Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-06T16:17:48Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_LeticiadeMenezesTorres.pdf: 1716063 bytes, checksum: b461cbc16a0524f9bee8e02c67961aaf (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T16:17:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_LeticiadeMenezesTorres.pdf: 1716063 bytes, checksum: b461cbc16a0524f9bee8e02c67961aaf (MD5) Previous issue date: 2013 / A Duffy binding proteindo Plasmodium vivax (PvDBP) e seu receptor na superfície dos eritrócitos, o antígeno Duffy/receptor para quimiocinas (DARC), estão envolvidos na principal via de invasão utilizada pelo P. vivax. No presente trabalho, realizou-se por um estudo do tipo coorte aberta, em área de assentamento agrícola da Amazônia brasileira, para avaliar a influência do receptor DARCna infecção e resposta imune ao P. vivax. Para isso, foi realizada a genotipagem do antígeno DARC através da técnica de PCR em tempo real. A pesquisa de anticorpos específicos foi realizada pela sorologia convencional (ELISA) e, por um ensaio funcional que avalia anticopos inibitórios da interação ligante-receptor. Entre os 690 indivíduos estudados, o genótipo FY*A/FY*Bfoi o mais frequente, consistente com a heterogeneidade étnica das populações que vivem na Amazônia brasileira. Na área estudada, não foi possível identificar associação entre a expressão DARCe a susceptibilidade a infecção pelo P. vivax. Em relação à resposta de anticorpos, nenhuma associação foi encontrada entre os genótipos de DARC e anticorpos IgG anti-PvDBP e nti-MSP119(outra proteína do P. vivax), ambos detectados pela sorologia convencional (ELISA). Contudo, a resposta de anticorpos inibitórios foi significativamente mais frequente em indivíduos heterozigotos carreadores de um alelo DARC-negativo (genótipos FY*A/FY*B ES e FY*B/FY*BES). Por último, a resposta de anticorpos inibitórios se manteve estável durante todo o período estudado (12 meses). Em conjunto, estes resultados demonstraram, pela primeira vez, que a expressão do receptor DARC pode influenciar na resposta imune inibitória contra a PvDBP . / The P. vivaxDuffy binding protein (PvDBP) and its erythrocytic receptor, the Duffy antigen receptor for chemokines (DARC), are involved in the major P. vivax erythrocyte invasion pathway. Here, in an agricultural settlement of the Brazilian Amazon area, we carried-out an open cohort study to analyzed DARC genotypes and its relationship to vivax susceptibility and the PvDBP immune response. To answer this question, DARC genotypes were determined by real-time PCR. Antibodies responses were analyzed by conventional serology (ELISA) using recombinant proteins, and byan in vitro functional assay that detect binding inhibitory antibodies (BIAbs) targeting PvDBP . Among 690 individuals enrolled in the study, the distribution of DARC genotypes was consistent with the heterogeneous ethnic origin of the Amazon population, with a predominance of genotype FY*A/FY*B.In the study area, DARC genotypes were not associated with P. vivax susceptibility. Also, there was no association between DARC and anti-PvDBP IgG, as detected by ELISA. However, the follow-up study demonstrated that BIAbs towards to be more frequent in heterozygous carrying a DARC-silent allele (genotypes FY*A/FY*BES and FY*B/FY*BES). In addition, antibodies to PvMSP119, another P. vivaxprotein,were not associated with DARC expression. Moreover, the BIAbs response remained constant during the 12 monthsof the follow up. Together, these results provide the first evidence that DARCexpression may influence the anti-PvDBP inhibitory immune response.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-09-04T19:02:19Z No. of bitstreams: 1 Yanaihara Pinchemel O papel de ROS (especies reativas de oxigenio)....pdf: 2179005 bytes, checksum: aa4588aae63e38910925daad6e5a1a78 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-04T19:02:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yanaihara Pinchemel O papel de ROS (especies reativas de oxigenio)....pdf: 2179005 bytes, checksum: aa4588aae63e38910925daad6e5a1a78 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Sepse é uma das doenças com a maior causa de morbidade para as quais não existe tratamento efetivo capaz de mudar o desfecho. O tratamento da sepse grave tem um custo alto devido ao fato de, geralmente, ser tratada em Unidades de Terapia Intensiva com fluídos intravenosos e antibióticos caros. Neste trabalho nós estudamos as primeiras etapas desta patologia com o foco na produção de espécies reativas de oxigênio deletérias pelas células inflamatórias circulantes. Nós encontramos usando microscopia eletrônica de varredura e análise de esfregaço de sangue a presença de eritrócitos morfologicamente alterados com a predominância de equinócitos. O mesmo efeito pode ser observado quando o sangue de voluntários sadios foram submetidos ao estresse oxidativo por adição direta de radicais livres oxidantes, principalmente peróxido de nitrito ou através da redução dos antioxidantes intracelulares, neste caso, o mais importante, os sistemas dependentes de glutationa. Como macrófagos removem eritrócitos modificados, foi utilizada a linhagem celular de macrófagos J774 e observamos a adesão imediata e iniciação do processo de fagocitose por essas células. Essas células iniciam a produção de superóxido quando em contato com eritrócitos modificados in vitro ou eritrócitos de pacientes sépticos. Nós também medimos a produção de ROS em sangue total pelo contador de fótons, usando como inibidores a superóxido dismutase para superóxido, azida para mieloperoxidase, desferroxamina e hidralazina para peróxido de nitrito, todas essas espécies estiveram presentes. O valor medido no sangue dos pacientes sépticos foi aumentado de 20 a 1000 vezes em relação aos voluntários. Quando usamos eritrócitos de pacientes sépticos com neutrófilos isolados observamos a produção de ROS durante a adesão dessas células com os neutrófilos. Esses dados nos permite sugerir que durante a sepse o primeiro contado com patógenos inicia uma produção de ROS que modifica oxidativamente os eritrócitos por um mecanismo de feedback positivo o qual amplifica a produção de espécies oxidativas para além da presença desses patógenos causando danos nos vasos e órgãos. / Sepsis is one of is a illness with the highest cause of morbidity for which no effective treatment exist capable of change the outcome. Severe sepsis treatment has a high care cost due to the fact that is usually treated in the intensive care unit with intravenous fluids and expensive antibiotics. In this submission we study the earliest stages of this pathology with the focus in the deleterious production of Reactive Oxygen Species by the inflammatory circulating cells. We found using both scanning electron microscopy and analysis of blood smear the ubiquitous presence of red blood cells (RBC) morphologically modified, with the predominance of equinocytes. The same effects could be observed when the blood of healthy volunteers were subject to oxidative stress, either by direct addition of free radicals oxidants, mainly peroxynitrite, or by lowering the intracellular antioxidants, in this case arguably the more important, the GSH dependent systems. As macrophage removes modified RBC we used the macrophage cell line j774 and could see the immediate attachment and initiation of phagocytosis by these cells. These cells initiate a production of superoxide when in contact with in vitro modified or sepsis pacients RBCs. We also measure total blood ROS production by photon counting, using as inhibitors SOD for superoxide, azide for myeloperoxidase and desferrioxamine and hydralazine for peroxinitrite; all these species were present. The amount measured in the blood of patients was increased from 20 to 1000 times in relation to controls. When we used sepsis patients RBC with isolated neutrophils again we saw attachment of these cells to the PMN a production of ROS. These data allow us to suggest that during sepsis the initial contact with pathogens initiate a production of ROS that modifies oxidativaly RBC that than by a mechanism of positive feedback amplifies the production beyond the presence of the pathogens and causes vessels and organs damage that this species are known to induce.

Made available in DSpace on 2014-07-28T18:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 105.pdf: 763272 bytes, checksum: 5b08e5b3e276180cfde228711ff06a51 (MD5) Previous issue date: 2008 / Made available in DSpace on 2014-12-22T16:56:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 105.pdf: 763272 bytes, checksum: 5b08e5b3e276180cfde228711ff06a51 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / A sociedade científica mundial vem sofrendo pressão para que seja efetuada a substituição de ensaios in vivo por ensaios in vitro, sendo o teste de irritação ocular de Draize um dos testes in vivo mais fortemente combatidos pelos setores ativistas que lutam pela promoção e preservação do bem estar animal. Como a substituição do teste de Draize por metodologia alternativa se mostrou tarefa mais difícil do que se imaginava inicialmente, sobretudo devido ao grande número de desfechos que esta metodologia quantifica, as agências internacionais de validação de metodologia alternativas adotaram como conduta a busca por uma bateria de ensaios in vitro que possam servir de triagem para avaliação do potencial irritante ocular de produtos e ingredientes. Neste caso, o uso de animais só é recomendado, quando os resultados obtidos in vitro sugerem um baixo potencial irritante. Neste contexto, o presente estudo objetivou avaliar o grau de preditibilidade do método de Quantificação de Proteínas Totais (QPT) na avaliação do potencial citotóxico de tensoativos (N=6) e produtos cosméticos acabados (xampus e condicionadores, N=19). Todos os produtos avaliados no presente estudo foram previamente analisados quanto ao seu potencial irritante pela metodologia in vivo. O teste in vitro foi realizado utilizando linhagem celular proveniente de fibroblasto de embrião de camundongo (3T3) e o corante Azul Brilhante de Coomassie R-250. A avaliação do coeficiente de variação do teste de QPT em células 3T3 mostrou um valor de CV por cento global de 30,00 por cento. Para a comparação entre os resultados in vivo (MEM) e in vitro (IC50) utilizamos o coeficiente de correlação de Pearson. / The world scientific community is under pressure to find effective ways to substitute in vivo by in vitro tests. The Draize Eye Test is one of the most disapproved in vivo tests by the animal welfare activists. Since the substitution of the Draize Eye Test by an alternative method turned out to be a more difficult issue than it was first thought, mainly due to the great number of endpoints that this assay is able to quantify, the international validation agencies for alternative methods adopted, as a conduct, the search for a set of in vitro assays, which might work as a screening for the evaluation of the ocular irritant potential of products and ingredients. The use of animals would only be recommended if the results obtained with the in vitro screening tests indicate a low irritant potential for a determined substance. In this context, the main goal of the present study was to evaluate the degree of predictability of the Total Protein Quantification Methodology (QPT) in the evaluation of the citotoxic potential of surfactants (n=6) as well as in cosmetics (shampoos and hair conditioners, n=19). All the evaluated products in this study were previously analyzed in vivo, regarding their irritant potential. The in vitro test was performed using a cellular lineage derived from embryo mouse fibroblast (3T3) and the dye Blue Brilhant of Coomassie – R 250. The evaluation of the test variation coefficient (CV%) in 3T3 cells demonstrated a global CV% of 30%. In order to compare the in vivo (MMS) results with the ones obtained in vitro (IC50), we applied the Pearson´s coefficient of correlation. The value obtained for the correlation between the two methods was –0.420 (p=0.022). The analysis of the IC50 and MMS values of the different ocular structures showed a better correlation of the in vitro method with the injuries on the conjunctive, than with the damage found on the iris or cornea in vivo. Furthermore, an enhanced correlation of the in vitro versus in vivo method was observed for surfactants, when compared to whole products. In order to evaluate the predictability of the in vitro test in regard to the in vivo method a cut-off point was established, where substances with values of IC50<1 mg/ml were determined as irritant and substances with levels of IC50 higher then 1mg/ml were considered as non-irritant. Hence, under the experimental conditions of the present study, the assay accuracy was of 80%, the sensibility was 94% and the specificity was of 43%. Based on the results obtained we conclude that the QPT method, using Dye Blue Brilliant of Comassie R-250 and the cellular lineage 3T3, shows a better ability to predict the irritant potential of isolated products (surfactants) than of entire products. Even though the global CV% value found with our in vitro method, according to WHO, is considered suitable for assays performed with cell lines, the comparison of our results with the published data shows that the SIRC cell line is more interesting once considering inter-assay accuracy. We also conclude that the proposed assay has a better capacity to predict the irritant effect on the conjunctive than on the other ocular structures. At last, it is worth pointing out that this method shows a high sensibility degree and moderate level of specificity, and the application of the QPT assay may be useful to add the screening set assays for the evaluation of toxicity induced by products under the scope of Sanitary Surveillance.

SANTIAGO, Thiago de Melo. Estudo de propriedades mecânicas e morfológicas de hemácias em indivíduos portadores de anemia falciforme por microscopia de força atômica. 2012. 117 f. Dissertação (Mestrado em Física) - Programa de Pós-Graduação em Física, Departamento de Física, Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Edvander Pires (edvanderpires@gmail.com) on 2015-10-16T20:53:51Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_tmsantiago.pdf: 3674927 bytes, checksum: 924d0c4a244e4eb06381e66ed8849abf (MD5) / Approved for entry into archive by Edvander Pires(edvanderpires@gmail.com) on 2015-10-20T20:55:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_tmsantiago.pdf: 3674927 bytes, checksum: 924d0c4a244e4eb06381e66ed8849abf (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-20T20:55:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_tmsantiago.pdf: 3674927 bytes, checksum: 924d0c4a244e4eb06381e66ed8849abf (MD5) Previous issue date: 2012 / Nesse trabalho, propomos o uso da Microscopia de Força Atômica para a investigação das propriedades mecânicas e morfológicas dos eritrócitos de pacientes com anemia falciforme, visando propor que parâmetros físicos tais como curvatura, rugosidade, elasticidade e viscosidade, possam ser utilizados na investigação laboratorial dessa doença. Em cada etapa experimental, foram medidas as propriedades mecânicas de cinco células por indivíduo. Nessa pesquisa analisamos o sangue de cinco pacientes em tratamento no Centro de Hematologia e Hemoterapia do Estado do Ceará (HEMOCE) e, como controle, cinco doadores sadios voluntários. Os resultados indicam a diminuição da rugosidade da superfície citoplasmática da membrana eritrocitária dos doadores com a doença. A análise de elasticidade das hemácias dos pacientes com anemia indica que módulo de Young, em média, é cerca de três vezes maior do que o módulo encontrado nas hemácias de doadores sadios. A análise da histerese de curvas de forças sobre os eritrócitos revela que as hemácias contendo a hemoglobina anormal dissipam menos energia e, portanto, são mais viscosas que as hemácias advindas de doadores sadios.

Introdução: Desde a década de 1970, quando se observou que a transfusão pré-transplante renal diminuía a rejeição ao enxerto, o efeito transfusion-related immunomodulation (TRIM) vem sendo estudado, não havendo, ainda, um entendimento completo de seu mecanismo. Recentemente, a descrição das células T reguladoras (TREG) trouxe novas possibilidades de compreensão desse fenômeno, com grande implicação terapêutica. Objetivos: Avaliar a proporção de células TREG antes e após a transfusão de concentrado de hemácias em uma amostra de pacientes clínicos não imunossuprimidos e correlacionar os resultados com o volume transfundido e o tempo de estocagem do sangue. Métodos: Pacientes com diversas patologias clínicas e com indicação de transfusão de concentrado de hemácias foram recrutados consecutivamente. Após assinatura do consentimento informado, o número de células TREG pré e pós-transfusão foi avaliado, bem como sua correlação com o número de unidades transfundidas e o tempo de estocagem. Resultados: Observou-se um aumento estatisticamente significativo na proporção de células TREG (CD4+, CD25+, FOXP3+) 72 horas após a transfusão (p=0,003). Tal aumento mostrou correlação com o número de unidades transfundidas, mas não com o tempo de estocagem (p=0,017 e 0,49, respectivamente). Conclusão: O aumento do numero de células TREG parece estar presente após transfusão de hemácias não leucodepletadas mesmo em uma amostra heterogênea, o que reforça sua importância clínica. A influência do número de unidades mas não do tempo de estocagem corrobora estudos anteriores. O mecanismo molecular do efeito TRIM, bem como seu impacto clínico em um cenário real, ainda precisam ser melhor avaliados. / Background: Transfusion-related immunomodulation (TRIM) has been the subject of research since the 1970s, when transfusion before kidney transplantation was found to decrease the rates of allograft rejection, but the mechanisms underlying this effect have yet to be fully elucidated. The recent description of regulatory T cells (TREG) has paved the way for a new understanding of this phenomenon, with major therapeutic implications. Objectives: To assess the levels of TREG cells before and after transfusion of packed red blood cells in a clinical sample of non-immunosuppressed patients and to correlate findings with the volume of blood transfused and length of storage. Methods: Patients with a variety of clinical conditions and with an indication for transfusion of packed red blood cells were recruited consecutively. After providing informed consent, pre- and post-transfusion TREG levels were measured, and their correlation with number of units transfused and length of storage was assessed. Results: There was a significant increase in the levels of TREG cells (CD4+/CD25+/FOXP3+) within 72 hours of transfusion (p=0.003). This increase correlated with the number of units transfused, but not with length of storage (p=0.017 and 0.49, respectively). Conclusion: An increase in TREG cell levels appears to follow transfusion of non-leukoreduced packed red blood cells even in a heterogeneous sample, which highlights the clinical relevance of this phenomenon. The influence of number of transfused units, but not of length of storage, on the results corroborates the findings of previous non-clinical studies. Further research is warranted to better investigate the molecular mechanism of the TRIM effect, as well as its clinical impact in real-world settings.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4029.pdf: 2110860 bytes, checksum: d02ac171388080b62d75f4d78539b911 (MD5) Previous issue date: 2011-08-01 / The blood cell composition in their qualitative and quantitative aspects as well as the functional properties of hemoglobin (Hb) shows characteristic of adaptation to the aquatic environment, aiding the understanding of the adaptability of the fish to the environment. The present study aimed to analyze the peripheral blood cells and the structural and functional characterization (in vitro) of hemoglobins of the South American lungfish, Lepidosiren paradoxa and facultative air-breathing fish H. unitaeniatus collected nearby Cuiaba, MT. The hematological variables, blood cell size, plasma ions, glucose and protein concentrations and the osmolality as well as the electrophoretic patterns of Hbs, the Root effect, quantification and the effect of allosteric modulators (IHP, ATP, GTP, 2.3 - BPG and NaCl) of the affinity of Hb to oxygen and Hb affinity in experiments of oxygenation in the blood stripped to and 4oC, 21oC and 40oC. The blood cells of L. paradoxa are exceptionally large and not numerous compared to H. unitaeniatus. The hematocrit and blood pH were similar in the two species. The erythrocyte number was lower in L. paradoxa (52 .103 ± 17 &#61549;L-1) than in H unitaeniatus (2386 .103 ± 370 &#61549;L-1). The hematimetric indexes mean corpuscular volume and mean corpuscular Hb were higher in L. paradoxa while the mean corpuscular Hb concentration and Hb concentration were higher in H. unitaeniatus. Among the white blood cells, in L. paradoxa, the lymphocytes (65.00 ± 4.00 %) were the most frequent cells, followed by eosinophils (19.00 ± 3.00 %), neutrophils (12.00 ± 2.00 %), monocytes (2.00 ± 0.60 %) and basophils (1.40 ± 0.40 %). In H. unitaeniatus lymphocytes were also the most frequent cells (85.14 ± 3.21 %) followed by neutrophils (12.00 ± 3.00 %) and monocytes (2.90 ± 1.23 %). In L. paradoxa the Mg+2, glucose and total protein plasma levels were significantly smaller than in H. unitaeniatus. There were no significant differences in the levels of K+, Ca+2, Cl- and osmolarity of plasma and between both species. Two Hb components, one major and another minor band was identified in L. paradoxa and another smaller; in H. unitaeniatus 6 anode components being 3 slow components and 3 fast component have been identified at different concentrations. In both species the stripped Hbs in three temperatures and in the presence of modulators, showed normal Bohr effect. In L. paradoxa cooperatively values were near 2.00 indicating cooperatively and absence of effect of Root; in H. unitaeniatus the cooperatively values were near 1.50, indicating low cooperatively and presence of Root effect. The affinity of Hb-oxygen proved be higher as decreased the temperature. The 2.3 - BPG was little effective in modulate the Hb in both species. The IHP ATP, GTP, and NaCl acted as negative modulators, being more effective in the modulation of Hb of H. unitaeniatus. The 2.3 - BPG was not detected in H. unitaeniatus and the ATP was the primary nucleotide intraeritrocitário for the two species being approximately 2 times higher than the GTP. In L. paradoxa was detected small amount IP2, but not in H. unitaeniatus. Our results show marked differences between the blood cells of L. paradoxa and H. unitaeniatus and the ability of adaptation of Hbs to environmental conditions to which they living. / A composição celular do sangue, em sua expressão quantitativa e qualitativa, bem como as propriedades funcionais das hemoglobinas apresenta aspectos característicos de adaptação ao ambiente aquático, auxiliando a compreensão da adaptabilidade dos peixes ao ambiente. O presente estudo teve como objetivo a análise do sangue periférico e a caracterização estrutural e funcional (in vitro) das hemoglobinas do peixe pulmonado Lepidosiren paradoxa e do peixe de respiração aérea facultativa Hoplerythrinus unitaeniatus coletados nos arredores de Cuiabá, MT. Para tanto foram determinadas as variáveis hematológicas, as concentrações plasmática de íons, glicose, proteínas e osmolalidade, a análise biométrica e morfológica das células sanguíneas, o padrão eletroforético das hemoglobinas, o efeito Root, a quantificação e o efeito dos moduladores alostéricos (IHP, ATP, GTP, 2,3 - BPG e NaCl) na modulação da afinidade das hemoglobinas ao oxigênio e a afinidade das hemoglobinas em experimentos de equilíbrio de oxigenação em sangue e stripped à 4oC, 21oC e 40oC. As células sanguíneas de L. paradoxa são excepcionalmente grandes e pouco numerosas comparadas as de H. unitaeniatus. Os valores de hematócrito e pH sanguíneo foram similares nas duas espécies. O número de eritrócitos foi mais baixo em L. paradoxa (52 103 ± 17 &#61549;L-1) do que em H. unitaeniatus (2386 103 ± 370 &#61549;L-1). Os índices hematimétricos, volume corpuscular médio e hemoglobina corpuscular média foram maiores em L. paradoxa enquanto que a concentração de hemoglobina corpuscular média e a concentração de hemoglobina foram maiores em H. unitaeniatus. Dentre os leucócitos, em L. paradoxa os linfócitos (65,00 ± 4,00 %) foram os mais freqüentes, seguidos dos eosinófilos (19,00 ± 3,00 %), neutrófilos (12,00 ± 2,00 %), monócitos (2,00 ± 0,60 %) e basófilos (1,40 ± 0,40 %). Em H. unitaeniatus os linfócitos também foram os mais freqüentes (85,14 ± 3,21 %) seguidos dos neutrófilos (12,00 ± 3,00 %) e monócitos (2,90 ± 1,23 %). Em L. paradoxa os níveis plasmáticos de Na+, Mg+2, glicose e proteínas totais foram significativamente menores aos observados em H. unitaeniatus. Não houve diferenças significativas nos valores de K+, Ca+2, Cl- e osmolaridade plasmática entre as duas espécies. O padrão eletroforético em gel de amido para L. paradoxa, mostrou a presença de dois componentes, um maior lento, e outro menor rápido, em H. unitaeniatus foram identificados 6 componentes anódicos com diferentes concentrações, sendo 3 componentes lentos e 3 componentes rápidos. Nas espécies estudadas as hemoglobinas stripped nas três temperaturas e na presença dos moduladores, mostraram efeito Bohr normal. Em L. paradoxa os valores de Hill foram próximos de 2,00 indicando cooperatividade e ausência de efeito Root; em H. unitaeniatus os valores de Hill próximos de 1,50, indicaram baixa cooperatividade e presença de efeito Root. A afinidade das hemoglobinas ao oxigênio mostrou-se maior à medida que se diminuiu a temperatura. O 2,3 - BPG foi pouco efetivo na modulação das hemoglobinas de ambas as espécies, já os moduladores IHP, GTP, ATP e NaCl atuaram como moduladores negativos, sendo a modulação mais efetiva em H. unitaeniatus. Não detectamos 2,3 - BPG e o ATP foi o principal nucleotídeo intra-eritrocitário para as duas espécies sendo aproximadamente 2 vezes superior ao GTP. Em L. paradoxa foi detectado pequena quantidade IP2, em H. unitaeniatus não detectamos a presença de inositóis. Os resultados mostram diferenças marcantes entre as células de L. paradoxa e H. unitaeniatus e a capacidade de adaptação molecular das hemoglobinas destas espécies às condições fisiológicas e ambientais a que estão sujeitas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000321939-Texto+Completo-0.pdf: 629614 bytes, checksum: 3a028aa2639bbe16eabae0603dd5e3f1 (MD5) Previous issue date: 2004 / Loss of renal function is a recognized complication following the intravascular use of radiocontrast agents. The cell membrane transport systems are possible targets for radiocontrast toxicity. The aim of the present study was to examine the effects of diatrizoate sodium (DS), diatrizoate meglumine (DM), a diatrizoate compound (DC), and Hypaque-M 76® upon membrane transport functions, using the erythrocyte as model. Na+/K+ pump activity was determined, the number of Na+/K+ pumps was estimated, and the cell membrane transports of L-arginine and choline were evaluated in erythrocytes obtained from normal individuals and from patients undergoing cardiac catheterization. Potassium influx was 1. 50±0. 35, 1. 32±0. 37, 1. 28±0. 30, and 1. 01±0. 25 mmol/L cell/h in control, DS, DM and DC groups, respectively (P=0. 004; DC against control group). Exposure to Hypaque-M 76® during cardiac catheterization diminished the activity of Na+/K+ pump (1. 40±0. 36 vs. 1. 27±0. 40 mmol/L cell/h; P=0. 039). The number of Na+/K+ pumps in presence of DS was decreased (156±36 vs. 143±34 pumps/erythrocyte; P=0. 015). L-arginine and choline membrane transports were unchanged, except at very high extracellular radiocontrast concentrations. Results suggest that a selective effect on erythrocytes membrane transport function seems to partake of the cytotoxic picture accompanying radiocontrast-induced acute renal failure. / Perda de função renal é reconhecidamente uma das complicações secundárias ao uso intravascular de radiocontrastes. A membrana celular e os sistemas de transporte são possíveis alvos para a toxicidade destas substâncias. O objetivo do presente estudo foi examinar os efeitos de diatrizoato de sódio (DS), diatrizoato meglumina (DM), um composto de diatrizoatos (CD), e Hypaque- M 76® sobre sistemas específicos de transporte de membrana celular, usando o eritrócito como modelo. A atividade da bomba de Na+/K+ foi determinada, o número de bombas de Na+/K+ foi verificado, e o transporte celular de L-arginina e colina avaliado em eritrócitos obtidos de indivíduos saudáveis e de pacientes que sofreram cateterismo cardíaco. O influxo de potássio foi 1,50±0,35, 1,32±0,37, 1,28±0,30, e 1,01±0,25 mmol/L cel/h nos grupos controle, DS, DM e CD, respectivamente (P=0,004; CD versus grupo controle). Exposição ao radiocontraste composto Hypaque-M 76® durante cateterismo cardíaco diminuiu a atividade de bomba de Na+/K+ (1,40±0,36 vs. 1,27±0,40 mmol/L cel/h; P=0,039). O número de bombas de Na+/K+ ativas em presença de DS foi diminuído (156±36 vs. 143±34 bombas/eritrócito; P=0,015). O transporte de membrana de L-arginina e colina permaneceu inalterado, exceto em concentrações extracelulares de radiocontrastes muito altas. Estes resultados sugerem que efeitos seletivos sobre a função dos sistemas de transporte de membrana analisados parecem participar do quadro de citotoxicidade que acompanha a insuficiência renal aguda induzida pelos radiocontrastes.

NaCl is a classic osmoregulatory agent that in isotonic conditions with the plasma is able to stabilize the red blood cells (RBC) in a relaxed (R) state, where these cells congregate a certain degree of stability with the capacity of exercise properly all its functions. The ethanol is a classic chaotropic agent, capable of promoting denaturation, but is also an osmolyte, able to promote stabilization of RBC. In 0.9% w/v NaCl and between 0 and 24% v/v ethanol, the RBC suffer lysis, but between 24 and 32%, the RBC are stabilized by the action of ethanol. This stabilization forms compacted or tight (T) RBC, which lost however many cell functions. In this work we studied the effect of concentrations of NaCl at 0.5, 0.9 and 1.1% w/v on the fixed time incubation (30 min) of human blood with concentrations of ethanol between 0 and 32%v/v. The RBC lysis and stabilization transitions by ethanol were described by sigmoids and characterized by their lysis half-point (D50) and stabilization (S50) transitions, respectively, and also by the amplitude (dX) and height (h) of those curves. The average value of D50 increased from 12.61 to 14.29%, but fell back again to 13.97% of ethanol/100 mL of 0.5, 0.9 and 1.1% w/v NaCl, respectively. The average value of S50 fell from 27.26 to 26.22 and 25.99% of ethanol/100 mL of solution with the increase in the concentration of NaCl solution of 0.5 to 0.9 and mL of 1.1% w/v saline, respectively. These results indicate that hypertonic saline solution potentiated the stabilizing effect of ethanol, certainly moving the RBC from of the state R to the state T. / O NaCl é um agente osmorregulatório clássico que em condições isotônicas com o plasma é capaz de estabilizar os eritrócitos em um estado R, onde essas células congregam um certo grau de estabilidade com a capacidade de exercerem suas funções. O etanol é um agente caotrópico clássico, capaz de promover desnaturação, mas é também um osmólito, capaz de promover estabilização de eritrócitos. Em NaCl a 0,9% m/v e entre 0 e 24% v/v de etanol, os eritrócitos sofrem lise, mas entre 24 e 32% v/v, os eritrócitos são estabilizados pela ação do etanol. Essa estabilização forma eritrócitos compactados, em um estado morfológico T, que perdem, entretanto, várias funções dessas células. Neste trabalho nós estudamos o efeito de concentrações de NaCl a 0,5, 0,9 e 1,1% m/v sobre a incubação por tempo fixo (30 min) de amostras de sangue humano com concentrações de etanol entre 0 e 32% v/v. As transições de lise e estabilização dos eritrócitos pelo etanol foram descritas por sigmóides e caracterizadas pelo ponto de meia-transição de lise (D50) e de estabilização (S50), respectivamente, mas também pela amplitude (dX) e altura (h) daquelas curvas (h). O valor de D50 do etanol aumentou de 12,61 para 14,29, mas voltou a diminuir para 13,97%, com o aumento da concentração da NaCl de 0,5 para 0,9 e 1,1% m/v, respectivamente. O valor médio de S50 diminuiu de 27,26 para 26,22 e 25,99% de etanol/100 mL de solução com o aumento na concentração de NaCl da solução de 0,5 para 0,9 e 1,1% m/v, respectivamente. Esses resultados indicam que a solução salina hipertônica potencializou o efeito de estabilização promovido pelo etanol, certamente deslocando os eritrócitos do estado R para o estado T. / Mestre em Genética e Bioquímica

Introdução: Desde a década de 1970, quando se observou que a transfusão pré-transplante renal diminuía a rejeição ao enxerto, o efeito transfusion-related immunomodulation (TRIM) vem sendo estudado, não havendo, ainda, um entendimento completo de seu mecanismo. Recentemente, a descrição das células T reguladoras (TREG) trouxe novas possibilidades de compreensão desse fenômeno, com grande implicação terapêutica. Objetivos: Avaliar a proporção de células TREG antes e após a transfusão de concentrado de hemácias em uma amostra de pacientes clínicos não imunossuprimidos e correlacionar os resultados com o volume transfundido e o tempo de estocagem do sangue. Métodos: Pacientes com diversas patologias clínicas e com indicação de transfusão de concentrado de hemácias foram recrutados consecutivamente. Após assinatura do consentimento informado, o número de células TREG pré e pós-transfusão foi avaliado, bem como sua correlação com o número de unidades transfundidas e o tempo de estocagem. Resultados: Observou-se um aumento estatisticamente significativo na proporção de células TREG (CD4+, CD25+, FOXP3+) 72 horas após a transfusão (p=0,003). Tal aumento mostrou correlação com o número de unidades transfundidas, mas não com o tempo de estocagem (p=0,017 e 0,49, respectivamente). Conclusão: O aumento do numero de células TREG parece estar presente após transfusão de hemácias não leucodepletadas mesmo em uma amostra heterogênea, o que reforça sua importância clínica. A influência do número de unidades mas não do tempo de estocagem corrobora estudos anteriores. O mecanismo molecular do efeito TRIM, bem como seu impacto clínico em um cenário real, ainda precisam ser melhor avaliados. / Background: Transfusion-related immunomodulation (TRIM) has been the subject of research since the 1970s, when transfusion before kidney transplantation was found to decrease the rates of allograft rejection, but the mechanisms underlying this effect have yet to be fully elucidated. The recent description of regulatory T cells (TREG) has paved the way for a new understanding of this phenomenon, with major therapeutic implications. Objectives: To assess the levels of TREG cells before and after transfusion of packed red blood cells in a clinical sample of non-immunosuppressed patients and to correlate findings with the volume of blood transfused and length of storage. Methods: Patients with a variety of clinical conditions and with an indication for transfusion of packed red blood cells were recruited consecutively. After providing informed consent, pre- and post-transfusion TREG levels were measured, and their correlation with number of units transfused and length of storage was assessed. Results: There was a significant increase in the levels of TREG cells (CD4+/CD25+/FOXP3+) within 72 hours of transfusion (p=0.003). This increase correlated with the number of units transfused, but not with length of storage (p=0.017 and 0.49, respectively). Conclusion: An increase in TREG cell levels appears to follow transfusion of non-leukoreduced packed red blood cells even in a heterogeneous sample, which highlights the clinical relevance of this phenomenon. The influence of number of transfused units, but not of length of storage, on the results corroborates the findings of previous non-clinical studies. Further research is warranted to better investigate the molecular mechanism of the TRIM effect, as well as its clinical impact in real-world settings.

Orientadores: Lauro Tatsuo Kubota, Nelci Fenalti Hoehr / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-05T05:16:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marzal_PercyCalvo_D.pdf: 1469754 bytes, checksum: 089db3068a7acb221eecbb8dd258a085 (MD5) Previous issue date: 2005 / Doutorado / Quimica Analitica / Doutor em Ciências