Hidrolisados de carne bovina são preparados visando a obtenção de pequenos peptídeos ou aminoácidos livres para incorporação em dietas para pessoas em condições fisiológicas especiais. O objetivo do presente é a otimização do processo biotecnológico de hidrólise da proteína da carne bovina pela bromelina. A otimização é feita em base de tratamentos estatísticos dos resultados experimentais para se desenvolver os modelos. A finalidade é elaborar um produto conservado para utilização em dietas. Existe efeito de interação entre o valor de pH e a temperatura nas atividades sobre a caseína da bromelina isolada e naquela presente no suco de abacaxi Ananas comosus L.. A enzima presente no suco \"in natura\" apresenta atividade sobre a caseína superior a bromelina isolada e purificada. Os efeitos do tipo de enzima e da temperatura simultaneamente não afetam a solubilidade alcançada pelas proteínas da carne bovina hidrolisadas com bromelina. Hidrolisados de carne bovina inoculados com esporos de Bacillus stearothermophilus FS 1518 a valor de pH 4,5 não apresentaram sobreviventes mesmo aos 30 segundos de tratamento térmico. Os valores do tempo de redução decimal (D) de esporos de Bacillus stearothermophilus foram de 0,57 min (pH 5,6) e de 0,96 min (pH 6,6); os valores da resistência do microrganismo a diferentes temperaturas (Z) foram de 6,3 °C (pH 5,6) e de 5,9 °C (pH 6,6). O modelo matemático para a atividade enzimática de bromelina de suco de abacaxi é: ^y = 171,63 +13,13 x1 + 18,25 x2 + 18,35 x1.x2 - 25,59x12 - 53,45 x22 A superfície de resposta é do tipo paraboloide elíptica. O valor de pH interfere mais sobre a atividade que a temperatura e o ponto estacionário de máximo indicado pelo modelo é 66,8° e valor de pH 6,4. O modelo matemático para a concentração de sólidos solúveis de carne é: ^ y = 7,13 - 1,02 x1 + 0,81 x2 + 0,45 x1.x2 - 0,42 x12 - 1,52 x22 A superfície de resposta é do tipo paraboloide elíptica. O ponto estacionário de máximo para concentração de sólidos solúveis, indicado pelo modelo é 89,5° e valor de pH 7,1. As condições ótimas indicadas pelo modelo para a atividade enzimática de bromelina de suco de abacaxi atendem a condições satisfatórias de teores de sólidos solúveis. As condições ótimas do processo biotecnológico de hidrólise da carne bovina indicadas pelo acoplamento dos modelos é : temperatura = 66,8 °C, valor de pH = 6,4, atividade enzimática = 175,94 ug/ml.min e concentração de sólidos solúveis = 7,6 g/100g. / The protein hydrolyzates production has the aim of preparation of small peptides or amino acids for its use in dietetic foods or with special purposes. The objectives of the research consist in establishing the optimization of the hydrolytic process of bovine meat by bromelain (statistics and mathematical models). The purpose of the study is the development of a preserved product to be used in diets. There is an interaction effect of pH and temperature on enzymic activity over casein by bromelain isolated or from ananas Ananas comosus juice. The bromelain from ananas juice has more activity then the isolated one. The effects of enzyme and temperature together do not affect the solubility of hydrolysed meat proteins. Meat hydrolysates, pH 4,5, inoculated with spores of Bacillus stearothermophilus FS 1518 did not show survivers after 30 sec of treatment. The values of thermal death time (D) were 0,57 min (pH 5,6) and 0,96 min (pH 6,6) and, the Z value 6,3 (pH 5,6) and 5,9 (pH 6,6). The mathematical model for the enzymic activity of bromelain from ananas juice is: ^ = 171,63 +13,13 x1 + 18,25 x2 + 18,35 x1.x2 - 25,59x12 - 53,45 x22 The surface response is paraboloid elipcal. The stationary maximum point indicated by the model is 66,8 °C and pH 6 ,4. The mathematical model for the soluble solids of meat proteins is: ^y = 7,13 - 1,02 x1 + 0,81 x2 + 0,45 x1.x2 - 0,42 x12 - 1,52 x22 The surface response is paraboloid elipcal. The stationary maximum point indicated by the model is 89,5 °C and pH 7,1. The optimum conditions indicated by the enzymic activity model satisfies the soluble solids contents of meat proteins. The optimum conditions of the biotechnological process of hydrolysis of bovine meat are: temperature = 66,8 °C, pH = 6,4, enzymic activity = 175,94 ug/ml.min and soluble solids contents = 7,6 g/100g.

A produção de hidrolisados protéicos visam três propósitos distintos: modificar as propriedades funcionais das proteínas; preparação de pequenos peptídeos ou aminoácidos para uso em dietéticos ou com finalidades especiais e, ainda, como agentes flavorizantes. Os objetivos da pesquisa consistiram em estabelecer as condições de processamento para obtenção de hidrolisados protéicos de carne bovina: estudo da ação enzimática da papaína, da tripsina e da protease microbiana, isoladas e em mistura; determinação do material solubilizado; do grau de hidrólise nas condições pré-estabelecidas e, de algumas propriedades funcionais como viscosidade e capacidade de emulsificação e, ainda, identificação e caracterização das substâncias resultantes da hidrólise. A finalidade do estudo é a elaboração de um preparado formulado para utilização em alimentação enteral. A porção da carne conhecida no mercado pelo nome de \"patinho\" foi submetida a tratamento prévio para retirada de gordura visível e aponevroses e, moída. Utilizou-se a papaína, a tripsina e a protease microbiana, isoladas e em mistura (papaína : tripsina : protease microbiana, 2: 1: 2), previamente submetidas a determinação de atividade. Preparou-se uma suspensão a 10% de proteína e a valor de pH = 7,0, aqueceu-se a 50-60 °C e após a estabilização da temperatura, acrescentou-se as enzimas na proporção 1:100 de proteína. O tratamento com a mistura de enzimas promove enriquecimento do solúvel em aminoácidos essenciais. Com a papaína ocorre o inverso. O teor de aminoácidos livres existentes na carne é baixo. Em apenas 30 minutos de tratamento enzimático na média a concentração eleva-se em 5,7 vezes. Durante a hidrólise ocorre um aumento na concentração de aminoácidos livres. O aminoácido liberado em maior teor em todos tratamentos foi a arginina. O triptofano foi detectado entre os livres e os teores de fenilalanina sempre estiveram abaixo do valor proposto pela FAO. As análises eletroforéticas revelaram a progressão da hidrólise mostrando as diferentes manchas de pesos moleculares cada vez menores. O hidrolisado é um produto de alto teor de oligopeptídeos solúveis e de aminoácidos livres, isento de contaminação microbiana. Durante o transcorrer do processo hidrolítico há uma variação constante nas características do solúvel e na sua composição aminoacídica. Procedeu-se à hidrólise sob agitação durante 3 horas. Após inativação térmica e filtração determinou-se a concentração de sólidos solúveis; a avaliação do peso molecular dos peptídeos solúveis; o fracionamento por cromatografia em camada delgada e, a análise quantitativa dos aminoácidos. Ainda foram feitas medidas de viscosidade e caracterização do fluido. O produto hidrolisado seco, acondicionado em sacos plásticos, foi analisado com relação a composição química, capacidade de emulsificação de sua proteína e perfil de aminoácidos. A eficiência do ataque das enzimas sobre as proteínas da carne bovina deu-se na seguinte ordem: mistura de enzimas, seguida da papaína e da tripsina e finalmente da protease microbiana segundo os parâmetros solubilidade e grau de hidrólise. Passados 120 minutos de hidrólise nas condições de trabalho os valores de graus Brix, sólidos solúveis e grau de hidrólise mantiveram-se inalterados. Na faixa de velocidades angulares ensaiadas o hidrolisado protéico comportou-se como um fluido não-Newtoniano, pseudoplástico. A viscosidade do hidrolisado é de 1,7 a 36,0 poise a 30 °C e 2,4 a 52,7 poise a 60 °C. Os valores máximos para a viscosidade são alcançados aos 90 minutos de hidrólise. Conforme cresce a concentração de proteína solúvel, aumenta a capacidade de emulsificação de óleo de soja em agua, acarretando uma diminuição do diâmetro dos glóbulos de gordura. / The protein hydrolyzates production has three different aims: to modify the funcional properties of the proteins; the preparation of small peptides or amino acids for its use in dietetic foods or with special purposes and, also as flavoring agents. The objectives of the research consist in establishing the processing conditions in order to obtain the meat protein hydrolyzates: the study of the enzymatic action of papain, trypsin and of microbial protease, separated or in a blend; determination of the solubilized material; the degree of hydrolysis in previously established conditions, and of some functional properties such as viscosity and emulsifying capacity and, finally the identification and characterization of the resulting substances from the hydrolysis. The purpose of the study is the development of a product to be used in enteral nutrition. The cut of meat locally called patinho\" was subject to previous handling in order to eliminate visible fat and aponeurosis, and ground. The papain, the trypsin and the microbial protease were used, separated or in a blend, previously subject to the determination of its activity. A 10 % protein solution was prepared with pH = 7.0, then heated at 50 - 60 °C and when the temperature was leveled, the enzymes were added to a proportion of 1:100 of protein. Then we proceeded to the hydrolysis under agitation for 3 hours. After thermic inactivation and filtration, the soluble solids concentration was determined, the molecular weight of the soluble peptides was estimated, then fractioning through thin layer chromatography and the amino acids quantity analysis. Viscosity measurement and fluid characterization were also established. The dry hydrolyzate product was stored in plastic bags and was analyzed according to chemical composition and emulsifying capacity of its protein. The effect of the enzyme action on the bovine meat protein was observed in sequence: blending of enzymes, followed by papain and trypsin and finally of the microbial protease according to solubility and degree of hydrolysis. After 120 minutes of hydrolysis under experimental conditions, the Brix degrees, soluble solids and degree of hydrolysis remained unchanged. In the angular velocity range tested the protein hydrolyzate presented a non-Newtonian, pseudoplastic behavior. The viscosity of the hydrolyzate is 1,7 - 36,0 poise at 30 °C and 2,4 - 52,7 poise at 60 °C. The maximum values of viscosity were reached at 90 minutes of hydrolysis. The increase of soluble protein concentration, increases the emulsifying capacity of soybean oil in water, bringing an a lowering of fat globules diameter. The treatment with the enzyme blend promotes an enrichment of the soluble in essential amino acids. The opposite occurs with papain. The ammount of free amino acids exhisting in meat is Low. After only 30 minutes of enzymatic treatment the ammount increases 5.7 times on average. During the hydrolysis the concentration of free amino acids grows. The most commonly found amino acids in all treatments was arginine. The tryptophan was found among the free and the phenylalanin ammounts were always bellow the FAOs proposed parameters. The electrophoretic analysis revealed the progress of hydrolysis, showing the different bands of molecular weights smaller every time. The hydrolyzate is a product of high soluble oligopeptides and free amino acids, free of microbiological contamination. During the hydrolytic process, there is a constant variation in characteristics of the soluble and its amino acidic composition.

As serina/treonina fosfatases (PPs) são enzimas responsáveis pela desfosforilação de resíduos de fosfoserina e/ou fosfotreonina e estão subdivididas em duas famílias gênicas designadas PPP e PPM. A família PPP está dividida em cinco subfamílias, que compreendem as PPs do tipo 1 (PP1), 2A (PP2A), 2B (PP2B), 5 (PP5) e 7 (PP7), de acordo com a similaridade entre as sequências de aminoácidos das subunidades ou domínios destas enzimas. Novas PPs estão sendo descobertas em diferentes organismos e classificadas nestas famílias ou subfamílias com base na análise comparada de suas sequências. Uma delas é a proteína fosfatase do tipo 4 (PP4), descoberta originalmente em coelhos e cujas funções biológicas vêm sendo progressivamente elucidadas. Neste estudo tivemos como objetivos a identificação e caracterização de uma nova serina/treonina fosfatase de Dictyostelium discoideum. Para isto, rastreamos uma biblioteca de cDNA e um cDNA completo que codifica a subunidade catalítica da fosfatase do tipo 4 (PP4c) foi isolado e seqüenciado. Verificamos que o gene da PP4c é essencial e está presente em cópia única localizada no cromossomo 2, originando um mRNA expresso ao longo de todo o ciclo de vida de D. discoideum. Imunodetecção da PP4c realizada com anticorpo específico indicou que os níveis desta proteína também são constitutivos. Observamos que a superexpressão da PP4c sob o controle de um promotor constitutivo não causa alterações fenotípicas detectáveis. A análise da localização celular da PP4c expressa em células de D. discoideum como proteína de fusão com GFP (Green Fluorescent Protein) revelou que a enzima está localizada no citossol, contrastando com outros organismos, onde ela se encontra enriquecida no centrossomo. Por fim, descrevemos neste trabalho, além da organização genômica da PP4, a estrutura dos genes de todas as serina/treonina fosfatases da família PPP encontradas no cromossomo 2 e apresentamos dados das relações entre estas enzimas de D. discoideum. / The serine/threonine protein phosphatases (PPs) are enzymes responsible for dephosphorylation of phosphoserine and/or phosphothreonine residues and are divided in two gene families designated as PPP and PPM. The PPP family is divided in five subfamilies, which comprise type 1 (PP1), 2A (PP2A), 2B (PP2B), 5 (PP5) and 7 (PP7) phosphatases. This subdivision is based on aminoacid sequence similarity or enzyme domains. Novel PPs have been discovered in different organisms and classified in these families or subfamilies based on comparative sequence analysis. One of these is type 4 protein phosphatase (PP4), originally discovered in rabbit, which functions have been progressively uncovered. In this study our goal is to identify and characterize a novel serine/threonine phosphatase in Dictyostelium discoideum. We first screened a cDNA library and isolated a complete cDNA encoding the catalytic subunit of protein phosphatase 4 (PP4c), confirmed by manual DNA sequencing. The PP4c is an essential, single-copy gene located in chromosome 2, which encondes a mRNA constitutively expressed throughout D. discoideum life cycle. Immunodetection of PP4c performed with specific antibodies indicated corresponding protein levels. Overexpression of PP4c under a strong promoter caused no detectable phenotype. Subcellular localization of PP4c expressed as a GFP-fusion protein revealed its cytosolic location, in contrast to other organisms, where it has been reported to be enriched in centrosomes. We also describe here the genetic organization of PP4c, the genetic structure of all serine/threonine protein phosphatases belonging to the PPP family found in chromosome 2, and a phylogenetic analysis indicating relationships among these enzymes in D. discoideum and other selected organisms.

As serina/treonina fosfatases (PPs) são enzimas responsáveis pela desfosforilação de resíduos de fosfoserina e/ou fosfotreonina e estão subdivididas em duas famílias gênicas designadas PPP e PPM. A família PPP está dividida em cinco subfamílias, que compreendem as PPs do tipo 1 (PP1), 2A (PP2A), 2B (PP2B), 5 (PP5) e 7 (PP7), de acordo com a similaridade entre as sequências de aminoácidos das subunidades ou domínios destas enzimas. Novas PPs estão sendo descobertas em diferentes organismos e classificadas nestas famílias ou subfamílias com base na análise comparada de suas sequências. Uma delas é a proteína fosfatase do tipo 4 (PP4), descoberta originalmente em coelhos e cujas funções biológicas vêm sendo progressivamente elucidadas. Neste estudo tivemos como objetivos a identificação e caracterização de uma nova serina/treonina fosfatase de Dictyostelium discoideum. Para isto, rastreamos uma biblioteca de cDNA e um cDNA completo que codifica a subunidade catalítica da fosfatase do tipo 4 (PP4c) foi isolado e seqüenciado. Verificamos que o gene da PP4c é essencial e está presente em cópia única localizada no cromossomo 2, originando um mRNA expresso ao longo de todo o ciclo de vida de D. discoideum. Imunodetecção da PP4c realizada com anticorpo específico indicou que os níveis desta proteína também são constitutivos. Observamos que a superexpressão da PP4c sob o controle de um promotor constitutivo não causa alterações fenotípicas detectáveis. A análise da localização celular da PP4c expressa em células de D. discoideum como proteína de fusão com GFP (Green Fluorescent Protein) revelou que a enzima está localizada no citossol, contrastando com outros organismos, onde ela se encontra enriquecida no centrossomo. Por fim, descrevemos neste trabalho, além da organização genômica da PP4, a estrutura dos genes de todas as serina/treonina fosfatases da família PPP encontradas no cromossomo 2 e apresentamos dados das relações entre estas enzimas de D. discoideum. / The serine/threonine protein phosphatases (PPs) are enzymes responsible for dephosphorylation of phosphoserine and/or phosphothreonine residues and are divided in two gene families designated as PPP and PPM. The PPP family is divided in five subfamilies, which comprise type 1 (PP1), 2A (PP2A), 2B (PP2B), 5 (PP5) and 7 (PP7) phosphatases. This subdivision is based on aminoacid sequence similarity or enzyme domains. Novel PPs have been discovered in different organisms and classified in these families or subfamilies based on comparative sequence analysis. One of these is type 4 protein phosphatase (PP4), originally discovered in rabbit, which functions have been progressively uncovered. In this study our goal is to identify and characterize a novel serine/threonine phosphatase in Dictyostelium discoideum. We first screened a cDNA library and isolated a complete cDNA encoding the catalytic subunit of protein phosphatase 4 (PP4c), confirmed by manual DNA sequencing. The PP4c is an essential, single-copy gene located in chromosome 2, which encondes a mRNA constitutively expressed throughout D. discoideum life cycle. Immunodetection of PP4c performed with specific antibodies indicated corresponding protein levels. Overexpression of PP4c under a strong promoter caused no detectable phenotype. Subcellular localization of PP4c expressed as a GFP-fusion protein revealed its cytosolic location, in contrast to other organisms, where it has been reported to be enriched in centrosomes. We also describe here the genetic organization of PP4c, the genetic structure of all serine/threonine protein phosphatases belonging to the PPP family found in chromosome 2, and a phylogenetic analysis indicating relationships among these enzymes in D. discoideum and other selected organisms.

A produção de hidrolisados protéicos visam três propósitos distintos: modificar as propriedades funcionais das proteínas; preparação de pequenos peptídeos ou aminoácidos para uso em dietéticos ou com finalidades especiais e, ainda, como agentes flavorizantes. Os objetivos da pesquisa consistiram em estabelecer as condições de processamento para obtenção de hidrolisados protéicos de carne bovina: estudo da ação enzimática da papaína, da tripsina e da protease microbiana, isoladas e em mistura; determinação do material solubilizado; do grau de hidrólise nas condições pré-estabelecidas e, de algumas propriedades funcionais como viscosidade e capacidade de emulsificação e, ainda, identificação e caracterização das substâncias resultantes da hidrólise. A finalidade do estudo é a elaboração de um preparado formulado para utilização em alimentação enteral. A porção da carne conhecida no mercado pelo nome de \"patinho\" foi submetida a tratamento prévio para retirada de gordura visível e aponevroses e, moída. Utilizou-se a papaína, a tripsina e a protease microbiana, isoladas e em mistura (papaína : tripsina : protease microbiana, 2: 1: 2), previamente submetidas a determinação de atividade. Preparou-se uma suspensão a 10% de proteína e a valor de pH = 7,0, aqueceu-se a 50-60 °C e após a estabilização da temperatura, acrescentou-se as enzimas na proporção 1:100 de proteína. O tratamento com a mistura de enzimas promove enriquecimento do solúvel em aminoácidos essenciais. Com a papaína ocorre o inverso. O teor de aminoácidos livres existentes na carne é baixo. Em apenas 30 minutos de tratamento enzimático na média a concentração eleva-se em 5,7 vezes. Durante a hidrólise ocorre um aumento na concentração de aminoácidos livres. O aminoácido liberado em maior teor em todos tratamentos foi a arginina. O triptofano foi detectado entre os livres e os teores de fenilalanina sempre estiveram abaixo do valor proposto pela FAO. As análises eletroforéticas revelaram a progressão da hidrólise mostrando as diferentes manchas de pesos moleculares cada vez menores. O hidrolisado é um produto de alto teor de oligopeptídeos solúveis e de aminoácidos livres, isento de contaminação microbiana. Durante o transcorrer do processo hidrolítico há uma variação constante nas características do solúvel e na sua composição aminoacídica. Procedeu-se à hidrólise sob agitação durante 3 horas. Após inativação térmica e filtração determinou-se a concentração de sólidos solúveis; a avaliação do peso molecular dos peptídeos solúveis; o fracionamento por cromatografia em camada delgada e, a análise quantitativa dos aminoácidos. Ainda foram feitas medidas de viscosidade e caracterização do fluido. O produto hidrolisado seco, acondicionado em sacos plásticos, foi analisado com relação a composição química, capacidade de emulsificação de sua proteína e perfil de aminoácidos. A eficiência do ataque das enzimas sobre as proteínas da carne bovina deu-se na seguinte ordem: mistura de enzimas, seguida da papaína e da tripsina e finalmente da protease microbiana segundo os parâmetros solubilidade e grau de hidrólise. Passados 120 minutos de hidrólise nas condições de trabalho os valores de graus Brix, sólidos solúveis e grau de hidrólise mantiveram-se inalterados. Na faixa de velocidades angulares ensaiadas o hidrolisado protéico comportou-se como um fluido não-Newtoniano, pseudoplástico. A viscosidade do hidrolisado é de 1,7 a 36,0 poise a 30 °C e 2,4 a 52,7 poise a 60 °C. Os valores máximos para a viscosidade são alcançados aos 90 minutos de hidrólise. Conforme cresce a concentração de proteína solúvel, aumenta a capacidade de emulsificação de óleo de soja em agua, acarretando uma diminuição do diâmetro dos glóbulos de gordura. / The protein hydrolyzates production has three different aims: to modify the funcional properties of the proteins; the preparation of small peptides or amino acids for its use in dietetic foods or with special purposes and, also as flavoring agents. The objectives of the research consist in establishing the processing conditions in order to obtain the meat protein hydrolyzates: the study of the enzymatic action of papain, trypsin and of microbial protease, separated or in a blend; determination of the solubilized material; the degree of hydrolysis in previously established conditions, and of some functional properties such as viscosity and emulsifying capacity and, finally the identification and characterization of the resulting substances from the hydrolysis. The purpose of the study is the development of a product to be used in enteral nutrition. The cut of meat locally called patinho\" was subject to previous handling in order to eliminate visible fat and aponeurosis, and ground. The papain, the trypsin and the microbial protease were used, separated or in a blend, previously subject to the determination of its activity. A 10 % protein solution was prepared with pH = 7.0, then heated at 50 - 60 °C and when the temperature was leveled, the enzymes were added to a proportion of 1:100 of protein. Then we proceeded to the hydrolysis under agitation for 3 hours. After thermic inactivation and filtration, the soluble solids concentration was determined, the molecular weight of the soluble peptides was estimated, then fractioning through thin layer chromatography and the amino acids quantity analysis. Viscosity measurement and fluid characterization were also established. The dry hydrolyzate product was stored in plastic bags and was analyzed according to chemical composition and emulsifying capacity of its protein. The effect of the enzyme action on the bovine meat protein was observed in sequence: blending of enzymes, followed by papain and trypsin and finally of the microbial protease according to solubility and degree of hydrolysis. After 120 minutes of hydrolysis under experimental conditions, the Brix degrees, soluble solids and degree of hydrolysis remained unchanged. In the angular velocity range tested the protein hydrolyzate presented a non-Newtonian, pseudoplastic behavior. The viscosity of the hydrolyzate is 1,7 - 36,0 poise at 30 °C and 2,4 - 52,7 poise at 60 °C. The maximum values of viscosity were reached at 90 minutes of hydrolysis. The increase of soluble protein concentration, increases the emulsifying capacity of soybean oil in water, bringing an a lowering of fat globules diameter. The treatment with the enzyme blend promotes an enrichment of the soluble in essential amino acids. The opposite occurs with papain. The ammount of free amino acids exhisting in meat is Low. After only 30 minutes of enzymatic treatment the ammount increases 5.7 times on average. During the hydrolysis the concentration of free amino acids grows. The most commonly found amino acids in all treatments was arginine. The tryptophan was found among the free and the phenylalanin ammounts were always bellow the FAOs proposed parameters. The electrophoretic analysis revealed the progress of hydrolysis, showing the different bands of molecular weights smaller every time. The hydrolyzate is a product of high soluble oligopeptides and free amino acids, free of microbiological contamination. During the hydrolytic process, there is a constant variation in characteristics of the soluble and its amino acidic composition.

Hidrolisados de carne bovina são preparados visando a obtenção de pequenos peptídeos ou aminoácidos livres para incorporação em dietas para pessoas em condições fisiológicas especiais. O objetivo do presente é a otimização do processo biotecnológico de hidrólise da proteína da carne bovina pela bromelina. A otimização é feita em base de tratamentos estatísticos dos resultados experimentais para se desenvolver os modelos. A finalidade é elaborar um produto conservado para utilização em dietas. Existe efeito de interação entre o valor de pH e a temperatura nas atividades sobre a caseína da bromelina isolada e naquela presente no suco de abacaxi Ananas comosus L.. A enzima presente no suco \"in natura\" apresenta atividade sobre a caseína superior a bromelina isolada e purificada. Os efeitos do tipo de enzima e da temperatura simultaneamente não afetam a solubilidade alcançada pelas proteínas da carne bovina hidrolisadas com bromelina. Hidrolisados de carne bovina inoculados com esporos de Bacillus stearothermophilus FS 1518 a valor de pH 4,5 não apresentaram sobreviventes mesmo aos 30 segundos de tratamento térmico. Os valores do tempo de redução decimal (D) de esporos de Bacillus stearothermophilus foram de 0,57 min (pH 5,6) e de 0,96 min (pH 6,6); os valores da resistência do microrganismo a diferentes temperaturas (Z) foram de 6,3 °C (pH 5,6) e de 5,9 °C (pH 6,6). O modelo matemático para a atividade enzimática de bromelina de suco de abacaxi é: ^y = 171,63 +13,13 x1 + 18,25 x2 + 18,35 x1.x2 - 25,59x12 - 53,45 x22 A superfície de resposta é do tipo paraboloide elíptica. O valor de pH interfere mais sobre a atividade que a temperatura e o ponto estacionário de máximo indicado pelo modelo é 66,8° e valor de pH 6,4. O modelo matemático para a concentração de sólidos solúveis de carne é: ^ y = 7,13 - 1,02 x1 + 0,81 x2 + 0,45 x1.x2 - 0,42 x12 - 1,52 x22 A superfície de resposta é do tipo paraboloide elíptica. O ponto estacionário de máximo para concentração de sólidos solúveis, indicado pelo modelo é 89,5° e valor de pH 7,1. As condições ótimas indicadas pelo modelo para a atividade enzimática de bromelina de suco de abacaxi atendem a condições satisfatórias de teores de sólidos solúveis. As condições ótimas do processo biotecnológico de hidrólise da carne bovina indicadas pelo acoplamento dos modelos é : temperatura = 66,8 °C, valor de pH = 6,4, atividade enzimática = 175,94 ug/ml.min e concentração de sólidos solúveis = 7,6 g/100g. / The protein hydrolyzates production has the aim of preparation of small peptides or amino acids for its use in dietetic foods or with special purposes. The objectives of the research consist in establishing the optimization of the hydrolytic process of bovine meat by bromelain (statistics and mathematical models). The purpose of the study is the development of a preserved product to be used in diets. There is an interaction effect of pH and temperature on enzymic activity over casein by bromelain isolated or from ananas Ananas comosus juice. The bromelain from ananas juice has more activity then the isolated one. The effects of enzyme and temperature together do not affect the solubility of hydrolysed meat proteins. Meat hydrolysates, pH 4,5, inoculated with spores of Bacillus stearothermophilus FS 1518 did not show survivers after 30 sec of treatment. The values of thermal death time (D) were 0,57 min (pH 5,6) and 0,96 min (pH 6,6) and, the Z value 6,3 (pH 5,6) and 5,9 (pH 6,6). The mathematical model for the enzymic activity of bromelain from ananas juice is: ^ = 171,63 +13,13 x1 + 18,25 x2 + 18,35 x1.x2 - 25,59x12 - 53,45 x22 The surface response is paraboloid elipcal. The stationary maximum point indicated by the model is 66,8 °C and pH 6 ,4. The mathematical model for the soluble solids of meat proteins is: ^y = 7,13 - 1,02 x1 + 0,81 x2 + 0,45 x1.x2 - 0,42 x12 - 1,52 x22 The surface response is paraboloid elipcal. The stationary maximum point indicated by the model is 89,5 °C and pH 7,1. The optimum conditions indicated by the enzymic activity model satisfies the soluble solids contents of meat proteins. The optimum conditions of the biotechnological process of hydrolysis of bovine meat are: temperature = 66,8 °C, pH = 6,4, enzymic activity = 175,94 ug/ml.min and soluble solids contents = 7,6 g/100g.

A perda de eficiência do inóculo fúngico na incorporação ao solo devido ao atrito indica a necessidade de desenvolvimento de um inóculo efetivo, viável, que mantenha a atividade biológica durante transporte e aplicação no solo, e proporcione melhora da remediação do solo contaminado. O projeto visou determinar a melhor formulação de inóculo peletizado de P. castanella afim de melhorar a resistência mecânica do inóculo e garantir as taxas de atividade enzimática e degradação de poluentes em solo. Avaliou-se o uso de agar-agar, fécula de mandioca e carragena na agregação do bagaço de cana-de-açúcar do inóculo por meio de ensaio enzimático, resistência mecânica, biomassa, colonização e degradação de pentaclorofenol (PCF). Fécula de mandioca foi capaz de melhorar a resistência do inóculo, não alterou significativamente o perfil fisiológico do fungo e proporcionou ótima taxa de degradação de PCF em relação aos demais agregantes. Este processo de imobilização mostra-se promissor em relação a outros processos por ser de simples formulação e requerer menos constituintes. / The loss of efficiency of fungal inocula during soil incorporation due to friction indicates the need to develop an effective and viable inoculum, capable to maintain its biological activity during transportation and land application, and improve the remediation of contaminated soil. The project aimed to determine the best formulation of pelleted inoculum of P. castanella in order to improve its mechanical strength and guarantee enzyme activity and degradation of pollutants in soil. We evaluated the use of agar-agar, cassava starch and carrageenan on the aggregation of sugarcane bagasse by carrying enzymatic and mechanical strength assays, biomass quantification, analysis of colonization and pentachlorophenol (PCP) degradation. Cassava starch improved the inoculums mechanical strength, did not significantly alter the physiological profile of the fungus and provided a great rate of PCP degradation when compared to the other compounds. This immobilization process is promising compared to other existing due to its simple formula and for requiring fewer components.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-05Bitstream added on 2014-06-13T18:41:56Z : No. of bitstreams: 1 gama_fgv_dr_jabo.pdf: 362347 bytes, checksum: 50eb2ff84ec762dc6be13df310869856 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A análise do líquido cerebrospinal demonstra ser uma ferramenta complementar viável e eficaz ao exame clínico-patológico do sistema nervoso, especialmente auxiliando no diagnóstico e prognóstico das suas inúmeras enfermidades. Porém, as variáveis apreciadas ao exame de rotina do liquor, nem sempre propiciam a detecção de anormalidades sutis frente a algumas situações neuropatológicas agudas, como por exemplo, nas viroses. Sendo assim, se faz necessário o aprofundamento do estudo do liquor com o escopo de se buscar técnicas mais sensíveis à identificação de alterações estruturais do tecido nervoso, bem como à avaliação do prognóstico do quadro clínico. E, recentemente, tem sido utilizada com sucesso em humanos a avaliação de marcadores bioquímicos, dentre os quais as atividades enzimáticas liquóricas da creatina quinase, lactato desidrogenase e aspartato aminotransferase. Sendo assim, idealizou-se o projeto de pesquisa, em tela, com o objetivo de se avaliar amostras liquóricas de cães acometidos por cinomose, com atenção especial às atividades enzimáticas, e sua correlação com achados histopatológicos do sistema nervoso central. Para tanto, foram colhidas amostras de LCR de 10 cães neurologicamente sadios e de 20 cães na fase neurológica da cinomose, as quais foram analisadas segundo a coloração, o aspecto, o pH, a densidade, a taxa de proteínas liquóricas totais e as atividades enzimáticas da lactato desidrogenase, da aspartato aminotransferase e da creatina quinase total e sua isoenzima CK-BB. Ademais fragmentos do encéfalo e medula espinhal também foram colhidos para posterior avaliação histopatológica. Os resultados obtidos foram capazes de demonstrar, principalmente a origem neurológica do aumento das atividades enzimáticas liquóricas, principalmente da CK e, ainda, a correlação entre o grau... / Evaluation of the cerebrospinal fluid is an important and efficient tool in the clinical-pathologic examination of the central nervous system, helping in the diagnosis and prognosis of several disorders. However, the variables presented in the cerebrospinal fluid not always allow the detection of acute neuropathology, such as viruses. It is necessary more studies with the purpose to obtain more sensitive techniques to identify structural changes in the nervous system, as well as the evaluation and prognosis of clinical signs. Recently, the evaluation of biochemical ma rkers , such as cerebrospinal enzyme activity, lactate dehidrogenase and aspartate aminotransferase, has been used in humans. Thus, the aim of the present study is to evaluate cerebrospinal samples of dogs with canine distemper, with focus on enzymatic activity and its correlation with histopathological finding of the central nervous system. For that purpose, samples of the CSF were collected from 10 dogs clinically healthy and 20 dos presenting neurological signs of canine distemper. The samples were evaluated for color, aspect, pH, density, total protein in CSF and enzyme activities (Iactate dehidrogenase, aspartate aminotransferase and total creatine kinase and its isoenzyme CK-BB). Moreover, fragments of the brain and spinal marrow were collected for histopathological evaluation. The results were capable to demonstrate the neurological origin of the increase in CSF enzyme activities, especially of CK and also the correlation between the degree of enzyme activities and the extent of desmielinizing injury found in the central nervous system.

A perda de eficiência do inóculo fúngico na incorporação ao solo devido ao atrito indica a necessidade de desenvolvimento de um inóculo efetivo, viável, que mantenha a atividade biológica durante transporte e aplicação no solo, e proporcione melhora da remediação do solo contaminado. O projeto visou determinar a melhor formulação de inóculo peletizado de P. castanella afim de melhorar a resistência mecânica do inóculo e garantir as taxas de atividade enzimática e degradação de poluentes em solo. Avaliou-se o uso de agar-agar, fécula de mandioca e carragena na agregação do bagaço de cana-de-açúcar do inóculo por meio de ensaio enzimático, resistência mecânica, biomassa, colonização e degradação de pentaclorofenol (PCF). Fécula de mandioca foi capaz de melhorar a resistência do inóculo, não alterou significativamente o perfil fisiológico do fungo e proporcionou ótima taxa de degradação de PCF em relação aos demais agregantes. Este processo de imobilização mostra-se promissor em relação a outros processos por ser de simples formulação e requerer menos constituintes. / The loss of efficiency of fungal inocula during soil incorporation due to friction indicates the need to develop an effective and viable inoculum, capable to maintain its biological activity during transportation and land application, and improve the remediation of contaminated soil. The project aimed to determine the best formulation of pelleted inoculum of P. castanella in order to improve its mechanical strength and guarantee enzyme activity and degradation of pollutants in soil. We evaluated the use of agar-agar, cassava starch and carrageenan on the aggregation of sugarcane bagasse by carrying enzymatic and mechanical strength assays, biomass quantification, analysis of colonization and pentachlorophenol (PCP) degradation. Cassava starch improved the inoculums mechanical strength, did not significantly alter the physiological profile of the fungus and provided a great rate of PCP degradation when compared to the other compounds. This immobilization process is promising compared to other existing due to its simple formula and for requiring fewer components.

Um enfoque analítico, envolvendo centrifugação diferencial de homogeneizados de cecos gástricos de Rhynchosciara americana preparados em condições brandas e vigorosas, suporta a asserção de que existe uma classe principal de aril-α- e β -glicosidases, aril-α- e β-galactosidases e celobiases que é ligada à membrana plasmática, e duas classes de maltases, aminopeptidases, carboxipeptidases e dipeptidases. Maltases ocorrem na membrana plasmática e no interior de lisossomos na forma solúvel, enquanto que as peptidases (amino-carboxi- e dipeptidase) são encontradas na membrana plasmática e citossol. A ocorrência das enzimas citadas acima na membrana plasmática das células cecais, foi confirmada por resultados obtidos em preparações de microvilosidades realizadas com técnica desenvolvida para enterocito de mamíferos. O tratamento de microvilosidades com solução hiperosmótica de Tris, seguido de centrifugação em gradiente de densidade, permitiu a separação de quatro frações de membrana e de uma fração que contém microvilosidades intactas e, provavelmente, microfilamentos isolados. Eletroferogramas do material recolhido do gradiente mostrou diferenças entre as frações de membrana e sugeriu a ocorrência de actina como componente majoritário dos microfilamentos das microvilosidades. Ensaios enzimáticos nas diferentes frações do gradiente confirmaram a ocorrência de celobiase e carboxipeptidase ligadas à membrana plasmática. Os resultados de distribuição intracelular de hidrolases nos cecos de R. americana permitiram propor que a digestão terminal de proteínas ocorre na membrana plasmática e no citossol, por ação de amino-, carboxi- e dipeptidases, enquanto que a digestão de carboidratos, com exceção da trealose, ocorre somente na superfície das microvilosidades. / An analytical approach involving differencial centrifugation of Rhynchosciara Americana midgut caeca homogenates prepared in mild and in vigorous conditions support the assumption there are one main class of aryl-α- e β-glucosidases, aryl-α - e β-galactosidases and cellobiases, which are plasma membrane bound, and two classes of maltases, aminopeptidades, carboxypeptidases and dipeptidases. Maltases, occur in plasma membrane and in lysosomes (as a soluble enzyme) and the others are found in plasma membrane and cytosol. A succeful purification of caeca cells brush-borders by tecniques used for mammal enterocytes confirmed the assumptions based on differential centrifugation data. Treatment of purified microvilli with a hyperosmotic solution of Tris, followed by density gradient centrifugation, resulted in the separation of four membrane fractions and one fraction containing intact microvilli and, probably, isolated microfilaments. Electropherograms of the material recovered from the gradient showed differences among the membrane fractions, and they permitted to propose that actin is a major component of microvilli microfilaments. Enzymatic assays in the different fractions from the gradient confirmed the occurrence of cellobiase and carboxypeptidase plasma membrana bound. The results permite to propose that the majority of the terminal digestion of proteins and carbohydrates, with the exception of trehalose, occurs on the surface of the insect midgut caeca cells microvilli.