Orientador: Marcos Nogueira Eberlin / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:03:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rocha_LilianLuciada_D.pdf: 7038351 bytes, checksum: aef66d9aae3ee21e2b41e1da18aa7456 (MD5) Previous issue date: 2002 / Doutorado

Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental. PROÁGUA, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-11-18T18:35:30Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_EstudoExtraçãoDesenvolvimento.pdf: 2963993 bytes, checksum: bfaea5e2c3453e06fae7857100f06970 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-11-19T17:55:50Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_EstudoExtraçãoDesenvolvimento.pdf: 2963993 bytes, checksum: bfaea5e2c3453e06fae7857100f06970 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-19T17:55:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_EstudoExtraçãoDesenvolvimento.pdf: 2963993 bytes, checksum: bfaea5e2c3453e06fae7857100f06970 (MD5) Previous issue date: 2012 / Microcontaminantes emergentes constituem um grupo de substâncias que é foco de intensa preocupação por parte de diversas agências internacionais. Neste grupo encontram-se diferentes classes de contaminantes, sendo elas: poluentes orgânicos persistentes, fármacos e produtos de cuidados pessoais, medicamentos veterinários, perturbadores endócrinos e nanomateriais. Mesmo sendo encontrados em concentrações da ordem de ng/L os mesmos são capazes de provocar efeitos adversos em humanos e na vida aquática; por este motivo seu monitoramento se faz necessário. Neste trabalho foram estudadas as seguintes classes de microcontaminantes: perturbadores endócrinos (estradiol, etinilestradiol, estrona, 4-octilfenol, 4-nonilfenol, dietilftalato, dietilhexilftalato e bisfenol A), fármacos (diclofenaco, ibuprofeno, paracetamol, naproxeno, ácido acetil salicílico e genfibrozila) e o estimulante cafeína. Como as concentrações desses contaminantes em água são bastante reduzidas é preciso realizar uma etapa de extração para que suas análises sejam viáveis. Deste modo foram estudadas as seguintes técnicas: extração em fase sólida (SPE), extração líquido-líquido (LLE) e microextração líquido-líquido dispersiva (DLLME). Para um estudo sistemático de todas as variáveis que podem influenciar as metodologias de extração, foram utilizados planejamentos experimentais multivariados (fatorial fracionário e Doehlert, ambos com ponto central). A SPE foi a técnica mais efetiva e as três variáveis estudadas foram significativas (volume, pH da amostra e pH da lavagem). A maioria dos analitos apresentaram valores de área cromatográfica maximizadas com o pH da amostra e da lavagem ácido e níveis médios de volume, dentro da faixa experimental investigada. Assim, a extração otimizada foi efetuada em cartucho Strata-X, com 500 mL de amostra em pH 2,0, lavagem com água em pH 2,0 e eluição realizada por 3 × 3 mL de acetato de etila. A determinação dos compostos estudados foi realizada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS), passando por etapa prévia de derivatização, e a metodologia foi validada apresentando limite de detecção do método (MLOD) de 0,5 a 5,0 ppb e limite de quantificação do método (MLOQ) na ordem de 0,5 a 75 ppb, e valores de recuperação de 33 a 160 %. Ainda, por haver uma etapa anterior de pré-concentração, os níveis de concentração em amostras naturais passíveis de análise são 1.000 vezes menor. A metodologia desenvolvida foi utilizada para análise de amostras de água superficial coletadas ao longo da bacia do Rio Doce e os resultados dessas análises foram tratados por meio da análise das componentes principais e da rede neural de Kohonen, onde foi possível observar o perfil de contaminação das amostras coletadas e relacioná-lo com o local de coleta. _________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Emergents microcontaminants are a group of substances that is the focus of intense concern by various international agencies. In this group there are different classes of contaminants, such as: persistente organic pollutants, pharmaceuticals and personal care products, veterinary drugs, endocrine disruptors and nanomaterials. Although the concentrations usually found are in the ng/L levels, they are able to cause adverse effects on aquatic life in humans and, for this reason, their monitoring are necessary. In this study, the following classes of microcontaminants were evaluated: endocrine disruptors (estradiol, ethinyl estradiol, estrone, 4-octylphenol, 4-nonylphenol, diethyl phthalate, dietilhexilftalato and bisphenol A), pharmaceuticals (diclofenac, ibuprofen, acetaminophen, naproxen, acetylsalicylic acid and gemfibrozil), and the stimulant caffeine. As the concentrations of these contaminants in water are very small it must be realized an extraction step to become possible their analyses. Thus it was studied the following techniques: solid phase extraction (SPE), liquid-liquid extraction (LLE) and dispersive liquid-liquid microextraction (DLLME). For a systematic study of all the variables that influence the extraction methodologies, it was utilized multivariate experimental designs (fractional factorial with central point and Doehlert). Thus it was selected the SPE as the most effective, considering that all the three studied variables were significant (volume and pH of the sample and pH of the wash), with most analytes presenting maximized chromatographic area values with acid pH of sample and for washing values and medium volume values, in the experimental domain investigated. In this way, the optimized extraction process was performed on Strata-X cartridge, with 500 mL of sample in pH 2.0, washing with water in pH 2.0 and elution carried out for 3 × 3 mL of ethyl acetate. The determination of the studied compounds was performed by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS), with a prior step of derivatization, and the methodology was validated showing MLOD from 0.5 to 5.0 ppb and MLOQ in the order from 0.5 to 75 ppb, and recovery values of 33 to 160 %. However, since there is a previous step of pre-concentration, concentration levels in natural samples that may be analyzed are 1000 times lower. The developed methodology was used to analyze surface water samples collected along the Rio Doce Basin and the results of these analyses were treated by principal component analysis and Kohonen neural network where it was possible to observe the profile of contamination of the collected samples and relate it to the sampling local.

Orientador: Fabiana Ferreira de Souza / Resumo: Os objetivos deste estudo foram validar a sonda fluorescente (MitoStatus Red) para análise de potencial mitocondrial em espermatozoide de cães por citometria de fluxo, associada a análise de integridade de membrana plasmática e do acrossomo (experimento I). Além disso, foi conduzida análise proteômica (abordagem shotgun) do plasma seminal de cães, sua correlação com a congelabilidade do sêmen e capacidade de ligação das células espermáticas em membrana perivitelina da gema de ovo (TL) (experimento II). No experimento I foram utilizado 10 ejaculados, com motilidade espermática >75% e as concentrações de 20 nM, 50 nM, 100 nM e 200 nM da sonda MitoStatus Red foram comparadas na citometria de fluxo. Concluiu-se que 20 nM foi a concentração ideal, sem danos as estruturas celulares. No experimento II foram utilizados 10 animais, 2 ejaculados/animal (n = 20). Os ejaculados foram avaliados por cinética espermática, citometria de fluxo (potencial mitocondrial, integridade de membrana plasmática e de acrossomo) e TL. A análise proteômica do plasma seminal foi avaliada por espectrometria de massas. Os ejaculados foram divididos em 3 clusters (cluster Low, cluster Medium, cluster Hight) de acordo com os parâmetros espermáticos pré e pós-descongelação. Os grupos foram correlacionados com as proteínas encontradas no plasma seminal. Concluiu-se que existe relação entre presença ou ausência de proteínas do plasma seminal de acordo com a qualidade espermática. / Mestre

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-13T20:44:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cunha_MariemRodriguesRibeiroda_D.pdf: 2999287 bytes, checksum: e5698d30a669305197d9916533cf295f (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A presença de resíduos de antibióticos no leite resulta da aplicação de diferentes substâncias antimicrobianas no gado leiteiro para o tratamento de infecções e uso profilático na prevenção de doenças e como aditivos adicionados à ração para promover o crescimento do animal. A utilização indiscriminada dos antibióticos pode estar associada à presença de resíduos no leite e em seus derivados acima dos Limites Máximos de Resíduos (LMR) permitidos. A demanda por um controle da qualidade deste produto levou a necessidade de métodos analíticos confiáveis que permitam avaliar o teor desses resíduos, visando garantir a qualidade dos alimentos, a segurança do consumidor e o reconhecimento mútuo a nível internacional. Esta pesquisa descreve o procedimento de validação intralaboratorial de um método para identificar e quantificar resíduos de anfenicóis e de treze antibióticos da classe dos B-lactâmicos em leite UHT e em pó integrais por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada ao espectrômetro de massas (CLAE/EM), de acordo com os critérios de validação preconizados pela Diretiva 2002/657/EC. Foram analisadas 475 amostras de leites integrais UHT e 140 em pó, perfazendo um total de 615 amostras. A coleta foi realizada pela Vigilância Sanitária dos estados de MG, RJ, SP, PR, RS, SC, ES, GO, MS, BA, PA e RO no período de julho/2006 a junho/2007. As amostras foram previamente submetidas ao ensaio de Kit SNAP e Kit ELIZA para cloranfenicol e B-Lactâmicos, respectivamente. O método por CLAE/EM foi utilizado para confirmar quantitativamente os antibióticos cloranfenicol, tianfenicol e florfenicol, e qualitativamente os B-lactâmicos (ampiclina, amoxicilina, cloxacilina, dicloxacilina, oxacilina, penicilinas G e V, cefapirina, cefalotin, cefazolin, cefoperazone e ceftiofur). Observou-se que 0,65% do total de amostras de leite UHT foram confirmadas, enquanto na triagem 4,11% foram reagentes. Para o leite em pó somente 1,44% do total de amostras foram confirmadas para florfenicol, enquanto na triagem 30,9% das amostras foram reagentes. Na triagem foi detectada a presença de resíduos de ß-lactâmicos em 3 amostras de leite UHT e 3 amostras de leite em pó. Em todas foi confirmada a presença do resíduo de cefapirina, representando, respectivamente, 0,65% e 2,14% do total das amostras. Os resultados mostraram que o método desenvolvido apresentou eficiência satisfatória ao uso pretendido / Abstract: The presence of antibiotic residues in milk resulting from the application of various antimicrobial substances in dairy cattle for the treatment of infections and prophylactic use in prevention of disease, before or after exposure, and added to feed additives to promote growth of the animal. Their indiscriminate use can be associated to the presence of residues in the milk and milk derivatives above the Maximum Limits of Residues (LMR) allowed. The demand for a control of the quality of this product, took to the development of reliable analytic methods that allow to evaluate the residue of antibiotics seeking to guarantee the quality of the victuals, the consumer's safety and the mutual recognition at international level. This study describes the procedure for intralaboratory validation of the method to identify and quantify residues amphenicols and thirteen antibiotics of the class of B¿lactams in UHT and powder milk by high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometer. They were analyzed 475 UHT milk samples and 140 powder milk samples, covering a total of 615. The collection was carried by the Sanitary Surveillances of States of MG, RJ, SP, Pr, RS, SC, ES, GO, MS, BA and PA in the period from july 2006 to june 2007. The samples were previously submitted to Kit SNAP rehearsal and of Kit ELISA for chloranphenicol and B-lactamics respectively.The method of high performance liquid chromatography coupled with simple quadrupole mass detection (HPLC/MS) it was used to confirm quantitatively the chloranphenicol, thiamphenicol and florphenicol antibiotics and qualitatively the B-lactamics ampicillins, amoxicillin, cloxacillin, oxacillin, penicillins G and V, cephapirin, cephalothin, cefoperazone and ceftiofur antibiotics. It was found that 0.65% of total samples of milk were confirmed, while 4.11% were in the screening reagents. For milk powder only 1.44% of total samples were confirmed to florphenicol, while 30.9% in the screening of samples were reactive. Sorting to detected in the presence for residues of B-lactamics in three samples of milk an three samples of milk powder. In all samples the cephapirin, a B-lactamics class of cephalosporins, was aconfirmed, representin respectively 065% and 2.14 of total samples. The results showed that the method developed showed satisfactory performance to intended use / Doutorado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Jose Pedrazzolli Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T08:01:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cruz_AlessandrodeCarvalho_M.pdf: 6535924 bytes, checksum: 32e397fd65c63f6c293df90358e9eff3 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Neste trabalho, a codeína foi determinada em plasma humano, através de metodologia analítica baseada no acoplamento da extração sólido-líquido "online" HPLC-MS/MS por electrospray positivo. O método foi desenvolvido visando a injeção direta de amostras plasmáticas sem prévio tratamento. O padrão interno utilizado foi o tramadol. O tempo total de análise foi de 3 min./amostra e devido ao sincronismo entre a corrida cromatográfica e a extração "on-line" automatizada o método possibilita a análise de mais de 400 amostras por dia. O uso de coluna monolítica (Chromolith Performance RP-18e, 100 mm x 4.6 mm) e extração em fase sólida automatizada (sistema Prospekt 2) demonstrou ser altamente eficiente em relação à resolução dos picos cromatográficos, tempo de retenção e pressão no interior da coluna cromatográfica. A curva de calibração foi definida com o intervalo de concentração de 5 à 200 ng/mL, atingindo boa linearidade. Excelentes resultados foram alcançados em relação à precisão e exatidão intra e inter-dia apresentando uma variação de 2.33 à 7.25% (CV%) e 2.35 à 9.97% (RE%), respectivamente. A metodologia analítica desenvolvida neste trabalho, baseada no acoplamento "on-line" SPE-HPLC-MS/MS apresentou boa seletividade, robustez, exatidão e precisão, bem como uma alta produtividade nas análises para determinação de codeína em plasma humano / Abstract: A specific LC-MS/MS method was developed and validated for automated determination of codeine in human plasma, using on-line solid-phase extraction (SPE) system coupled with positive ion electrospray ionization tandem mass spectrometry. Method allowed plasma direct injection onto cartridge without sample pre-treatment. Total analysis time per run was 3 min, allowing high-throughput for codeine determination. SPE on-line along monolithic column (Chromolith Performance RP-18e, 100 mm x 4.6 mm) demonstrated to be highly effective in terms of backpressure, separation speed and peak asymmetry. Calibration curves range was linear 5.0-200 ng/mL. Method showed an excellent intra-assay and inter-assay precision ranged from 2.33 to 7.25% (CV%) as well as great intra-assay and inter-assay accuracy, ranging from -2.35 to 9.97% (RE%). SPE-LC-MS/MS method provided selectivity, robustness, accuracy, precision and high-throughput to assess codeine pharmacokinetics in human plasma samples / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T03:36:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_MarciaAparecidada_D.pdf: 10125609 bytes, checksum: 145f4a9b65da8eb2521c6f76e1d715a9 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A biodisponibilidade relativa, de duas formulações de comprimido de clorpropamida 250 mg, foi avaliada em voluntários sadios de ambos os sexos. O estudo foi aberto, aleatorizado, cruzado em dois períodos com intervalo de três semanas, para o qual foram selecionados 36 voluntários. As amostras de sangue foram coletadas antes da administração de dose única de cada formulação, uma Teste (T) e outra Referência (R) e durante 72 horas após a administração. A concentração plasmática de clorpropamida foi determinada por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massa seqüencial (LC/MS/MS), usando ionização tipo eletrospray no modo positivo com monitoramento de reação múltipla (MRM). O limite de quantificação foi de 0,1 µg/mL. O padrão interno foi a glibenclamida. A ASC0-72, que representa ASC truncada, Cmax e Tmax foram obtidas da curva de concentração plasmática em função do tempo. A ASC foi calculada empregando o método trapezoidal. Apenas ASC0-72 e Cmax de ambas as formulações foram estatisticamente comparados. A média geométrica e o intervalo de confiança (90%) da razão T/R foram respectivamente 93,99 (87,11%¿101,41%) para Cmax e 92,45 (85,96%-99,44%) para ASC0-72. Como o intervalo de confiança (90%), para ASC0-72 e Cmax, apresenta-se dentro do intervalo de confiança de 80-125% proposto pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa) e pelo Food and Drug Administration (FDA-EUA), concluiu-se que ambas as formulações estudadas são bioequivalentes, no que diz respeito à magnitude e a velocidade de absorção e, portanto podem ser clinicamente intercambiáveis sem prejuízo terapêutico. Palavras-chave: Clorpropamida, bioequivalência, HPLC acoplada à espectrometria de massa seqüencial (LC/MS/MS), biodisponibilidade, farmacocinética / Abstract: The relative bioavailability between two formulations of chlorpropamide was assessed on the dosage form tablet 250 mg, in healthy volunteers of both sexes. The study was conducted using an open, randomized, two-period crossover design with the 3-week washout interval. Thirty-six subjects were selected. The blood samples were collected at the time prior to dosing and over an interval of 72 hours, of the single dose of each formulation, a Test (T) and another Reference (R). Chlorpropamide plasma concentrations were analyzed by high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) with positive ion electrospray ionization using multiple reaction monitoring (MRM). The limit of quantification was 0,1 µg/mL for plasma Chlorpropamide analysis. The internal standard was the glibenclamide. The AUC 0-72, which represents AUC truncated, Cmax and Tmax were obtained from plasma concentration-time curve. The AUC was calculated using the trapezoidal rule. Only AUC0-72 and Cmax of the each other formulations were statistically compared. The geometric mean and respective 90% confidence interval (CI) of T/R ratios were 93.99 (87.11%¿101.41%) for Cmax and 92.45 (85.96%-99.44 %) for AUC0-72. Since the interval confidential (90%) for AUC0-72 and Cmax ratios were within the 80-125% interval proposed by the Agência Nacional de Vigilância Sanitária-Brazil (Brasil-Anvisa) and by the Food and Drug Administration (USA-FDA), it was concluded that both the formulations studied are bioequivalent for both the rate and extent of absorption and, therefore can be used interchangeably without impairing therapeutic effectiveness. Key words: Chlorpropamide, bioequivalence, high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC/MS/MS), bioavailability, pharmacokinetic / Doutorado / Doutor em Farmacologia