Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 459969 bytes, checksum: 684ba7361082f44d749b2627833c1178 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Morphofunctional studies on the testis allied to studies in endocrinology, embryology and cryopreservation of gametes, generate information that can be applied in assisted reproduction, favoring the development of methodologies used in conservation of species. The objectives of this study were to quantify morphological and functional structures of the testicular parenchyma, calculate gonadosomatic, tubulosomatic, leydigosomatic and Sertoli cell indices; describe the duration of the seminiferous epithelium cycle (SEC) by identifying the most advanced germ cells labeled by 5- bromodeoxyuridine (BrdU); characterize the various stages that constitute the seminiferous epithelium cycle based on tubular morphology and calculate daily sperm production per gram of testis of jaguarundi (Pumayagouaroundi). For this purpose we used five adult males, one from Centro de Triagem de AniamaisSilvestres at Universidade Federal de Viçosa and four from ParqueZoológico de São Paulo. After chemical restraint animals had their body weight, body size, and diameter of the chest measured, and underwent testicular biopsies in order to obtain biological material for histological and immunohistochemical evaluation. In the studied Jaguarundis the average weight was 6.6 kg, being that 0.032% of it was allocated in testis (gonadosomatic index), which has 57.36 m of seminiferous tubule, coming to a tubulosomatic index of 0.027% . The total number of Leydig cells found in this species was 72.96 million cells and leydigosomatic index was calculated at 0.001%. Eight stages of the SEC were described and had their relative frequencies determined based on the tubular morphology method. At SEC, pre- meiotic stage of the spermatogenic process was higher than the other ones (48.66 %). Through the use of a cell proliferation marker (BrdU) injected in the testicles, labeled cells were observed in round spermatids of stage V after 14 days of application. From this, we can conclude that a seminiferous epithelium cycle of the Jaguarundi lasts 8.4 days, and the total spermatogenic process duration is 37.8 days. The Jaguarundi presented in the seminiferous epithelium, in each cross section of the seminiferous tubule at stage I of the cycle, an average of 1.03 spermatogonia type A; 9.78 primary spermatocytes at pre-leptotene/leptotene; 10.68 primary spermatocytes in pachytene; 25.3 round spermatids. The spermatogenesis general yield in this species was approximately 18.9 cells, and each Sertoli cell was able to sustain and maintain 14.24 round spermatids. The daily sperm production found demonstrates that the Jaguarundi is an animal with a high level of production, since its production is about 51.52 million sperm per gram of testis. / As pesquisas morfofuncionais sobre o testículo aliadas aos estudos em endocrinologia, embriologia e criopreservação de gametas, produzem informações que podem ser aplicadas na reprodução assistida, favorecendo o desenvolvimento de metodologias utilizadas na conservação de espécies. Os objetivos deste estudo foram quantificar as estruturas morfofuncionais do parênquima testícular, calcular os índices gonadossomáticos, tubulossomáticos e leydigossomáticos e de célula de Sertoli; descrever a duração do ciclo do epitélio seminífero pela identificação das células germinativas mais avançadas marcadas pela 5-bromodeoxiuridina (BrdU); caracterizar os diversos estádios que constituem o ciclo do epitélio seminífero com base na morfologia tubular e calcular a produção espermática diária por grama de testículo de gato mourisco (Puma yagouaroundi). Para isso foram utilizados cinco animais machos adultos, sendo um proveniente do Centro de Triagem de Animais Silvestres da Universidade Federal de Viçosa e quatro do Parque zoológico de São Paulo. Após contenção químicaos animais tiveram suas medidas corporais de peso, tamanho corporal, e diâmetro de tórax mensurados, foram também submetidos a biópsias testiculares a fim de se obter material biológico para avaliação histológica e imunohistoquímica. Nos gatos mourisco estudados a média de peso foi de 6,6 kg sendo desses, 0,032% alocados em testículo (índice gonadossomático) que possui 57,36 m de túbulo seminífero perfazendo um índice tubulossomático de 0,027%. O número total de células de Leydig encontradas nessa espécie foi de 72,96 milhões de células e o índice leydigossomático foi calculado em 0,001%. Foram descritos e determinada a frequência relativa de oito estádios do ciclo do epitélio seminífero (CES) com base no método da morfologia tubular. No CES a fase pré-meiótica do processo espermatogênico foi maior que as outras (48,66%). Através do uso de um marcador de proliferação celular injetado intratesticularmente (BrdU) foram observadascélulas marcadas em espermátides arredondadas do estádio V, após 14 dias da aplicação. A partir daí, pode-se concluir que um ciclo do epitélio seminífero do gato mourisco dura 8,4 dias, e o processo espermatogênico duração total de 37,8 dias. O gato mourisco apresentou no epitélio seminífero, em cada secção transversal do túbulo seminífero no estádio I do ciclo, em média, 1,03 espermatogônias do tipo A; 9,78 espermatócitos primários em pré-leptóteno/leptóteno; 10,68 espermatócitos primários em paquíteno; 25,3 espermátides arredondadas. O rendimento geral da espermatogênese nesta espécie foi de aproximadamente 18,9 células, e cada célula de Sertoli foi capaz de sustentar e manter 14,24 espermátides arredondadas. A produção espermática diária encontrada demonstra que o gato mourisco é um animal com alto nível de produção, uma vez que sua produção é cerca de 51,52 milhões de espermatozoides por grama de testículo.

Orientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Banca: Maria Luiza Silveira Mello / Banca: Reinaldo Azoubel / Banca: Carlos Alberto Vicentini / Banca: Eliana Morielle Versute / Resumo: O corpo cromatóide (CB) é uma organela citoplasmática que, aparentemente, possui um papel no estoque de RNA e proteínas para a diferenciação final dos espermatozóides. Existem algumas teorias que tentam explicar a origem do material que compõe essa organela. Uma dessas teorias, proposta por alguns autores, sugere que o CB se origine a partir de material nucleolar, que se fragmenta nas etapas iniciais da espermatogênese e, em seguida, migra para o citoplasma. O objetivo do presente estudo foi acompanhar o ciclo nucleolar por meio de análises citoquímicas - hematoxilina-eosina (HE); azul de toluidina (AT); variante da concentração crítica de eletrólitos (CEC); reação de Feulgen; impregnação por íons prata (AgNOR); citogenéticas - impregnação por íons prata (AgNOR), e análises ultra-estruturais - microscopia eletrônica de transmissão (MET), para verificar a relação da fragmentação do material nucleolar com a formação do corpo cromatóide (CB), em algumas espécies de vertebrados: Tilapia rendalli (Teleostei, Cichlidae); Dendropsophus minutus (Amphibia, Anura); Phrynops geoffroanus (Reptilia, Testudines) e coelho albino da raça Nova Zelândia - Oryctolagus cuniculus (Mammalia, Lagomorpha). Por meio das análises citoquímicas foi possível observar que ocorre uma fragmentação do material nucleolar no início da prófase I, em todas as espécies analisadas, e uma posterior reorganização do nucléolo no núcleo de espermátides iniciais, com uma área significantemente menor do que a área do nucléolo das espermatogônias. Três fenômenos podem contribuir para essa diferença significante entre as áreas nucleolar de espermatogônias e espermátides: a) Modificação no estado funcional da célula; b) Diminuição no número de RONs nas espermátides; c) Migração de material nucleolar fragmentado ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The chromatoid body (CB) is a cytoplasmic organelle that has a function related to RNA and protein accumulation and ⁄ or storage for later germ-cell differentiation. Many theories have been postulated in order to explain the origins of the CB material. One of the most accepted theory describes that it originates from a nucleolar material, where it was fragmented in the early spermatogenesis, and finally, this fragmented nucleolar material migrates to cytoplasm. The aims of the present study were: 1) monitoring the nucleolar material distribution by means of cytochemical techniques (hematoxylin-eosin (HE), toluidine blue (TB), modified Critical Electrolyte Concentration for detecting RNA (CEC), silver-ion impregnation (AgNOR) and Feulgen reaction), and by ultrastructural analysis (Transmission Electron Microscopy - TEM); and 2) comparing the nucleolar material distribution with the formation of CB in some vertebrate species: Tilapia rendalli (Teleostei, Cichlidae); Dendropsophus minutus (Amphibia, Anura); Phrynops geoffroanus (Reptilia, Testudines); and Oryctolagus cuniculus (Mammalia, Lagomorpha). For all analyzed species, the cytochemical techniques showed that the nucleolar fragmentation occurred during the beginning of prophase I, and the nucleolus reorganization occurred in the early spermatids nucleus. Statistical tests evidenced that area of the early spermatids nucleolus were smaller than the spermatogonia nucleolus area. Three phenomena can contribute for the statistical difference between the spermatogonia nucleolar area and the early spermatids nucleolar area: a) Modification of cell activity; b) Decrease of the number of NORs in the spermatids; c) Migration of the fragmented nucleolar material from the nucleus to the cytoplasm. This nucleolar material will participate in the CB formation process. The ultrastructural analysis showed an ...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Mary Massumi Itoyama / Banca: Fernanda Cristina Alcantara dos Santos / Banca: Sandra Regina de Carvalho Marchesin / Resumo: No presente trabalho verificamos que os testículos possuem morfologias diferentes podendo ser arredondados, arredondados/espiralados ou alongados/espiralados. Com relação à morfometria das células em prófase I, B. micantulum e R. zela foram as que apresentaram as menores células, G. f. flavus foi a que apresentou maior tamanho e R. c. crassifemur e M. brasiliensis apresentaram tamanho intermediário. A avaliação da espermatogênese nos permitiu concluir que as características observadas são semelhantes às das outras espécies de Heteroptera, descritas na literatura, diferindo apenas com relação à morfologia dos testículos, o número de cromossomos e o sistema cromossômico do sexo. A análise das ultraestruturas observadas durante a espermatogênese de Gelastocoris flavus flavus e Martarega uruguayensis mostraram a presença de várias mitocôndrias pequenas e uniformemente distribuidas pelo citoplasma em células em profase I, de ambas espécies, que foram se unindo formando o complexo mitocondrial, que possui no seu interior as mitocôndrias enoveladas, posteriormente este complexo mitocondrial se divide em duas estruturas denominadas derivados mitocondriais, que se dispõem bilateralmente ao axonema. O axonema dessas espécies possui o padrão de 9+9+2. A formação do acrossomo inicia-se nos primeiros estágios da espermiogênese sendo composto de muitas vesículas acrossomais que se unem formando uma única estrutura, sendo observada regiões e algumas estruturas mais coradas em seu interior. Basicamente o processo de espermiogênese não diferiu entre as duas espécies analisadas / Abstract: In this study, we found different morphologies for testes of the Heteroptera species Belostoma anurum, B. micantulum, Gelastocoris angulatus, G. flavus flavus, Rheumatobates crassifemur crassifemur, Buenoa amnigenus, B. unguis, Martarega brasiliensis, M. membranacea, M. uruguayensis, Rhagovelia tenuipes and R. zela. They can by round, round/spiral and elongated/spiral. The size of prophase I cells also varied, being the smallest ones detected in B. micantulum and R. zela, the largest in G. f. flavus, and the intermediate in R. c. crassifemur and M. brasiliensis. The analyses of spermatogenesis allowed us to conclude that, in the studied species, the features are similar to those of other previously described Heteroptera species, differing only as to the testicular morphology, the chromosome number, and the sex chromosome system. Ultrastructural analysis of the spermatogenesis showed several small mitochondrias evenly distributed throughout the cytoplasm, in cells at prophase I of G. f. flavus and M. uruguayensis. The small mitochondrias joined to form the mitochondrial complex. Later, this mitochondrial complex divided into two structures called mitochondrial derivatives, located bilaterally to the axoneme. The axoneme of these species showed the flagellar pattern 9+9+2. The acrosome started to be formed in the early stages of spermiogenesis, being composed of many acrosome vesicles that join to form a single structure. Some regions within this structure were more strongly stained. Basically the process of spermiogenesis did not differ between the species G. f. flavus and M. uruguayensis / Mestre

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O objetivo do presente estudo foi estudar aspecto estrutural e ultraestrutural das células do epitélio germinativo de Hypophthalmus marginatus durante a espermatogênese. Foram capturados 168 espécimes no período entre dezembro de 2011 a dezembro de 2012. Macroscopicamente foram identificados 69 machos adultos, ainda em campo foi realizada uma incisão ventral e fragmentos da região mediana dos testículos e sêmen foram retirados e submetidos ao processamento e análise em microscopia de luz, microscopia eletrônica de transmissão e varredura. Os estudos evidenciaram que as células germinativas se proliferam no interior do cisto espermático de forma sincrônica. As espermátides entram no processo de espermiogênese passando por três fases distintas de diferenciação celular. O núcleo não se move em relação ao eixo flagelar e os centríolos não migram para o núcleo. Os espermatozóides liberados no lúmen do túbulo seminífero apresentaram uma cabeça esférica com o núcleo altamente condensado e sem acrossoma, a peça intermediária curta contendo um único flagelo longo com axonema apresentando o microtúbulo padrão (9+2), a fossa nuclear excêntrica alojava parcialmente o centríolo proximal. A presença de células espermatogênicas na mesma subfase da meiose no interior do cisto é caracterizada como espermatogênese cística, com desenvolvimento sincrônico das células, Isto sugere que espermiogênese de H. marginatus seja do tipo III e a presença da fossa nuclear é considerada uma característica distinta para a espécie, o que difere de outros pimelodideos. / Hypophthalmus marginatus is a siluriforme, belonging to the family Pimelodidae. This species is highly consumed in eastern Amazonia and has a wide socio-economic importance to the region. Studies on the histological characterization of the reproductive system are still unknown in this species. Therefore, this study serves as a tool for biotechnology techniques, necessary for the production in captivity, since this species is one of the fishing resource most intensively exploited by artisanal fisheries. The aim of this study was to characterize the structural and ultrastructural features of germinal epithelium cells of Hypophthalmus marginatus during spermatogenesis. 168 specimens were collected from December 2011 to December 2012. Macroscopically were identified 69 adult males. In field, ventral incision was held in fishes and fragments of testicles from the median region and semen were removed. Then the material was subjected to processing and analysis of light microscopy, transmission electron microscopy and scanning. The data revealed that the germ cells proliferate inside the spermatic cyst synchronously. Spermatids enter at the spermiogenesis process through three distinct stages of cell differentiation. The nucleus does not move relative to the axis flagellar and the centrioles don't migrate to the nucleus. The spermatozoids showed a spherical head with the highly condensed nucleus and no acrosome. The intermediary piece was short containing a single long flagellum. The axoneme presents the structure of microtubules within the pattern (9 + 2). The nuclear fossa housed the proximal centriole partially. The presence of spermatogenic cells in the same subphase of meiosis inside the cyst is characterized as cystic spermatogenesis, with synchronous growth of the cells. This suggests that spermiogenesis of H. marginatus is of type III and the presence of nuclear fossa is considered a distinctive feature for the species, which differs from other pimelodids.