Made available in DSpace on 2015-06-17T19:34:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:23Z : No. of bitstreams: 1 000827131_20160930.pdf: 1032389 bytes, checksum: 1ec652e603aca7989376c865a7b92ae6 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-10-03T12:15:51Z: 000827131_20160930.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-10-03T12:16:37Z : No. of bitstreams: 1 000827131.pdf: 2564151 bytes, checksum: 723e8967f02bfb11f977abb54f8c05f4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Programa de Doutorado Sanduíche no Exterior (PDSE) / O epidídimo é o órgão do sistema reprodutor masculino responsável pela maturação e armazenamento dos espermatozóides. A contração da cauda do epidídimo (CE) é um dos primeiros eventos da fase de emissão seminal da ejaculação e o sistema nervoso autônomo simpático desempenha um papel importante na contração da CE através da ativação de adrenoceptores α1 (α1-ARs). Neste estudo mostramos que a CE expressa α1A-ARs e α1D-ARs e que ambos os receptores contribuem, de um modo complexo, para a contração da CE induzida por agonistas α1. Na ausência de ativação por agonistas o α1D-ARs modula a contração induzida pela ativação de α1A-ARs por agonistas exógenos. Os α1A-ARs da CE não são dessensibilizados pela oximetazolina. Os andrógenos desempenham um papel importante na manutenção da interação entre os α1A/1D-ARs visto que a redução de andrógenos, mas não de estrógenos, pela castração evidencia a presença dos α1D-ARs. A interação complexa entre os 1A/α1D-ARs é discutida no contexto de heterodimerização de receptores visto que mostramos, pela primeira vez, a heterodimerização entre os α1A e α1D-ARs recombinantes humanos / The epididymis is the male reproductive organ responsible for sperm maturation and storage. The contraction of cauda epididymis (CE) during ejaculation is one of the first events of seminal emission phase of ejaculation and the sympathetic nervous system plays a key role in the CE contraction via α1 adrenoceptors (α1-ARs) activation. In this study we show that CE expresses α1A and α1D-ARs and both receptor subtypes contribute in a complex way to the CE contraction induced by α1-ARs agonists. The α1D modulates α1A-ARs induced contraction irrespective of agonist-mediated α1D activation. There is no desensitization of CE α1A-ARs to oxymetazoline. The androgens were shown to play an important role in the maintenance of such α1A/α1D interaction as the androgen deprivation unravels the cryptic functional α1D-ARs. Estrogens had no effect on α1-ARs mediated contraction of CE. The complex α1A/α1D interaction is discussed in the context of receptor heterodimerization as we showed, for the first time, heteromerization of recombinant α1A/α1D-ARs / Programa de Doutorado Sanduíche no Exterior (PDSE): 12355/13-5

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Coorientador: Maricy Apparício Ferreira / Banca: Eliandra Antonia Pires Buttler / Banca: Juliana Corrêa Borges Silva / Resumo: Este estudo foi conduzido com o objetivo de o uso do meio diluente Botu-crio associado a vitamina E, em diferentes concentrações, que se demonstrem efetivas para a criopreservação de sêmen obtido de recuperado epididimário em felinos domésticos. Cinquenta e quatro gatos domésticos foram utilizados no experimento após serem submetidos à orquiectomia eletiva e os espermatozóides obtidos diretamente da cauda e ducto deferente do epidídimo. Foram constituídos 18 "pools", com o material de três animais cada e estes, divididos em quatro grupos experimentais. No grupo controle (G0) o sêmen foi congelado com o diluente Botu-Crio®. Nos grupos G 0,3, G 0,6 e G 0,9, ao diluente Botu-Crio® foi acrescido vitamina E em três concentrações, 0,3, 0,6 e 0,9mM, respectivamente. Para cada grupo, as amostras de sêmen fresco foram inicialmente avaliadas quanto à motilidade, vigor, morfologia supravital e teste hiposmótico, para verificar a qualidade mínima exigida para a congelação (motilidade ≥70% e vigor ≥3). Os mesmos parâmetros foram reavaliados após a descongelação também para o TBARS. Na avaliação da motilidade e vigor, não foi observado diferença estatística entre o grupo controle e as concentrações de vitamina E. Nos testes supravital, hiposmótico, morfológico e teste TBARS, também não houve significância entre as três diferentes concentrações de vitamina E e o grupo controle. Pode-se concluir que as três concentrações de vitamina E, não ofereceram proteção antioxidante ao recuperado de epidídimo de felinos domésticos / Abstract: This study was conducted with the objective of using the medium Botu-crio®, associated vitamin E, at different concentrations, which demonstrate effective for cryopreservation of epididymal semen obtained recovered from domestic cats. Fifty-four domestic cats were used in the experiment after undergoing elective orchiectomy and sperm obtained directly from the tail of the epididymis and vas deferens. 18 " pools " were made with the material of three animals each and these were divided into four experimental groups. In the control group (G0) semen was frozen with Botu-crio®. In the groups G 0.3, G 0.6 to G 0.9, the diluent was added at three concentrations of vitamina E, 0.3, 0.6 and 0.9 mM, respectively. For each group, the fresh semen samples were initially evaluated for motility, viability, morphology and supravital and hypoosmotic test to verify minimum quality required for freezing (≥ 70 % motility and vigor ≥ 3). The same parameters were reassessed after thawing also for TBARS. In the evaluation of motility and vigor, no statistical difference was observed between the control group and the concentrations of vitamin E. In supravital tests, hyposmotic, morphological and TBARS assay, there was no significance between the different concentrations of vitamin E and the control group. It can be concluded that the three concentrations of vitamin E, antioxidant protection not offered recovered from epididymis of domestic cats / Mestre

Orientador: Luiz Ricardo de Almeida Kiguti / Coorientador: André Sampaio Pupo / Banca: Edson Antunes / Banca: Sandra Cordellini / Banca: Erick José Ramo da Silva / Resumo: O epidídimo é o órgão do sistema reprodutor masculino responsável pela maturação e armazenamento dos espermatozóides. A contração da cauda do epidídimo (CE) é um dos primeiros eventos da fase de emissão seminal da ejaculação e o sistema nervoso autônomo simpático desempenha um papel importante na contração da CE através da ativação de adrenoceptores α1 (α1-ARs). Neste estudo mostramos que a CE expressa α1A-ARs e α1D-ARs e que ambos os receptores contribuem, de um modo complexo, para a contração da CE induzida por agonistas α1. Na ausência de ativação por agonistas o α1D-ARs modula a contração induzida pela ativação de α1A-ARs por agonistas exógenos. Os α1A-ARs da CE não são dessensibilizados pela oximetazolina. Os andrógenos desempenham um papel importante na manutenção da interação entre os α1A/1D-ARs visto que a redução de andrógenos, mas não de estrógenos, pela castração evidencia a presença dos α1D-ARs. A interação complexa entre os 1A/α1D-ARs é discutida no contexto de heterodimerização de receptores visto que mostramos, pela primeira vez, a heterodimerização entre os α1A e α1D-ARs recombinantes humanos / Abstract: The epididymis is the male reproductive organ responsible for sperm maturation and storage. The contraction of cauda epididymis (CE) during ejaculation is one of the first events of seminal emission phase of ejaculation and the sympathetic nervous system plays a key role in the CE contraction via α1 adrenoceptors (α1-ARs) activation. In this study we show that CE expresses α1A and α1D-ARs and both receptor subtypes contribute in a complex way to the CE contraction induced by α1-ARs agonists. The α1D modulates α1A-ARs induced contraction irrespective of agonist-mediated α1D activation. There is no desensitization of CE α1A-ARs to oxymetazoline. The androgens were shown to play an important role in the maintenance of such α1A/α1D interaction as the androgen deprivation unravels the cryptic functional α1D-ARs. Estrogens had no effect on α1-ARs mediated contraction of CE. The complex α1A/α1D interaction is discussed in the context of receptor heterodimerization as we showed, for the first time, heteromerization of recombinant α1A/α1D-ARs / Doutor

Orientador: Luis Antonio Violin Dias Pereira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T03:55:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arroteia_KelenFabiola_D.pdf: 15193315 bytes, checksum: b6b3930ea05ff1d7b858f560e01c178a (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O processo de fecundação em mamíferos depende de uma seqüência de eventos que culminam na ativação do oócito pelo espermatozóide. A diferenciação completa das células germinativas testiculares em células com capacidade fecundativa envolve testículos, epidídimos, ductos deferentes e trato reprodutor feminino. No epidídimo, a superfície dos espermatozóides pode sofrer diversas modificações, em um processo conhecido como maturação epididimária. Diversas proteínas sintetizadas e secretadas pelas células epiteliais do epidídimo serão posteriormente localizadas na superfície ou mesmo no interior da vesícula acrossômica do espermatozóide. A aquisição da capacidade de fertilização pelo spermatozóide tem sido correlacionada à esta nova organização das moléculas de membrana proporcionada durante o trânsito epididimário. A obtenção de anticorpos monoclonais que reconhecem os antígenos expressos pelas células germinativas testiculares durante seus processos contíguos de diferenciação, ou pelas células dos ductos pelos quais os espermatozóides transitam durante o processo de maturação tem constituído uma importante estratégia para permitir a geração de um mapa das moléculas que atuam na preparação do espermatozóide para a fecundação. O anticorpo monoclonal (Amc) TRA (testicular germ cells immunized to rat - monoclonal antibody) 54 reconhece um antígeno localizado em espermátides dos túbulos seminíferos de camundongos C57 BL/6 com idade superior a 24 dias pós-parto e também um antígeno expresso nas células epiteliais da cabeça do epidídimo e em espermatozóides da luz deste órgão. A molécula secretada percorre a luz do epidídimo no sentido ântero-posterior e, neste percurso, é incorporada pelos espermatozóides em trânsito. Com o intuito de contribuir para a compreensão dos complexos mecanismos que preparam o espermatozóide para a fecundação, o presente trabalho buscou identificar e reconhecer a estrutura protéica e a função biológica do antígeno reconhecido pelo Amc TRA 54 nas células epiteliais do epidídimo. No futuro, os resultados obtidos poderão contribuir com a geração de novas ferramentas clínicas para a solução de problemas relacionados à biologia da reprodução / Abstract: In mammals, fertilization depends on a sequence of events that culminates in the activation of the oocyte by the spermatozoa. The complete differentiation of the testicular germ cells in cells with fertilization ability involves the testis, epididymis, vas deferens and female reproductive organs. In the epididymis, the membrane surface of the spermatozoa may be modified, through a process known as epididymal maturation. Several proteins synthesized and secreted by the epididymal epithelial cells can be further located on the spermatozoa membrane surface or even though inside its acrosomal vesicle. The acquisition of the fertilization ability by the spermatozoa has been related with a new molecular organization of the membrane provided during the epididymal transit. The production of monoclonal antibodies (mAb) that recognizes antigens exclusively expressed by testicular germ cells or by the cells of the ducts through the spermatozoa passes during its maturation has been considered an important approach to permit the elaboration of the molecular map involved in the spermatozoa preparation. The mAb TRA (testicular germ cells immunized to rat - monoclonal antibody) 54 recognizes an antigen located in spermatids of seminiferous tubules of C57 BL/6 mice more than 24 days old and also in a specific population of epithelial cells in epididymal caput and in the luminal spermatozoa. The synthesis and release of the epididymal antigen occur in an androgen-dependent manner and independent of the testicular expression. Released antigen moves down the epididymis and is further incorporated by luminal spermatozoa. This work was performed in order to comprehend the complex mechanisms that prepare spermatozoa for the fertilization process. The molecular structure of the epididymal protein and its biological functions were investigated and solved. In a near future, the obtained results can contribute with new clinical tools for solving problems in reproductive biology / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Submitted by Natalia de Souza Gonçalves (natalia.goncalves@ufpe.br) on 2016-09-15T14:49:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) NIVALDO BERNARDO DE LIMA JUNIOR_PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM SAÚDE HUMANA E MEIO AMBIENTE_CENTRO ACADÊMICO DE VITÓRIA_2016.pdf: 3049237 bytes, checksum: 3c055666b0821330db98ccf2d17c644b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T14:49:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) NIVALDO BERNARDO DE LIMA JUNIOR_PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM SAÚDE HUMANA E MEIO AMBIENTE_CENTRO ACADÊMICO DE VITÓRIA_2016.pdf: 3049237 bytes, checksum: 3c055666b0821330db98ccf2d17c644b (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / CAPES / Dermanura cinerea é um morcego frugívoro, cujas informações acerca da sua biologia reprodutiva ainda permanecem pouco conhecidas em diferentes biomas do Brasil, sobretudo quando se considera as análises morfométricas e histológicas de suas gônadas. O objetivo desse trabalho foi analisar por meio do estágio reprodutivo, histologia e morfometria o testículo, epidídimo e ovário de D. cinerea, ao longo do ciclo reprodutivo anual, em um fragmento preservado de Mata Atlântica (Reserva Biológica de Saltinho) situado no estado de Pernambuco, Nordeste do Brasil. Fêmeas e machos adultos foram capturados por meio de redes de neblina e as coletas ocorreram mensalmente, durante duas noites consecutivas, ao longo de dezoito meses. Os dados meteorológicos foram agrupados em seis períodos de três meses cada: período I (junho – agosto/2014); período II (setembro – novembro/2014); período III (dezembro/2014 – fevereiro/2015); período IV (março – maio/2015); período V (junho – agosto/2015) e período VI (setembro – novembro/2015). Esse agrupamento foi realizado com base no que se tem descrito para o período seco (setembro - fevereiro) e período chuvoso (março - agosto) nessa área de estudo. Entretanto, alguns meses apresentaram médias de precipitação atípicas entre os períodos, enquanto a temperatura teve pouca variação (24,0 a 27,4). Foram capturados um total de 23 machos e 25 fêmeas. Os testículos dos machos foram classificados de acordo com a morfologia externa em: machos com testículos descendentes e não descendentes. Já as fêmeas foram classificadas em: inativas, grávidas, lactantes e pós-lactantes. Os espécimes utilizados nas análises histomofométricas dos órgãos foram eutanasiados. Nos machos foram selecionados 18 espécimes, ao passo que nas fêmeas foram selecionadas 10 inativas. Os órgãos foram coletados, fixados e processados seguindo a técnica histológica de rotina. As lâminas histológicas produzidas foram coradas por Hematoxilina – Eosina e analisadas em microscópio óptico. Morfometricamente, nos testículos, foram realizadas mensurações da área de ocupação do compartimento tubular e intertubular, número de células de Leydig, de Sertoli, de espermatócitos e de espermátides alongadas. No epidídimo foi mensurada a altura do epitélio, o diâmetro tubular, diâmetro do lúmen e diâmetro do epitélio das regiões do segmento inicial, cabeça, corpo e cauda. No ovário foi mensurada as áreas total e de ocupação dos folículos em diferentes estágios de maturação, incluindo a quantificação destes folículos e corpo lúteo. Esses dados foram submetidos ao teste t de Student. De acordo com os resultados, a atividade testicular de D. cinerea não apresenta um padrão reprodutivo definido; o epidídimo possui maior sensibilidade às variações sazonais na região caudal e as fêmeas apresentam dois picos reprodutivos de acordo com os períodos considerados em área de Mata Atlântica do estado de Pernambuco. / Dermanura cinerea is a fruit bat, whose information about their reproductive biology are still little known in different biomes of Brazil, especially when considering the morphological and histological analyzes of their gonads. The aim of this study was to analyze through the reproductive stage, histology and morphometry the testis, epididymis and ovary of D. cinerea, during the annual reproductive cycle in a fragment preserved Atlantic Forest (Biological Reserve Saltinho) located in the state of Pernambuco, northeastern Brazil. Adult females and males were captured through nets and the collections were monthly during two consecutive nights along eighteen months. Meteorological data were grouped into six periods of three months each: period I (June - August / 2014); period II (September - November / 2014); period III (December / 2014 - February / 2015); period IV (March - May / 2015); period V (June - August / 2015) and period VI (September - November / 2015). This grouping was based on what has been described for the dry season (September - February) and rainy season (March - August) in this study area. However, a few months have mean atypical precipitation between the periods while the temperature had little variation (24.0 to 27.4). A total of 23 males and 25 females were captured. The testes of males were classified according to the external morphology: males with descendant testes and not descendant. The females were classified as inactive, pregnant, lactating and post-lactating. Specimens used in histomorphometric analysis of the organs were euthanized. In males were selected 18 specimens, while females were selected in 10 inactive. The bodies were collected, fixed and processed according to routine histological technique. The produced histological slides were stained with hematoxylin - eosin and analyzed by light microscopy. Morphometrically in the testes were performed measurement of the occupation area tubular compartment and Intertubular, number of Leydig cells, Sertoli cells, spermatocytes and spermatids elongated. In the epididymis was measured the height of the epithelium, the tubular diameter, lumen diameter and diameter epithelial of the regions of the initial segment, caput,corpus and cauda. Ovary was measured and the total areas of occupation of follicles at different stages of maturation, including quantification of these follicles and corpus luteum. These data were submitted to Student's t test. According to the results, testicular activity D. cinerea does not present a defined reproduction pattern; the epididymis is more sensitive to seasonal variations in the flow region and the females have two reproductive peaks according to the periods considered in Atlantic Forest area of the state of Pernambuco.

Orientadores: Luis Antonio Violin Dias Pereira, Suzana de Fatima Paccola Mesquita / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T22:34:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_PatrickVianna_D.pdf: 2682268 bytes, checksum: c80303a2f196fc3cdb21e73865600ba4 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Durante o processo de maturação epididimária, proteínas secretadas pelo epidídimo interagem com os espermatozoides modificando-os funcionalmente. Cerca de 75% das proteínas que participam da maturação epididimária são secretadas pelas células epiteliais do segmento inicial e cabeça do epidídimo e 48% destas proteínas tem a síntese dependente de dihidrotestosterona (DHT), a qual é sintetizada a partir da testosterona pela ação da enzima 5 ? redutase. A DHT é de extrema importância para a fisiologia do sistema reprodutor masculino. Níveis elevados de DHT na vida adulta podem predispor a vários distúrbios, tais como a alopecia androgênica. Com o intuito de se minimizar os efeitos da DHT, a finasterida foi o primeiro inibidor da 5 ? redutase que recebeu aprovação clínica para o tratamento desses distúrbios.Um público cada vez mais jovem utiliza a finasterida como um método preventivo e paliativo contra a alopecia androgênica, com isso, estudos dos efeitos da finasterida no sistema reprodutor masculino são de grande interesse clínico. O ojetivo desse estudo foi avaliar as possíveis alterações no segmento da cabeça do epidídidmo e na qualidade espermática em animais submetidos ao tratamento agudo (15 dias), crônico (56 dias) e animais que tiveram o tratamento (agudo e crônico) interrompido por um período de 30 dias. Na administração aguda (15 dias) de finasterida em ratos observou-se algumas alterações na integridade da membrana plasmática do espermatozoide. A administração crônica (56 dias) de finasterida em ratos leva a alterações no epidídimo, tais como: redução do peso, alterações morfométricas-estereológicas, diminuição do tempo de trânsito do espermatozoide, redução da motilidade, alterações na integridade da membrana do espermatozóide e redução nos parâmetros de fertilidade desses animais. Mesmo com a interrupção do tratamento com finasterida (por 30 dias) a qualidade do espermatozóide continua comprometida. Dessa forma, estudos adicionais devem ser realizados para complementar o conhecimento existente sobre a fisiologia do epidídimo após a depleção DHT, sobre o tempo que necessário para a recuperação dos parâmetros de fertilidade após a interrupção do tratamento com finasterida, e se estes parâmetros podem ser totalmente recuperados / Abstract: During epididymal maturation, proteins secreted by epididymis functionally interact with the spermatozoa modifying it. About 75% of the proteins that participate in the epididymal maturation are secreted by the epithelial cells of the initial segment and caput of the epididymis and 48% of the synthesis is dependent on dihydrotestosterone (DHT), which is synthesized from testosterone by the action of the enzyme 5 ? reductase.The DHT is extremely important for the physiology of the male reproductive system. High levels of DHT in adulthood may predispose to various disorders such as androgenic alopecia. In order to minimize the effects of DHT, medications were produced with the purpose of inhibit the action of 5 ?-reductase and among those medications the finasteride was the first 5 ? reductase inhibitor that received clinical approval for the treatment of these disorders. A public increasingly young uses finasteride as a preventive and palliative method and against androgenic alopecia, in this way; studies of the effects of finasteride in the male reproductive system are of clinical and commercial interest. The aim of this study was to evaluate the possible alterations in the caput epididymis and sperm quality in animals submitted to acute (15 days) and chronic (56 days) treatment and animals with 30 days post- treatment. Acute administration of finasteride in rats (15 days) was observed reduction in sperm membrane integrity. Chronic administration of finasteride in rats (56 days), leads to changes in the epididymis, such as weight reduction, morphometric-stereological changes, decreased transit time of sperm, motility of the sperm membrane integrity and consequently in fertility parameters of these animals. Even with the interruption of treatment with finasteride (30 days) sperm quality remains committed. Thus, further studies should be performed to complement the existing knowledge on the physiology of the epididymis after DHT depletion, on the time that is needed for the recovery of fertility parameters after interruption of finasteride treatment, and if it these parameters can be fully recovered / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Carlos Arturo Levi D'Ancona, Paulo Augusto Neves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T11:43:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Saade_RicardoDestro_D.pdf: 1299944 bytes, checksum: dfdd6825fd6739a18659a773638e845d (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Introdução: O tratamento da infertilidade masculina tem evoluído muito nas últimas décadas. O advento de técnicas de reprodução assistida (RA) e, particularmente, a injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) tornaram possível o tratamento de indivíduos até então considerados inférteis, como os casos de azoospermia obstrutiva e os de azoospermia não obstrutiva. Nestes casos, na impossibilidade de correção cirúrgica, outros procedimentos de obtenção de espermatozóides podem ser realizados como a aspiração microcirúrgica dos epidídimos (MESA), punção aspirativa percutânea dos epidídimos (PESA), aspiração testicular de espermatozóides (TESA) ou a extração testicular (TESE). Objetivos: A proposta de trabalho foi verificar a obtenção de espermatozóides viáveis em até cinco punções percutâneas do epidídimo. Analisar as alterações histológicas inflamatórias e cicatriciais, assim como a densidade de fibras de músculo liso e colágenas nos epidídimos de ratos, após punções. Material e método: O grupo piloto consistiu em quatro animais, sendo dois para estudo da anatomia e da histologia do epidídimo normal e outros dois para avaliação dos efeitos da vasectomia. A vasectomia bilateral foi realizada por meio de laparotomia infra-umbilical. Foi padronizado o lado direito para estudo e o esquerdo como controle. O grupo estudado consistiu em 50 ratos que realizaram vasectomia e foram separados em cinco grupos de I a V, contendo 10 animais cada. Os animais do grupo I foram submetidos a uma punção percutânea trans-escrotal; II a duas punções; III a três punções; IV a quatro punções; V a cinco punções. As punções dos epidídimos foram feitas após 30 dias da vasectomia, com escalpe 25G na cabeça do epidídimo. O material extraído foi suspenso em meio de cultura HTF e analisado em câmara de Makler. O intervalo entre cada punção foi de 15 dias e os animais foram sacrificados após 15 dias da última punção. Os epidídimos foram fixados em líquido de Bouin. Foram realizados estudos histológicos e estereológicos dos epidídimos puncionados. Resultados: O número médio de espermatozóides recuperados nas punções foi de: 48,78 x 106 /ml, 37,55 x 106 /ml, 26,33 x 106 /ml, 33,90 x 106 /ml e 41,34 x 106 /ml, nos grupos I a V, respectivamente. Após a análise histológica, observou-se que as variáveis infiltrado linfoplasmocitário, reação granulomatosa, fibrose e desarranjo estrutural apresentaram diferença significativa a partir da segunda punção. O efeito cumulativo das punções somente foi observado nas variáveis infiltrado linfoplasmocitário e fibrose, mostrando que existe diferença significativa entre os grupos I e II em relação aos grupos III, IV e V. No estudo estereológico, a densidade volumétrica do tecido conjuntivo foi de 21,56%, 27,60%, 35,67%, 37,56% e 38,60% no lado puncionado nos grupos I a V (p<0,05). Conclusões: No presente estudo, verificamos a obtenção de espermatozóides em todos os grupos até cinco punções. Todos os animais apresentaram alterações histológicas significativas dos epidídimos, quando comparados ao grupo controle, a partir da segunda punção, exceto na variável necrose. Somente nas variáveis infiltrado linfoplasmocitário e fibrose foram observadas efeito cumulativo das PESA. O estudo estereológico demonstrou aumento da densidade volume do tecido conjuntivo dos epidídimos provocado pelas punções / Abstract: Introduction: The treatment of male infertility had a great development in the last decades. The advent of assist reproductive techniques and specially the intra-cytoplasmic sperm injection (ICSI) has allowed the treatment of these patients otherwise considered infertile. Patients with obstructive and non-obstructive azoospermia, whose surgical reconstruction is not possible, can be submitted to retrieval spermatozoa procedures including microsurgical epididymal sperm aspiration (MESA), percutaneous epididymal sperm aspiration (PESA) testicular sperm extraction (TESE) and testicular sperm aspiration (TESA). Objectives: To verify the retrieval of viable spermatozoa within up to five percutaneous epididymal sperm aspirations and to evaluate the histological and stereological modifications in the rat epididymis after the procedures. Material and Methods: The pilot group consisted of four animals, two of them were used in the study about anatomy and histology of normal epididymis. The other two were used to verify the effects of the vasectomy. These procedures were performed through infra-umbilical laparotomy. The right side was standardized for the study group and the left for control. A total of 50 Wistar rats underwent vasectomy procedures and were distributed into five groups I to V, totalizing 10 animals each. In the group I, the animals underwent to one PESA procedure, II two, III three, IV four and V five. The epididymal punctures were done with 25G scalp in the caput after 30 days of the vasectomy and consecutively after 15 days of the previous puncture. The material extracted was suspended in HTF solution culture and analyzed in a Makler chamber. The epididymis were fixed in Bouin technique. Histological and stereological analyses were performed in the punctured epididymidis. Results: The number of retrieved spermatozoa was: mean 48.78 x 106 /ml, 37.55 x 106 /ml, 26.33 x 106 /ml, 33.90 x 106 /ml e 41.34 x 106 /ml, from group I to V. The histological analyses included evaluation of infiltration of lymphocytes and plasmocytes, granulomatous reaction, fibrosis and structural disorder; these alterations presented significant differences after the second puncture. The cumulative effect was observed only within the variables: lymphocytic and plasmocytic infiltrate and fibrosis. It was found differences in the groups I and II in comparison with III, IV and V. The stereological analyzes showed significant increase in connective tissue volume 21.56%, 27.60%, 35.67%, 37.56% and 38.60% from group I through V. Conclusions: In this study, it was performed retrieval of spermatozoa in all groups up to five punctures. All the animals presented histological alterations in the epididymis after the second puncture when compared to the control group, except necrosis, and only lymphocytic and plasmocytic infiltrate and fibrosis were shown as cumulative effects within the punctures. The stereological analyses showed increase of connective tissue volume that was caused by the punctures / Doutorado / Cirurgia / Doutor em Cirurgia

Amostras espermáticas provenientes do epidídimo podem ser utilizadas com diversas finalidades tais como: modelo experimental para pesquisa com sêmen, aproveitamento do sêmen de animais de alto valor genético que vierem a óbito e possibilidade da coleta e aproveitamento do sêmen de animais em perigo de extinção. No entanto, para a utilização desta técnica é necessário o estudo de diversos fatores que poderiam influenciar sua eficiência, como por exemplo, as formas de armazenamento dos testículos, efeitos da criopreservação, diluidores utilizados, entre outros. O presente estudo teve como objetivos: 1- determinar a temperatura mais adequada para o armazenamento do testículo após o abate do animal (4 ou 34ºC) levando-se em consideração testes funcionais e fecundação in vitro; 2- avaliar o efeito desta temperatura de armazenamento no sêmen epididimário fresco e criopreservado e; 3- verificar a eficiência do tratamento com ácido decosaexanóico (DHA) e antioxidantes adicionados ao diluidor. Para isso, amostras espermáticas foram coletadas da cauda do epidídimo de touros provenientes de abatedouros. Para testar o efeito da temperatura de acondicionamento dos testículos, os mesmos foram armazenados entre 2 e 4 horas após o abate, à temperatura de 4 ou 34º C. O sêmen foi então coletado da cauda do epidídimo, submetido ou não à criopreservação e avaliado quanto a análise computadorizada da motilidade espermática (CASA), integridade de membrana e potencial mitocondrial (iodeto de propídeo, SYBR e JC1), fertilização in vitro e susceptibilidade ao estresse oxidativo (TBARS). Visto que os resultados deste experimento indicaram que a temperatura de 4ºC era a mais indicada, a mesma foi utilizada para a avaliação do efeito da suplementação com DHA e antioxidantes adicionados ao diluidor. Nesta fase, o sêmen foi avaliado quanto à integridade de membrana e acrossomo (eosina/nigrosina e fast green/rosa bengala, respectivamente), atividade mitocondrial (diaminobenzidina), integridade do DNA (ensaio da estrutura da cromatina espermática SCSA) e susceptibilidade ao estresse oxidativo (TBARS). Os resultados do presente estudo indicam que o tratamento com o DHA tornou os espermatozóides mais susceptíveis aos danos causados pelo estresse oxidativo. Por outro lado, resultados diversos foram encontrados com a associação entre DHA e antioxidantes. A associação entre DHA e superóxido dismutase (SOD) e DHA e glutationa reduzida (GSH) apresentaram os melhores resultados em relação à motilidade espermática e à integridade de membrana, respectivamente. No entanto, o DHA, quando associado à Vitamina E, apresentou resultados negativos para a atividade mitocondrial. Os resultados do presente estudo indicam que o tratamento com DHA e SOD ou DHA e GSH em amostras espermáticas coletadas de epidídimos armazenados a 4ºC por até 4 horas, pode melhorar a qualidade espermática pós criopreservação. / Sperm recovery from the cauda epididymis can be very advantageous, for example: in case of the unexpected death of a genetically highly valuable animal, as an experimental model for research on semen and for the use in endangered species. However, the efficiency of this technique demands the study of several issues such as the storage conditions of the testicles prior semen collection, the effects of cryopreservation and semen extenders, among others. The objective of the present study was: 1- to evaluate the ideal temperature for testicles storage after slaughter (4 or 34ºC) based on functional tests and on in vitro fertility; 2- to evaluate the effect of storage temperature on fresh and cryopreserved semen samples, and; 3- to test the addition of decosaexanoic acid (DHA) and antioxidants to the semen extender. Sperm samples were collected from the caudae epididymides of testicles collected from abattoirs. To test the effect of temperature of storage, testicles were kept under 4 or 34ºC, between two to four hours after slaughter. Semen was then collected from the caudae epididymides and cryopreserved or not. Samples were then evaluated for computer assisted sperm analysis (CASA), membrane integrity and mitochondrial potential (propidium iodide, SYBR and JC1), in vitro fertilization outcomes, and susceptibility to the oxidative stress (TBARS). Results of this study indicated that, with no doubt, storage of testicles under 4ºC is the most appropriate in order to improve post-thaw sperm quality and in vitro fertility. Therefore, this temperature was used in the rest of the study to test the effect of DHA and antioxidant treatments to the semen extender. In this part of the study, semen was evaluated for membrane and acrosome integrities (eosin/nigrosin and fast green/bengal rose stain, respectively), mitochondrial activity (diaminobenzidine stain), DNA integrity (sperm chromatin structure assay SCSA) and, sperm susceptibility to the oxidative stress (TBARS). Results of the present study indicate that due to the treatment with DHA, epididymal sperm became more susceptible to the oxidative stress. On the other hand, different results were found regarding the association between DHA and antioxidant. The association between DHA and superoxide dismutase (SOD) and between DHA and reduced glutathione (GSH) showed better results on sperm motility and membrane integrity, respectively. On the other hand, when associated to the Vitamin E, the DHA showed poor results on mitochondrial activity. Results of the present study indicate that the treatment with DHA and SOD or GSH to epididymal sperm samples collected from testicles stored at 4ºC for up to 4 hours, may improve post-thaw sperm quality.

A ema (Rhea americana americana) é uma ave que pertence ao grupo das Ratitas, ordem Rheiforme e a família Rheidae. Neste trabalho foram analisadas as características morfológicas, macroscópicas e microscópicas, dos órgãos do aparelho reprodutor masculino (testículos, epidídimos, ductos deferentes e falo) e a cloaca em 23 emas, quatro filhotes com duas semanas, sete jovens (de três a oito meses) e doze adultas (três anos), provenientes do abatedouro da Cooperativa Emas do Brasil, RS e do CEMAS, Mossoró, RN. Fragmentos de cada órgão foram fixados por imersão em formoldeído 10%, tampão fosfato pH 7,4, 0,1M ou em solução de Karnovsky (paraformoldeído 4% e glutaraldeído 2,5%, tampão fosfato pH 7,4, 0,1M) e processados na rotina para microscopia de luz e eletrônica de varredura, respectivamente. Os testículos da ema possuem formato alongado e localizam-se na cavidade celomática, na região intra-abdominal dorsal, com comprimento e largura médias de 7,6 ± 1,2 cm e 2,6 ± 0,7 cm nos adultos; 4,5 ± 1,5 cm e 0,9 ± 0,4 cm nos jovens; e 0,8 ± 0,3 cm, e 0,2 ± 0,1 cm nos filhotes. O testículo está envolto pela túnica albugínea e seu parênquima possui túbulos seminíferos, compostos por epitélio espermatogênico e por células de sustentação, e pelo tecido intersticial, com as células endócrinas intersticiais, tecido conjuntivo frouxo e vasos. Nos adultos observaram-se todas as células da linhagem espermatogênica, enquanto nos jovens com 3 meses os testículos apresentaram túbulos seminíferos com luz reduzidas, espermatogônia e células de sustentação indiferenciadas. O epidídimo apresentou-se alongado e fusiforme junto a margem medial do testículo. Os ductos eferentes possuem um epitélio pseudoestratificado colunar ciliado baixo, enquanto no ducto epididimário o epitélio é alto. O ducto deferentes apresentou trajeto sinuoso nos adultos, retilíneo nos jovens, convoluto na sua porção média, diminuindo seu formato sigmóide em sua porção caudal, próximo à cloaca. O epitélio é pseudoestratificado reveste a luz irregular nos adultos, e circular nos jovens, mantendo proximidade com o ureter. A cloaca dividiu-se em três segmentos: o coprodeu, o urodeo e o proctodeo. No urodeu os ductos deferentes desembocaram em papilas na parede ventro-lateral, próximo a inserção do falo fibroso. O falo é um órgão fibroso linfático, localizado na parede ventral, no assoalho da cloaca, e apresentou duas porções: uma rígida bifurcada e contorcida, e outra simples espiralada e flexível, a qual normalmente esteve invertida. De forma geral os órgãos reprodutores das emas compartilharam da morfologia de outras aves, principalmente aquelas descritas para os avestruzes. / The ema (Rhea american american) is a bird that belongs to the group of the Ratitas, order Rheiforme and family Rheidae. At this study were analyzed the morphological characteristics, macroscopic and microscopic, of the male genital organ (testes, epididymis, deferent ducts, and fhallus) and the cloaca in 23 emas, four chicken (two weeks old), young witer three to ten months old and twelve adult animals (three years old), originating from Cooperativa Emas do Brasil, RS and also from CEMAS, Mossoró, RN. Slices from each organ were fixed by immersion in phorformaldehyde 10%, or in Karnovsky solution (phorformaldehyde 10%, buffer phosphate pH 7.4, 0.1M and glutaraldehyde 2.5% buffer phosphate pH 7.4, 0.1M) and processed for light and scanning microscopy, respectively. The testis of rhea had elongated shape and were located inside coelomatic cavity, in dorsal region of abdominal cavity, with medium length and width of 7.6 ± 1.2 cm and 2.6 ± 0.7 cm at adult animals; 4.5 ± 1.5 cm and 0.9 ± 0.4 cm at young animals; and 0.8 ± 0.3 cm, and 0.2 ±0.1 cm at chicken. The testis were recovered by the tunica albuginea and its parenchyma had seminiferous tubules composed by spermatogenic epithelium and by sustentation cells, and also interstitial tissue, with interstitial endocrine cells, connective tissue and vessels. At the adult animals were observed all the cells from spermatogenic lineage, whilst at the youngs with 3 months the seminiferous tubules had a smale lumen with spermatogonia and undifferentiated sustentacular cells. The epididymis was elongated and fusiform closely to medial testis board. The efferents ductus were composed by a low ciliated pseudoestratified epithelium, while the epididimydis duct had a light epithelium. The deferent duct had sinuous stretch at adult animals, rectilineae at young animal, convolute at its medium portion, decreasing its sigmoid shape at caudal portion, next to cloaca. The epithelium was pseudostratified ciliated, irregular lumen at adult animal, and circular at young animal, closely with urether. The cloaca was divided into three segments: coprodeum, urodeum and proctodeum. At urodeum the deferent ducts discharged into papillas at the ventral side wall, next to fibrous phallus`s insertion. The phallus was a lymphatic fibrous organ, located at ventral wall, at the cloaca floor, and was composed by two portions: one rigid forked and twisted, and another simple spiraled and flexible, which normally was inverted. In a general way the Rhea genital organs shared the morphology from others birds, mainly those described to the ostrich.

Foram utilizados dez jacarés - do - Pantanal (Caiman crocodylus yacare), machos de faixa etária juvenil; sete espécimes foram destinados ao estudo macroscópico e os outros três foram utilizados para o estudo microscópico de luz. Após a abertura da cavidade pleuroperitoneal foi observado e identificado que os testículos são em pares e apresentam-se aderidos a parede dorsal da cavidade pleuroperitoneal. O epidídimo é alongado e muito enovelado, encontra-se na extremidade cranial do testículo, seguindo medialmente até sua extremidade caudal, onde inicia-se com o ducto deferente e posterior abertura na cloaca. O falo tem um formato tubular de aspecto cônico, mostrando ser um órgão com breve resistência, porém é flexível e possuem características de tecido cartilaginoso. Na microscopia de luz foi observada que, o testículo é limitado pela túnica albugínea. Os túbulos seminíferos são extremamente contorcidos e em seus espaços estão preenchidos por tecido intersticial e células de Leydig. Encontram-se na rede testicular túbulos revestidos por epitélio cubóide. Os ductos do epidídimo são revestidos pelo epitélio pseudo-estratificado não ciliado que variam entre células cúbicas e prismáticas. Os ductos deferentes caracterizam-se por apresentar uma luz estreita revestida pelo epitélio pseudo-estratificado prismático não ciliado. O falo é revestido pelo epitélio estratificado escamoso não queratinizado e envolto por tecido conjuntivo. / Ten Young-aged male Pantanal alligators (Caiman crocodylus yacare) were used; seven specimes were destinated to macroscopic study and the other three were used in the study of light microscopy. After the opening of the pleuroperitoneal cavity, we observed and identified that testes are in pairs and adhered to the dorsal wall of the pleuroperitoneal cavity. The epididymis is long and very convoluted. It is found in the cranial extremity of the testis, following medially until its caudal extremity, where it is initiated with ductus deferens and posterior opening in the phallus. Phallus has a tubular shape in conic aspect showing to be an organ with little resistence, but it is flexible and has features of cartilaginous tissue. In the light microscopy we observed that the testis is limited by the tunica albuginea. The seminiferous tubules are extremely convoluted and its spaces are filled with intersticial tissue and Leydig cells. Tubule lined with cuboidal epithelium are found in the rete testis. The ductus epididymus are lined with by non-ciliated pseudostratified epithelium to columnar cells. Ductus deferens show a very narrow light lined by the non-ciliated columnar pseudostratified epithelium. Phallus is lined by the non-keratinized stratified squamous epithelium and connective tissue.