Orientador: Maria Luiza Silveira Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T15:22:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Grazziotin_NeivaAparecida_M.pdf: 2050916 bytes, checksum: 1f07c979d1e88da18d14b11bc6162c9a (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Esta investigação teve por objetivo detectar e caracterizar a freqüência de fenômenos de morte celular programada (MCP) em eritrócitos nucleados, tendo por justificativa o fato de que a concentração crítica de eletrólitos (CEC) na cromatina de eritrócitos de frango é variada, sugerindo alterações nos complexos DNAproteína de parte da população celular. Eritrócitos de ftango, pombo e rã foram analisados por citoquímica e pelo método imunocitoquímico de TUNEL para avaliação de MCP. Os resultados indicaram que a maioria da população celular se encontrava em alguma fase ativa do processo de MCP, evidenciado especialmente pela variada intensidade de resposta nuclear ao método de TUNEL e que é sugestiva de alterações químicas e de estereoarranjamento nos complexos DNA-proteína desses núcleos. A alta freqüência de MCP revelada pelo método de TUNEL estaria de acordo com os dados reportados de CEC na cromatina de eritrócitos de frango. A resposta mais intensa ao método de TUNEL nos eritrócitos de rã em relação às aves pode estar associada ao tempo de vida mais curto dos primeiros e a variantes em histona H5, que fariam com que o acesso do DNA à fragmentação por endonucleases e, conseqüentemente, ao método imunocitoquímico fossem diferentes / Abstract: The objective of this investigation is to detect and characterize the frequency of programmed cell death (PCD) phenomena in nucleated erythrocytes, having as justification the fact that the critical electrolyte concentration (CEC) in chicken erythrocytes chromatin is varied, suggesting alterations in the DNA-protein complexes in part of the cellular population. Chicken, pigeon and frog erythrocytes have been analyzed by cytochemistry and immunocytochemical TUNEL assay for PCD avaluation. The results have shown that the majority of cellular population was in some active phase of PCD process, evidenced especially by the varied intensity of nuclear response to the TUNEL assay and which suggests chemical and stereoarrangement alterations in the DNA-protein complexes of these nuclei. The high frequency of PCD revealed by the TUNEL assay would be in agreement with the reported CEC data in chicken erythrocyte chromatin. The most intense response to the TUNEL assay in frog erythrocytes regarding fowls can be associated with a shorter life span of the former and the histone H5 variants which would cause the DNA access to fragmentation by endonucleases and, consequently, to the immunocytochemical assay, to be different / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-16T04:10:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Grotto_HelenaZerlottiWolf_M.pdf: 1514958 bytes, checksum: affb7bfc731d3268684e605443d4f76a (MD5) Previous issue date: 1987 / Resumo: A avaliação da função esplénica foi levada a efeito em 59 pacientes com anemia falciforme, 10 portadores de hemoglobinopatia SC, 4 Sß+ talassêmicos e 14 Sߺ talassêmicos, através da contagem de hemácias com irregularidades de superfície ("pits") a microscopia de contraste de interferência. Adicionalmente em 22 pacientes foi analisada a curva de depuração de hemácias autólogas lesadas pelo calor e marcadas com Cr51. Os pacientes com anemia falciforme mostraram valores de contagem de "pits" de 20,81% ± 10,30, próximos aos indivíduos esplenectomizados (34,96% ± 10,85) e significativamente superiores aos controles normais (0,66 ± 0,54). Nos portadores de hemoglobinopatia SC (10,56 ± 8,44) e Sߺ talassêmicos (14,19 ± 12,84) foram observadas contagens intermediárias entre o grupo normal e os com anemia falciforme. As contagens de hemácias com "pits" não detectaram hiperatividade esplénica, conforme resultados obtidos em 3 pacientes com esplenomegalia, portadores de esquistossomose. Esses pacientes revelaram contagens de hemácias com "pits" semelhantes aos controles normais e rápida depuração de hemácias lesadas e marcadas com Cr51. As correlações entre contagens de hemácias com "pits", idade dos pacientes, dosagem de Hb fetal e porcentagens de células irreversivelmente falcizadas mostraram correlação estatística. Em seu conjunto os dados obtidos nesse trabalho comprovam que no grupo de pacientes estudados a hipofunção esplênica é mais freqüente e provavelmente de aparecimento mais precoce nos pacientes com anemia faleiforme e Sߺ talassemia quando comparados aos com hemoglobinopatia SC, em que as alterações da função esplênicas são mais discretas. Além disso, o pequeno número de pacientes Sß+ talassêmicos estudados apresentou significativa redução na atividade funcional do baço, comparável àquela encontrada nos esplenectomizados. / Abstract: Splenic function was carried out in 59 patients with sickle cell anemia, 10 patients with SC hemoglobinopathy , 4 with Sß+ thalassemia and 14 Sߺ thalassemia, by counting the number of erythrocytes with pits by using interference phase contrast microscopy. In 22 patients red cell life-span was also measured using autologous heat-damaged erythrocytes labeled with Cr51. The patients with sickle cell anemia showed 20,81% ± 10,30 of erythrocytes with pits, values similar to splenectomized patients (34,96% ± 10,85) and significantly higher than normal controls (0,66% ± 0,54). The patients with SC hemoglobinopathy and with Sߺ thalassemia showed intermediate values (10,56% ± 8,44 and 14,19 ± 12,84 respectively). Pits couting did not detect splenic hyperactivity, as analysed in 3 patients with schistosomiasis and splenomegaly. These showed pits counts similar to normal controls, and a rapid clearance of labeled red cells. Statistically significant, correlation was found among pits count and age of patients, foetal hemoglobin level, and percentage of irreversibly sickled red cells. Our results show that a depressed splenic function is more frequent and probably apears earlier in patients with sickle cell anemia and Sߺ thalassemia as compared with the SC hemoglobinopathy. In these last hemoglobinopathy changes are milder. Besides that, the small number of Sߺ thalassemia patients studied showed significant diminished splenic activity function, as compared with splenectomized patients. / Mestrado / Mestre em Ciências Médicas

Orientador : Antonio Sergio Ramalho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T14:14:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sena_LedaLuziaAlvesde_D.pdf: 2207879 bytes, checksum: 732092d12db9c458ec5660a5c0df9019 (MD5) Previous issue date: 1983 / Resumo: Apesar de a deficiência da desidrogenase de 6-fosfato de glicose (G6-PD) ser uma alteração genética freqüente em populações brasileiras, ainda se dispõe de poucas informações a respeito do significado clínico dessa enzimopenia em nosso meio. Assim sendo, pretendeu-se com o presente trabalho iniciar o estudo sistemático da deficiência de G6-PD na região de Campinas, SP, investigando vários aspectos dessa enzimopenia importantes do ponto de vista genetico-clínico. Para tanto, a deficiência de G6-PD foi investigada em uma amostra de 3.339 indivíduos do sexo masculino residentes na região de Campinas, representados por doadores de sangue, pacientes internados em hospitais e hansenianos medicados com sulfona. Foram detectados 104 deficientes de G6-PD, a partir dos quais foram investigados os objetivos propostos) ou seja: 1) verificar a validade do uso do teste de redução da metemoglobina (BREWER et al., 1962) na identificação da deficiência de G6-PD, já que esse teste, por ser simples e econômico, ê passível de ser usado em larga escala em nossas populações; 2) caracterizar uma amostra de deficientes de G6-PD detectados na região de Campinas quanto á sua procedência e grau de exposição a fatores potencialmente hemolíticos do meio ambiente; 3) avaliar a morbidade da enzimopenia em nosso meio: a) verificando a freqüência de antecedentes sugestivos de hemólise em uma amostra de deficientes, comparando-a com a de um grupo controle; b) investigando clínica e laboratorialmente uma amostra de deficientes que já estavam sendo submetidos, no momento da detecção, à terapêutica potencialmente hemolítica, ou seja uma amostra de hansenianos medicados com diaminodifenilsulfona (DDS); 4) caracterizar uma amostra de deficientes quanto às variantes de G6-PD; 5) investigar as conseqüências clínicas da transfusão sangues deficientes de G6-PD; 6) verificar a eventual associação entre a deficiência G6-PD e a hemoglobina S. Para atender a esses objetivos, os enzimopênico seus controles normais e pacientes transfundidos com sangues deficientes de G6-PD foram submetidos a vários exames clínicos e/ ou laboratoriais, que permitiram à autora chegar às seguintes conclusões:1 ) O teste de redução da metemoglobina é um método confiável de triagem dos deficientes de G6-PD, desde que observados os pré-requisito necessários para a realização desse exame. Não foram observados no presente trabalho os casos falsamente deficientes de G6-PD referidos por BAPAT et al.(1976), razão pela qual não se constatou nenhuma vantagem em modificar esse teste ou em substituí-lo por outros exames mais dispendiosos, como o teste do descaramento do azul cresil brilhante; 2) grande parte dos deficientes de G6-PD na região de Campinas são imigrantes, oriundos, sobretudo, dos Estados Nordestinos e de Minas Gerais; 3) os deficientes de G6-D na região de Campinas mantêm contato freqüente com fatores ambientes capazes de desencadear hemólise, tais como a naftalina, a sulfa e outros medicamentos. A intensidade de contato dos enzimopênicos com essas substâncias, no entanto, parece ser insuficiente para desencadear, na maioria dos casos, hemólise importante; 4) a maioria dos deficientes de G6-PD da região de Campinas, sejam negróides ou caucasóides, apresenta a variante A- dessa enzima, mais benigna do ponto de vista clínico; 5) a deficiência de G6-PD não determina o aparecimento de alterações clinicas graves na maioria dos enzimopênicos da região de Campinas. Assim sendo, essa enzimopenia não deve constituir um problema de Saúde Pública em nosso meio, embora, seja importante a nível individual e familial, já que não pode ser excluída a possibilidade de um ou outro deficiente manifestar, esporadicamente, complicações clinicas graves, ou até mesmo fatais; 6) na maioria das transfusões de sangues deficientes de G6-PD realizadas em nosso meio não devem ocorrer complicações hemolíticas importantes no receptor. Isso talvez se deva ao fato de a maioria dos doadores de sangue apresentar a variante A-de G6-PD. Aqui também é importante ressaltar que a possibilidade de ocorrência de reações pós-transfusionais graves em casos esporádicos do uso de sangues deficientes de G6PD não está excluída, sobretudo se o doador apresentar a variante Mediterrânea e o receptor estiver sendo medicado com drogas incompatíveis; 7) a deficiência de G6-PD não deve estar associada, em nosso meio, à hemoglobina S / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Os níveis de DHEA atingem seu pico entre a segunda e a terceira décadas de vida, e então começam a diminuir em torno de 2% ao ano. A diminuição da DHEA associada ao envelhecimento pode levar a doenças autoimunes, disfunção sexual, osteoporose, alteração do metabolismo de lipídios, diabetes tipo 2 e doenças cardiovasculares. Tais observações sugerem que o restabelecimento de DHEA aos níveis encontrados em jovens adultos pode ter efeitos benéficos nos distúrbios relacionados à idade. Muitas hipóteses têm sido propostas para o envelhecimento cardíaco, incluindo o acúmulo de radicais livres. Neste estudo objetivou-se determinar o papel da DHEA sobre o estresse oxidativo (tecido cardíaco e eritrócitos), por meio de medidas de dano oxidativo e de defesas antioxidantes enzimáticas e não-enzimáticas, correlacionando-o com vias de sinalização, em diferentes etapas do envelhecimento de ratos Wistar machos sadios. No primeiro artigo, avaliamos os efeitos de diferentes concentrações de DHEA em distintas janelas temporais sobre o estresse oxidativo e sua relação com a ativação da Akt no miocárdio de ratos adultos (3 meses). A DHEA produziu diferenças significativas entre as diferentes janelas temporais sobre os parâmetros estudados, com uma resposta com perfil prooxidante no miocárdio dos ratos adultos. No segundo artigo, avaliamos os efeitos da administração crônica de DHEA sobre o estresse oxidativo e sua relação com a ativação da Akt no miocárdio de ratos jovens e velhos (3 e 18 meses). A DHEA produziu aumento na fosforilação da Akt e diminuiu a atividade da SOD nas duas idades estudadas. A ativação da via da Akt parece estar relacionada com mudanças nos parâmetros de estresse oxidativo, de acordo com a idade investigada. A administração crônica de DHEA sobre o estresse oxidativo nos eritrócitos de ratos de diferentes idades (3, 13 e 18 meses) foi o objetivo do terceiro artigo, e como resultado a DHEA produziu efeito prooxidante sobre todas as idades, especialmente na idade de 13 meses. Parece que aos 13 meses há uma importante depleção de alguns antioxidantes específicos, que pode ter evidenciado os efeitos da DHEA. No último artigo avaliamos os efeitos da administração crônica de DHEA sobre o estresse oxidativo no coração de ratos jovens e velhos (3 e 24 meses), verificamos se tais mudanças estariam associadas às alterações no estado redox e correlacionamos a concentração de peróxido de hidrogênio à possível modulação da expressão de proteínas redox-sensíveis. A DHEA aumentou significativamente a atividade da GST no miocárdio dos grupos 3 e 24 meses. O fator idade diminuiu a concentração de peróxido de hidrogênio e a concentração proteica de Nrf2, independentemente do tratamento. Entretanto, a idade aumentou as concentrações de GST, Akt e p-Akt em ambos os grupos de 24 meses. O grupo 24 meses tratado com DHEA respondeu diferentemente considerando as medidas de GSSG, a atividade da GPx e a concentração da p-Akt. Os resultados obtidos por meio destes experimentos indicam um cenário em que a DHEA parece modular proteínas redox-sensíveis, bem como exerce diferentes efeitos em relação ao estresse oxidativo dependendo da idade. O uso indiscriminado deste hormônio poderia alterar vias redox-sensíveis de maneira a produzir adaptações inadequadas ou não necessariamente benéficas ao organismo.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Pós-Graduação em Nanociência e Nanobiotecnologia, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-04-07T17:08:45Z No. of bitstreams: 1 2017_DouglasRodriguesCavalcanti.pdf: 13176012 bytes, checksum: b31b14a830f51259879b50ff467a194b (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2017-04-20T12:44:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_DouglasRodriguesCavalcanti.pdf: 13176012 bytes, checksum: b31b14a830f51259879b50ff467a194b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-20T12:44:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_DouglasRodriguesCavalcanti.pdf: 13176012 bytes, checksum: b31b14a830f51259879b50ff467a194b (MD5) / Manchas de sangue estão entre os vestígios mais recorrentes em cenas de crime. Estabelecer o tempo desde a deposição (time since deposition - TSD) dessas manchas, pode constituir o primeiro indício dos investigadores forenses acerca do momento em que um crime foi cometido. O sangue inicia o processo de envelhecimento a partir do momento em que sai do corpo humano e entra em contato com o ambiente físico. As propriedades biofísicas (morfologia e elasticidade) das hemácias (RBCs) sofrem uma série de mudanças, muitas das quais podem ser avaliadas utilizando técnicas microscópicas como a microscopia de força atômica (MFA). O objetivo geral do estudo foi avaliar por MFA e espectroscopia de força o processo de envelhecimento associado às possíveis modificações das características das RBCs em manchas de sangue, determinando se há algum padrão de transformação temporal. Os resultados qualitativos demonstraram que não há diferença morfológica na estrutura da RBC, quando do exame de imagens de MFA pela simples comparação visual, durante o período de 28 dias de análise aplicado no estudo. Entretanto, os resultados quantitativos, pelas análises micro- e nanométricas de MFA, demonstraram a tendência de aumento linear das medidas médias, tais como área da superfície e volume dessas células durante esse período, quando a mancha de sangue foi depositada sobre superfície de vidro e mantida sob condição ambiental não controlada. Observou-se também que a variação da temperatura e da umidade pode alterar a avaliação dessas medidas médias durante a estimativa do TSD. O tipo de superfície para deposição de mancha de sangue deve ser levado em consideração durante análises para o cálculo temporal, e os resultados obtidos sobre os suportes de vidro, metal e cerâmica evidenciaram diferenças significativas nas medidas das RBCs. A superfície de metal apresentou valores maiores, quando comparado com as outras duas superfícies. Para avaliar a possibilidade de aplicação dos dados obtidos, pelo padrão temporal das RBCs foram utilizados mapas auto-organizáveis de Kohonen (Self-Organizing Maps – SOM). Apesar das observações aqui obtidas, a utilização da MFA, durante levantamentos periciais em locais de crime, ainda requer a ampliação e o desenvolvimento de estudos científicos para a determinação de um método capaz de avaliar, com precisão, o TSD de manchas de sangue. / Bloodstains are among the most recurring traces in crime scenes. Establishing the time since deposition (TSD) of these spots may be the first clue of forensic investigators as to when a crime was committed. The blood starts the aging process from the moment it leaves the human body and comes into contact with the physical environment. The biophysical properties (morphology and elasticity) of red blood cells (RBCs) undergo a series of changes, many of which can be evaluated using microscopic techniques such as atomic force microscopy (AFM). The overall aim of the study was to evaluate by AFM and force spectroscopy the aging process associated with possible modifications of the characteristics of RBCs in blood spots, determining if there is any pattern of temporal transformation. The qualitative results demonstrated that there is no morphological difference in the structure of the RBC when examining AFM images by simple visual comparison during the 28 day period of analysis applied in the study. However, the quantitative results, by micro- and nanometric analyses of AFM, demonstrated the linear increase trend of the average measurements, such as surface area and volume of these cells during that period, when the blood stain was deposited on glass surface and maintained under uncontrolled environmental conditions. It was also observed that the variation of temperature and humidity may alter the evaluation of these mean measurements during the estimation of TSD. The type of surface for blood stain deposition should be taken into account during analyzes for the temporal calculation, and the results obtained on glass, metal and ceramic supports showed significant differences in RBC measurements. The metal surface presented higher values when compared to the other two surfaces. Kohonen's self-organizing maps (SOM) were used to assess the possibility of applying the data obtained by the temporal pattern of RBCs. In spite of the observations obtained, the use of AFM in crime scenes still requires the expansion and development of more scientific studies to determine the method capable of evaluating the TSD in blood spots.

Os níveis de DHEA atingem seu pico entre a segunda e a terceira décadas de vida, e então começam a diminuir em torno de 2% ao ano. A diminuição da DHEA associada ao envelhecimento pode levar a doenças autoimunes, disfunção sexual, osteoporose, alteração do metabolismo de lipídios, diabetes tipo 2 e doenças cardiovasculares. Tais observações sugerem que o restabelecimento de DHEA aos níveis encontrados em jovens adultos pode ter efeitos benéficos nos distúrbios relacionados à idade. Muitas hipóteses têm sido propostas para o envelhecimento cardíaco, incluindo o acúmulo de radicais livres. Neste estudo objetivou-se determinar o papel da DHEA sobre o estresse oxidativo (tecido cardíaco e eritrócitos), por meio de medidas de dano oxidativo e de defesas antioxidantes enzimáticas e não-enzimáticas, correlacionando-o com vias de sinalização, em diferentes etapas do envelhecimento de ratos Wistar machos sadios. No primeiro artigo, avaliamos os efeitos de diferentes concentrações de DHEA em distintas janelas temporais sobre o estresse oxidativo e sua relação com a ativação da Akt no miocárdio de ratos adultos (3 meses). A DHEA produziu diferenças significativas entre as diferentes janelas temporais sobre os parâmetros estudados, com uma resposta com perfil prooxidante no miocárdio dos ratos adultos. No segundo artigo, avaliamos os efeitos da administração crônica de DHEA sobre o estresse oxidativo e sua relação com a ativação da Akt no miocárdio de ratos jovens e velhos (3 e 18 meses). A DHEA produziu aumento na fosforilação da Akt e diminuiu a atividade da SOD nas duas idades estudadas. A ativação da via da Akt parece estar relacionada com mudanças nos parâmetros de estresse oxidativo, de acordo com a idade investigada. A administração crônica de DHEA sobre o estresse oxidativo nos eritrócitos de ratos de diferentes idades (3, 13 e 18 meses) foi o objetivo do terceiro artigo, e como resultado a DHEA produziu efeito prooxidante sobre todas as idades, especialmente na idade de 13 meses. Parece que aos 13 meses há uma importante depleção de alguns antioxidantes específicos, que pode ter evidenciado os efeitos da DHEA. No último artigo avaliamos os efeitos da administração crônica de DHEA sobre o estresse oxidativo no coração de ratos jovens e velhos (3 e 24 meses), verificamos se tais mudanças estariam associadas às alterações no estado redox e correlacionamos a concentração de peróxido de hidrogênio à possível modulação da expressão de proteínas redox-sensíveis. A DHEA aumentou significativamente a atividade da GST no miocárdio dos grupos 3 e 24 meses. O fator idade diminuiu a concentração de peróxido de hidrogênio e a concentração proteica de Nrf2, independentemente do tratamento. Entretanto, a idade aumentou as concentrações de GST, Akt e p-Akt em ambos os grupos de 24 meses. O grupo 24 meses tratado com DHEA respondeu diferentemente considerando as medidas de GSSG, a atividade da GPx e a concentração da p-Akt. Os resultados obtidos por meio destes experimentos indicam um cenário em que a DHEA parece modular proteínas redox-sensíveis, bem como exerce diferentes efeitos em relação ao estresse oxidativo dependendo da idade. O uso indiscriminado deste hormônio poderia alterar vias redox-sensíveis de maneira a produzir adaptações inadequadas ou não necessariamente benéficas ao organismo.

Os níveis de DHEA atingem seu pico entre a segunda e a terceira décadas de vida, e então começam a diminuir em torno de 2% ao ano. A diminuição da DHEA associada ao envelhecimento pode levar a doenças autoimunes, disfunção sexual, osteoporose, alteração do metabolismo de lipídios, diabetes tipo 2 e doenças cardiovasculares. Tais observações sugerem que o restabelecimento de DHEA aos níveis encontrados em jovens adultos pode ter efeitos benéficos nos distúrbios relacionados à idade. Muitas hipóteses têm sido propostas para o envelhecimento cardíaco, incluindo o acúmulo de radicais livres. Neste estudo objetivou-se determinar o papel da DHEA sobre o estresse oxidativo (tecido cardíaco e eritrócitos), por meio de medidas de dano oxidativo e de defesas antioxidantes enzimáticas e não-enzimáticas, correlacionando-o com vias de sinalização, em diferentes etapas do envelhecimento de ratos Wistar machos sadios. No primeiro artigo, avaliamos os efeitos de diferentes concentrações de DHEA em distintas janelas temporais sobre o estresse oxidativo e sua relação com a ativação da Akt no miocárdio de ratos adultos (3 meses). A DHEA produziu diferenças significativas entre as diferentes janelas temporais sobre os parâmetros estudados, com uma resposta com perfil prooxidante no miocárdio dos ratos adultos. No segundo artigo, avaliamos os efeitos da administração crônica de DHEA sobre o estresse oxidativo e sua relação com a ativação da Akt no miocárdio de ratos jovens e velhos (3 e 18 meses). A DHEA produziu aumento na fosforilação da Akt e diminuiu a atividade da SOD nas duas idades estudadas. A ativação da via da Akt parece estar relacionada com mudanças nos parâmetros de estresse oxidativo, de acordo com a idade investigada. A administração crônica de DHEA sobre o estresse oxidativo nos eritrócitos de ratos de diferentes idades (3, 13 e 18 meses) foi o objetivo do terceiro artigo, e como resultado a DHEA produziu efeito prooxidante sobre todas as idades, especialmente na idade de 13 meses. Parece que aos 13 meses há uma importante depleção de alguns antioxidantes específicos, que pode ter evidenciado os efeitos da DHEA. No último artigo avaliamos os efeitos da administração crônica de DHEA sobre o estresse oxidativo no coração de ratos jovens e velhos (3 e 24 meses), verificamos se tais mudanças estariam associadas às alterações no estado redox e correlacionamos a concentração de peróxido de hidrogênio à possível modulação da expressão de proteínas redox-sensíveis. A DHEA aumentou significativamente a atividade da GST no miocárdio dos grupos 3 e 24 meses. O fator idade diminuiu a concentração de peróxido de hidrogênio e a concentração proteica de Nrf2, independentemente do tratamento. Entretanto, a idade aumentou as concentrações de GST, Akt e p-Akt em ambos os grupos de 24 meses. O grupo 24 meses tratado com DHEA respondeu diferentemente considerando as medidas de GSSG, a atividade da GPx e a concentração da p-Akt. Os resultados obtidos por meio destes experimentos indicam um cenário em que a DHEA parece modular proteínas redox-sensíveis, bem como exerce diferentes efeitos em relação ao estresse oxidativo dependendo da idade. O uso indiscriminado deste hormônio poderia alterar vias redox-sensíveis de maneira a produzir adaptações inadequadas ou não necessariamente benéficas ao organismo.

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T13:04:03Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Carlos Lima da Silva.pdf: 834149 bytes, checksum: c68f708260a624cc97fb6f06101d8169 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T13:04:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Carlos Lima da Silva.pdf: 834149 bytes, checksum: c68f708260a624cc97fb6f06101d8169 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / Durante o armazenamento em bancos de sangue, os eritrócitos sofrem progressiva deterioração, o que pode comprometer a integridade pós-transfusional de hemácias na circulação sanguínea. Muitas destas lesões de armazenagem podem ser causadas por danos oxidativos nas membranas das hemácias. Alguns estudos relataram que a vitamina E é um dos antioxidantes mais importantes que pode atuar sobre os lipídios das membranas celulares. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar se as propriedades antioxidantes da vitamina E são capazes de melhorar as condições de armazenamento de concentrados de hemácias (CHs). Devido à sua natureza hidrofóbica, foram preparadas emulsões de vitamina E com tensoativos em diferentes solventes (tampão fosfato salino 1X - PBS, 0,9% de solução salina ou Sagmanitol - SAG-M). As caracterizações das emulsões mostraram a presença de partículas na escala nanométrica e confirmaram a presença de vitamina E nas formulações preparadas. Após essa etapa, os CHs foram divididos em duas unidades. Uma delas recebeu as emulsões e a outra foi usada como controle. As formulações foram adicionadas às bolsas de sangue de forma asséptica e, em seguida, os CHs foram armazenados a 4°C. As análises de controle de qualidade realizadas no 35o dia de armazenamento mostraram que emulsões de vitamina E em PBS levavam a hemólise. Os resultados de produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) não mostraram nenhuma diferença entre o sistema com salina e vitamina E quando comparado ao controle. No entanto, o sistema com a vitamina E e SAG-M apresentou diminuição relativa na produção de ROS de pelo menos 35% durante o armazenamento. A elasticidade das hemácias para o sistema com SAG-M foi então medida usando uma pinça óptica e os resultados mostraram que a capacidade de deformação dessas hemácias não diferiu significativamente do controle durante todo o armazenamento. Assim, concluímos que a solubilização da vitamina E em meio aquoso foi eficaz, formando emulsões com gotículas em escala manométrica e mantendo a integridade da vitamina. Quando a emulsão foi formulada em SAG-M houve redução significativa da produção de ROS, mas não houve alteração nas propriedades elásticas das hemácias, provavelmente por a vitamina E atuar como antioxidante principalmente sobre apenas um dos componentes da membrana eritrocitária, os lipídeos.

Orientador: Eneida de Paula / Dissertação (mestrado) - Unversidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-26T18:12:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Prete_PauloSergioCastilho_M.pdf: 7512602 bytes, checksum: 3cde985a4e814dabb7fb0d50b30a4d23 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Surfactantes apresentam efeito concentração dependente sobre membranas de eritrócitos, podendo proteger ou solubilizar essas membranas. Neste trabalho estudamos a interação de surfactantes não-iônicos da série Tween (Polioxietileno-sorbitol) com membranas de eritrócitos humanos. Triton X1O0 (t-octilfenoxi polietoxi etanol), foi usado como controle para os ensaios hemolíticos. Inicialmente fizemos a carActerização físico-auímicA dos surfActAntes atrAvés da determinAção da CMC, e medidAs de lH-RMN, que comprovaram a purezA e composição estruturAI dos surfactantes. Estudos hemolíticos em eritrócitos humAnos (com suspensões de Ht de 5 20%) revelaram que os surfactantes da série Tween (20, 40 e 80) têm efeito protetor e lítico Acima dAS suas respectivAs CMCs (59, 27 e 12 _), enquAnto que com o Triton Xloo estes efeitos ocorrem na faixa dA sua concentrAção micelar críticA (0,25 mM). O ensaio de proteção a hemólise foi feito em condições hipotônicAs (77 mM de NaCI) e o de lise em condições isotônicas. Em Ambos ensAios mediu-se fotometricamente A saída de hemoglobina (Hb), do eritrócito. DAS concentrAções de surfActAnte parA proteção (Cprot), início (csat) e 100% de hemólise (CSOI) determinamos AS razões molares surfActante:lipídio no eritrócito para proteção e lise (RProt, Rsat, Rso respectivamente). Nos ensaios em condições isotônicas medimos também a liberação do I( intracelular (por potenciometria) como um método alternativo de quantificar a hemólise. Assim como as medidas de liberação de Hb, os ensaios de liberação de I( mostraram-se adequados aos estudos hemolíticos. Detectou-se uma estreita correlação entre os valores de csat e esol obtidos pelas duas técnicas, embora a liberação de I( ocorra em concentrações menores de surfactante, indicando que a saída de I( precede a de Hb, na hemólise. Em concentrações muito altas esses surfactantes podem induzir a oxidação da Hb, sendo que o Tween 80 tem maior poder oxidante que os demais da série (Tween 80 > Tween 40 > Tween 20) e o Triton X100 não oxida a Hb. O efeito oxidante do Tween 80 impediu a determinação dos valores de Rso1 em Ht mais altos. O tratamento proposto por Lichtenberg (1985) para a quantificação da razão efetiva surfactante:membrana para solubilização não se mostrou adequado à análise do efeito hemolítico dos surfactantes da série Tween, cujos valores de R são muito altos, caracterizando-os como pouco hemolíticos / Abstract: Surfactants present hemolytic effects and depending on their concentration, they can either protect or solubilize erythrocyte membrane. In this work we have studied the interaction of nonionic surfactants from the Tween series (polyoxyethylenesorbitan) with human erythrocytes membranes. Triton Xl00 (t-octylphenoxypolyethoxyethanol) was used as a control, in hemolytic assays. To assure the purity and structural composition of the surfactants we employed CMC determination and lH-NMR characterization. Hemolytic studies with human erythrocytes (Ht 5 - 20%) showed that surfactants from the Tween series (20,40 and 80) have a protective and Iytic effect upon the membrane above their respective CMCs (59, 27 and 12 _), while Triton Xl00 presents those effects at its CMC range (0,25 mM). The "protection" assays were carried out in a hypotonic media (NaCI 77mM) and the Iysis experiments in isotonic conditions. In both assays Hb release from the erythrocyte was spectrophometrically measured. From the surfactant concentrations for protection (Ol'Ot), onset (csat) and 100% hemolysis (csol) we determined the surfactant:lipid molar ratios for protection and Iysis (RProt, Rsat, R$OI respectively). At isotonic condition we measured also the release of intracelular K'" (by potenciometry) as an alternative method for quantifying hemolysis. As well as Hb release measurements, the assays of K'"-release showed to be quite adequate for the study of hemolysis. There is a good correlation between csat and csol values obtained by the two techniques, although K'"-release occurs at lower surfactant concentrations than Hb-release. In extremely high concentrations, these surfactants induce Hb oxidation, being Tween 80 the one with the highest oxidative power, in comparison to the other Tweens (Tween 80 > Tween 40 > Tween 20). Triton X100 does not oxidise Hb. The oxidative effect of Tween 80 prevented the determination of Rso1 values in the highest Hts. The treatment proposed by Lichtenberg (1985) for the quantification of surfactant:membran ratios for solubilization was not found adequate for the analysis of the hemolytic effect of Tweens, which R values are very high, characterizing them as weak solubilizers / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores : Satie Hatsushika Ogo, Marcio Alberto Torsoni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-31T21:36:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cesquini_Maristela_M.pdf: 4737338 bytes, checksum: 2952df03fdaba0efee2200574902da5b (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Espécies reativas de oxigênio (EROs) são constantemente formadas em células aeróbicas, particularmente nas mitocôndrias de células aeróbicas e nos eritrócitos. Estas EROs, em condições normais, são removidas por um eficiente sistema de detoxificação celular composto principalmente pelas enzimas antioxidantes, glutationa, vitaminas e microelementos. Entretanto, quando a produção de EROs sobrepõem a capacidade do sistema antioxidante, reações deletérias podem ocorrer caracterizando a condição conhecida como estresse oxidativo. Em algumas patologias, tais como anemia falciforme, talassemia e deficiência em glicose-6 fostato desidrogenase, o estresse oxidativo é ainda maior. A anemia falciforme é uma hemoglobinopatia genética caracterizada pelo aumento da geração de ERO, liberação anormal de ferro da Hb e atividade diminuída do sistema antioxidante gerando elevado estresse oxidativo. Diversas terapias têm sido utilizadas no intuito de minimizar os danos oxidativos sofridos por estes indivíduos portadores desta patologia, como a administração de ácido ascórbico e vitamina E. Neste trabalho o efeito de flavonóides, nos processos oxidativos do sangue de indivíduos portadores de anemia falciforme foi investigado. Os flavonóides são compostos amplamente distribuídos na natureza e por estarem presentes em grande quantidade na dieta humana podem ser ingeridos naturalmente; sua atividade antioxidante, antiosteoporótica, anticancerígena, antiinflamatória e antiviral têm sido bem descrita. O efeito dos flavonóides (quercetina e rutina) foi estudado nos processos de oxidação de Hb, ligação de Hb à membrana celular, peroxidação lipídica da membrana eritrocitária e formação de grupos carbonil de proteínas no sangue de indivíduos normais e portadores de anemia falciforme. Em geral, o nível de danos oxidativos encontrados no sangue de indivíduos falcêmicos foi maior do que no sangue de indivíduos normais, diferindo apenas nos experimentos de oxidação de Hb, nos quais os resultados foram semelhantes para ambas as Hb, este fato talvez se deva a presença de grande quantidade de Hb A, proveniente da transfusão, no sangue deStes pacientes. A quercetina mostrou maior efeito antioxidante em todos os experimentos. A rutina comportou-se como pró-oxidante na oxidação da Hb quando utilizada em concentrações inferiores a 150 _M, mostrando um efeito protetor acima desta concentração. Com base nos resultados obtidos, pode-se especificar que os flavonóides, principalmente a quercetina, apresentam um efeito benéfico na proteção contra os danos oxidativos do sangue de indivíduos portadores de anemia falciforme / Abstract: Oxygen reactive species (ROS) are constantly formed in aerobic cells, particularly in the mithocondria and erythrocytes. These ROS, under normal conditions, are removed by an efficient antioxidant system composed by antioxidant enzymes, glutathione, vitamines and microelements. However, when the ROS production is higher than the antioxidant system capacity, pathological reactions can occur characterizing the oxidative stress condition. In some pathologies, such as sickle cell anaemia, thalassemia and glucose-6-phosphate desidrogenase deficience, the oxidative stress is increased. The sickle cell anaemia is a genetic disease characterized by an increase of ROS generation, abnormal iron release and lower antioxidant activity. Several therapies have been used in order to decrease the oxidative damages of these pacients, such as the acid ascorbic and vitamine E administration. Thus, it was interesting to investigate the effect of natural antioxidant compounds, the flavonoids, in oxidative processes in the blood of sickle cell anaemia individuais and to compare the results with of normal individuais. The flavonoids are compounds widely distributed in the nature and normaly consumed by humans since they are present in great amount in the human diet; their antioxidant, antiosteoporotic, antitumor, antinflamatory and antiviral activities have been described. The effect offlavonoids (quercetin and rutin) was studied in the process of Hb oxidation, binding of Hb to celular membrane, lipid peroxidation of erythrocyte membrane and protein carbonyl groups formation in the blood of sickle anaemia and normal individuais. In general, the oxidative damage levels found in the blood of sickle individuais were higher than that found in the blood of normal individuais, differing only in the experiments of Hb oxidation. In this case, the results were similar to both Hb, perhaps because of great amount of Hb A in the blood of sickle patients. The quercetin showed higher antioxidant effect in ali experiments. The rutin behaved as pro-oxidant in the Hb oxidation, when rutin is used in concentration lower than 150 11M, however it showed protective effect in higher concentrations. Supported by these results, we can suggest beneficial effects of flavonoids, mainly of quercetin, in the protection against oxidative damage of sickle anaemia individuais blood / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular