected negatively indispensable biological parameters to the cycle of D. saccharalis. / A broca da cana-de-açúcar Diatraea saccharalis F. é considerada uma das principais pragas nas Américas, sendo responsável por danos diretos e indiretos a esta cultura. A utilização de entomopatógenos para o controle de pragas tem se intensificado bastante nas últimas décadas, sendo os fungos Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. e Metarhizim anisopliae (Metch.) Sorok. os mais utilizados. Os objetivos deste trabalho foram avaliar os efeitos destes fungos, em diferentes concentrações, sobre parâmetros biológicos de D. saccharalis e analisar morfologica e quantitativamente os tipos de hemócitos desse inseto, em lagartas do terceiro ínstar, desafiados imunologicamente pelos fungos estudados, em concentrações diferentes. Foram avaliados período e viabilidade larval e pupal, fecundidade, viabilidade de ovos e longevidade de machos e fêmeas de D. saccharalis, pulverizando-se concentrações de 103, 104, 105 conídios mL-1 sobre lagartas do inseto. Com relação a B. bassiana, os resultados mostraram que para o período larval e pupal e viabilidade pupal não houve diferença. A viabilidade larval foi reduzida na concentração de 105 conídios mL-1 (56,67%). A fecundidade, a viabilidade de ovos e a longevidade de machos e fêmeas foram afetadas, principalmente na concentração 105 conídios mL-1, onde apresentaram médias de 237 ovos, 48,60 %, 2,17 e 2,50 dias, respectivamente. Para M. anisopliae foram observadas diferenças em relação viabilidade larval (56,67%), período pupal (7,86 dias), viabilidade pupal (53,33%), viabilidade de ovos (52,34%) e longevidade de machos e fêmeas (2,17 e 2,50 dias), na concentração 105 conídios mL-1. Os resultados referentes à análise dos hemócitos revelaram que as células mais freqüentes foram os esferulócitos, plasmócitos e granulócitos, com percentuais de 34,75%, 29,66% e 22,16%, respectivamente, enquanto que os hemócitos menos freqüentes foram os pró-hemócitos (8,33%), adipohemócitos (2,58%) e oenocitóides (2,41%). Após inoculação com o fungo B. bassiana verificou-se que diferenças só ocorreram para os granulócitos na concentração de 107 conídios mL-1 (24 e 36h) e para os plasmócitos nas concentrações 105 conídios mL-1 (60h) e 107 conídios mL-1 (24 e 36h), onde houve um aumento dos granulócitos e declínio dos plamócitos na maior concentração, e aumento dos plasmócitos na concentração 105 conídios/mL-1. M. anisopliae não interferiu nos granulócitos e plamócitos. No que se refere aos esferulócitos verificou-se uma maior tendência de redução dessas células no intervalo de 36h para ambos os fungos, porém diferença significativa só ocorreu na concentração de 105 conídios/mL-1 no intervalo de 60h resultando na menor média para esse tipo de hemócito quando desafiados pelo M. anisopliae. Os resultados obtidos indicaram que B. bassiana e M. anisopliae, mesmo sendo utilizados em baixas concentrações, têm potencial para serem utilizados em programas de controle, visto que, os mesmos afetaram negativamente parâmetros biológicos imprescindíveis ao ciclo de D. saccharalis.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-29T10:38:38Z No. of bitstreams: 2 Tese - Luciana Silva Lobo - 2015.pdf: 2839978 bytes, checksum: 0ef10b35664e1c515db65675ee0208fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-01-29T10:44:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Luciana Silva Lobo - 2015.pdf: 2839978 bytes, checksum: 0ef10b35664e1c515db65675ee0208fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-29T10:44:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Luciana Silva Lobo - 2015.pdf: 2839978 bytes, checksum: 0ef10b35664e1c515db65675ee0208fa (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-07-22 / Triatoma infestans is the main vector of Chagas disease in Argentina, Bolívia and Paraguai. Beauveria bassiana is effective against all developmental stages of T. infestans. The dynamics of the host infection with B. bassiana has not been well studied yet and more basic research is necessary to elucidate aspects of this interaction. The present study characterized volatile organic compounds (VOC) secreted by T. infestans physically disturbed and infected with B. bassiana employing gas cromatography coupled to mass spectrometry. The expression of genes potentially involved in the biosynthesis of this volatiles (Ti-brnq and Ti-bckdc) was analysed according to the progress of infection with quantitative reverse transcription real-time (qPCR) methodology. The time-related expression of B. bassiana genes envolved in the biosynthesis of fungal toxins (BbtenS, BbbeaS, BbbslS) in nymphs treated with conidia or blastospores was measured, as well as the gene expression levels of insect proteins belonging to the humoral immune response (TiPPO, TiHL, TiDEF) in the same nymphs. Moreover, the influence of conidia on nymphal behavior was analysed. No clear repellent effect of conidia was found. Isobutyric acid was the most abundant VOC found, however, significant effect of the fungal on propionic acid secretion was found 1–3 days after treatment (a.t.). Ti-brnq and Ti-bckdc expression was higher 4 d a.t. than at 10 d a.t. in both conidial concentrations tested, but a significant effect of the time was found only with the first gene. In individuals immersed in the higher conidial concentration the expression of BbtenS and BbbeaS peaked 3 and 12 days a.t. respectively, and 9 days a.t with individuals treated with the lower concentration. In blastospore-injected nymphs, these genes peaked 24 h a.t. and in dead insect exposed in humid chamber. A significant effect of time on the expression of TiPPO in nymphs immersed in both conidial concentrations was found. TiDEF and TiHL peaked 6 days a.t. to both conidial concentration tested. In insects injected with blastospores significant increase in the expression pattern of all genes was found at the lower dose tested. Results emphasized the importance to elucidate better the dynamics of infection of T. infestans with B. bassiana in order to develop biological control estrategies of these vectors with entomopathogenic fungi. / Triatoma infestans é o vetor principal da doença de Chagas na Argentina, Bolívia e Paraguai. Beauveria bassiana se destaca por ser eficiente contra todos os estágios de vida de T. infestans. A dinâmica da infecção desse fungo em seus hospedeiros ainda não foi muito estudada, e são necessários mais estudos básicos para a elucidação de aspectos dessa interação. O presente estudo caracterizou compostos voláteis orgânicos (CVO) liberados por T. infestans fisicamente perturbados e infectados por B. bassiana através de cromatografia gasosa acoplada à espectrofotometria de massa, e analisou o padrão de expressão de genes envolvidos na produção e liberação desses voláteis (Ti-brnq e Ti-bckdc) em função do progresso da infecção, através de PCR em tempo real. Foi estudado também o padrão de expressão de genes envolvidos na biossíntese de toxinas de B. bassiana (BbtenS, BbbeaS, BbbslS) durante o processo da infecção em ninfas tratadas com conídios ou blastosporos, e de genes envolvidos na resposta imune humoral (TiPPO, TiHL, TiDEF) nas mesmas ninfas. Além disso, foi analisada a influência de conídios de B. bassiana sobre o comportamento de T. infestans. Não foi encontrado efeito claro de repelência de ninfas a conídios. O CVO majoritário encontrado foi o ácido isobutírico, mas houve efeito da infecção somente sobre a produção do ácido propiônico 1–3 dias após o tratamento (a.t.). A expressão de Ti-brnq e Ti-bckdc foi significativamente maior aos 4 dias a.t. que aos 10 dias para as duas concentrações de conídios testadas, com efeito significativo somente para o primeiro gene. Em indivíduos imersos em conídios na maior concentração, a expressão de BbtenS e BbbeaS apresentou um pico 3 e 12 dias a.t., já na menor concentração, o pico de expressão ocorreu aos 9 dias a.t. Em insetos injetados com blastosporos, o pico da expressão desses genes ocorreu 24 h a.t. e em cadáveres expostos a câmara úmida. Para ninfas imersas em suspensão de conídios, foi encontrado efeito significativo do tempo sobre a expressão de TiPPO nas duas concentrações testadas. TiDEF e TiHL tiveram um pico de expressão aos 6 dias a.t. para as duas concentrações testadas. Em ninfas injetadas com blastosporos, a expressão dos três genes de imunidade variou significativamente de acordo com o tempo de infecção somente com a menor dose de blastosporos. Os resultados ressaltaram a importância de esclarecer melhor a dinâmica da infecção de T. infestans com B. bassiana para o desenvolvimento de estratégias de controle biológico desse vetor com fungos entomopatogênicos.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-25T12:47:20Z No. of bitstreams: 2 Tese - Cíntia das Chagas Bernardo - 2016.pdf: 2168975 bytes, checksum: f20144021bf112df62693342cfba7dae (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-25T12:47:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Cíntia das Chagas Bernardo - 2016.pdf: 2168975 bytes, checksum: f20144021bf112df62693342cfba7dae (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-25T12:47:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Cíntia das Chagas Bernardo - 2016.pdf: 2168975 bytes, checksum: f20144021bf112df62693342cfba7dae (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-07-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The current study compared the virulence of conidia and blastospores of Metarhizium anisopliae s.l. (IP 363), Metarhizium robertsii (IP 146) and Beauveria bassiana s.l. (IP 361 and GC 307) against Rhipicephalus microplus, and the tolerance to heat and UV-B radiation; in addition, it evaluated the development of conidia and blastospores of the isolates IP 146 and IP 361 on the tick cuticle by scanning electron microscopy (SEM). Larvae and engorged females of R. microplus were treated (larvae: 106, 107 or 108 propagules/mL, females: 107 propagules/mL) by immersion in conidia or blastospores suspensions of tested isolates. The higher percentage of larval mortality was obtained in the group treated with conidia of IP 361, which had lower LC50. In bioassays with engorged females, IP 146 and IP 361 blastospores, provided tick percent control superior to 90%, while conidia of the same isolates, promoted 70.97% and 63.29% of tick control, respectively. Ticks were treated topically with 50 μL of fungal suspension (107 propagules/mL) and incubated at different times from 0 to 96 hours to analyze its development on the engorged females cuticle; after each incubation time, the females were fixed and analyzed by SEM. Blastospores of both isolates have started development 4 hours after treatment, demonstrating rapid development and suggesting penetration by the tick natural openings; at 4 hours incubation, indicative of penetration of IP 361 blastospores through the cuticle was observed, but no signs of penetration was observed with IP 146 blastospores at any time evaluated. Furthermore, fungal suspensions (103 propagules/mL) were exposed to heat (45 °C) for several time periods, then inoculated in Petri plates with BDAY medium plus chloramphenicol (0.055% v/v), and incubated for 7 days at 27 °C and RH ≥ 80%. ARSEF 324 conidia (79.1%) were more tolerant to heat than conidia of IP 363 (55.5%), IP 146 (1.5%), GC 307 (0%), and IP 361 (0% ) at 2 hours exposure, as well as blastospores after 60 minutes exposure, demonstrating mean percent CFU of 100%, 12.3%, 30.7%, 55% and 0%, respectively. Fungal suspensions (103 propagules/mL) were also inoculated on BDAY in Petri plates, and exposed to UV-B radiation; after treatment, plates were incubated for 7 days at 27 °C and RH ≥ 80%. No difference in mean relative percent CFU between conidia and blastospores was observed. Suitable adjuvants which aim at protecting fungal propagules against stressful abiotic factors are required for conidia and blastospores; however, the selection of isolates with marked natural tolerance to heat and UV-B radiation may increase performance of bioproducts. Accordingly, it is suggested that blastospores are promising fungal propagules for biological control of ticks, since they were virulent against R. microplus; in addition, the rapid development of blastospores on the tick cuticle indicates they may be exposed shortly to harmful environmental abiotic factors. / O presente estudo comparou conídios e blastosporos de Metarhizium anisopliae s.l. (IP 363), Metarhizium robertsii (IP 146) e Beauveria bassiana s.l. (IP 361 e CG 307) quanto a virulência para Rhipicephalus microplus, e quanto a tolerância ao calor e a radiação UV-B; foi avaliado ainda o desenvolvimento de conídios e blastosporos dos isolados IP 146 e IP 361 na cutícula de carrapatos por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV). Larvas e fêmeas ingurgitadas de R. microplus foram tratadas (larvas: 106, 107 ou 108 propágulos/mL; fêmeas: 107 propágulos/mL) por imersão, com conídios e blastosporos dos isolados avaliados. Maior percentual de mortalidade foi obtido nos grupos de larvas tratadas com conídios de IP 361, o qual obteve menor CL50. No bioensaio com fêmeas, blastosporos de IP 146 e IP 361 proporcionaram percentual de controle superior a 90%, enquanto que conídios dos mesmos isolados promoveram mortalidade de 70,97% e 63,29%, respectivamente. Para análise do desenvolvimento dos propágulos na cutícula de fêmeas ingurgitadas, essas foram tratadas topicamente com 50 µL de suspensão fúngica (107 propágulos/mL), incubadas em diferentes tempos de 0 a 96 horas; após cada tempo de incubação as fêmeas foram processadas e analisadas por MEV. Blastosporos de ambos isolados iniciaram seu desenvolvimento já após 4 horas de tratamento, demonstrando rápido desenvolvimento e sugerindo penetração por aberturas naturais do carrapato; com 4 horas de incubação foi possível ver a penetração de blastosporos de IP 361 através da cutícula, situação não evidenciada pelo isolado IP 146 em nenhum tempo avaliado. Nos testes de tolerância ao calor, o isolado de Metarhizium acridum (ARSEF 324) foi inserido como isolado padrão, por ser conhecida a sua tolerância. Suspensões fúngicas (103 propágulos/mL) foram expostas ao calor (45°C) por diferentes tempos, em seguida inoculadas em placas de Petri com meio BDAY acrescido de cloranfenicol (0,055% v/v) e incubadas por 7 dias a 27°C, e UR ≥ 80%. Conídios de ARSEF 324 (79,1%) demonstraram ser mais tolerantes ao calor do que conídios de IP 363 (55,5%), IP 146 (1,5%), CG 307 (0%) e IP 361 (0%) no tempo de 2 horas de exposição, assim como blastosporos no tempo de 60 minutos, demonstrando percentual relativo médio de 100%, 12,3%, 30,7%, 55% e 0%, respectivamente. Nos testes de exposição à UV-B, suspensões fúngicas (103 propágulos/mL) foram inoculadas em placas de Petri contendo BDAY e expostas a diferentes doses de radiação; após tratamento, as placas foram incubadas por 7 dias a 27°C, e UR ≥ 80%. Não houve diferença do percentual relativo médio de conídios e blastosporos expostos a mesma dose de radiação. Adjuvantes adequados que visem proteger os propágulos fúngicos contra fatores abióticos estressantes são requeridos para formulações de conídios e blastosporos; no entanto, a seleção de isolados naturalmente mais tolerantes ao calor e a radiação UV-B podem favorecer o desenvolvimento de bioprodutos. Nesse sentido, acredita-se que blastosporos sejam promissores para o biocontrole de carrapatos, já que estes se demonstraram virulentos para R. microplus, além de apresentarem rápido desenvolvimento sobre a cutícula desse artrópode, o que pode indicar menor tempo de exposição desses propágulos a fatores abióticos limitantes no ambiente.

Made available in DSpace on 2016-02-26T14:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GiovanaDanielaBusarello.pdf: 463836 bytes, checksum: 2081f2ab59e2e39dffe6a3506eddb577 (MD5) Previous issue date: 2008-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This research evaluated, under laboratory conditions, the efficiency of different isolates of entomopathogenic fungus Beauveria bassiana to control leaf-cutting ant Atta sexdens rubropilosa. Soldiers and workers were inoculated with suspensions containing 1,0 x 107, 1,0 x 108, 1,0 x 109 e 1,0 x 1010 conidia/mL, maintained in B.O.D., at 25 ± 1°C, 70% RH and 12 hours of photophase, without food. The mortality was evaluated daily, until 15 days after inoculation. The experimental delineation used was entirely randomly. The sporulation data were submitted to the analysis of variance and the TL50 values (in days) were obtained through the Probit analysis. All isolates of B. bassiana were pathogenic to insect, being workers more susceptible than soldiers. The isolates IBCB 21 and IBCB 07 were the most virulent for workers and soldiers, respectively. The isolate IBCB 21 also caused high percentages of confirmed mortality, showing potential for use in the control of A. sexdens rubropilosa / Este trabalho avaliou a eficiência de diferentes isolados do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana no controle de formigas cortadeiras Atta sexdens rubropilosa, em condições de laboratório. Suspensões contendo 1,0 x 107, 1,0 x 108, 1,0 x 109 e 1,0 x 1010 conídios/mL foram inoculadas em soldados e operárias, mantidos em câmara B.O.D., a 25 ± 1°C, 70% UR e fotofase de 12 horas, sem alimentação. A mortalidade foi verificada diariamente, até 15 dias após a inoculação. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado. Os dados referentes à esporulação foram submetidos à análise de variância e os valores de TL50 (em dias) foram obtidos através da análise de Probit. Todos os isolados de B. bassiana foram patogênicos ao inseto, sendo as operárias mais suscetíveis que os soldados. Os isolados IBCB 21 e IBCB 07 foram os mais virulentos para operárias e soldados, respectivamente. O isolado IBCB 21 também causou altas porcentagens de mortalidade confirmada, apresentando potencial para utilização no controle de A. sexdens rrubropilosa

Formulações a base de dispersões oleosas de conídios aéreos de fungos entomopatogênicos apresentam diversas vantagens em comparação à aplicação de produtos não formulados; entretanto, a complexidade e a falta de compreensão dos fatores que influenciam a persistência desse tipo de formulação fazem com que ainda seja pouco utilizada. O efeito de diferentes níveis de secagem de conídios, tipo de óleo, métodos de extração, estabilidade de blastosporos, compatibilidade de surfactantes e adição de aditivos foram avaliados para o desenvolvimento de micopesticidas formulados em óleo. Os melhores resultados obtidos com os conídios em óleo foram avaliados quanto à proteção conferida à radiação UV e a eficiência das formulações na mortalidade de Tenebrio molitor. Zeolita foi a argila mais eficiente na manutenção da viabilidade de blastosporos de M. anisopliae e B. bassiana, e apesar de resultados promissores a estabilidade desses propágulos foi muito inferior a de conídios aéreos. Vinte surfactantes foram avaliados quanto a inocuidade aos conídios, em dois ensaios, culminando com a seleção dos quatro mais compatíveis, dois deles E5 e E7, avaliados nos experimentos posteriores demonstraram bom potencial para compor a formulação como agentes emulsionantes. Dois aditivos foram avaliados na formulação e respostas distintas foram observadas. O A1 foi altamente incompatível, enquanto diferentes concentrações de A2 (1, 3 e 5%) incrementaram a sobrevivência dos conídios em até sete vezes. As vantagens da presença do A2 ficaram evidentes também em combinações de óleo com os quatro emulsionantes selecionados. As dispersões oleosas proporcionaram sobrevivência até sete vezes superior para conídios expostos a radiação UV em relação a conídios não formulados e dois experimentos comprovaram que as formulações oleosas testadas foram mais eficientes no controle de insetos, com reduções de até 2,3 vezes no tempo de sobrevivência de insetos. Os 12 bioensaios com mais de 20.000 leituras de viabilidade descritos neste trabalho permitiram um melhor entendimento dos fatores críticos que afetam a vida de prateleira de conídios, e indicam procedimentos que podem ser utilizados para melhorar a estabilidade de micopesticidas formulados em óleo. / Oil-based formulations of aerial conidia of entomopatogenic fungi have several advantages compared to the use of unformulated products; however, the complexity and lack of understanding of the factors that influence the persistence of this type of formulation make it still not widely used. The effect of different levels of drying conidia, oil type, extraction methods, blastospores stability, compatibility of surfactants and addition of additives were evaluated for the development of a mycopesticide oil formulation. The best results obtained with aerial conidia were evaluated regarding the protection against UV radiation and the efficacy of the formulations to control Tenebrio molitor. Zeolita was the most compatible clay in maintaining the viability of blastospores of M. anisopliae and B. bassiana, and despite promising results in the stability, the shelf life of these propagules was much lower than aerial conidia. Twenty surfactants were evaluated for safety to conidia in two trials resulting in the selection of the four most compatible, two of them E5 and E8, were evaluated in subsequent experiments demonstrating good potential as emulsifiers in oil-based formulations. Two additives were evaluated in the formulation and distinct responses were observed. A1 was highly toxic to the fungi, while different concentrations of A2 increased the survival of the conidia up to seven times. The advantages of A2 were evident also in combinations of oil with the four selected emulsifiers. Oil-based formulation provided survival up to seven times higher for conidia exposed to simulated UV radiation compared to unformulated conidia, and two experiments showed that oil formulations were more efficient in the insect control, with reductions of up to 2.3 times on the survival time of insects. Twelve bioassays and over 20.000 viability readings described in this work, allowed a better understanding of the critical factors that affect the shelf-life of conidia, and indicate methods that can be used to improve the stability of mycopesticides in oil-based formulations.

A viticultura é uma atividade de grande importância econômica, destacando-se a sustentabilidade da pequena propriedade e o desenvolvimento territorial associados às atividades ligadas ao turismo. As plantas cultivadas se tornam vulneráveis a patógenos e insetos-praga e a videira apresenta diversas espécies consideradas pragas que reduzem sua produção e rentabilidade, entre estas, Spodoptera frugiperda, causando danos em diferentes partes da planta. Fungos entomopatogênicos podem oferecer uma alternativa aos pesticidas convencionais para o controle de pragas, pois produzem enzimas que degradam o exoesqueleto do inseto como quitinases e proteases facilitando o modo de infecção. Neste trabalho foi avaliado o potencial inseticida do fungo Nomurea rileyi, linhagem UCS03, contra S. frugiperda e o perfil eletroforético por SDS-PAGE das proteínas secretadas por N. rileyi em presença da cutícula do inseto em diferentes intervalos de tempo em gel unidimensional. O fungo N. rileyi apresentou virulência contra S. frugiperda, determinando um CL50 de 2 x 109conídios/mL com a linhagem UCS03 demonstrando atividade bionseticida. Na avaliação do perfil proteico do secretoma de N. rileyi em presença da cutícula do inseto, em diferentes tempos de cultivo, foi possível verificar um perfil altamente diferenciado. A maior concentração de proteína foi encontrada no 14° dia de incubação (0,3507 mg/mL) reduzindo a quantidade de proteínas após este período. Na análise por SDS-PAGE foi possível verificar diferentes proteínas de diferentes massas moleculares, nos intervalos de tempo considerados, sendo muitas inferiores a 75 kDa. Estas proteínas com diferentes massas moleculares podem estar envolvidas no metabolismo do fungo. Desta forma, estes resultados podem contribuir para a compreensão do processo de infecção de N. rileyi em S. frugiperda, oferecendo potencial para o desenvolvimento de novas pesquisas e aplicações destas em processos biotecnológicos. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2017-03-14T12:21:21Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Ana Carolina Ruiz.pdf: 656327 bytes, checksum: 52c5a7db081b0ec94339972595956f52 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T12:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Ana Carolina Ruiz.pdf: 656327 bytes, checksum: 52c5a7db081b0ec94339972595956f52 (MD5) Previous issue date: 2017-03-14 / Viticulture is an activity of great economic importance with emphasis on the sustainability of small property and territorial development associated with tourism related activities. Cultivated plants become vulnerable to pathogens and insect pests and the vine has several species considered as pests that reduce their production and profitability, among them, Spodoptera frugiperda, with causes damage in different parts of the plant. Entomopathogenic fungi can provide an alternative to conventional pesticides for controlling pests, they produce enzymes that degrade the insect exoskeleton, such aschitinases and proteases facilitating the infection. In this work, the insecticide potential of the fungus Nomurea rileyi and S. frugiperda was evaluated, as well as the proteins secreted by N. rileyi in the presence of insect cuticle at different time intervals in one-dimensional gel. The fungus N. rileyi presented virulence against S. frugiperda, determining a CL50 of 2 x 109 con / mL with UCS03 strain demonstrating bionseticida activity. In assessing the protein profile of secretome N. rileyi in the presence of insect cuticle, at different times of cultivation, a highly differentiated profile was verified. The highest concentration of protein was found at day 14 of incubation (0.3507 mg / ml) reducing the amount of protein after this period. In the one-dimensional gel analysis was verified different molecular weights of proteins, in the time interval considered being many less than 75kDa. These proteins with different molecular weights may be involved in fungal metabolism. Thus, these results can contribute to the understanding of the infection process of N. rileyi in S. frugiperda, offering potential for the development of new researches and applications in biotechnological processes.

Submitted by Deyse Queiroz (deysequeirozz@hotmail.com) on 2018-05-18T13:02:41Z No. of bitstreams: 1 FRANCISCA AMANDA ABREU MARTINS - DISSERTAÇÃO PPGHT 2016.pdf: 1114179 bytes, checksum: 1804a3728b4b1b900e48cfd4d2008a1d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-18T13:02:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FRANCISCA AMANDA ABREU MARTINS - DISSERTAÇÃO PPGHT 2016.pdf: 1114179 bytes, checksum: 1804a3728b4b1b900e48cfd4d2008a1d (MD5) Previous issue date: 2016-08-29 / O ácaro rajado, Tetranychus urticae Koch, é considerado uma das principais pragas de frutíferas no Brasil, dentre elas, a cultura do Carica papaya tem sido intensamente danificada por esse artrópode. Na produção de mamão são inúmeros os desafios para o controle desta praga. Este trabalho foi elaborado visando contribuir para o fomento de programas de manejo de T. urticae na cultura do mamão, com seguintes objetivos: a) prospectar isolamentos de insetos moribundos linhagens fúngicas de Beauveria bassiana, visando seu uso no controle do T. urticae; b) avaliar a eficiência na mortalidade do T. urticae nos estágios de ovo, larva e protoninfa, in vitro,quando contaminados com fenpropatrina (0,5 g/L), abamectina (0,6 g/L), Milbemectina (0,3 g/L), calda Sulfocálcica (7,0 g/L), três isolados de B. bassiana e a testemunha água destilada. Na 1ª etapa do trabalho obteve-se 10 linhagens de B. bassiana, reisolados de insetos moribundos encontrados no alto sertão Paraibano, que estão mantidos em meios de cultura na UFCG. Destes, três (P21CZ, P22CZ e P29CZ), analisando-se os resultados obtidos in vitro, pode-se imputar como os que apresentaram maior potencial de germinação para utilização de bioenaios in vitro, tendo em vista o controle de T. urticae, e foram enviados ao Laboratório de Seletividade de Produtos Químicos, UFERSA. Na 2ª etapa do trabalho, para se iniciar os bioensaios foram transferidas fêmeas fertilizadas de T. urticae para discos de folhas de Canavallia ensiformis. Quando os ácaros atingiram, em cada bioensaio, o estágio desejado, de ovo, larva ou protoninfa, iniciava-se o bioensaio. Cada disco foi pulverizado contaminado com os tratamentos por meio de pulverizador pressurizado manualmente, em seguida deixados por um período de 1 hora para a secagem, eliminando o excesso dos resíduos. Logo após a secagem foram transferidos para câmaras climatizadas tipo BOD, onde permaneceram em condições controladas à temperatura de 25 ± 1 ºC, fotofase de 12 horas e umidade relativa de 60 ± 10%, para obtenção dos dados biológicos. Os parâmetros biológicos avaliados foram: duração e mortalidade de ovos, larvas, protoninfas e deutoninfas. Os resultados dos três bioensaios foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Apesar da fase contaminada nos três bioensaios não ter sido afetada, houve mortalidade acumulada nas fases subsequentes. O inseticida fenpropatrina ocasionou 100% de mortalidade nos bioensaios com o estágio de ovo e larva. Os acaricidas químicos fenpropatrina, milbemectina e abamectina foram mais eficientes nos três bioensaios, com valores médios de taxa de mortalidade semelhantes. Para as larvas diretamente tratada o abamectina, ocasionou maior tempo de duração contato das larvas. O isolado B. bassiana P22CZ, na concentração (2,5 x 106 ), apresentou maior taxa de mortalidade 63,8%. Observou-se, uma relação positiva entre o aumento do tempo da exposição dos ácaros às concentrações do isolado P29CZ e a maior concentração aplicada. As porcentagens de mortalidade acumulada pela calda sulfocálcica nos três bioensaios, ovo, larva e protoninfa foram baixas, com valores respectivos de 8,8%, 7,5% e 25%. / The spider mite, Tetranychus urticae Koch, is considered one of the main pests of fruit in Brazil, among them, the Carica papaya culture has been heavily damaged by this arthropod. In papaya production are numerous challenges to the control of this pest. This work was prepared to contribute to the development of T. urticae management programs in papaya crop, with the following objectives: a) insulations prospect of dying insects fungal strains of Beauveria bassiana, aiming its use in the control of T. urticae; b) evaluate the efficiency in mortality of T. urticae in the egg, larva and protonymph in vitro when contaminated with fenpropathrin (0.5 g / L), abamectin (0.6 g / L), Milbemectin (0, 3 g / L), lime sulfur (7.0 g / L), three isolates of B. bassiana and distilled water control. In the 1st stage of the work was obtained 10 strains of B. bassiana, reisolated of dying insects found in high backlands of Paraiba, which are kept in culture media in UFCG. Of these, three (P21CZ, P22CZ and P29CZ), analyzing the results obtained in vitro, can be attributed to those with the highest germination potential for use in vitro bioenaios, in view of the control of T. urticae, and They were sent to the Selectivity of Laboratory Chemicals, UFERSA. In the 2nd stage of the work, to start bioassays fertilized females of T. urticae for sheet Canavallia ensiformis discs were transferred. When the mites reached in each bioassay, the desired stage, egg, larva or protonymph prefaced the bioassay. Each disc was sprayed with the treatments contaminated by manually pressurized spray then left for a period of 1 hour for drying, removing excess waste. Soon after drying were transferred to air-conditioned BOD chambers, where they were kept under controlled temperature conditions of 25 ± 1 ° C, photoperiod 12 hours and relative humidity of 60 ± 10%, to obtain biological data. The parameters evaluated were: duration and mortality of eggs, larvae, and protonymphs deutonymphs. The results of the three bioassays were subjected to analysis of variance and the means compared by Tukey test at 5% probability. Although the contaminated phase in the three bioassays have not been affected, there was cumulative mortality in the subsequent phases. The fenpropathrin insecticide caused 100% mortality in bioassays with egg and larva stage. The fenpropathrin chemical acaricides, milbemectin and abamectin were more efficient in all three bioassays with average values similar mortality. For directly treated larvae the abamectin, caused longer-term contact of the larvae. The isolated B. bassiana P22CZ, the concentration (2.5 x 106), had the highest mortality rate 63.8%. We observed a positive relation between increased exposure time of the mites to concentrations of isolated P29CZ and the highest concentration applied. The percentage of cumulative mortality by lime sulfur in the three bioassays, egg, larva and protonymph were low, with values of 8.8%, 7.5% and 25%.