Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-04T19:04:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Olávio Campos Júnior.pdf: 1483597 bytes, checksum: 42ca44fcbab056c05db880532806f7ae (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-14T19:13:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Olávio Campos Júnior.pdf: 1483597 bytes, checksum: 42ca44fcbab056c05db880532806f7ae (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-14T19:13:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Olávio Campos Júnior.pdf: 1483597 bytes, checksum: 42ca44fcbab056c05db880532806f7ae (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 / CAPES / Partículas de exaustão do diesel (PED) contribuem substancialmente para a toxicidade crônica e aguda do material particulado inalado. A exposição a poluentes está relacionada com o aumento da ocorrência de distúrbios reprodutivos como redução da espermatogênese. Desta forma, o presente trabalho objetivou caracterizar o efeito da exposição às PED por meio do processo de nebulização sobre a espermatogênese de ratos Wistar adultos através de análises morfológicas e histomorfométricas dos testículos. Vinte ratos Wistar adultos com 105 dias de idade foram divididos em dois grupos (n=10): GT – Grupo teste exposto às partículas da exaustão do diesel; e GC – grupo controle. A exposição foi realizada por meio de dispositivo de nebulização pneumática, durante 90 dias e após a última exposição os animais foram anestesiados, eutanasiados e orquiectomizados. Os testículos foram pesados e fixados com solução Bouin, corados com Hematoxilina-Eosina e analisados por microscopia de luz. Os resultados mostraram que os animais do GT apresentaram redução no peso testicular de 8,8% e no peso corporal 6,2% com manutenção do índice gonadossomático. A proporção volumétrica dos compartimentos tubular e intertubular não foi afetada. Entretanto, o aumento de 4,7% da razão túbulo-epitélio no GT sugere comprometimento da função epitelial do túbulo seminífero. Os comprimentos do túbulo seminífero por testículo e o por grama de testículo diminuíram 54,0% e 50,0% respectivamente, comparados ao GC. As populações celulares por seção transversal do túbulo seminífero no estádio 1 com base no método morfológico apresentaram um aumento de 13,4% no número corrigido de espermátides arredondadas como para as células de Sertoli. A população de células de Sertoli por testículo e por grama de testículo mostrou uma redução significativa de 58,4% e 54,2%, respectivamente. As frequências dos estádios 2, 3, 5 e 6 do ciclo do epitélio seminífero foram diferentes no GT. A produção espermática diária PED por grama de testículo aumentou 56,8% enquanto a PED por testículo foi de 60,7% menor nos animais expostos cronicamente às partículas da exaustão do diesel. Frente a esses resultados constata-se que a exposição às DEP na concentração média estabelecida pela Organização Mundial da Saúde está associada com o comprometimento da produção diária de espermatozoides em ratos na idade adulta. Além do mais, os dados biométricos, morfológicos e estereológicos indicam que as DEP podem estar envolvidas em mecanismos que ativam mudanças na normalidade estrutural e funcional testícular de ratos expostos. / Diesel exhaust particles (DEP) contribute substantially to chronic and acute toxicity of inhaled particulate matter. Studies have investigated the possibility that exposure to pollutants may increase reproductive disorders such as spermatogenesis reduction. The present study aimed to characterize the DEP exposure effect on seminiferous tubule and spermatogenesis of adult rats through the nebulization process by morphological and histomorphometric testis analyses. Twenty adult Wistar rats 105 days of age were randomly divided into two groups (n = 10): GT – Tested group exposed to DEP and CG – non-exposed group. The animal exposure was performed using pneumatic nebulization device for 90 consecutive days. Twenty-four hours after the last treatment animals were anesthetized, euthanized and orchiectomized. The testis were weighed and fixed in Bouin solution and stained with Hematoxylin - Eosin and analyzed by light microscopy. In the GT animals presented decreased testicular weight of 8.8% and testicular weight of 6.2% while the gonadossomatic index did not change. The volume density of tubular and intertubular compartiments were not affected by exposure. However, significant increase of 4.7% in the tubule-epithelium ratio in GT suggests impairment of the compromised seminiferous epithelial function. The seminiferous tubule length per testis and the seminiferous tubule length per gram of testis significantly smaller 54.0% and 50.0% than the GC, respectively. Seminiferous epithelium cells number per seminiferous tubule cross section at based on morphological method showed increase of 3.4% in round spermatids and Sertoli cells. The Sertoli cells population per testis and per gram of testicular tissue showed reduction of 58.4% and 54.2% respectively. Frequency of stages 2, 3, 5 and 6 seminiferous tubules were different in GT group. The daily sperm production per gram of testicular tissue was higher 56.8% while the sperm production per testis was lower 60.7% in animals chronically exposed to diesel exhaust. These results indicate that exposure to DEP at levels in similar mean concentration established by the World Health Organization were associated with impairment of daily sperm production in adulthood rats. Furthermore, the biometric, morphological and stereological data indicate that DEP may be involved in the mechanisms that activate changes in normal mechanisms of testis structure and function of exposed rats testis.

Orientador: Francisco Eduardo Martinez / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:26:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Segatelli_TaniaMara_D.pdf: 2722114 bytes, checksum: 42553c00f75889ad9e7da916ef3940bd (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O gerbilo (Meriones unguiculatus) é um roedor nativo das regiões áridas da Mongólia e China, é de especial interesse em pesquisas biomédicas e tem sido criado em laboratório desde 1960. Estudos sobre a estrutura e função do testículo do gerbilo são raros, em especial sobre a espermatogênese. O presente trabalho é o primeiro a realizar uma investigação mais detalhada sobre a duração do ciclo espermatogênico e analisar morfométrica e funcionalmente o testículo do gerbilo. Através da técnica de marcação com 3H-timidina, a duração do ciclo do epitélio seminífero foi estimada em 10,55 :f: 1,0 dias e a duração total do processo espermatogênico foi de 47,47 dias, considerando que 4,5 ciclos são necessários para completar o processo. Os compartimentos tubular e intersticial ocuparam volume de 92% e 8%, respectivamente. Baseado no volume ocupado pelo compartimento tubular no parênquima testicular e no diâmetro do túbulo seminífero, aproximadamente 10 metros de túbulos seminíferos foram encontrados por testículo e 18 metros por grama de testículo no gerbilo. Cerca de 12 espermatócitos primários foram formados para cada espermatogônia do tipo AI. O índice meiótico observado foi de 2,8, representando 30% de perdas celulares durante as divisões meióticas. O número de células de Sertoli por grama de testículo foi de 28 milhões, com capacidade de suporte individual de 21 células germinativas. A produção espermática diária por grama de testículo foi de 33 milhões, sugerindo alta eficiência espermatogênica nessa espécie. O gerbilo pode ser utilizado como modelo para futuras investigações do processo espermatogênico / Abstract: The gerbil (Meriones unguiculatus) is a rodent native of the arid regions of Mongolia and China, is of special interest in biomedical research and has been bred in laboratory since 1960. Studies on the structure and function of the gerbil testis are sporadic and, moreover those on spermatogenesis are rare. This is the first study to perform a more detailed investigation about duration of the spermatogenic cycle and morphometric and functional analysis of the gerbil testis. Through 3H-thymidine injection tecnic, the mean duration of seminiferous epithelium cyc1e was determined to be 10.55 :t 1.0 days and the total duration of spermatogenesis based on 4.5 cyc1es was 47.47 days. The volume density of tubular and interstitial compartments was approximately 92% and 8%, respectively. Based on the volume of the testis parenchyma and the volume occupied by seminiferous tubules in the testis and the tubular diameter, about 9 and 18 meters of seminiferous tubules were found per testis and per gram of testis, respectively. About 12 primary spermatocytes were formed for each type A1 spermatogonia. The meiotic index was 2.8. This result shows that 30% of cell loss occurs during the two meiotic divisions. The number of Sertoli cell per gram of the testis was 28 million and the supporting capacity was 21 germ cel1. The daily sperm production per gram of the testis was 33 million. This value suggest high spermatogenic efficiency in this specie. The gerbil could be utilized as an animal model for future investigation of spermatogenic process / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

SOUSA, Solange Damasceno. Proteômica do fluido da Rete Testis de carneiros Morada Nova. 2015. 133 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Zootecnia, Programa de Pós-Graduação em Zootecnia. Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-08-10T12:26:45Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_sdsousa.pdf: 3355993 bytes, checksum: 3f9c9ea989725756a91c3d6679b0614a (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-08-10T15:18:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_sdsousa.pdf: 3355993 bytes, checksum: 3f9c9ea989725756a91c3d6679b0614a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-10T15:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_sdsousa.pdf: 3355993 bytes, checksum: 3f9c9ea989725756a91c3d6679b0614a (MD5) Previous issue date: 2015 / The aim of the study was to identify and characterize the proteins of the rete testis fluid from Morada Nova rams. The testicles, obtained from six slaughtered Morada Nova rams, were immediately dissected. The head of the epididymis was separated to gain access to the efferent ducts. The fluid from the efferent ducts was obtained by testis massage. Thereafter, the fluid was centrifuged to remove cell debris and sperm. Proteins were precipitated with acetone at -20°C and quantified by the Bradford assay. Each sample (400 µg) was focused in strips of 13 cm (pH 4-7) and the second dimension was conducted on SDS-PAGE 15%. The gels were scanned with an ImageScanner II (GE Lifesciences, USA) and analyzed using the PDQuest® version 8.0.1 (Bio-Rad Laboratories, USA). Spots detected after PDQuest analysis of 2-D maps were cut from gels and submitted to trypsin digestion. Proteins were identified using tandem mass spectrometry. Protein information obtained by MASCOT was analyzed using the software tool for searching annotations of proteins (STRAP). Protein-protein interaction networks were obtained from STRING version 9.0 database. In the gels were detected 227 ± 32.1 spots (mean ± SD), where 51% of the proteins were found above 40 kDa, corresponding to 65% of the intensity of all spots detected. Based on gene ontology analysis, the most common biological processes associated with proteins from rete testis fluid were regulation (24.28%) and cellular process (23.27%). Binding (27.42%) and catalytic activity (19.30%) corresponded to the most frequent molecular functions for those proteins. The most intensely expressed proteins were: albumin, clusterin, serotransferrin, immunoglobulin gamma-1 chain and alpha-2-HS-glycoprotein. The rete testis fluid has a large quantity of proteins related to the spermatogenesis. This feature is important in view of the fact that these molecules contribute to the development of the germ cells, as a result of the transport and conversion of substances required to the production of male gametes. / O objetivo do estudo foi identificar e caracterizar as proteínas do fluido da rete testis de carneiros Morada Nova. Os testículos, obtidos de seis carneiros Morada Nova abatidos, foram imediatamente dissecados. A cabeça do epidídimo foi separada para ter acesso aos ductos eferentes. O fluido oriundo dos ductos eferentes foi obtido por massagem do testículo. Posteriormente, o fluido foi centrifugado para remoção dos debris celulares e espermatozoides. As proteínas foram precipitadas com acetona a -20°C e quantificadas pelo método de Bradford. Cada amostra (400 μg) foi focalizada em tiras de 13 cm (pH 4-7) e a segunda dimensão foi realizada em SDS-PAGE a 15%. Os géis obtidos foram escaneados com um ImageScanner II (GE Lifesciences, EUA) e analisados utilizando o aplicativo PDQuest® versão 8.0.1 (Bio-Rad Laboratories, EUA). Os spots detectados após a análise dos mapas 2-D no PDQuest foram cortados dos géis e submetidos a digestão com tripsina. As proteínas foram identificadas por espectrometria de massa em tandem. A informação sobre a proteína adquirida pela busca no MASCOT foi analisada através da utilização do programa para anotações de proteínas (STRAP). Redes de interação proteína-proteína foram obtidas a partir do banco de dados STRING versão 9.0. Nos géis foram detectados em média 227 ± 32,1 spots, onde 51% das proteínas se encontraram acima de 40 kDa representando 65% da intensidade de todos os spots detectados nos géis. Com base na análise da ontologia gênica, os processos biológicos mais comuns associados às proteínas do fluido rete testis foram regulação (24,28%) e processos celulares (23,27%). Ligação (27,42%) e a atividade catalítica (19,30%) corresponderam às funções moleculares mais frequentes. As proteínas mais intensamente expressas foram: albumina, clusterina, serotransferrina, imunoglobulina gama-1 e alfa-2-HS-glicoproteína. A maioria das proteínas identificadas desempenha importantes papéis nos processos de espermatogênese, proteção espermática, motilidade, capacitação e reação acrossômica. O fluido da rete testis possui várias proteínas envolvidas na espermatogênese, o que representa um importante fator, uma vez que estas moléculas contribuem para o desenvolvimento das células germinativas, participando no transporte e conversão de substâncias requeridas para a produção dos gametas masculinos.

A infertilidade é uma doença do sistema reprodutivo considerada um problema de saúde pública global, afetando aproximadamente 15% dos casais e 7% dos homens. Falência espermatogênica primária é definida como incapacidade dos testículos produzirem espermatozoides, apesar do suporte hormonal adequado. Esse estudo é o primeiro a comparar dois grupos de pacientes com falência espermatogênica primária por meio da técnica array-CGH+SNP, utilizando a plataforma 4X180 (Agilent®). Adicionalmente, foram comparados os resultados obtidos por essa técnica com bancos de dados genômicos de expressão. Foram analisados vinte e três pacientes com falência espermatogênica primária, sendo sete com oligozoospermia extrema e dezesseis com azoospermia não obstrutiva, assim como seis homens comprovadamente férteis (grupo controle). A análise genômica foi realizada pelo software Nexus 8.0 e as análises de bancos de dados genômicos de expressão por meio do software Nexus Expression 3.0 com nível de significância de 5%. Os primeiros resultados evidenciaram diferenças de número e de tamanho das alterações genômicas (CNVs e LOHs) entre os dois grupos da amostra e o grupo controle, sendo a diferença do número de CNVs de perdas do grupo com oligozoospermia significativamente maior do que no grupo controle. O grupo de pacientes com azoospermia apresentou alterações genômicas de maior tamanho, entre 552pb a 11.3MB, quando comparado aos homens oligozoospérmicos e ao grupo controle. A análise descritiva permitiu identificação de um gene candidato a fenótipo de falência espermatogênica primária na região 12q21.1-q21.2, o gene GLIPR1L1. Por meio da análise individualizada, identificamos dois genes candidatos ao fenótipo de infertilidade, o SHH, localizado na região 7q21.3, e o TMEM184A, localizado na região 7p22.3. Foram também descritas oito novas regiões de CNVs e LOHs nos dois grupos da amostra, direcionando novos estudos para correlação entre genótipo e fenótipo. / Infertility is a disease of the reproductive system and a global public health problem affecting approximately 15% of couples and 7% of men. Primary spermatogenic failure is defined as the inability of the testes to produce sperm although there is adequate hormonal support. This study is the first to compare two groups of patients with primary spermatogenic failure using array-CGH + SNP technique with the 4X180 (Agilent®) platform. Also, we compared the results obtained by this technique with genomic expression databases. Twenty-three patients with primary spermatogenic failure were analyzed, seven with extreme oligozoospermia and sixteen with nonobstructive azoospermia. We used six proven fertile men as a control group. Genomic analysis was performed by Nexus 8.0 software and analysis of genomic databases of expression was performed using the Nexus Expression 3.0 software with 5% significance level. Initial results showed differences in both the number and size of genomic alterations (CNVs and LOHs) between the two sampled infertility groups and the control group. The main difference was that the number of overall CNVs losses which was significantly higher in the oligozoospermia group than in the control group. The group of patients with azoospermia showed larger genomic alterations, between 552bp and 11.3MB size, compared to oligozoospermic men and the control group. A descriptive analysis was used to identify a candidate gene, GLIPR1L1, for the primary spermatogenic failure phenotype in the region 12q21.1-q21.2. Through individualized analysis, we identified two other candidate genes that may have a relationship with the infertility phenotype, SHH, located in the 7q21.3 region, and TMEM184A, located on the 7p22.3 region. Eight new areas of CNV and LOHs have also been described in the two sample groups, for more extensive genotype and phenotype correlative studies.

Orientador: Mary Massumi Itoyama / Banca: Doralice Maria Cella / Banca: Maria Elisabete Jorge Amaral / Resumo: Os Heteroptera constituem um dos mais importantes grupos de insetos do ponto de vista econômico, pois a maioria, durante os estádios de ninfa e adulto, alimenta-se de plantações ou grãos armazenados para o consumo humano. As análises citogenéticas permitiram verificar que Antiteuchus tripterus possui um lobo composto (5/6), o qual pode estar envolvido na nutrição do lobo harlequin, evidência que pressões evolutivas ocorreram para a manutenção deste lobo, nesta espécie, o que demonstra a importância, desse lobo, para algumas espécies. Permitiram, ainda, verificar que todas as espécies apresentam sistema cromossômico do sexo XY e complemento cromossômico de 2n= 14 cromossomos. Além disso, as análises do comportamento nucleolar evidenciaram que há atividade metabólica diferenciada para os lobos 4, 5 e 6 em Antiteuchus tripterus e também em espécies não possuidoras do lobo harlequin, como Platycarenus umbractulatus, que apresentou marcações diferenciadas no lobo 5, a qual pode indicar a formação de espermatozóides não fecundantes. A espécie Euschistus heros não apresenta lobo harlequin, porém as análises da espermatogênese demonstraram que há diferenças significativas no tamanho das células dos lobos 4 e 6, os quais podem estar relacionados com a formação de espermátides não-fecundantes. Foi verificada a presença de corpos nucleolares na forma de "mushroom" nas espécies do gênero Oebalus, característica, ainda não descrita na literatura, além disso, foi observada, em P. umbractulatus, a presença de dois corpos escuros e dois mais claros, que podem demonstrar a participação dos cromossomos sexuais na formação e organização do nucléolo desta espécie. Assim, verifica-se a importância dessas análises para compreensão do cenário evolutivo da família Pentatomidae. / Abstract: The Heteroptera are the most important group of insect related with economic importance, because the most of them, during ninfal stage and adult stage, feed in plantations or stored grains to the human consumption. The cytogenetical analyses permitted verify that Antiteuchus tripterus has a compound lobe (5/6), which should be involved in the nutrition of harlequin lobe, evidences that evolutionary pressures occurred for the maintenance of this lobe in this species, which shows the importance of this lobe for some species. The analyses also permitted to evidence that all species analyzed have XY sexual chromossomic systems and a chromossomic complement 2n= 14 chromosomes. Furthermore, the analyses of the nucleolar behavior showed there are different metabolic activities in the lobes 4, 5 and 6 in Antiteuchus tripterus and in the species without the harlequin lobe, as Platycarenus umbractulatus, also had different marcation in lobe 5, which can indicate the formation of non-fertilizing sperm. The species Euschistus heros do not have harlequin lobe, but the analyses of spermatogenesis showed that there are significant differences in cell size in the lobes 4 and 6, which may be related to the formation of non-fertilizing spermatids. It was verified the presence of nucleolar bodies with morphology like "mushroom" in the species of the genus Oebalus, feature not yet observed. Moreover was observed in P. umbractulatus, the presence of two dark bodies and two lighter, which may demonstrate the participation of sex chromosomes in the formation and organization of the nucleolus in these species. Thus, this present work shows the importance of such analyses for understanding the evolutionary scenario of the family Pentatomidae. / Mestre

As dificuldades técnicas atuais para o manejo e controle de pragas que atacam as lavouras em nosso país, vêm incentivando a busca por métodos de controle alternativos e/ou complementares aos convencionais, destacando-se o potencial dos inseticidas botânicos. O Neem é uma planta nativa da Índia pertencente à família Meliaceae, conhecida popularmente como Nim ou Neem e tem sido usada por séculos no Oriente como: planta medicinal no tratamento de inflamações, infecções virais, hipertensão e febre, planta sombreadora, repelente, material para construção, combustível, lubrificante, adubo e mais recentemente como praguicida natural. Mesmo alavancada pela produção orgânica de alimentos, o uso de bioinseticidas ainda carece de mais pesquisas acerca de cada formulação principalmente sua ação sobre os organismos, sendo assim esta pesquisa visou avaliar os efeitos do extrato aquoso das folhas de Neem (Azadiractha indica) em ratos Wistar machos em idade reprodutiva, objetivando avaliar quais possíveis danos induzidos a exposição por oito dias ao extrato da planta pode resultar e também avaliar sua capacidade contraceptiva trazendo respostas importantes afim de se conhecer esta importante alternativa ao uso de agrotóxicos sintéticos. Para este estudo foram utilizados 20 ratos Wistar que foram divididos em 4 grupos compostos por 5 animais cada, sendo: G1 - 10.000ppm, G2 - 7.500ppm, G3 - 5.000 ppm e G4 - controle com água destilada. O volume administrado foi padronizado em 1 ml para cada animal e a administração deu-se por gavagem, por oito dias. Para se estudar as reações ocasionadas pelo tratamento realizamos nos animais após a administração das diferentes doses do composto o reconhecimento de sinais clínicos de toxicidade, a investigação das alterações fisiológicas, análise da qualidade do sêmen e avaliação macro e microscópicas dos órgãos alvo fígado, rins e testículos. Nossos resultados apontam que o extrato aquoso de Neem administrado por oito dias, via oral, nas doses empregadas apresentou baixa toxicidade, uma vez que não foi revelada nenhuma alteração nos quesitos avaliados, contudo apresentou resultados que levam a considerar sua capacidade contraceptiva, por terem alterando de forma negativa a motilidade e viabilidade espermática nas maiores doses administradas. / The current technical difficulties for the management and control of pests that attack the crops in our country have been encouraging the search for alternative and / or complementary control methods to conventional ones, highlighting the potential of the botanical insecticides. Neem is a plant native to India belonging to the family Meliaceae, popularly known as Nim or Neem and has been used for centuries in the East as: medicinal plant (in the treatment of inflammation, viral infections, hypertension and fever), shading plant, repellent, building material, fuel, lubricant, fertilizer and more recently as natural pesticide. Even though the use of bio-insecticides is still underpinned by organic food production, there is still a need for more research on each formulation, especially its action on organisms. This research aimed to evaluate the effects of the aqueous extract of Neem leaves (Azadiractha indica) on Wistar rats males of reproductive age, aiming to evaluate which possible induced damages the exposure for eight days to the extract of the plant can result and also to evaluate its contraceptive capacity bringing important answers in order to know this important alternative to the use of synthetic agrochemicals. For this study 20 Wistar rats were divided into 4 groups composed of 5 animals each, being: G1 - 10.000ppm, G2 - 7,500ppm, G3 - 5,000 ppm and G4 - control with distilled water. The volume administered was standardized in 1 ml for each animal and administration was given by gavage for eight days. In order to study the reactions caused by the treatment, the clinical signs of toxicity were confirmed in the animals after administration of the different doses of the compound, investigation of physiological changes after administration of the extract, analysis of the semen quality and macro and microscopic evaluation of the organs target liver, kidneys and testicles. After analysis of the results obtained it can be considered that the aqueous extract of Neem administered for eight days, orally, in the doses used presented low toxicity, since no changes were revealed in the evaluated items, however presented results that lead to consider its contraceptive capacity, because it has negatively altered motility and sperm viability at the highest doses administered.

O objetivo deste trabalho foi o de avaliar o efeito da suplementação da dieta de Tilápias (Oreochromis niloticus) utilizando sal comercial composto dos microminerais cobre, manganês e zinco, sobre a histologia e o desenvolvimento das gônadas dos machos. Foram utilizados 1200 machos masculinizados de tilápia, com média de peso de 120g, suplementadas com níveis crescentes (0,00; 0,35; 0,70; 1,05; 1,40 e 1,75 mg/kg) de um produto comercial composto por Cu 13,40 g/kg; Mn 26,70 g/kg e Zn 66,70 g/kg. O experimento foi conduzido em um sistema de recirculação de água, composto por 24 tanques divididos ao meio totalizando 48 unidades experimentais. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com medidas repetidas no tempo. As biometrias e coletas foram realizadas em 16 e 32 semanas de experimento, para avaliar o desenvolvimento dos peixes. As gônadas coletadas foram preparadas e cortadas para confecção de lamina histológica, após coradas com hematoxilina e eosina, e posteriormente fotografadas, utilizando microscópio com câmera acoplada. A contagem das fotos foi realizada manualmente, e avaliou-se o número de células por mm3, para espermatogônias, espermatócitos, espermátides e espermatozoides. As correlações entre número de espermatozoides, espermatócitos, espermátides e tratamentos foi de -0,30, -0,20 e -0,30, respectivamente, demonstrando que o efeito da suplementação crescente com o sal, é prejudicial para o desenvolvimento das células reprodutivas masculinas. Foi observado que os tratamentos com adição igual ou superior a 0,70 mg/kg do sal comercial causaram danos as gônadas para os parâmetros da gametogênese de número de espermatócitos, espermátides e espermatozoides. Sendo assim, a utilização de sais que contenham combinação de Cu 13,40 g/kg; Mn 26,70 g/kg e Zn 66,70 g/kg reprodutores machos de tilápia, não é recomendada em função dos danos causados nas etapas da gametogênese, reduzindo a produção de espermatozoides. / The objective of this study was to evaluate the effect of supplementing the diet of tilapia (Oreochromis niloticus) using commercial salt compound of micro minerals copper, manganese and zinc, on the histology and gonadal development of males. A total of 1200 masculinized male tilapia were used, with 120 g average weight, supplemented with increasing levels (0.00, 0.35, 0.70, 1.05, 1.40 and 1.75 mg / kg) of a product commercial composed of Cu 13,40 g/kg; Mn 26,70 g/kg e Zn 66,70 g/kg. The trial was conducted in a water recirculation system, consisting of 24 tanks divided in half, totaling 48 experimental units. The experimental design was completely randomized with repeated measures over time. The biometry and samples were taken at 16 and 32 weeks of experiment, to evaluate the fish development. The collected gonads were prepared and sliced for making histological slide, after stained with hematoxylin and eosin, and then photographed using a microscope with attached camera. The count of the photos was performed manually, and was rated the number of cells per mm3 to spermatogonia, spermatocytes, spermatids and sperm cell. The correlations between the number of spermatozoa, spermatocytes, spermatids and treatments was of -0.30, -0.20 and -0.30, respectively, demonstrating that the effect of increasing supplementation of the salt is detrimental to the development of male reproductive cells. It was observed that the addition equal or superior to 0.70 mg / kg of commercial salt caused damage in the gonads for gametogenesis parameters number of spermatocytes, spermatids and sperma cell. Thus, the use of combination of salts containing 13.40 g Cu / kg; Mn 26.70 g / kg Zn and 66.70 g / kg breeding male tilapia is not recommended due to the damage caused in the stages of gametogenesis, reducing the sperm production.

A prática de exercício físico de mulheres nos períodos de preconcepção e gestação causa uma série de efeitos benéficos no desenvolvimento da prole. Pouco se sabe, no entanto, sobre a influência do exercício físico masculino sobre seus descendentes. Como a espermatogênese é um processo contínuo, as experiências de vida dos pais poderiam reprogramar o genoma dos espermatozoides por meio de processos epigenéticos, por exemplo, que poderiam interferir no desenvolvimento da prole. A presente dissertação tem como objetivo estudar essa hipótese. Examinamos os efeitos do exercício físico paterno sobre os seguintes parâmetros de desenvolvimento da prole: maturação corporal, desempenho cognitivo, expressão do BDNF muscular, no hipocampo e córtex frontal; e metilação global do DNA no hipocampo. Para tanto, ratos Wistar machos foram divididos em dois grupos: sedentários e exercitados. O protocolo de exercício físico consistiu de corrida na esteira por um período de 8 semanas. Após, os animais foram expostos às fêmeas em período fértil e não-treinadas. Os filhotes de ambos os grupos de pais foram submetidos a testes para avaliação do ganho de peso e medidas de crescimento, do primeiro dia pós-natal (P1) até o P21 A partir do P46, foram realizadas a medida indireta do consumo máximo de oxigênio e a avaliação da aprendizagem espacial e memória, até o P52. Os animais foram submetidos à eutanásia; os músculos dos membros posteriores, os testículos, as glândulas adrenais e a gordura gonadal foram pesados. Os resultados mostram que a prole de pais treinados e de não-treinados não diferem quanto às medidas físicas, desempenho físico, avaliação cognitiva e expressão do fator trófico. No entanto, houve uma diminuição significativa no peso dos testículos e da gordura gonadal na prole de pais treinados. O nível de metilação do DNA no hipocampo de filhos de pais exercitados apresentou uma diminuição, comparada ao grupo de filhos de pais sedentários. Esse resultado aponta para uma maior expressão gênica no grupo exercitado. Embora no presente estudo os mecanismos pelos quais o exercício paterno influencia o desenvolvimento da prole não tenham sido estabelecidos, reforça-se o papel essencial que a atividade física tem em um estilo de vida saudável e na prevenção de doenças, além de não gerar prejuízos ao desenvolvimento dos descendentes. / The physical exercise of women in the pre-conception and gestation periods causes a series of beneficial effects on offspring development. Little is known, however, about the influence of male physical exercise on their offspring. As spermatogenesis is a continuous process, the life experiences of the fathers could reprogram the sperm genome by means of epigenetic processes, for example, which could interfere in the development of the offspring. The present dissertation aims to study this hypothesis. We examined the effects of paternal physical exercise on the following parameters of offspring development: body maturation, cognitive performance, hippocampus, cortex and muscle BDNF expression, and global DNA methylation in the hippocampus. Thus, male Wistar rats were divided into two groups: sedentary and exercised. The physical exercise protocol consisted of running on the treadmill for a period of 8 weeks. Afterwards, the animals were exposed to females at a fertile and untrained. The pups of both groups of parents were submitted to tests to evaluate the weight gain and growth measures from the first postnatal day (P1) to P21. From P46, the indirect measurement of maximum oxygen consumption and the evaluation of spatial learning and memory were made until P52 The animals were submitted to euthanasia; the muscles of the hindlimbs, the testicles, the adrenal glands and the gonadal fat were weighed. The results showed that the offspring of trained and untrained fathers did not differ in physical measures, physical performance, cognitive evaluation and trophic factor expression. However, there was a significant decrease in testicles weight and gonadal fat in the offspring of trained parents. The level of DNA methylation in the hippocampus of pups of exercised fathers presented a decrease, compared to the group of pups of sedentary fathers. This result points to a greater gene expression in the exercised group. Although in the present study the mechanisms by which paternal exercise influences the development of the offspring have not been established, the essential role that physical activity has in a healthy lifestyle and in the prevention of diseases is reinforced, and it does not cause the offspring development any harm as well.

Orientador: Rosicleire Veríssimo Silveira / Banca: Cristiele da Silva Ribeiro / Banca: George Shigueti Yasui / Resumo: Em teleósteos, a utilização de transplante de espermatogônias tronco está criando um cenário novo e promissor na área de biotecnologia e produção em aquicultura, possibilitando a preservação de espécies em perigo de extinção. Esta técnica consiste na remoção de células tronco espermatogoniais do testículo de um animal doador e a sua transferência para o testículo de um receptor. Para garantir a eficiência desta técnica o receptor deve ter sua espermatogênese endógena suprimida, pois a eficiência do transplante depende do sucesso na competição entre células germinativas transplantadas e células germinativas endógenas nos túbulos seminíferos. Este estudo teve por objetivo promover experimentalmente a depleção da espermatogênese endógena de Devario aequipinnatus, por meio da droga quimioterápica Myleran (Busulfan) e sua associação com a temperatura de 30°C. Foram definidas quatro fases de maturação gonadal para o ciclo testicular de D. aequipinnatus: Maturação Inicial, Maturação Intermediária, Maturação Final e Regressão, essas definições tiveram como base as alterações do epitélio germinativo testicular associado aos estágios das células germinativas presentes. Para depleção foram testadas duas dosagens, no T15/18 foram aplicadas duas injeções, via intracelomática, com intervalo de 10 dias entre as mesmas, sendo a primeira dose de 15 mg kg -1 Myleran (Busulfan) e a segunda com 18 mg kg -1 de Myleran. No T40 foi aplicado somente uma injeção contendo 40 mg kg -1 de Myleran (Busulfan). Como grupo controle foi utilizado uma unidade experimental sem a inclusão de qualquer tipo de droga, em que os animais permaneceram sob as mesmas condições de temperatura, alimentação e fotoperíodo oferecidas para os animais utilizados dos tratamentos. O T15/18 e o T40 apresentaram uma redução significativa na quantidade de Espermatócitos e consequentemente um aumento na quantidade de lúmen... / Abstract: In teleosts, the use of spermatogonial stem transplant is creating a new and promising scenario in the area of biotechnology and aquaculture production, enabling the preservation of species in danger of extinction. This technique involves the removal of spermatogonial stem cells of the testis of a donor animal and its transfer to the testicle of a receiver. To ensure the efficiency of this technique the receiver shall have its endogenous spermatogenesis deleted because the transplant efficiency depends on the success in the competition between transplanted germ cells and endogenous germ cells in the seminiferous tubules. This study aimed to experimentally promote depletion of endogenous spermatogenesis Devario aequipinnatus through the chemotherapy drug Myleran (Busulfan) and its association with the temperature 30 ° C. Maturation of four phases have been defined for testicular cycle D. aequipinnatus: Maturation Home, Intermediate maturation, maturation and Final Regression, these definitions were based on the changes of the testicular germinal epithelium associated with the stages of germ cells present. For depletion two doses were tested in the T15 / 18 were applied two injections via intracelomic with an interval of 10 days between them, the first dose of 15 mg kg-1 Myleran (Busulfan) and second with 18 mg kg- 1 Myleran. T40 was applied only in an injection containing 40 mg kg-1 Myleran (Busulfan). The control group was used an experimental unit without the inclusion of any type of drug, where the animals were kept under the same conditions of temperature, photoperiod and food offered to the animals used treatments. The T15 / 18 and T40 showed a significant reduction in the number of spermatocytes and consequently an increase in the amount tubular lumen in the testes of the animals examined. Three days after application of Busulfan for both single dose and double dose of Busulfan for an increase in pyknosis in spermatogonia ... / Mestre

Orientador: Classius de Oliveira / Banca: Sebastião Roberto Taboga / Banca: John Campbell McNamara / Resumo: O presente estudo analisa as características estruturais e ultra-estruturais dos testículos, bem como as características do sistema pigmentar extracutâneo e sua relação com as outras estruturas, nos anuros Physalaemus nattereri (Steindachner, 1963) e P. fuscomaculatus (Steindachner, 1964). Dez machos adultos de cada espécie foram coletados em Nova Itapirema, distrito de Nova Aliança - SP e processados para análises em microscopia de luz e microscopia eletrônica de transmissão. Os testículos apresentaram numerosas células contendo pigmentos, aleatoriamente distribuídas na túnica albugínea e interstício, dando ao órgão uma coloração marrom escura. Essas células são estruturalmente semelhantes a melanócitos, e se caracterizam pela enorme quantidade de pigmentos melânicos no interior de corpúsculos elétron-densos contendo melanina, os melanossomos. Durante a espermiogênese ocorre condensação da cromatina e alongamento nuclear, além da perda de material citoplasmático. As células de Sertoli apresentam em seu citoplasma grande quantidade de microtúbulos e grânulos de glicogênio. O espermatozóide é fusiforme, contém uma capa acrossômica e perfuratorium na região anterior do núcleo e a peça intermediária contém uma bainha citoplasmática com mitocôndrias. O flagelo apresenta o axonema, fibra justaxonemal e membrana ondulante, e bastão axial ausente. Esta organização é semelhante à encontrada em outros anfíbios como P. biligonigerus, P. gracilis e P. fuscomaculatus. / Abstract: This paper was analyses the structural and ultra-structural characteristics of the testis, and the extracutaneous pigmentary system characteristics and the relationship with other structures, in the anurans Physalaemus nattereri (Steindachner, 1963) and P. fuscomaculatus (Steindachner, 1964). Ten males adults of each species were collected in Nova Itapirema, district of Nova Aliança - SP and processed for analyses in light and transmission electron microscopy. The testis presented numerous pigment-containing cells, randomly distributed in the albuginea tunic and interstitium, giving the organ a dark brown coloration. The intense pigmentation observed in the testis is due to great amount of cellular types containing granules of brown coloration and long citoplasmic processes, characterized by the synthesis and accumulation of great amount of melanin pigment inside of melanosomes. Spermiogenesis in the anuran P. nattereri involves chromatin condensation and nuclear elongation, with visible cytoplasmic eliminations. In this stage it can also be seen inside Sertoli cell citoplasm, surrounding each spermatid, a great amount of microtubules and glycogen. The anterior region of the nucleous presented an acrossome and perfuratorium. A mitochondrial sleeve is found around the proximal portion of the tail. The tail presents an axonema with a 9+2 axoneme pattern, a justaxonemal fiber, undulating membrane and absence of axial rod. This organization is similar to that found in other amphibians such as P. biligonigerus, P. gracilis and P. fuscomaculatus. / Mestre