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Avalia??o da produ??o de esp?cies reativas de oxig?nio e da citotoxicidade in vitro mediada pelo sistema 2,4-pentanodiona/horseradish peroxidase/oxig?nioPinheiro, N?thale Rodrigues 28 March 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / O sistema ADEPT (antibody-directed enzyme prodrug therapy) ? uma terapia antitumoral que envolve a ativa??o catal?tica de um pr?-f?rmaco, nas proximidades do s?tio tumoral, por uma enzima conjugada a um anticorpo monoclonal com afinidade para ant?genos espec?ficos das c?lulas tumorais. O sistema composto pela enzima Horseradish peroxidase (HRP) e ?cido indol-3-ac?tico (IAA) tem sido estudado para o emprego na terapia ADEPT, e associado ? indu??o de apoptose de c?lulas tumorais. A 2,4-pentanodiona (PD) tamb?m atua como substrato da HRP sendo oxidada por ela atrav?s de uma rea??o cuja cin?tica ? semelhante ? da cat?lise do IAA e, portanto, pode representar uma alternativa para essa terapia. Este trabalho teve como objetivo realizar uma avalia??o da citotoxicidade mediada pelos produtos provenientes da oxida??o da PD pela HRP frente a diferentes linhagens celulares, utilizando para isso diferentes metodologias que determinam a viabilidade celular como o azul de Trypan, MTT e vermelho neutro assim, como a an?lise microsc?pica das altera??es celulares induzidas por esses sistemas; estabelecer uma compara??o com a citotoxicidade mediada pela oxida??o do IAA catalisada pela mesma enzima; verificar a incid?ncia de morte celular por apoptose mediada pelos sistemas IAA/HRP/O2 e PD/HRP/O2; al?m de verificar a produ??o e os tipos de esp?cies reativas de oxig?nio (ERO) produzidas pelos dois sistemas. Os experimentos permitiram evidenciar que as combina??es PD/HRP/O2 e IAA/HRP/O2 levam a forma??o de ERO, sendo as esp?cies provavelmente formadas pela oxida??o da PD o radical ?nion super?xido e o per?xido de hidrog?nio (H2O2) e pela oxida??o do IAA o H2O2. Foi observado, somente para o IAA, um aumento na forma??o de ERO com o uso de uma maior concentra??o do substrato. Quanto ao estudo de viabilidade celular, esse permitiu evidenciar, atrav?s das tr?s metodologias, o efeito citot?xico dos sistemas PD/HRP/O2 e IAA/HRP/O2, no entanto, o ensaio do MTT mostrou-se mais sens?vel para esse estudo. A oxida??o do IAA pela HRP induziu apoptose, contudo n?o foi poss?vel identificar o tipo de morte celular mediada pelo sistema PD/HRP/O2, provavelmente devido a um problema t?cnico durante algumas an?lises em citometria de fluxo, o Quenhcing. Apesar de o sistema IAA/HRP/O2 ter apresentado uma destrui??o celular mais expressiva, o substrato IAA quando testado na aus?ncia da enzima mostrou-se
t?xico, o que n?o foi visto para a PD quando testada nas concentra??es de 1; 1,5 e 2 mM, o que a torna um bom substrato para o emprego na terapia ADEPT. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2014. / ABSTRACT
The system ADEPT (antibody-directed enzyme prodrug therapy) is an antitumor therapy that involves catalytic activation of a prodrug near the tumor site by an enzyme conjugated to a monoclonal antibody with affinity for specific antigens of tumor cells. The system composed by horseradish peroxidase (HRP) enzyme and indole-3-acetic acid (IAA) has been studied for the use in ADEPT therapy, and associated with apoptosis induction on tumor cells. The 2,4-pentanedione (PD) also acts as a substrate for HRP and being oxidized through a reaction whose kinetics is similar to the catalysis of IAA and, therefore, might represent an alternative to this therapy. This study aimed to conduct a evaluation of the cytotoxicity mediated by products from the oxidation of PD by HRP against different cell lines, using different methodologies that determine cell viability as Trypan blue, MTT and Neutral Red, as well as morphologic changes of the cell induced by these systems; establish a comparison with the cytotoxicity mediated by the oxidation of IAA catalyzed by the same enzyme; verify the incidence of apoptosis mediated by IAA/HRP/O2 and PD/HRP/O2 systems; besides verifying the production and types of reactive species oxygen (ROS) produced by the two systems. The experiments allowed to show that PD/HRP/O2 and IAA/HRP/O2 combinations lead to the formation of ROS, being the species probably formed by oxidation of PD the radical superoxide anion and hydrogen peroxide (H2O2) and by the oxidation of IAA the H2O2. It was observed only for the IAA, an increase in ROS production using a higher concentration of the substrate. Regarding the study of cell viability, this allowed to evidence, through the three methodologies, the cytotoxic effect of PD/HRP/O2 and IAA/HRP/O2 systems, however, the MTT assay proved more sensitive for this study. The oxidation of the IAA by HRP induced apoptosis, but could not identify the type of cell death mediated by PD/HRP/O2 system, The oxidation of by HRP the IAA induced apoptosis, but could not identify the type of cell death mediated by PD/HRP/O2 system, probably due to a technical problem for a few flow cytometric analyzes, the Quenching. Although IAA/HRP/O2 system have presented a more significant cell destruction, the IAA substrate when tested in the absence of enzyme was toxic, what has not seen for PD when tested in the concentrations of 1, 1.5, and 2 mM, making it a good substrate for employment in ADEPT therapy.
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Papel das esp?cies reativas de oxig?nio na infec??o experimental pelo Trypanosoma cruziS?na, Israelly Viana de 29 June 2015 (has links)
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IsraellyVianaDeSena_DISSERT.pdf: 988106 bytes, checksum: fd7fe778e190889d6f1a07cababa96be (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-01-23T11:12:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2015-06-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Neste estudo foi avaliado o papel das esp?cies reativas de oxig?nio na infec??o experimental pelo T. cruzi. Inicialmente, realizamos cultura de macr?fagos na presen?a de formas tripomastigotas do parasito e demonstramos que o T. cruzi induz a produ??o de ROS in vitro. Posteriormente, camundongos albinos Swiss foram infectados com 1 ? 104 formas tripomastigotas sangu?neas da cepa Y e tratados com os inibidores de ROS (N-acetilciste?na), e da ?xido n?trico sintase induz?vel/iNOS (aminoguanidina) ou ambos, e determinado a parasitemia, mortalidade, produ??o de IgG e de citocinas no soro (IL-17, IFN-?, TNF-?) por meio de ELISA; e a express?o de RNAm de citocinas no mioc?rdio dos camundongos por RT-PCR em tempo Real. Animais infectados com a cepa Y que tiveram a inibi??o simult?nea de ROS e NO apresentaram mortalidade inicial precoce (in?cio da mortalidade no 6? D.A.I), foi observado 100% de mortalidade em todos os grupos de animais. Camundongos que tiveram a inibi??o de ROS e NO, apresentaram maior produ??o de IFN-? e TNF-? no soro e tamb?m maior express?o de RNAm destas citocinas no tecido card?aco, quando comparado ao grupo controle. O excesso na produ??o de IFN-? e TNF-? pode conduzir a efeitos delet?rios ao hospedeiro. Quanto ? produ??o de IL-17 e IgG total, n?o houve diferen?a entre os grupos de animais que tiveram ROS ou NO bloqueado. A express?o da iNOS foi menor no grupo de animais tratados com os inibidores de ROS e NO, quando comparado ao controle n?o tratado. Os resultados indicam que as esp?cies reativas de oxig?nio participam da regula??o imunol?gica durante a infec??o experimental pelo T. cruzi, evitando mortalidade precoce ao hospedeiro.
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Avalia??o dos par?metros de estresse oxidativo no l?pus eritematosoCosta, Tatiana Xavier da 27 March 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-03-27 / OBJECTIVE: The aim of this work was to analyse some oxidative stress parameters in patients of Systemic L?pus Erythematosus. PATIENTS AND METHODS: Determinations of reduced glutathione content in whole blood were carried out. The activity of superoxide dismutase, gluthatione peroxidase
and catalase in erythrocytes and the concentration of reactive substances of acid thiobarbituric in plasma of patients female (n =19) with SLE no activity of disease (Mex-SLEDAI < 2), with average ages of 32 ? 11 years, through the
spectrophotometrical methods and from healthy individuals (n =30). Statistical data were analyzed by student t-test, p<0,05. RESULTS: Our data indicated a significant decrease on the activity of catalase and significant increase on the
concentration of reactive substances of acid thiobarbituric in patients with SLE comparing with healthy individuals. There was no significant difference in other parameters. CONCLUSION: The results showed that oxidative stress has a role in the pathogenesis of the disease in SLE, even in patients without active disease. / OBJETIVO: Analisar os par?metros de estresse oxidativo no L?pus Eritematoso Sist?mico. PACIENTES E M?TODOS: Foram realizadas as determina??es do conte?do de glutationa reduzida no sangue total, da atividade da super?xido
dismutase, da glutationa peroxidase e da catalase nos eritr?citos e da concentra??o de Subst?ncias Reativas ao ?cido Tiobarbit?rico no plasma de 19 pacientes do sexo feminino com LES sem atividade de doen?a (Mex-SLEDAI <
2), com m?dia de idade de 32 ? 11 anos, atrav?s de m?todos
espectrofotom?tricos e comparada a um grupo de 30 indiv?duos sadios nas mesmas condi??es. As pacientes com LES apresentaram tempo de doen?a em torno de 5 ? 3 anos. Os dados estat?sticos foram analisados atrav?s do teste tstudent considerando um n?vel de signific?ncia de P<0,05. RESULTADOS: Foi verificado que a concentra??o de Subst?ncias Reativas ao ?cido Tiobarbit?rico foi significantemente mais elevada e a atividade da catalase foi significantemente diminu?da nos pacientes com LES em compara??o ao controle. N?o houve diferen?a significativa nos outros par?metros. CONCLUS?O: O aumento da peroxida??o lip?dica e a diminui??o da atividade da catalase sugerem que o estresse oxidativo tem um papel na patog?nese da doen?a no LES, mesmo em pacientes sem doen?a ativa
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Avalia??o "in vitro" e "in vivo" da atividade antioxidante do extrato hidroetan?lico de folhas de Turnera ulmifolia Linn. var. elegans (Turneraceae)Brito, Naira Josele Neves de 26 March 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-03-26 / Recently, it has been a increasing interest in the antioxidative role of natural products to aid
the endogenous protective biological systems against the deleterious effects of oxygen (ROS)
and nitrogen (RNS) reactive species. Many antioxidant compounds, naturally occurring from
plant sources. Natural antioxidants can protect and prevent the human body from oxidative
stress and retard the progress of many diseases in which free radical are involved. Several
plants used in the folk medicine to treat certain disorders that are accompanied by
inflammation and other pharmacological properties have been proved their attributed
properties, such antioxidant activity. Turnera ulmifolia Linn. var. elegans (Turneraceae),
frequently employed by population as a medicinal plant, demonstrated antioxidant activity by
in vitro and in vivo assays, using its leaf hydroethanolic extract (10%) he in vitro DPPH
radical-scanvenging activity showed a strong antioxidant activity (86.57% ? 0.14), similar to
Carduus marianus and catequine effects. For the in vivo assays, adult female Wistar rats
(n=48) with carbon tetrachloride hepatic injury induced (2,5mL/kg i.p.) were used, Six groups
or rats were uses (n=8) [G1 = control (1,25 mL/kg i.p. vehicle); G2 = CCl4 (2,5 mL/kg i.p.);
G3 = CCl4 + extract 7 days (500 mg/kg p.o.); G4 = CCl4 + Legalon? 7 days (50 mg/kg p.o.),
G5 = CCl4 + extract 21 days (500 mg/kg p.o.) e G6 = CCl4 + Legalon? 21 days (50 mg/kg
p.o.)]. The hepatic oxidative injury was evaluated through biochemical parameters [alanine
amino transferase (ALT), aspartate amino transferase (AST)] histopathological study, while
thiobarbituric acid reactive products (TBAR), glutathione (GSH), catalase (CAT), superoxide
dismutase (SOD), and glutathione peroxidase (GPx) levels were used to evaluate proantioxidant
parameters. The plant extract tested was found effective as hepatoprotective as
evidenced by a decreasing in the ALT and AST activities (p<0.001) and TBAR (plasma,
p<0.001 and liver, p<0.001). Levels of GSH (blood, p<0.001 and liver, p<0.001) and
antioxidant enzymes [CAT erythrocyte (p<0.05) and hepatic (p<0.01); SOD erythrocyte
(p<0.001) and hepatic (p<0.001); GPx erythrocyte (p<0.001) and hepatic (p<0.001)] were
also significantly increased. Histopathological changes induced by CCl4 were significantly
reduced by the extract treatment. The data obtained were comparable to that of Legalon?, a
reference hepatoprotective drug. The results showed that T. ulmifolia leaf extract protects
against CCl4 induced oxidative damage. Therefore, this effect must be associated to its
antioxidant activity, attributed to the phenolic compounds, present in these extract, which can
act as free radical scavengers / Atualmente existe um crescente interesse no estudo dos antioxidantes, classe de subst?ncias
que protegem os sistemas biol?gicos dos efeitos delet?rios das esp?cies reativas de oxig?nio
(ERO) e de nitrog?nio (ERN). Muitos desses antioxidantes s?o mol?culas de origem vegetal
que contribuem para a preven??o e para o tratamento de doen?as nas quais o estresse
oxidativo est? envolvido. Na medicina popular, plantas com comprovada atividade antiinflamat?ria,
apresentam diversas atividades farmacol?gicas, dentre elas, a antioxidante.
Turnera ulmifolia Linn. var. elegans (Turneraceae), uma planta medicinal, largamente
utilizada pela popula??o, apresentou atividade antioxidante quando avaliada in vitro e in vivo,
utilizando-se o extrato hidroetan?lico (10 %) obtidos das folhas dessa planta. A capacidade
antioxidante in vitro desse extrato foi avaliada atrav?s do seq?estro do radical 1,1-difenil-2-
picril-hydrazyl (DPPH ). O resultado apresentou um marcado potencial antioxidante ao
seq?estrar 86,57%?0,14 do radical DPPH , compar?vel ao obtido com as subst?ncias de
refer?ncia. No ensaio in vivo, empregando-se modelo experimental murino (48 ratas Wistar),
inj?ria hep?tica foi induzida com CCl4 (2,5 mL/kg i.p. dose ?nica) e o dano oxidativo
hep?tico foi avaliado atrav?s da atividade das transaminases (ALT e AST) e pelo exame
histopatol?gico, enquanto que as subst?ncias reativas ao ?cido tiobarbit?rico (SRAT),
conte?do de glutationa reduzida (GSH) e atividade das enzimas catalase (CAT), super?xido
dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx) foram os par?metros pr?-antioxidante
avaliados. Os animais foram divididos em seis grupos (n=8) [G1 = controle (1,25 mL/kg i.p.
de ve?culo); G2 = CCl4 (2,5 mL/kg i.p.); G3 = CCl4 + extrato 7 dias (500 mg/kg p.o.); G4 =
CCl4 + Legalon? 7 dias (50 mg/kg p.o.), G5 = CCl4 + extrato 21 dias (500 mg/kg p.o.) e G6 =
CCl4 + Legalon? 21 dias (50 mg/kg p.o.)]. O p?s-tratamento com o extrato provocou um
decr?scimo na atividade da ALT e AST (p<0,001) e de SRAT (plasma, p<0,001 e f?gado,
p<0,001), aumentando o conte?do da GSH (sangue, p<0,001 e em f?gado, p<0,001), bem
como a atividade das enzimas antioxidantes, [CAT eritrocit?ria (p<0,05) e hep?tica (p<0,01);
SOD eritrocit?ria (p<0,001) e hep?tica (p<0,001); GPx eritrocit?ria (p<0,001) e hep?tica
(p<0,001)]. A an?lise histopatol?gica mostrou uma redu??o do dano hep?tico causado pelo
CCl4. Os resultados obtidos com o extrato foram an?logos aqueles do tratamento com
Legalon?, padr?o antioxidante, utilizado in vivo. Com base nesses dados, conclui-se que o
extrato de folhas de T. ulmifolia apresenta capacidade hepatoprotetora diante do quadro de
estresse oxidativo induzido pelo CCl4. Efeitos estes, que, provavelmente, est?o associados ?
atividade antioxidante detectada, atribu?das ?s subst?ncias fen?licas presentes no extrato, que
devem agir como seq?estradores de radicais livres, bloqueando as rea??es em cadeias
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An?lise das mudan?as no perfil prot?ico durante o estresse oxidativo in vivo e atua??o da MutY-Glicosilase em respostas celularesOliveira, Ana Helena de Sales 26 February 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Esp?cies reativas de oxig?nio (EROs) s?o produtos do metabolismo celular capazes de reagir com biomol?culas, como prote?nas, lip?deos e ?cido nucl?ico. Essas rea??es podem causar modifica??es delet?rias para a c?lula. Fotossensibilizadores como o azul de metileno (MB), s?o capazes de produzir EROs, como o oxig?nio singlete (1O2), uma das formas mais reativas do oxig?nio molecular. O 1O2 ? capaz de oxidar guaninas, gerando les?es no DNA, como 7,8-dihydro-8-oxoguanine (8-oxoG), o mais frequente produto da oxida??o, que durante
a replica??o pode emparelhar com adenina levando ? muta??es. Foi de interesse desse estudo, caracterizar a citotoxicidade, o potencial mutag?nico e o padr?o de express?o prot?ica, durante o estresse oxidativo induzido pelo MB, usando como modelo cepas de Escherichia
coli proficiente em reparo e deficientes em MutY-Glicosilase, uma enzima de reparo envolvida na corre??o de pares 8-oxoG:Adenina. Essas cepas foram tratadas com MB em presen?a ou aus?ncia de luz. O crescimento, sobreviv?ncia, a taxa de mutag?nese e padr?o de s?ntese prot?ica, foram analisados. O tratamento afetou o crescimento bacteriano, induzindo
morte celular, mutag?nese, e mudan?as no padr?o de s?ntese prot?ica em ambas as cepas. Entretanto a cepa deficiente em MutY mostrou uma maior sensibilidade em rela??o a cepa proficiente. Adicionalmente, a cepa deficiente em MutY apresentou um padr?o de express?o
prot?ica diferenciado quando comparado com a cepa proficiente. Esses resultados sugerem o envolvimento da MutY na corre??o de les?es de DNA n?o caracterizadas e que a aus?ncia de MutY induz altera??es no padr?o de express?o prot?ica
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Participa??o do v?rus sincicial respirat?rio, das esp?cies reativas de oxig?nio e da autofagia na forma??o de redes extracelulares de eosin?filos na asmaSilveira, Josiane Silva 26 October 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-10-26 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / INTRODUCTION: asthma is a chronic inflammatory disease characterized by secretion of elevated levels of cytokines (interleukin (IL)-4, IL-5 and IL-13), reactive oxygen species (ROS), autophagy and eosinophil extracellular traps (EETs) release in airway. Moreover, respiratory syncytial virus (RSV) infection may facilitate allergic sensitization development as well as exacerbate asthma symptoms. Recently, studies have demonstrated an increase of autophagy in eosinophils of asthmatic patients, contributing to an increase in inflammatory response. In asthma, an increase in EETs release may cause tissue damage and an increase in mucus viscosity, which contribute to airway obstruction and reduction of lung function. However, the mechanism of EETs formation and its pathophysiologic role in asthma are poorly understood.
OBJECTIVE: the aim of this dissertation was to elucidate some mechanisms involved in EETs release in asthma. We investigated whether the respiratory syncytial virus (RSV) could induce EETs in vitro in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) eosinophils of an experimental asthma model. Moreover, we evaluated ROS and autophagy participation in mechanisms involved in EETs formation.
METHODS: in order to perform the experimental model of asthma, BALB/cJ mice were sensitized with two subcutaneous injections of ovalbumin (OVA) on days 0 and 7, followed by three intranasal challenges with OVA on days 14, 15 and 16 of the protocol. In paper 1, BALF eosinophils of OVA group and control group were stimulated with RSV (103 PFU/mL) in vitro for 3 hours. After that, culture supernatant was collected in order to perform the analyses proposed in this study which were evaluated according to the specific objectives of this paper. In paper 2, during the experimental asthma protocol, mice were treated intranasally with a nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase (NDPH oxidase) inhibitor, diphenyleneiodonium (DPI), or a glutathione precursor, N-acetylcysteine (NAC). In paper 3, mice were treated intranasally with an autophagy inhibitor, 3-Methyladenine (3-MA). Treatments were performed 45 minutes before of the three intranasal administrations with OVA. At the end of the protocol, BALF and lung tissue were collected to perform the techniques discribed in each of the papers, according to their specific objectives.
RESULTS: in paper 1, we verified an increase in EETs release in BALF eosinophils from OVA group stimulated with RSV in vitro. RSV in vitro decreased IFN-? in BALF cells when compared to the OVA group. In paper 2, we showed that in NAC-treated OVA group there was a decrease in the inflammatory cells in BALF and lung tissue. DPI or NAC treatments reduced EPO activity, goblet cells hyperplasia, inflammatory cytokines and NF?B p65 immunocontent in lung, and they helped in decreasing ROS production in lung. Furthermore, NAC increased catalase (CAT) activity in lung. However, only NAC treatment improved mitochondrial energy metabolism in lung. We showed that DPI or NAC reduced EETs formation in BALF from the OVA group. In paper 3, we showed that in 3-MA-treated OVA group there was a decrease in the inflammatory cells, EPO activity, goblet cells hyperplasia, inflammatory cytokines, NF?B p65 immunocontent, and oxidative stress in airway. Moreover, 3-MA was able to improve mitochondrial energy metabolism and increase Na+,K+-ATPase activity. We also demonstrated that 3-MA decreased light chain 3B (LC3B) in BALF cells and lung tissue as well as reduced EETs formation in BALF.
CONCLUSION: our results verified an important role for RSV in the induction of EETs release. Moreover, DPI, NAC and 3-MA treatments decreased airway inflammation, oxidative stress and EETs release in asthma. Our data suggested that RSV, ROS and autophagy participate in the mechanisms for EETs release in asthma. Thus, identification of mechanisms that regulate EETs formation in asthma may contribute to a better understanding of the pathogenesis of this chronic inflammatory disease which damages patients? quality of life and is responsible for a high economic cost for the Brazilian Single Health System (SUS). / INTRODU??O: a asma ? uma doen?a inflamat?ria cr?nica caracterizada pela secre??o de elevados n?veis de citocinas do perfil T helper 2 (Th2) como interleucina (IL)-4, IL-5 e IL-13, esp?cies reativas de oxig?nio (EROs), aumento da autofagia e forma??o redes extracelulares de eosin?filos (EETs). A infec??o pelo v?rus sincicial respirat?rio (VSR) pode facilitar o desenvolvimento da sensibiliza??o al?rgica bem como exacerbar os sintomas da doen?a. Recentemente, estudos t?m demonstrado o aumento da autofagia em eosin?filos das vias de pacientes asm?ticos, contribuindo para o aumento da resposta inflamat?ria nas vias a?reas. Na asma, a produ??o excessiva de EETs pode causar dano tecidual e aumento da viscosidade do muco, podendo contribuir para o aumento da obstru??o da via a?rea e redu??o da fun??o pulmonar. Entretanto, os mecanismos de forma??o das EETs e seu papel fisiopatol?gico na asma s?o pouco compreendidos.
OBJETIVO: esta disserta??o teve como objetivo elucidar alguns mecanismos envolvidos na libera??o de EETs na asma. Avaliamos a participa??o do VSR in vitro, das EROs e da autofagia nos mecanismos envolvidos na libera??o das EETs em eosin?filos do lavado broncoalveolar (LBA) em um modelo experimental de asma.
METODOLOGIA: para o desenvolvimento do modelo experimental de asma, camundongos BALB/cJ foram sensibilizados com duas inje??es subcut?neas de ovalbumina (OVA) nos dias 0 e 7 seguidos por tr?s desafios intranasais com OVA nos dias 14, 15 e 16 do protocolo. No artigo cient?fico 1, eosin?filos do LBA de animais do grupo OVA e do grupo controle foram estimulados com VSR (103 PFU/mL) in vitro por 3 horas. Ap?s este per?odo, o sobrenadante da cultura foi coletado para a realiza??o das t?cnicas avaliadas conforme os objetivos espec?ficos deste artigo cient?fico. No artigo cientifico 2, durante o protocolo experimental de asma, os animais foram tratados via intranasal com um inibidor da nicotinamida adenina dinucleot?deo fosfato oxidase (NADPH oxidase), difenileno-iod?nio (DPI), ou com um precursor da glutationa, N-acetilciste?na (NAC), 45 minutos antes dos tr?s desafios intranasais com OVA. J? no artigo cientifico 3, os animais foram tratados via intranasal com um inibidor de autofagia, 3-metiladenina (3-MA), 45 minutos antes dos tr?s desafios intranasais com OVA. Ao final do protocolo o LBA e o tecido pulmonar foram coletados para a realiza??o das t?cnicas avaliadas em cada um dos artigos cient?ficos, conforme seus objetivos espec?ficos.
RESULTADOS: no artigo cientifico 1, observamos um aumento na libera??o de EETs em eosin?filos do LBA de animais submetidos ao modelo experimental de asma e estimulados com VSR in vitro. Por outro lado, o VSR in vitro foi capaz de diminuir os n?veis de IFN-? no sobrenadante da cultura de eosin?filos do LBA. Em rela??o aos resultados do artigo cient?fico 2, verificamos que no grupo OVA tratado com NAC ocorreu uma diminui??o no n?mero de c?lulas inflamat?rias no LBA bem como uma redu??o no infiltrado inflamat?rio pulmonar. Al?m disso, os animais do grupo OVAM tratados com DPI ou NAC apresentaram uma redu??o da enzima EPO, hiperplasia de c?lulas caliciformes, citocinas inflamat?rias e da prote?na fator nuclear kappa B (NF?B p65). Os tratamentos com DPI ou NAC foram capazes de reduzir a forma??o de EROs, aumentar a atividade da enzima catalase antixidante (CAT). Por outro lado, par?metros do metabolismo energ?tico mitocondrial aumentaram somente com o tratamento com NAC. Por fim, demonstramos que os tratamentos com DPI ou NAC foram capazes de reduzir a forma??o de EETs do LBA. No artigo cient?fico 3, observamos que no grupo OVA tratado com o inibidor de autofagia, 3-MA, ocorreu uma diminui??o no n?mero de c?lulas inflamat?rias no LBA bem como uma redu??o do infiltrado inflamat?rio pulmonar. Al?m disso, os animais tratados com 3-MA apresentaram uma redu??o nos n?veis da enzima EPO, hiperplasia de c?lulas caliciformes, citocinas inflamat?rias e da prote?na NF?B p65. O tratamento com 3-MA foi capaz de reduzir a forma??o de EROs bem como aumentar os n?veis da enzima antioxidante CAT. O tratamento com 3-MA tamb?m melhorou par?metros do metabolismo energ?tico mitocondrial e a atividade da enzima Na+,K+ATPase. Demonstramos tamb?m que o tratamento com 3-MA diminuiu o imunoconte?do da prote?na light chain 3B (LC3B) em eosin?filos do LBA e no tecido pulmonar e reduziu a forma??o de EETs no LBA.
CONCLUS?O: Nossos resultados demonstram um importante papel do VSR na indu??o da libera??o de EETs. Al?m disso, verificamos que os tratamentos com DPI, NAC e 3-MA foram capazes de reduzir a inflama??o das vias a?reas, o estresse oxidativo e a libera??o de EETs no LBA. Demonstramos que o VSR, as EROs e a autofagia participam dos mecanismos que regulam o processo de libera??o das EETs na asma. Assim, a identifica??o de alguns desses mecanismos envolvidos na libera??o de EETs na asma pode contribuir para uma melhor compreens?o da patog?nese desta doen?a inflamat?ria cr?nica que prejudica a qualidade de vida dos pacientes e ? respons?vel por um alto custo econ?mico para o Sistema ?nico de Sa?de (SUS).
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Influ?ncia do sistema anteoxidante da catalase no ciclo do glioxilato durante o estabelecimento p?s-germinativo de c?rtamo (Carthamus tinctorius L.) e de girassol (Helianthus annuus L.)Torres, Taffarel Melo 09 April 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-04-09 / Funda??o de Apoio ? Pesquisa do Estado do Rio Grande do Norte / Oilseeds are a high-value natural resource, due to its use as a substitute for
petroleum. However, the storage time can reduce seed viability and oil quality.
Therefore, scientific efforts have been made to provide a increment of storage time,
germination rates and plant establishment of high-value oilseeds. The seedling
establishment depends of the plant pass over the functional transition stage,
characterized by a metabolic change from heterotrophic condition to autotrophic one.
The storage oil mobilization is performed by β-oxidation process and the glyoxylate
cycle. Also, the functional transition involves acclimation to photosynthetic condition,
which generally includes the participation of antioxidant system and the reactive
oxygen species, the latter are produced in various reactions of primary and
secondary metabolism. In the present study, Catalase was inhibited during the
functional transition of sunflower and safflower, after were performed many analyzes
to elucidate the effects caused on the SOD and APX antioxidant systems. Also, were
checked the changes in expression pattern of the glyoxylate cycle enzymes markers,
ICL and MLS. It was observed that after CAT inhibition, the SOD and APX antioxidant
systems allow the seedling establishment. Besides, was verified that both oilseeds
can be accelerate the reverse mobilization and the photosynthetic establishment
when Catalase activity has dramatically decreased / As sementes oleaginosas armazenam ?leos, um recurso natural de alto valor
econ?mico devido a sua aplicabilidade como substituto aos derivados do petr?leo.
Por?m, o tempo de armazenamento pode inviabilizar a semente provocando a
redu??o da qualidade do ?leo e perda da viabilidade da semente. Por este motivo,
esfor?os cient?ficos t?m sido realizados para proporcionar um maior tempo de
armazenamento e incrementar taxas de germina??o e estabelecimento destas
plantas com alto valor econ?mico. O estabelecimento da pl?ntula depende da
capacidade do vegetal transpassar a etapa de transi??o funcional, caracterizada
pela mudan?a do estado heterotr?fico para o autotr?fico. O consumo das reservas
de ?leo depende das vias de β-oxida??o e do ciclo do glioxilato. No entanto, o
processo de transi??o envolve a aclimata??o do vegetal ? condi??o de organismo
fotossintetizante, que em geral conta com a participa??o fundamental do sistema
antioxidante do vegetal devido ? produ??o de esp?cies reativas de oxig?nio em
v?rias rea??es do metabolismo prim?rio e secund?rio. Neste estudo, a Catalase foi
inibida durante a transi??o funcional de girassol e c?rtamo para analisar os efeitos
provocados nos sistemas antioxidantes de APX e da SOD e verificar as
modifica??es no padr?o de express?o das enzimas marcadoras do ciclo do
glioxilato, ICL e MLS. Constatou-se que diante da inibi??o da Catalase o sistema
antioxidante da APX e da SOD permitem o estabelecimento da pl?ntula. Verificou-se
tamb?m que as duas oleaginoasas parecem acelerar a mobiliza??o de reservas e o
estabelecimento fotossint?tico quando a Catalase tem a atividade drasticamente
reduzida
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