Made available in DSpace on 2014-06-12T23:00:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4199_1.pdf: 7087056 bytes, checksum: 2904d06b2b0020f646791deb08fd49cc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / A Olanzapina é usada para tratamento agudo e manutenção da esquizofrenia, bem como outras psicoses. Apesar dos antipsicóticos atípicos serem cada vez mais utilizados nos dias atuais, pouco se sabe sobre sua influência na espermatogênese. Tendo como base que já foram detectados receptores dopaminérgicos em células germinativas, o presente estudo tem como objetivo investigar os efeitos do tratamento com Olanzapina, durante o período de 45 dias. Após o prazo de aplicação, foi realizada a coleta do sangue e os ratos foram submetidos à eutanásia para retirada das gônadas e glândulas anexas. Foi observado que a Olanzapina produziu modificações estruturais e funcionais nas estruturas investigadas. Houve redução nos níveis séricos de testosterona, nos pesos testicular, epididimário e prostático, no diâmetro tubular e na altura do epitélio seminífero, as quais podem ser relacionadas à redução no processo espermatogênico

Orientador : Nelson Rodrigues Netto Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-15T00:07:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_Ubirajara_D.pdf: 1291258 bytes, checksum: f00adfb5b6ee8b5015a1abf5ff9b8416 (MD5) Previous issue date: 1989 / Resumo: Foi avaliado o potencial fértil de 54 homens, com idade variando de 19 a 42 anos, submetidos a orquiectomia unilateral. Todos apresentavam testículo contralateral tópico, com volume e consistência normais. Os pacientes foram divididos, de acordo com a causa da orquiectomia, em grupo I (criptorquidia, 19 casos); grupo 11 (torção de testículo, 14 casos); grupo III (tumor maligilo, 12 casos); grupo IV (acidental, 9 casos). Foram colhidos, no mínimo, dois espermogramas, com período de abstinência que variou de 5 a 14 dias. O tempo entre a espermioanálise e a cirurgia variou de 6 meses a 30 anos, mediana de 5 anos. Todas as amostras de sêmen foram examinadas pelo mesmo laboratório (Serviço de Andrologia da Universidade de Hamburg, RFA - Prof. Dr. C. Schirren). Não se observou diferença entre os grupos de pacientes analisados quanto à concentração de espermatozóides. A porcentagem de indivíduos com menos de 20 milhões/mI foi 52,6% no grupo I, 57,5% no grupo 11, 50% no grupo III e 55,5% no grupo IV. Concluiu-se que, a retirada de um testículo pode acarretar diminuição importante do potencial fértil no homem, independentemente da etiologia da hemicastração. / Abstract: It was evaluated the fertility potentia} of 54 men, between 19 and 42 years old, submitted to unilateral orchiectomy. AlI of them had contralateral scrotal testis with normal volume and consistence. The patients were divided according to the etiology purpose of the orchiectomy in 4 groups: group I cryptorchidism, 19 cases; group 2 - testicular torsion, 14 cases: group 3 -testicular cancer, 12 cases; group 4 - accidental, 9 cases. The period between surgery and seminal analysis varied from 6 months to 30 years (mean 5 years). AU semen samples were examined at the same laboratory (Andrology Department of University of Hamburg, FRG - Pror. Dr. C. Schirren). No difference was observed among the groups of patients, regarding the sperm concentration. 52,6% in group 1, 57,5% in group 2, 50% in group 3 and 55,5% in group 4 presented less than 20 millionlml spermatozoa. We concluded that unilateral orchiectomy leads to a considerable decrease of male fertility potential, independently of the primary etiology. / Doutorado / Doutor em Ciências Médicas

Submitted by Lucas Benites Doretto (lucasbdoretto@gmail.com) on 2019-02-01T13:11:58Z No. of bitstreams: 1 Doretto_2018.pdf: 4650233 bytes, checksum: 9bea19edf8684552c0f36f3b98fe9df8 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2019-02-01T18:19:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 doretto_lb_me_bot.pdf: 4650233 bytes, checksum: 9bea19edf8684552c0f36f3b98fe9df8 (MD5) / Made available in DSpace on 2019-02-01T18:19:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 doretto_lb_me_bot.pdf: 4650233 bytes, checksum: 9bea19edf8684552c0f36f3b98fe9df8 (MD5) Previous issue date: 2018-12-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As células tronco são classificadas em dois grandes grupos de acordo com sua origem e capacidade de diferenciação. Células tronco embrionárias (CTE) são originadas do zigoto, e podem ser classificadas como totipotentes, isto é, capazes de originar um indivíduo inteiro, ou pluripotentes, quando originam os três folhetos embrionários (ecto, meso e endoderme). As células tronco adultas (CTA) são as células tronco encontradas nos tecidos fetais e adultos; classificadas como uni, oligo ou multipotentes dependendo da variedade de tecidos originados a partir delas. Marcadores de células tronco, como antígenos de superfície específicos, fatores de trancrição como OCT4 e NANOG são expressos em CTE e algumas CTA, mas são rapidamente reprimidos à medida que as células se diferenciam. O presente trabalho tem como objetivo identificar marcadores de células tronco e com isso, os efeitos do hormônio endócrino Fsh e do fator parácrino GDNF na atividade proliferativa e gênica dessas populações de células e também de células de Sertoli. Foi observado que os marcadores Pou5f3 e Gfra1a são principalmente expressos em espermatogônias tronco indiferenciadas e que sua expressão reduz significativamente sob efeito do recombinante zebrafish Fsh. Por outro lado, genes como o igf3, nanos3 e nanog tiveram sua expressão aumentada significativamente. O recombinante humano GDNF não altera significativamente a expressão desses genes, porém estimula a proliferação de espermatogônias tipo Aund e Adiff e células de Sertoli associadas. Logo, conclui-se que o rzfFsh atua de maneira endócrina na diferenciação de espermatogônias tronco Pou5f3+ e Gfra1a+ via células de Sertoli, visto que seu receptor é principalmente expresso em cistos indiferenciados. O rhGDNF, que por sua vez é expresso em células germinativas, estimula a proliferação de Aund e Adiff e células de Sertoli associadas através de seu receptor Gfra1a, expresso em ambas populações. / 2016/12101-4

Orientador: Luis Guillermo Bahamondes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-11-07T17:25:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nascimento_JosianeAparecidaAndradedo_D.pdf: 304920 bytes, checksum: a33fb24706f276ef7a6353ee4def52fe (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Os objetivos foram avaliar a reação acrossomal (RA) de espermatozóides recuperados depois de lavado uterino, medir o levonorgestrel (LNG) no soro e no lavado uterino e avaliar a expressão da glicodelina-A endometrial após a administração do LNG para anticoncepção de emergência (AE). MATERIAIS E MÉTODOS: Quarenta e oito experimentos foram realizados em 14 mulheres menstruando regularmente. Quatro grupos foram formados diferindo entre eles os intervalos coito?tratamento e tratamento?recuperação dos espermatozóides e obtenção da biópsia. RESULTADOS: A concentração dos espermatozóides recuperados a partir da cavidade uterina 24 ou 48 horas após o tratamento foi de 14,5 ± 3,9 x 106 e 17,3 ± 6,8 x 106 células/ml, respectivamente. Não houve diferenças entre a taxa de RA e a intensidade da expressão da glicodelina-A endometrial nos ciclos tratados com LNG ou placebo. Após 24 horas da administração do LNG o valor no fluido de lavagem da cavidade uterina representou 1,38% dos valores observados no soro. CONCLUSÕES: A RA ou a expressão da glicodelina-A endometrial não foram influenciadas pelo LNG após 24 ou 48 horas da sua administração para AE. O LNG não prejudicou o muco Resumo x cervical uma vez que espermatozóides viáveis foram encontrados no trato genital feminino 36-60 horas após o coito e 24-48 horas após a ingestão do LNG. O mecanismo de ação do LNG para AE permanece enigmático / Abstract: The objectives were to assess acrosomal reaction (AR) of spermatozoa following flushing the uterus, to measure levonorgestrel (LNG) in serum and in the flushing fluid of the uterus and the endometrial glycodelin-A expression after administration of LNG as emergency contraception (EC). MATERIALS AND METHODS: Forty-eight experiments were conducted on 14 regularly menstruating women. Four groups were formed based on different intercourse - treatment interval and treatment ? recovery of spermatozoa and the biopsies. RESULTS: Spermatozoa recovered from uterus 24 or 48 hours after treatment were 14,5 ± 3,9 x 106 and 17,3 ± 6,8 x 106 cells/ml, respectively. There were no differences between the AR rate and the endometrial glycodelin-A staining intensity on LNG or placebo treated cycles. LNG at uterine flushing medium represents 1.38% of the values observed in serum at 24 hours after LNG intake. CONCLUSIONS: AR status or glycodelin-A were not influenced after 24 or 48 hours of administration of 1.5 mg of LNG as EC indicating no significant effect. LNG did not impair the cervical mucus either because viable spermatozoa were found in the genital tract 36-60 hours after coitus and 24-48 hours after LNG intake. The mechanism of action of LNG as EC remains enigmatic / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Tocoginecologia

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:02:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002 / Com o objetivo de contribuir para o conhecimento da biologia reprodutiva do peru Meleagris gafopavo, descreveu-se, nesta pesquisa, a morfologia, histoquimica e morfometria de orgaos genitais masculinos desta especie, utilizando as tecnicas histologicas de rotina, coloracoes histoquimicas e analises morfometricas. O testiculo, epididimo e ducto deferente sao orgaos pares, situados simetricamente de cada lado da linha mediana corporal, no interior da cavidade celomatica. Revestido por delicada tunica albuginea, o testiculo apresenta riqueza em tubulos seminiferos (76,4 por cento do conteudo testicular) e escasso tecido intertubular. No epitelio seminifero sao observadas celulas de Sertoli; espermatogonias (A escura, A clara 1, A clara 2 e 13); espermatocitos e espermatides, em 13 etapas de diferenciacao. O ciclo do epitelio seminifero apresenta 11 estagios, descritos de acordo com as mudancas observadas no acrossoma, forma do nucleo e aspecto da cromatina das espermatides, durante a espermiogenese. O epididimo e constituido pela rede testicular ductulo eferente, ductulo de ligacao e ducto epididimario, mostrando diferencas no epitelio de revestimento, de acordo com a estrutura analisada A positividade aos metodos histoquimicos observada na tunica albuginea, tecido conjuntivo peritubular e membrana basal do epitelio dos tubulos seminiferos e dos componentes das vias genitais, indica presenca de glicosaminoglicanas caboxiladas, sulfatadas, bem como glicoproteinas' ricas em acido sialico. O epitelio seminifero e negativo aos metodos do acido periodicoreativo de Shiff (PAS) e do azul de Alcian. O epitelio dos ductulos eferentes e o unico do epididimo que mostra caracteristicas de celulas secretoras de glicoproteinas neutras. Revestido por epitelio pseudoestratificado prismatico, o ducto deferente e longo e abre-se no urodeo da cloaca, atraves de papila. E positivo aos metodos histoquimicos somente nos segmentos medio e caudal, sendo capaz de secretar glicosaminoglicanas caboxiladas, sulfatadas e glicoproteinas ricas em acido sialico...(au) / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-02-20T14:17:42Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 888183 bytes, checksum: a2e88459716ce3e0c006ae2ed7a79d60 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-20T14:17:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 888183 bytes, checksum: a2e88459716ce3e0c006ae2ed7a79d60 (MD5) Previous issue date: 2017-09-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os testículos de anuros são descritos como órgãos pares, arredondados, compactos, geralmente amarelados, esbranquiçados ou branco-leitosos. Em anuros a espermatogênese é cística, e nos cistos as células germinativas se encontram no mesmo estádio de desenvolvimento. A compreensão do ciclo reprodutivo de anuros torna-se necessário para definir as características da sazonalidade do desenvolvimento das células germinativas. O trabalho foi executado com o objetivo da avaliação quantitativa do desenvolvimento gonadal, bem como do processo espermatogênico e dos índices somáticos em rãs-touro mantidas em condições abióticas de temperatura, umidade e luminosidade controladas. Foram utilizadas 108 rãs machos com idade de 120 a 246 dias. Foram avaliados o desenvolvimento do peso e comprimento corporal, a morfologia gonadal e os índices somáticos durante um período de 124 dias. Foram também quantificados os parâmetros produtivos espermáticos, como: proporção dos diferentes tipos de células contidas nos lóbulos seminíferos e proporção intertubular. A partir da proporção volumétrica dos diferentes tipos de cistos foram definidos os estádios de desenvolvimento testicular, sendo considerado: No início da maturação os animais tinham 120 dias de idade. A média dos índices gonadossomáticos, adipossomático e hepatossomático foram de 0,018%, 3,836% e 4,464%, respectivamente. Os cistos continham em média, maior quantidade de espermatogônia B, seguido de espermatócitos primários e espermatogônia A. Na transição do início de maturação para a maturação intermediária, os animais tinham 148 dias de idade. A média dos índices gonadossomáticos, adipossomático e hepatossomático foram de 0,029%, 4,50% e 4,99%, respectivamente. Os cistos encontrados em maior proporção foram de espermatogônia B, seguido de espermatócito primário e espermatogônia A. Na transição da maturação intermediária para maturação avançada, os animais tinham 196 dias de idade. A média dos índices gonadossomáticos, adipossomático e hepatossomático foram de 0,041%, 4,48% e 4,41%, respectivamente. Os cistos encontrados em maior proporção foram de espermatogônia B, seguido de espermatócito primário e espermátide alongada. Na maturação avançada, os animais tinham 246 dias de idade. A média dos índices gonadossomáticos, adipossomático e hepatossomático foram de 0,062%, 7,28% e 6,29%, respectivamente. Os cistos encontrados em maior proporção foram de espermatócito primário, seguido de espermatogônia B e espermátide alongada. Os estádios de desenvolvimento testiculares ocorrem concomitantemente com o estágio dos animais. O desenvolvimento gonadal está relacionado com o estádio fisiológico reprodutivo. O ciclo espermatogênico de rãs-touro mantidas em ambiente controlado é cíclico e contínuo. / The anuric testicles are described as peer organs, rounded, compact, usually yellowish, whitish or milky white. In anurans the spermatogenesis is cystic, and in the cysts the germ cells are at the same stage of development. The comprehension of the reproductive cycle of anurans becomes necessary to define the seasonality characteristics of germ cell development. This work aimed the quantitative evaluation of the gonadal development, as well as the spermatogenic process and the somatic indices in bullfrogs maintained under abiotic conditions of controlled temperature, humidity and luminosity. Were used 108 male frogs, ranging from 120 to 246 days. The developments of body weight and length, gonadal morphology and somatic indices were evaluated during the time of 124 days. Sperm productive parameters were also quantified, such as: proportion of different types of cells contained in the seminiferous lobes and intertubular ratio. From the volumetric ratio of the different types of cysts the stages of testicular development were defined, being considered: At the beginning of maturation the animals were 120 days old. The mean gonadosomatic, adiposomal and hepatosomatic scores were 0.018%, 3.836% and 4.464%, respectively. The cysts contained, on average, a greater amount of spermatogonia B, followed by primary spermatocytes and spermatogonia A. At the transition from early maturation to intermediate maturation, the animals were 148 days old. The mean gonadosomatic, adiposomal and hepatosomatic scores were 0.029%, 4.50% and 4.99%, respectively. The cysts found in the highest proportion were spermatogonia B, followed by primary spermatocytes and spermatogonia A. At the transition from intermediate maturation to advanced maturation, the animals were 196 days old. The mean gonadosomatic, adiposomal and hepatosomatic rates were 0.041%, 4.48% and 4.41%, respectively. The cysts found in the highest proportion were spermatogonia B, followed by primary spermatocytes and elongated spermatids. At advanced maturation, the animals were 246 days old. The mean gonadosomatic, adiposomal and hepatosomatic scores were 0.062%, 7.28% and 6.29%, respectively. The cysts found in the highest proportion were primary spermatocytes, followed by spermatogonia B and elongated spermatids. Testicular development stages occur concurrently with the stage of the animals. Gonadal development is related to the reproductive physiological stage. The spermatogenic cycle of bullfrogs kept in a controlled environment is cyclical and continuous.

A concentração intratesticular de andrógenos no período fetal e neonatal é elevada, entretanto as células de Sertoli não expressam o receptor intracelular de andrógenos (iAR). Assim, neste período as células de Sertoli não respondem aos andrógenos através dos mecanismos clássicos. A importância fisiológica da elevada concentração de andrógenos ainda não é compreendida, acredita-se ser em virtude de sua ação através de mecanismos não-clássicos. Os hormônios T (testosterona) e FSH atuam sinergicamente para aumentar a eficiência da espermatogênese, entretanto estudos mostram que o FSH bloqueia a fosforilação ERK mediada pela ação não-clássica da T. Este estudo teve por objetivos: avaliar a expressão de iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn; avaliar o efeito da T e da EpiT sobre a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn; avaliar o efeito da T sobre o potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn; e avaliar a interação entre os efeitos eletrofisiológicos da T e epitestosterona (EpiT) com o FSH em células de Sertoli de ratos no 14º dpn. A técnica de imunoistoquímica foi utilizada para a avaliação a imunorreatividade ao iAR (n=5 por grupo). Na técnica de captação de 45Ca2+ testículos inteiros de ratos no 4º dpn foram pré-incubados com 45Ca2+ por 60 minutos e incubados com T (1 μM) ou EpiT (1 μM) por 5 minutos (n=5 por grupo). O potencial e a resistência de membrana das células de Sertoli foram registrados através da técnica eletrofisiológica de registro intracelular. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Nos testículos de animais no 5º dpn foi realizada a aplicação de T (1 μM), n=4. Nos animais no 14º dpn foi realizada a aplicação de FSH (4 mU) seguida da aplicação de T (1 μM) ou e EpiT (1 μM), após 30 segundos (n=7 e 6, respectivamente); e EpiT (1μM) após 5 minutos (n=6). Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados foram analisados pelo teste T student para comparação entre dois grupos, ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni e teste de Friedmann, seguido do pós-teste de Dunn. Este projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais - CEUA/UFRGS n° 22635. A imunorreação ao iAR foi observa nas células de Leydig e células peritubulares em todas as idades. Não foi observada marcação referente a iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn. T e EpiT estimularam a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn. A aplicação tópica de T promoveu a despolarização do potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 4º dpn. A aplicação de FSH seguida da aplicação de T e EpiT promoveu uma redução da reposta dos dois hormônios. Já aplicação de EpiT 5 minutos após a aplicação do FSH resultou em um retardo da despolarização promovida pela EpiT. A resistência da célula também foi reduzida, em comparação com a resistência da aplicação isolada da EpiT. Concluímos que: as células de Sertoli de ratos Wistar não expressam iAR no 4º e 5º dpn; T e EpiT atuam através do mecanismo de ação não clássico estimulado a captação de cálcio em testículos inteiros de ratos no 4º dpn; e a T produz um efeito despolarizante sobre a membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn similar ao já observado aos 15 dias. Este efeito não-clássico produzido pelos andrógenos é mediado por um receptor, ainda não identificado, localizado na membrana celular ou próximo a ela, estruturalmente diferente do iAR. A interação entre os efeitos do FSH e andrógenos sobre o potencial de membrana de células de Sertoli resulta na redução da resposta despolarizante desencadeada pelos hormônios. / The intratesticular testosterone concentration is high in the early postnatal period, but the intracellular androgen receptor expression is still absent in Sertoli cells. Thus, these cells do not respond to androgens, through classical mechanisms. The physiological importance of the high concentration of androgens in the testes is not fully understood, it is believed to be due to its action through non-classical mechanisms. Both FSH and T (testosterone) increase the spermatogenic efficiency, however studies show that FSH blocks testosterone-mediated activation of ERK mediated by non-classic action. This study aimed to evaluate iAR expression in Sertoli cells from Wistar rats on post-natal day (pnd) 4 and 5; the non-classical effects of testosterone and epitestosterone on calcium uptake and the electrophysiological effects of testosterone (1 μM) on Sertoli cells from rats on pdn 4 and 5 with lack of expression of intracellular androgen receptor (iAR), and evaluate the crosstalk on electrophysiological effects of testosterone and epitestosterone with FSH in Sertoli cells from rats on pnd 14. Immunohistochemistry was used to evaluate iAR immunoreactivity in Sertoli cells from Wistar rats (n = 5 each group). Calcium uptake was investigated using whole testes from rats on pdn 4. The testicular tissue was pre-incubated in Hank’s balanced salt solution (HBSS) with 45Ca2+ for 60 min (n=5 in each group). Then, testes were incubated in HBSS with 45Ca2+, with or without T (1 μM) or EpiT (1 μM) for five minutes. The membrane potential of Sertoli cells was recorded using a standard single microelectrode technique. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. T (1 μM) it was apply in testis of rats on pnd 5 (n=5). In animals on pnd 14 FSH (4 mU) injection was followed by the application of T (1 μM) or EpiT (1 μM) after 30 seconds (n = 7 and 6, respectively) and EpiT (1μM), after 5 minutes (n = 6). The results are given as mean ± SEM. For statistical analyses it was used Student T-test, ANOVA for repeated measures followed by Bonferroni post-test and Friedman test followed by Dunn's post-test. This study was approved by the Ethics Committee for animal research of UFRGS (process number CEUA/UFRGS n° 22635). The iAR immunoreactivity was observed in Leydig and peritubular cells at all ages. No immunoreaction concerning of iAR was observed in Sertoli cells on pnd 4 and 5. At this age both, testosterone and epitestosterone increased 45Ca2+ uptake, within 5 minutes of incubation. Testosterone promoted membrane potential depolarization of Sertoli cells on pnd 5. FSH application followed by testosterone and epitestosterone reduced the depolarization of the two hormones. Application of epitestosterone five minutes after FSH resulted in a delay of epitestosterone-promoted depolarization. The cell resistance was also reduced in comparison with the resistance of the isolated application EpiT. Sertoli cells from rats on pnd 4 and 5 do not express iAR. Both T and EpiT act through non-classical mechanism stimulating calcium uptake in whole rat testes on dpn 4. T produces a depolarizing effect on the Sertoli cell membrane of rats on pnd 5 similar to observed at 15-day-old rats. This non classical action of androgens is mediated by a receptor, not yet identified, situated in the membrane cell or close to it, different from iAR. FSH, and testosterone/epitestosterone affect each other electrophysiological responses suggesting a cross talking in the intracellular signaling pathways.

A concentração intratesticular de andrógenos no período fetal e neonatal é elevada, entretanto as células de Sertoli não expressam o receptor intracelular de andrógenos (iAR). Assim, neste período as células de Sertoli não respondem aos andrógenos através dos mecanismos clássicos. A importância fisiológica da elevada concentração de andrógenos ainda não é compreendida, acredita-se ser em virtude de sua ação através de mecanismos não-clássicos. Os hormônios T (testosterona) e FSH atuam sinergicamente para aumentar a eficiência da espermatogênese, entretanto estudos mostram que o FSH bloqueia a fosforilação ERK mediada pela ação não-clássica da T. Este estudo teve por objetivos: avaliar a expressão de iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn; avaliar o efeito da T e da EpiT sobre a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn; avaliar o efeito da T sobre o potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn; e avaliar a interação entre os efeitos eletrofisiológicos da T e epitestosterona (EpiT) com o FSH em células de Sertoli de ratos no 14º dpn. A técnica de imunoistoquímica foi utilizada para a avaliação a imunorreatividade ao iAR (n=5 por grupo). Na técnica de captação de 45Ca2+ testículos inteiros de ratos no 4º dpn foram pré-incubados com 45Ca2+ por 60 minutos e incubados com T (1 μM) ou EpiT (1 μM) por 5 minutos (n=5 por grupo). O potencial e a resistência de membrana das células de Sertoli foram registrados através da técnica eletrofisiológica de registro intracelular. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Nos testículos de animais no 5º dpn foi realizada a aplicação de T (1 μM), n=4. Nos animais no 14º dpn foi realizada a aplicação de FSH (4 mU) seguida da aplicação de T (1 μM) ou e EpiT (1 μM), após 30 segundos (n=7 e 6, respectivamente); e EpiT (1μM) após 5 minutos (n=6). Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados foram analisados pelo teste T student para comparação entre dois grupos, ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni e teste de Friedmann, seguido do pós-teste de Dunn. Este projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais - CEUA/UFRGS n° 22635. A imunorreação ao iAR foi observa nas células de Leydig e células peritubulares em todas as idades. Não foi observada marcação referente a iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn. T e EpiT estimularam a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn. A aplicação tópica de T promoveu a despolarização do potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 4º dpn. A aplicação de FSH seguida da aplicação de T e EpiT promoveu uma redução da reposta dos dois hormônios. Já aplicação de EpiT 5 minutos após a aplicação do FSH resultou em um retardo da despolarização promovida pela EpiT. A resistência da célula também foi reduzida, em comparação com a resistência da aplicação isolada da EpiT. Concluímos que: as células de Sertoli de ratos Wistar não expressam iAR no 4º e 5º dpn; T e EpiT atuam através do mecanismo de ação não clássico estimulado a captação de cálcio em testículos inteiros de ratos no 4º dpn; e a T produz um efeito despolarizante sobre a membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn similar ao já observado aos 15 dias. Este efeito não-clássico produzido pelos andrógenos é mediado por um receptor, ainda não identificado, localizado na membrana celular ou próximo a ela, estruturalmente diferente do iAR. A interação entre os efeitos do FSH e andrógenos sobre o potencial de membrana de células de Sertoli resulta na redução da resposta despolarizante desencadeada pelos hormônios. / The intratesticular testosterone concentration is high in the early postnatal period, but the intracellular androgen receptor expression is still absent in Sertoli cells. Thus, these cells do not respond to androgens, through classical mechanisms. The physiological importance of the high concentration of androgens in the testes is not fully understood, it is believed to be due to its action through non-classical mechanisms. Both FSH and T (testosterone) increase the spermatogenic efficiency, however studies show that FSH blocks testosterone-mediated activation of ERK mediated by non-classic action. This study aimed to evaluate iAR expression in Sertoli cells from Wistar rats on post-natal day (pnd) 4 and 5; the non-classical effects of testosterone and epitestosterone on calcium uptake and the electrophysiological effects of testosterone (1 μM) on Sertoli cells from rats on pdn 4 and 5 with lack of expression of intracellular androgen receptor (iAR), and evaluate the crosstalk on electrophysiological effects of testosterone and epitestosterone with FSH in Sertoli cells from rats on pnd 14. Immunohistochemistry was used to evaluate iAR immunoreactivity in Sertoli cells from Wistar rats (n = 5 each group). Calcium uptake was investigated using whole testes from rats on pdn 4. The testicular tissue was pre-incubated in Hank’s balanced salt solution (HBSS) with 45Ca2+ for 60 min (n=5 in each group). Then, testes were incubated in HBSS with 45Ca2+, with or without T (1 μM) or EpiT (1 μM) for five minutes. The membrane potential of Sertoli cells was recorded using a standard single microelectrode technique. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. T (1 μM) it was apply in testis of rats on pnd 5 (n=5). In animals on pnd 14 FSH (4 mU) injection was followed by the application of T (1 μM) or EpiT (1 μM) after 30 seconds (n = 7 and 6, respectively) and EpiT (1μM), after 5 minutes (n = 6). The results are given as mean ± SEM. For statistical analyses it was used Student T-test, ANOVA for repeated measures followed by Bonferroni post-test and Friedman test followed by Dunn's post-test. This study was approved by the Ethics Committee for animal research of UFRGS (process number CEUA/UFRGS n° 22635). The iAR immunoreactivity was observed in Leydig and peritubular cells at all ages. No immunoreaction concerning of iAR was observed in Sertoli cells on pnd 4 and 5. At this age both, testosterone and epitestosterone increased 45Ca2+ uptake, within 5 minutes of incubation. Testosterone promoted membrane potential depolarization of Sertoli cells on pnd 5. FSH application followed by testosterone and epitestosterone reduced the depolarization of the two hormones. Application of epitestosterone five minutes after FSH resulted in a delay of epitestosterone-promoted depolarization. The cell resistance was also reduced in comparison with the resistance of the isolated application EpiT. Sertoli cells from rats on pnd 4 and 5 do not express iAR. Both T and EpiT act through non-classical mechanism stimulating calcium uptake in whole rat testes on dpn 4. T produces a depolarizing effect on the Sertoli cell membrane of rats on pnd 5 similar to observed at 15-day-old rats. This non classical action of androgens is mediated by a receptor, not yet identified, situated in the membrane cell or close to it, different from iAR. FSH, and testosterone/epitestosterone affect each other electrophysiological responses suggesting a cross talking in the intracellular signaling pathways.

A concentração intratesticular de andrógenos no período fetal e neonatal é elevada, entretanto as células de Sertoli não expressam o receptor intracelular de andrógenos (iAR). Assim, neste período as células de Sertoli não respondem aos andrógenos através dos mecanismos clássicos. A importância fisiológica da elevada concentração de andrógenos ainda não é compreendida, acredita-se ser em virtude de sua ação através de mecanismos não-clássicos. Os hormônios T (testosterona) e FSH atuam sinergicamente para aumentar a eficiência da espermatogênese, entretanto estudos mostram que o FSH bloqueia a fosforilação ERK mediada pela ação não-clássica da T. Este estudo teve por objetivos: avaliar a expressão de iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn; avaliar o efeito da T e da EpiT sobre a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn; avaliar o efeito da T sobre o potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn; e avaliar a interação entre os efeitos eletrofisiológicos da T e epitestosterona (EpiT) com o FSH em células de Sertoli de ratos no 14º dpn. A técnica de imunoistoquímica foi utilizada para a avaliação a imunorreatividade ao iAR (n=5 por grupo). Na técnica de captação de 45Ca2+ testículos inteiros de ratos no 4º dpn foram pré-incubados com 45Ca2+ por 60 minutos e incubados com T (1 μM) ou EpiT (1 μM) por 5 minutos (n=5 por grupo). O potencial e a resistência de membrana das células de Sertoli foram registrados através da técnica eletrofisiológica de registro intracelular. O registro intracelular da célula de Sertoli foi realizado utilizando microcapilares de borossilicato preenchidos com KCl 3 M acoplados a um eletrômetro. Nos testículos de animais no 5º dpn foi realizada a aplicação de T (1 μM), n=4. Nos animais no 14º dpn foi realizada a aplicação de FSH (4 mU) seguida da aplicação de T (1 μM) ou e EpiT (1 μM), após 30 segundos (n=7 e 6, respectivamente); e EpiT (1μM) após 5 minutos (n=6). Os resultados foram dados como média ± SEM. Os dados foram analisados pelo teste T student para comparação entre dois grupos, ANOVA para medidas repetidas com o pós-teste de Bonferroni e teste de Friedmann, seguido do pós-teste de Dunn. Este projeto foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais - CEUA/UFRGS n° 22635. A imunorreação ao iAR foi observa nas células de Leydig e células peritubulares em todas as idades. Não foi observada marcação referente a iAR em células de Sertoli de ratos Wistar no 4º e 5º dpn. T e EpiT estimularam a captação de cálcio em testículos de ratos no 4º dpn. A aplicação tópica de T promoveu a despolarização do potencial de membrana de células de Sertoli de ratos no 4º dpn. A aplicação de FSH seguida da aplicação de T e EpiT promoveu uma redução da reposta dos dois hormônios. Já aplicação de EpiT 5 minutos após a aplicação do FSH resultou em um retardo da despolarização promovida pela EpiT. A resistência da célula também foi reduzida, em comparação com a resistência da aplicação isolada da EpiT. Concluímos que: as células de Sertoli de ratos Wistar não expressam iAR no 4º e 5º dpn; T e EpiT atuam através do mecanismo de ação não clássico estimulado a captação de cálcio em testículos inteiros de ratos no 4º dpn; e a T produz um efeito despolarizante sobre a membrana de células de Sertoli de ratos no 5º dpn similar ao já observado aos 15 dias. Este efeito não-clássico produzido pelos andrógenos é mediado por um receptor, ainda não identificado, localizado na membrana celular ou próximo a ela, estruturalmente diferente do iAR. A interação entre os efeitos do FSH e andrógenos sobre o potencial de membrana de células de Sertoli resulta na redução da resposta despolarizante desencadeada pelos hormônios. / The intratesticular testosterone concentration is high in the early postnatal period, but the intracellular androgen receptor expression is still absent in Sertoli cells. Thus, these cells do not respond to androgens, through classical mechanisms. The physiological importance of the high concentration of androgens in the testes is not fully understood, it is believed to be due to its action through non-classical mechanisms. Both FSH and T (testosterone) increase the spermatogenic efficiency, however studies show that FSH blocks testosterone-mediated activation of ERK mediated by non-classic action. This study aimed to evaluate iAR expression in Sertoli cells from Wistar rats on post-natal day (pnd) 4 and 5; the non-classical effects of testosterone and epitestosterone on calcium uptake and the electrophysiological effects of testosterone (1 μM) on Sertoli cells from rats on pdn 4 and 5 with lack of expression of intracellular androgen receptor (iAR), and evaluate the crosstalk on electrophysiological effects of testosterone and epitestosterone with FSH in Sertoli cells from rats on pnd 14. Immunohistochemistry was used to evaluate iAR immunoreactivity in Sertoli cells from Wistar rats (n = 5 each group). Calcium uptake was investigated using whole testes from rats on pdn 4. The testicular tissue was pre-incubated in Hank’s balanced salt solution (HBSS) with 45Ca2+ for 60 min (n=5 in each group). Then, testes were incubated in HBSS with 45Ca2+, with or without T (1 μM) or EpiT (1 μM) for five minutes. The membrane potential of Sertoli cells was recorded using a standard single microelectrode technique. The intracellular recording of Sertoli cells was performed using microcapillaries filled with 3 M KCl coupled to an electrometer. T (1 μM) it was apply in testis of rats on pnd 5 (n=5). In animals on pnd 14 FSH (4 mU) injection was followed by the application of T (1 μM) or EpiT (1 μM) after 30 seconds (n = 7 and 6, respectively) and EpiT (1μM), after 5 minutes (n = 6). The results are given as mean ± SEM. For statistical analyses it was used Student T-test, ANOVA for repeated measures followed by Bonferroni post-test and Friedman test followed by Dunn's post-test. This study was approved by the Ethics Committee for animal research of UFRGS (process number CEUA/UFRGS n° 22635). The iAR immunoreactivity was observed in Leydig and peritubular cells at all ages. No immunoreaction concerning of iAR was observed in Sertoli cells on pnd 4 and 5. At this age both, testosterone and epitestosterone increased 45Ca2+ uptake, within 5 minutes of incubation. Testosterone promoted membrane potential depolarization of Sertoli cells on pnd 5. FSH application followed by testosterone and epitestosterone reduced the depolarization of the two hormones. Application of epitestosterone five minutes after FSH resulted in a delay of epitestosterone-promoted depolarization. The cell resistance was also reduced in comparison with the resistance of the isolated application EpiT. Sertoli cells from rats on pnd 4 and 5 do not express iAR. Both T and EpiT act through non-classical mechanism stimulating calcium uptake in whole rat testes on dpn 4. T produces a depolarizing effect on the Sertoli cell membrane of rats on pnd 5 similar to observed at 15-day-old rats. This non classical action of androgens is mediated by a receptor, not yet identified, situated in the membrane cell or close to it, different from iAR. FSH, and testosterone/epitestosterone affect each other electrophysiological responses suggesting a cross talking in the intracellular signaling pathways.

Orientador: Mary Anne Heide Dolder / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T12:09:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lombello_ChristianeBertachini_M.pdf: 9479025 bytes, checksum: 9986dd2f70f0ff8ce310e7c3fa559cfc (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Foram realizados sete experimentos de cultura de túbulo seminíferos abrangendo variações das condições de fragmentação, manipulação e de cultura. As variações aplicadas à cultura visaram minimizar os sinais de desorganização e degeneração tecidual. Verificou-se que as técnicas de fragmentação introduziram alterações na organização do epitélio seminífero, como o deslocamento de populações celulares germinativas em direção ao lúmen tubular. Como conseqüência desta movimentação celular apareceram também espaços intercelulares no epitélio germinativo. Esta desorganização tecidual interfere na integridade das interações entre as populações celulares presentes, necessárias para seu desenvolvimento. Apareceram sinais de degeneração celular progressivos como a descaracterização das células de Sertoli, acúmulo de gotículas de Iipídios, vacuolização nuclear e citoplasmática e presença de resíduos celulares. As alterações não puderam ser revertidas. O teste de complementos no meio de cultura (soro fetal bovino-SFB, e hormônio folículo estimulante-FSH) objetivou o aprimoramento da técnica. A presença de SFB ativou populações celulares inespecíficas, as células mióides, causando alterações morfológicas nestas cél ulas, como o arredondamento nuclear. Estas células cresceram desordenadamente e a parede tubular apresentou-se espessada. Já a presença de FSH teve efeito positivo, retardando o aparecimento dos sinais de degeneração. Foi importante estabelecer quais as condições ideais de cultura, meio HAMFlO:DMEM, na presença de HEPES(15mMlml), bicarbonato de sódio (1,2g/1), BSA(1g/I), MIX(O,lmMll), FSH(O,4ug/ml) e gentamicina(lOO/-lg/ml), em estufa a 32°C, por um período de 3 dias. Nestas condições obtivemos o mínimo possível de alterações do epitélio seminífero. Estabelecemos então um padrão das alterações introduzidas através da técnica de cultura em si. Frente a este controle foram realizados dois experimentos de aplicação do cádmio às culturas de túbulos seminíferos. Estes experimentos foram realizados num período de três dias, com fixações diárias, utilizando as condições de cultura pré-estabelecidas. Foram testadas três concentrações do metal (1;10 e IOO/-lM) durante uma hora de exposição. Também foi realizado um controle com exposição direta dos túbulos seminíferos em cultura ao cádmio I/-lM. Foi constatada a intensificação e o aceleramento dos sinais de degeneração devido à presença do metal no meio de cultura / Abstract: Cultures of seminiferous tubules were made according to seven experiments including variations of fragmentation conditions, of manipulation and of culture medium. Tubule fragmentation and manipulaÍion introduced disturbances of the eminiferous epithelium, such as the dislocation of germ cells directed towards the tubular lumen. As a consequence of this movement there were intercellular spaces. The epithelial integrity is fundamental for cellular interactions necessary for cellular development. During the culture period cellular degeneration occurred progressively. Morphological disturbances of the Sertoli cells, marked accumulation of lipid droplets, nuclear and citoplasmatic vacuolization and the presence of cellular debris were observed. The addition of calffetal serum (CFS) to the medi um activated myoid cell populations and caused morphological alterations of these cells (such as nuclear rounding). These changes were accompanied by the thickening of the tubular wall. On the other hand the presence ofFSH in the culture medium was very positive, delaying and reducing degeneration signs. It was important to establish the disturbances caused by the culture techniques and the period during which the seminiferous tubules can be maintained with minimum alterations to be used as a control situation. Two experiments were made wíth cadmium applied to the semíníferous tubules cultures. These experiments were based on culture conditions established by the previous experiments and they were monitored with daily fixations during a three day period. Three concentrations of this metal (1, 10 e 1O0_M) were tested during a one hour period of exposition. A control of direct exposition oftubules to the metal (l_M) was carried out entire culture período As a consequence of cadmium present ín the culture, degeneration was intensified and accelerated. It was established that cadmium can act directly on germ cells causing degenerative alterations / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas