CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Diversos estudos tÃm evidenciado que a principal funÃÃo da proteÃna desacopladora mitocondrial de plantas (pUCP) està relacionada a regulaÃÃo de espÃcies reativas de oxigÃnio (EROs). AnÃlises in silico sugerem a existÃncia de famÃlias multigÃnicas para a codificaÃÃo de pUCPs, porÃm novos estudos ainda sÃo necessÃrios para estabelecer o perfil de expressÃo gÃnica das pUCPs, assim como a quantidade de genes em cada espÃcie e suas relaÃÃes filogenÃticas. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar, analisar filogeneticamente e avaliar o perfil de expressÃo da famÃlia multigÃnica da pUCP em diferentes tecidos durante o desenvolvimento da soja [Glycine max (L.) MERR.] e em condiÃÃes de estresse. Foi realizada uma anÃlise in silico no genoma da soja e de outras leguminosas disponÃveis no banco de dados WGS, revelando uma famÃlia multigÃnica codificadora da pUCP, UCP1 e 2 com nove Ãxons, UCP 3 com 2 Ãxons, e UCP 4 e 5 com apenas um Ãxon. Dentre as leguminosas analisadas a soja se destacou com o maior nÃmero de genes, 10 genes no total, sendo quatro genes GmUCP1, uma GmUCP2, uma GmUCP3, dois GmUCP4 e dois GmUCP5, alÃm da presenÃa de um splicing alternativo no gene GmUCP1b1. Primers especÃficos foram desenhados para cada membro da GmUCP a fim de analisar os perfis de expressÃo em diferentes tecidos (semente seca e embebida, flores, vagens, cotilÃdones, folhas unifolioladas e trifolioladas, raÃzes, hipocÃtilos e epicÃtilos) durante o desenvolvimento da soja. Para os ensaios em condiÃÃes de estresse foram utilizadas folhas e raÃzes de soja com treze dias apÃs a semeadura (DAS) que foram submetidas a estresse osmÃtico promovido pela aplicaÃÃo de polietileno glicol (PEG) e estresse biÃtico atravÃs de Ãcido salicÃlico (AS). O RNA total de cada amostra foi extraÃdo para a realizaÃÃo de RT-qPCR. Os valores de ct foram obtidos pelo programa realplex e analisados pelo programa GeNorm. O perfil de expressÃo gÃnica mostrou que todos os genes GmUCP foram expressos em todos os tecidos/ÃrgÃos analisados durante o desenvolvimento da soja, com exceÃÃo de alguns genes em semente seca e epicÃtilo. Os diferentes perfis de expressÃo de cada gene durante o desenvolvimento de cada tecido/ÃrgÃo sugerem que ocorra uma regulaÃÃo gÃnica espacial/temporal entre os membros da GmUCP. Os perfis de expressÃo dos genes GmUCP em soja durante as condiÃÃes de estresses foi diversificado, visto que 2 genes apresentaram expressÃo estÃvel em ambos tecidos/estresse, 7 genes apresentaram queda do perfil de expressÃo, enquanto apenas 4 genes apresentaram aumento dos nÃveis de transcritos. / Several studies have evidenced that the main function of the mitochondrial uncoupling protein in plants (pUCP) is related to reactive oxygen species (ROS) regulation. In silico analysis suggests the existence of multigenic families to pUCPs codification, however further studies are yet needed to establish the pUCPs genetic expression profile, just like the gene amount in each species and their phylogenetic relations. The current work had as objective to characterize, analyze phylogeneticly and evaluate the expression profile of the pUCP multigenic family in different tissues during the soybean development [Glycine max (L.) MERR.] and in stress conditions. It has been performed an in silico analysis on the soybean genome and on other legumes available in the database WGS, revealing a codifier multigenic family for pUCP, UCP1 and 2 with 9 exons, UCP3 with 2 exons, and UCP4 and 5 with only 1 exon. Amongst the legumes analyzed, the soybean stood out with the greater number of genes, 10 genes in total, giving four GmUCP1 genes, one GmUCP2, one GmUCP3, two GmUCP4 and two GmUCP5, along with the presence of an alternative splicing on GmUCP1b1 gene. Specific primers have been designed for each GmUCP member in order to analize the expression profiles in different tissues (dry and doused seed, flowers, pods, cotyledons, unifoliate and trifoliate leaves, roots, hypocotyl and epicotyl) during the soybean development. For the assays in stress conditions have been used soybean leaves and roots with thirteen days after sowing (DAS) which have been subjected to osmotic stress caused by the application of polyethylene glycol (PEG) and biotic stress caused by salicylic acid (SA). The total RNA from each sample has been extracted in order to perform the RT-qPCR. The ct values have been obtained through the realplex program and analyzed through the GeNorm program. The genetic expression profile has shown that all genes were expressed in every tissue/organ analyzed during the soybean development, with the exception on some genes in dry seeds and epicotyl. The different expression profiles of each gene during the development of each tissue/organ suggest that occurs a spatial/temporal gene regulation among the GmUCP members. The expression profiles of the GmUCP genes in soybean during the stress conditions have varied, once 2 genes have shown steady expression in both tissues/ stress, 7 genes have shown a drop in the expression profile, while only 4 genes have shown an increase of the transcript levels.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O esgotamento das reservas de energia nÃo-renovÃvel, como petrÃleo, carvÃo e gÃs natural, tÃm estimulado a busca por fontes alternativas geradoras de energia. Neste contexto, o pinhÃo manso (Jatropha curcas L.) tem recebido especial atenÃÃo por parte dos pesquisadores, devido à presenÃa de grande quantidade de Ãleo em suas sementes, que pode ser convertida em biodiesel. O objetivo deste trabalho foi investigar o comportamento de genes relacionados ao metabolismo de lipÃdios durante os processos de desenvolvimento e germinaÃÃo da semente de pinhÃo manso. Para quantificar com exatidÃo os nÃveis de expressÃo gÃnica por RT-qPCR foi feita uma seleÃÃo entre nove candidatos a genes de referÃncia. Nossos resultados mostraram que na anÃlise de sementes em desenvolvimento, os genes GAPDH, UCP, ACT11, PP2A2 e CICLOF foram os mais estÃveis. Para as sementes em germinaÃÃo, os genes considerados mais estÃveis foram EF1-α, PP2A2, GAPDH, PUB3 e ACT11. Para validar nossos resultados com genes de referÃncia, foi utilizado o padrÃo de expressÃo do gene que codifica a proteÃna oleosina no qual foi observado que o mesmo foi similar aos observados em artigos cientÃficos pesquisados, indicando que os genes de referÃncia estavam apropriados para normalizaÃÃo dos dados de RT-qPCR. ApÃs obtenÃÃo desses dados, efetuou-se um estudo da expressÃo por RT-qPCR de 20 genes envolvidos com o metabolismo de lipÃdios. Nossos resultados revelaram que os genes oleosina, β-cetoacil-ACP Sintase I e II, tioesterase A e triacilglicerol lipase I, bem como outros genes envolvidos na biossÃntese de lipÃdios, alcanÃaram altos nÃveis de expressÃo no desenvolvimento da semente. Os genes acil-CoA sintetase, tiolase e triacilglicerol lipase II, relacionados com a degradaÃÃo de lipÃdios apresentaram altos nÃveis de transcritos na germinaÃÃo da semente. Os dados obtidos neste trabalho contribuem para o entendimento das vias metabÃlicas estudadas, fornecendo subsÃdios para a produÃÃo, via engenharia genÃtica, de variedades melhoradas do pinhÃo manso. / The depletion of non-renewable energy such as oil, coal and natural gas, has stimulated the search for alternative sources of energy generation. In this context, physic nut (Jatropha curcas L.) has received special attention from researchers due to the presence of large amounts of oil in its seeds that can be converted into biodiesel. The objective of this study was to investigate the behavior of genes related to lipid metabolism during the development and germination of physic nut seeds. To accurately quantify the levels of gene expression by RT-qPCR, a selection of nine candidates for reference genes was performed. Our results showed that the GAPDH, UCP, ACT11, PP2A2 and CICLOF were the most stable genes during the development of the seeds. In germinating seeds, EF1-α, PP2A2, GAPDH, PUB3 and ACT11 were considered the most stable genes. To validate our findings with reference genes, we used the expression profile of the gene encoding the oleosin protein in which that was similar to those observed in the literature evaluated, indicating that they were suitable reference genes for data normalization by RT-qPCR. After obtaining these data, we performed a gene expression study by RT-qPCR of 20 genes involved in lipid metabolism. Our results revealed that the oleosin, β-ketoacyl-ACP Synthase I and II, thioesterase A and triacylglycerol lipase I genes, as well as other genes involved in lipid biosynthesis, achieved high expression levels in developing seeds. Acyl-CoA synthetase, thiolase and triacylglycerol lipase II, genes related to the degradation of lipids, showed high transcript levels in germinating seeds. The data obtained in this study contribute to the understanding of the metabolic pathways studied, providing subsidies for production of improved varieties of physic nut via genetic engineering.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The aim this study were (i) to map and identify proteins in seminal plasma of New Zealand white rabbits strain, using the techniques of two-dimensional electrophoresis coupled to mass spectrometry and to estimate associations between these proteins with sperm parameters and (ii) characterize expression of the nerve growth factor polypeptide beta ( -NGF) and its cognate neurotrophic receptor tyrosine kinase type 1 (NTRK1), and nerve growth factor receptor (NGFR) at gonads and sex glands in adult New Zealand white rabbits as well as the NGF concentration in seminal plasma of sexually mature animals, using RT - PCR and immunohistochemistry. Also was measured the NGF concentration in the blood and seminal plasma by ELISA. Study 1 was performed at Federal University of CearÃ, in Fortaleza-Ce. Semen samples were collected from 18 adult rabbits, using an artificial vagina. After collecting proceeded to the evaluation of semen quality parameters: total motility, individual progressive motility, sperm concentration, sperm morphology and functional tests: membrane integrity (HOST), acrosomal integrity and vitality. The seminal plasma was obtained by centrifugation of semen, and subjected to two-dimensional electrophoresis. Gels were stained with colloidal Coomassie, scanned and analyzed in PDQuest application. The individual spots were excised from the gels, digested with trypsin, and submitted to mass spectrometry (ESI-QUAD-TOF) to identification. The results were subjected to statistical analysis to verify the existence of associations between the presence and / or intensity of the spots present in the protein maps of seminal plasma with the semen quality parameters. The associations between the parameters of ejaculated sperm and the expression of seminal plasma proteins of rabbits were estimated by multiple regression models using the REG procedure of SAS statistical application (v.9.0, 2002) with STEPWISE selection. 232  69.5 spots/gel were detected with 34 spots consistently present in all gels. These 34 spots corresponded to 15% of the total number of spots, representing 32% of the optical intensity of all the spots. Mass spectrometry identified approximately 95% of the detected spots (identified: 220 spots; analyzed: 232 spots), which corresponded to 87 different proteins. The most abundant proteins were the annexins, zeta-globin, lipocalin, FAM 115 protein and a serpins cluster. Other proteins also have been identified, such as transferrin, heat shock protein, glutathione transferase and others. The NGF (protein nerve growth factor) presence also has been identified which has been reported in other species such as ovulation induction factor. This 87 proteins identified in seminal plasma of rabbits participate mainly of biological processes associated with cellular processes (65.25%), regulation (64.25%) and response to stimuli (22.9%). Significant associations were observed between the proteins identified in seminal plasma of rabbits with sperm evaluated parameters such as individual progressive motility, sperm viability, cells with morphology and functional membranes have been associated with specific proteins. Associations were observed for several proteins with the same sperm parameter. According to literature, this is first report about the proteome of seminal plasma of rabbits and its role on the seminal parameters. Knowledge of these proteins contributes to a better understanding of the regulatory mechanisms of seminal plasma on sperm function in rabbits. Study 2 was conducted at Università Degli Studi di Perugia in the city of Perugia-Pe, Italy. It was evaluated the expression of NGF protein that was previously identified during study 1. The immunoreactivity and gene expression of NGF and cognate receptors were detected in testis, prostate and seminal vesicle. The highest levels of NGF and NTRK1 transcripts were found in prostate, while intermediate expressions were found in testis. NGFR transcripts were expressed at the same level on both the testis and prostate, and were more abundant than in seminal vesicles. The widespread distribution of NGF in all glandular cells of the prostate, coupled with its high abundance of mRNA on confirm that the prostate is a major source of this neurotrophin in rabbits. In conclusion, the present data suggest that NGF is involved in developmental system and spermatogenesis of testis rabbits and that NGF can act as a potential factor for induction of ovulation, being abundantly present in seminal plasma. / Os objetivos deste estudo foram (i) mapear e identificar as proteÃnas do plasma seminal de coelhos da raÃa Nova ZelÃndia Branca, utilizando as tÃcnicas de eletroforese bidimensional associada à espectrometria de massa e estimar associaÃÃes entre essas proteÃnas com os parÃmetros espermÃticos e (ii) caracterizar a expressÃo do fator de crescimento nervoso, poliptido beta ( -NGF), e os seus receptores cognatos neurotrÃficos da tirosina-quinase de tipo 1 (NTRK1) e receptor fator de crescimento nervoso (NGFR) nas gÃnadas e glÃndulas sexuais de coelhos da raÃa Nova ZelÃndia Branca, bem como as concentraÃÃes de NGF no plasma seminal de animais sexualmente maduros, utilizando as tÃcnicas de RT - PCR e imunohistoquÃmica. TambÃm foi dosada a concentraÃÃo da NGF no sangue e no plasma seminal atravÃs da tÃcnica de ELISA. O estudo 1 foi realizado na Universidade Federal do CearÃ, na cidade de Fortaleza-Ce. Foram coletados amostras de sÃmen de 18 coelhos adultos, utilizando- se uma vagina artificial. ApÃs a coleta procedeu-se a avaliaÃÃo dos parÃmetros qualidade seminal: motilidade, vigor, concentraÃÃo espermÃtica, morfologia espermÃtica e os testes funcionais: integridade de membrana, integridade acrossomal e vitalidade. O plasma seminal foi obtido pela centrifugaÃÃo do sÃmen, e submetido à eletroforese bidimensional. Os gÃis foram corados com Coomassie coloidal, digitalizados e analisados no aplicativo PDQuest. Os spots foram cortados individualmente dos gÃis, digeridos com tripsina, e submetidos à identificaÃÃo por espectrometria de massa (ESI- QUAD-TOF). Os resultados obtidos foram submetidos a avaliaÃÃo estatÃstica para verificar a existÃncia de associaÃÃes entre entre a presenÃa e/ou intensidade dos spots presentes nos mapas protÃicos do plasma seminal com os parÃmetros de qualidade seminal. As associaÃÃes entre os parÃmetros dos espermatozoides ejaculados e a expressÃo das proteÃnas do plasma seminal dos coelhos foram estimadas por modelos de regressÃo mÃltipla usando o procedimento REG do aplicativo estatÃstico SAS (v.9.0, 2002) com a seleÃÃo STEPWISE. Foram detectados 232  69,5 spots protÃicos por gel, com 34 spots presentes consistentemente em todos os gÃis. Esses 34 spots corresponderam a 15 % do total do nÃmero de spots, representando 32 % da intensidade Ãptica de todos os spots. A espectometria de massa identicou aproximadamente 95% dos spots detectados (220 spots de um total de 232), que corresponderam a 87 proteÃnas diferentes. As proteÃnas mais abundantes foram as anexinas, zeta-globina, lipocalinas, proteina FAM 115 e um grupamento de serpinas. Outras proteÃnas tambÃm foram identificadas, tais como: transferrina, heat shock protein, glutationa transferase, entre outras. TambÃm foi identificada apresenÃa da proteÃna fator de crescimento nervoso (NGF) que tem sido relatada em outras espÃcies como fator de induÃÃo à ovulaÃÃo. As 87 proteÃnas identificadas no plasma seminal de coelhos participam principalmente dos processos biolÃgicos associados a processos celulares (65,25 %), regulaÃÃo (64,25 %) e resposta a estÃmulos (22,9 %). Foram observadas associaÃÃes significativas entre as proteÃnas identificadas no plasma seminal de coelhos com os parÃmetros espermÃticos avaliados,tais como vigor, nÃmero de cÃlulas viÃveis, morfologia espermÃtica e cÃlulas com membranas funcionais foram associados com proteÃnas especÃficas. Foram observadas associaÃÃes de vÃrias proteÃnas com um mesmo parÃmetro espermÃtico. De acordo com a literatura, este representa o primeiro relato sobre o proteoma do plasma seminal de coelhos e seu papel sobre os parÃmetros seminais. O conhecimento dessas proteÃnas contribuirà para uma melhor compreensÃo dos mecanismos de regulaÃÃo do plasma seminal sobre a funÃÃo espermÃtica em coelhos. O estudo 2 foi conduzido na Università Degli Studi di Perugia, na cidade de Perugia-Pe, ItÃlia. Foi avaliada a expressÃo da proteÃna NGF que foi previamente identificada no estudo 1. A imunorreatividade e a expressÃo gÃnica da NGF e os seus receptores cognatos foram detectados nos testÃculos, prÃstata e vesÃcula seminal. Os nÃveis mais elevados de NGF e NTRK1 transcritos foram encontrados na prÃstata, enquanto expressÃes intermediÃrias foram encontradas no testÃculo. NGFR transcritos foram expressos nos mesmos nÃveis em ambos os testÃculos e da prÃstata e eram mais abundantes do que nas vesÃculas seminais. A distribuiÃÃo generalizada de NGF em todas as cÃlulas glandulares da prÃstata, juntamente com a sua abundÃncia de RNAm relativo, confirmam que a prÃstata à das principais fontes desta neurotrofina em coelhos. Em conclusÃo, os presentes dados sugerem que o sistema NGF està envolvido no desenvolvimento testicular e espermatogÃnese de coelhos e que o NGF pode atuar como um potencial fator de induÃÃo à ovulaÃÃo, sendo abundantemente presentes no plasma seminal.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O objetivo deste estudo foi avaliar ferramentas fenotÃpicas, histolÃgicas, imunolÃgicas e moleculares para caracterizar caprinos mestiÃos quanto à resistÃncia e susceptibilidade aos nematoides gastrintestinais. Para isso, foram utilizados 231 animais F2, de ambos os sexos, com idade variando de cinco a dez meses, provenientes de quatro lotes experimentais. Semanalmente, foram coletadas amostras de fezes e sangue para realizaÃÃo dos exames: contagem de ovos por grama de fezes (OPG), coprocultura, volume globular (VG), proteÃna plasmÃtica total (PPT), eosinÃfilos sanguÃneos (EOS) e determinaÃÃo dos nÃveis de imunoglobulinas. Nos mesmos dias das coletas, tambÃm foi realizado o mÃtodo Famacha. Os animais foram ordenados de acordo com os valores de OPG, os 12 animais que apresentaram as menores mÃdias foram caracterizados como resistentes e os 12 animais que apresentaram as maiores mÃdias foram caracterizados como susceptÃveis. Os animais do lote experimental 4, como apresentaram a melhor caracterizaÃÃo fenotÃpica, foram necropsiados para a recuperaÃÃo dos nematoides gastrintestinais e amostras de tecidos para anÃlises histolÃgicas e de expressÃo gÃnica. O OPG foi eficaz, nos quatro lotes, para a caracterizaÃÃo de caprinos resistentes e susceptÃveis as parasitoses gastrintestinais nos dois desafios de infecÃÃo (P<0,05). No quarto lote, as variÃveis: OPG, VG e PPT foram eficazes na identificaÃÃo dos animais quanto a diferentes nÃveis de resistÃncia. Nos demais lotes, o VG, a PPT, a contagem de eosinÃfilos e o Famacha nÃo foram tÃo eficazes como o OPG, para diferenciar caprinos resistentes e susceptÃveis Ãs parasitoses gastrintestinais. Os nÃveis de IgA e IgG, em especial para Haemonchus contortus, nos dois desafios de infecÃÃo, e a contagem de eosinÃfilos no abomaso foram parÃmetros eficazes na resposta imune, indicando que essas cÃlulas de defesa apresentam um papel efetor no controle das infecÃÃes gastrintestinais. Na expressÃo gÃnica, a IL-5 e IL-10 apresentaram nÃveis superiores significativos no grupo susceptÃvel, mostrando que a expressÃo destas citocinas na quinta semana de infecÃÃo pode ter papel em mecanismos de susceptibilidade a nematoides gastrintestinais. / The aim of this study was to evaluate phenotypic, histologic, immunologic and molecular tools to characterize goat crossbred in resistant and susceptibily to gastrointestinal nematodes. For this purpose, we used 231 F2 animals of both genders, of ages between five and ten months, from four different kidding seasons. Stool and blood samples were collected weekly for eggs per gram of feces (EPG) determinations, fecal culture, packed cell volume (PCV), total plasma protein (TPP), blood eosinophils (EOS) and immunological tests. Famacha scores were obtained on the same sample collection days. The animals were ranked according to EPG values and the 12 animals with lowest means were considered resistant while the 12 animals with the highest means were considered susceptible. The animals in the experimental lot 4, presented the best phenotypic characterization and were chosen for, recovery of gastrointestinal nematodes and tissue samples for histological and gene expression determinations. EPG, PCV and TPP were effective in the identification of resistant and susceptible. In the other lots, the PCV, TPP, eosinophil count and Famacha were not as effective as EPG. IgG and IgA levels, particularly for Haemonchus contortus infection in both challenges, showed significant differences in some of the studied timepoints. Resistant animals presented higher eosinophil counts in the abomasum, indicating that these cells participate in the control of gastrointestinal infections. IL-5 and IL-10 gene expression levels were significantly higher in the susceptible group, showing that the expression of these cytokines in the fifth week of infection may have a role in mechanisms of susceptibility to gastrointestinal nematodes.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O fator de elongaÃÃo 1alfa (EF1&#945;) à responsÃvel pela ligaÃÃo do aminoacil-tRNA ao sÃtio A do ribossomo, atuando, assim, na fase de alongamento da sÃntese proteica. O EF1&#945; em plantas à codificado por uma famÃlia multigÃnica com nÃmero de genes variÃvel entre espÃcies. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar, analisar filogeneticamente e elucidar o perfil de expressÃo dos genes EF1&#945; em soja durante o desenvolvimento, bem como selecionar o(s) gene(s) de referÃncia mais estÃveis para ensaios de qRT-PCR no desenvolvimento e condiÃÃes de estresse. AnÃlises in silico nos genomas de soja e de outras leguminosas disponÃveis em bancos de dados revelaram famÃlias gÃnicas de 3 a 6 membros com estrutura conservada de 2 Ãxons e 2 Ãntrons. Dentre as espÃcies analisadas (Glycine max, Cajanus cajan, Vigna unguiculata, Medicago truncatula e Phaseolus vulgaris) G. max foi a que apresentou o maior nÃmero de genes, classificados como EF1&#945; 1a; 1b; 1c; 2a; 2b e 3 apÃs anÃlise filogenÃtica. A expressÃo dos genes EF1&#945; foi estudada em diferentes tecidos (flores, vagens, sementes, cotilÃdones, folhas unifolioladas e trifolioladas, raÃzes, hipocÃtilos e epicÃtilos) durante o desenvolvimento da soja. A anÃlise de expressÃo por qPCR revelou que os genes EF1&#945; sÃo funcionais, sendo expressos em todos os tecidos, contudo apresentam expressÃo diferencial dependente do tecido e do estÃdio de desenvolvimento. A expressÃo relativa entre os genes membros mostrou predomÃnio de expressÃo para 5 dos 6 genes analisados: EF1&#945; 1a: sem predomÃnio de expressÃo; EF1&#945; 1b: GerminaÃÃo e desenvolvimento do hipocÃtilo; EF1&#945; 1c: Desenvolvimento da vagem; EF1&#945; 2a: Desenvolvimento da vagem, folhas unifoliolada e trifoliolada; EF1&#945; 2b: Desenvolvimento da vagem, folhas unifolioladas; EF1&#945; 3: GerminaÃÃo, flores, raÃzes, fases iniciais do desenvolvimento do hipocÃtilo e epicÃtilo. Esses dados, juntamente com os de folhas e de raÃzes submetidas a condiÃÃes de estresse (PEG e AS) foram usados para avaliar a estabilidade de expressÃo dos diferentes genes EF1&#945; de soja atravÃs dos programas GeNorm e NormFinder. Para as anÃlises durante o desenvolvimento, quatro genes de expressÃo estÃvel (UKN1, SKIP16, EF1&#946; e MTP) foram tambÃm utilizados. Os genes EF1&#945; foram mais estÃveis em cotilÃdones (EF1&#945; 3 e EF1&#945; 1c); epicÃtilos (EF1&#945; 1b, EF1&#945; 2b e EF1&#945; 1a); hipocÃtilos (EF1&#945; 1a e EF1&#946;); vagens (EF1&#945; 2a e EF1&#945; 2b) e raÃzes (EF1&#945; 2a e UKN1) e menos estÃveis em folhas trifolioladas/unifolioladas (UKN1 e SKIP16) e sementes em germinaÃÃo (EF1&#946; e SKIP16). Em folhas sob condiÃÃes de estresse, anÃlises atravÃs do GeNorm revelaram que quatro genes (EF1&#945; 2a >1b >2b >1a) apresentaram classificaÃÃo de estabilidade semelhante nos estresses por AS e PEG. Jà em raÃzes, distinto padrÃo de estabilidade foi encontrado: EF1&#945; 2a > 1c >2b >1b > 1a >3 para PEG e EF1&#945; 1c > 3 > 2a > 1a > 2b > 1b para AS. Tais resultados foram confirmados usando o programa NormFinder. A despeito das variaÃÃes de expressÃo gÃnica em diferentes tecidos em desenvolvimento e condiÃÃes de estresse, foram determinados genes EF1&#945; que podem ser usados para normalizar ensaios de PCR em tempo real em soja e leguminosas (tribo Phaseoleae) vez que genes EF1&#945; ortÃlogos foram identificados entre essas diferentes espÃcies. / The elongation factor 1alpha (EF1&#945;) is responsible for binding of aminoacyl-tRNA to the A site of the ribosome, acting thus the elongation phase of protein synthesis. The EF1&#945; in plants is encoded by a multigene family with variable number of genes among species. The aim of this study was to characterize, analyze phylogenetic and elucidate the expression profile of EF1&#945; genes in soybean during development, as well as select (s) gene (s) of the most stable reference for qRT-PCR assays in the development and conditions stress. In silico analyses in the genomes of soybean and other leguminous plants available in databases revealed gene families 3-6 members with conserved structure of 2 exons and 2 introns. Among the analyzed species (Glycine max, Cajanus cajan, Vigna unguiculata, Phaseolus vulgaris and Medicago truncatula) G. max was the one with the largest number of genes classified as EF1&#945; 1a, 1b, 1c, 2a, 2b and 3 after phylogenetic analysis. The EF1&#945; gene expression was studied in different tissues (flowers, pods, seeds, cotyledons, trifoliate and unifolioladas leaves, roots, hypocotyls and epicotyls) during the development of soybean. Expression analyses by qPCR revealed that the EF1&#945; genes are functional and expressed in all tissues, however exhibit differential expression dependent on the tissue and developmental stage. Relative expression between genes members showed predominance of expression for 5 of the 6 genes analyzed: EF1&#945; 1a: no predominance of expression; EF1&#945; 1b: Germination and development hypocotyl; EF1&#945; 1c: pods development; EF1&#945; 2a: pods development, unifoliate and trifoliate leaves; EF1&#945; 2b: pods development, unifoliate leaves; EF1&#945; 3: Germination, flowers, roots, early stages development (hypocotyl and epicotyl). These data, together with the leaves and roots subjected to stress conditions (PEG and AS) were used to assess the stability of expression of different EF1&#945; genes soybean through the programs GeNorm and NormFinder. For the analyses during development, four stable genes (UKN1, SKIP16, EF1&#946; and MTP) were also used. EF1&#945; genes were more stable in cotyledons (EF1&#945; 3 and EF1&#945; 1c); epicotyls (EF1&#945; 1b, 2b and 1a), hypocotyls (EF1&#945; 1a, EF1&#946; and EF1&#945; 1c); pods (EF1&#945; 2a and EF1&#945; 2b) and roots (EF1&#945; 2b and UKN1) and less stable in trifoliate/unifoliolate leaves (UKN1 and SKIP16) and germinating seeds (EF1&#946; and SKIP16). In leaves under stress conditions, through GeNorm analyses revealed that four genes (EF1&#945; 2a> 1b> 2b> 1a) showed similar stability in the classification of stress for AS and PEG. Already in roots, distinct pattern of stability was found: EF1&#945; 2a> 1c> 2b> 1b> 1a> 3 for PEG and EF1&#945; 1c> 3> 2a> 1a> 2b> 1b to AS. These results were confirmed using the program NormFinder. In spite of changes in gene expression in different tissues in development and stress conditions were determined EF1&#945; genes that can be used to normalize the qPCR assays in soybean and others leguminous plants (Phaseoleae tribe) seeing that EF1&#945; genes orthologous were identified between these different species.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O objetivo deste estudo foi investigar a expressÃo do sistema interleucina 1 (proteÃnas e RNAm de ligantes e receptores) e sua distribuiÃÃo nos ovÃrios de vacas cÃclicas, bem como avaliar os efeitos da IL-1&#946; na sobrevivÃncia e ativaÃÃo de folÃculos primordiais in vitro. Os ovÃrios foram processados para a localizaÃÃo do sistema interleucina 1 em folÃculos prÃ-antrais e antrais utilizando as tÃcnicas de imunohistoquÃmica, qPCR e anÃlise de Western blot. Para os estudos in vitro, fragmentos ovarianos foram cultivados em &#945;-MEM+ suplementado com IL-1&#946; (0, 1, 10, 50 ou 100 ng/mL), e apÃs 6 dias foram processados para anÃlise histolÃgica. Os resultados de imunohistoquÃmica mostraram que a proteÃna para os integrantes do sistema interleucina I (IL-1&#946;, IL-1RA, IL-1RI e IL-1RII) foram detectados em diferentes compartimentos foliculares. Infelizmente, o anticorpo testado para localizaÃÃo de IL-1&#945; nÃo reagiu em ovÃrios bovinos. Todas as proteÃnas testadas foram observados no citoplasma dos oÃcitos e nas cÃlulas da granulosa de todas as categorias foliculares, e nas cÃlulas da teca de folÃculos antrais, com a exceÃÃo da IL-1&#945;, que nÃo foi encontrada em nenhuma das cÃlula analisados. Foram observados nÃveis variÃveis de RNAm para o sistema interleucina 1 nas diferentes categorias foliculares analisadas. ApÃs 6 dias de cultivo, a presenÃa de IL-1&#946; (10 ou 50 ng/mL) foi capaz de manter a percentagem de folÃculos normais e de promover a ativaÃÃo dos folÃculos primordiais. Em conclusÃo, os componentes do sistema de interleucina 1 sÃo expressos diferencialmente em cÃlulas ovarianas de acordo com a fase do desenvolvimento folicular. AlÃm disso, a IL-1&#946; promove o desenvolvimento de folÃculos primordiais in vitro. Estes resultados sugerem um importante papel do sistema interleucina 1 na regulaÃÃo da foliculogÃnese em bovinos. / This study aims to investigate the expression of interleukin 1 system (proteins and mRNA of ligands and receptors) and its distribution in ovaries of cyclic cows, as well as to evaluate the effects of IL-1&#946; on the survival and activation of primordial follicles in vitro. The ovaries were processed for localization of interleukin 1 system in preantral and antral follicles by immunohistochemical, qPCR and western blot analysis. For in vitro studies, ovarian fragments were cultured in &#945;-MEM+ supplemented with IL-1&#946; (0, 1, 10, 50 or 100 ng/mL), and aftes 6 days the tissues cultured were processed for histological analysis. Immunohistochemical results showed that the proteins for interleukin 1 system (IL-1&#946;, IL-1RA, IL-1RI and IL-1RII) were detected in the various follicular compartments. Unfortunately, IL-1&#945; antibodies tested did not react in bovine ovaries. All the proteins tested were observed in the cytoplasm of oocytes and granulosa cells from all follicular categories, and theca cells of antral follicles, with the exception that IL-1&#945; has not been found in any analyzed cell. Variable levels of mRNA for the interleukin 1 system in the follicular size and classes analysed. After 6 days of culture, the presence of IL-1&#946; (10 or 50 ng/mL) was effective in maintaining the percentage of normal follicles and in promoting primordial follicle activation. In conclusion, interleukin 1 system is differentially expressed in the ovarian cells according to the stage of follicular development. Moreover, IL-1&#946; promotes the development of primordial follicles. These results suggest an important role of the interleukin 1 system in the regulation of folliculogenesis in bovine species.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O pinhÃo-manso (Jatropha curcas L.) à uma planta oleaginosa, pertencente à famÃlia Euphorbiaceae, cujas sementes sÃo reconhecidas como matÃria-prima com potencial para a produÃÃo de Ãleo. Essa planta tambÃm à considerada tolerante a condiÃÃes adversas, tais como dÃficit hÃdrico e deficiÃncia nutricional do solo, o que favorece o seu cultivo em regiÃes Ãridas e semiÃridas. Objetivou-se avaliar os efeitos do estresse salino sobre a germinaÃÃo e a mobilizaÃÃo das reservas de sementes e plÃntulas de pinhÃo-manso, por meio de anÃlises bioquÃmicas, fisiolÃgicas e ultraestruturais. Os parÃmetros germinativos foram negativamente afetados pelo estresse salino, observando-se reduÃÃes significativas principalmente no percentual de germinaÃÃo e no Ãndice de velocidade de germinaÃÃo. Similarmente, a matÃria seca, avaliada no eixo embrionÃrio e no endosperma, foi reduzida pela salinidade. Com relaÃÃo aos compostos de reserva, os lipÃdios foram os mais abundantes, correspondendo a 64,0% da matÃria seca do endosperma da semente quiescente. Estes compostos apresentaram forte retardo em sua mobilizaÃÃo em condiÃÃo de estresse salino. As proteÃnas, a segunda reserva mais abundante (21,3%), tambÃm tiveram sua mobilizaÃÃo severamente afetada pelo tratamento salino. O amido foi detectado em pequena quantidade (5,5%), porÃm, verificou-se o aumento transiente de seu teor aos 5 dias apÃs a semeadura (DAS), que coincidiu com a intensa mobilizaÃÃo de lipÃdios, em condiÃÃes controle. Entretanto, em condiÃÃes de estresse salino, o amido foi pouco mobilizado. Os produtos da mobilizaÃÃo das reservas, em condiÃÃes controle, principalmente os aÃÃcares nÃo-redutores e aminoÃcidos livres aumentaram no endosperma, enquanto que, sob condiÃÃes de salinidade, eles foram pouco alterados. AlÃm disso, as anÃlises citoquÃmicas e ultraestruturais confirmaram a abundante quantidade de lipÃdios e proteÃnas, sendo detectados inÃmeros corpos proteicos e lipÃdicos no citoplasma das cÃlulas endospÃrmicas dessas sementes. A salinidade tambÃm promoveu alteraÃÃes morfolÃgicas e ultraestruturais nas cÃlulas endospÃrmicas durante a germinaÃÃo e desenvolvimento de plÃntulas. O presente estudo tambÃm avaliou o metabolismo lipÃdico atravÃs da anÃlise da composiÃÃo dos Ãcidos graxos do endosperma e da anÃlise da atividade enzimÃtica e da expressÃo gÃnica das enzimas lipase, liase do isocitrato e sintase do malato. Os Ãcidos graxos insaturados foram os mais abundantes, destacando-se o oleico e o linoleico-linolÃnico, que apresentaram incrementos em seus teores, em condiÃÃes controle, ao longo do perÃodo avaliado, porÃm, sob estresse salino foram pouco alterados. A lipase apresentou incremento na sua atividade ao longo da germinaÃÃo, que coincidiu com a intensa mobilizaÃÃo de lipÃdios observada no controle. Similarmente, a reduÃÃo dessa atividade foi correspondente ao retardo na mobilizaÃÃo dos lipÃdios em condiÃÃo de estresse salino. A atividade enzimÃtica da liase do isocitrato nÃo apresentou diferenÃas significativas entre os tratamentos atà Ãs 96 horas apÃs a semeadura (HAS), porÃm apÃs esse perÃodo, verificaram-se as maiores reduÃÃes na condiÃÃo de estresse salino, quando comparado ao controle. Jà a atividade da sintase do malato foi significativamente maior em condiÃÃes controle atà Ãs 144 HAS, entretanto, a partir desse perÃodo, essa atividade se mostrou superior em condiÃÃes salinas. Verificaram-se reduÃÃes na atividade dessas enzimas em decorrÃncia do estresse, o que teve correlaÃÃo com as mudanÃas na expressÃo dos genes da lipase e liase do isocitrato. Portanto, pode-se concluir que a salinidade contribuiu para o retardo na mobilizaÃÃo dos lipÃdios, a principal reserva encontrada nas sementes de J. curcas, o que foi correlacionado a reduÃÃo na atividade das enzimas envolvidas no seu metabolismo. / Jatropha curcas L. is an oilseed species belonged to Euphorbiaceae family, whose seeds are recognized as promising source for biodiesel production. Its ability to survive in adverse conditions, such as water stress and poor nutritional soil, is noteworthy, which favors its cultivation in arid and semiarid regions. Here we evaluate the negative effects promoted by NaCl salt stress on seed germination, reserve mobilization of J. curcas through biochemical, physiological and ultrastructural analysis. The seed germination parameters were significantly affected by salt stress, being observed that the main parameters affected were germination percentage and germination speed index. Similarly, the embryo and endosperm dry mass were reduced by Na+ and Cl- increase in the medium. Considering the reserve compounds, the most abundant reserve of these seeds were the lipids, which corresponded to 64.0% of endosperm seed quiescent dry mass. They showed a stronger delay in reserve mobilization under saline conditions. Proteins were the second most important reserve (21.3%), being severally affected by salinity. The starch was detected in little amount (5.5% of quiescent seed dry mass), however there was a transient increase in this contents at 5 DAI (days after imbibition), which was correlated to the intense lipid mobilization, in control conditions. On the other hand, in salinity, it was observed that starch mobilization was reduced. The seed reserve products (mainly non-reducing sugars and free amino acids) were increased in endosperm in control in relation to quiescent seed, during germination, whereas for salt conditions, these products were few changed. Additionally, cytochemical and ultrastructural analyses confirmed the large amount of protein and lipid bodies in endosperm cells, reaching the identification of a huge amount of protein and lipid bodies. Salt stress promoted morphological and ultrastructural changes in endospermic cells, during germination and seedling development confirming the biochemical analyses. The present study also evaluated the lipid metabolism, using the fatty acid composition analysis and enzymatic and expression genic analyses for lipase, isocitrate liase, malate sintase. The unsaturated fatty acids were the most abundant, highlighting oleic (C18:1) and linoleic-linolenic (C18:2; C18:3), showing increase in their contents, in control conditions, during the evaluated period. However, the fatty acids practically were not changed in salinity conditions. Lipase showed increase in their activity during germination, which corresponded to intense mobilization in lipids in control. In similar way, the reduction of this activity happened in salinity, correlating to lipid delay mobilization. The evident delay of protein and oil body mobilization could strongly affect initial seedling development. The liase isocitrate activity did not show significant differences between treatments until 96 hours after imbibition (HAI), however, following this period, it was verified the strongest reduction in salt stress condition. The activity of malate synthase was not significantly higher in control conditions until 144 HAI, however, following this period, this activity was higher in salinity. It were verified reductions in enzymatic activity due to salt stress, which were correlated to gene expression changes of lipase and isocitrate lyase. Therefore, salinity contributed negatively to lipid mobilization, the main reserve of J. curcas seeds, which was correlated to reduction in activity of the enzymes involved in lipid metabolism.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / A tese à composta por dois capÃtulos. O primeiro capÃtulo inclui o trabalho cujo objetivo foi investigar o potencial uso de pares de transcritos correlativos baseados em microarranjos como marcadores de fertilidade masculina usando a displasia da bainha fibrosa (DFS) como modelo afetado. Atualmente à bastante reconhecido que a tecnologia de microarranjos pode ser limitada pelos custos e que a qualidade dos transcritos permanece relativamente desconhecida. Para responder essas questÃes, nÃs analizamos pares de transcritos estÃveis por qPCR com um processo sistemÃtico de desenho de primers sistemÃtico. Nesse estudo experimental, nÃs utilizamos amostras de homens com fertilidade comprovada e de homens com diagnÃtico de DFS. Nossa abordagem foi baseada nas sequÃncias de primers dos seis genes de interesse, os quais foram desenhados utilizando os programas Oligo7 e Primer3Plus. A especificidade do primer foi inicialmente analisada in silico atravÃs de pesquisas nos bancos de dados ENSEMBL, University of California Santa Cruz (UCSC), e National Center for Biotechnology Information (NCBI) para uso de sequÃncias especÃficas aos genes alvos. A habilidade dos pares de transcritos em classificar as amostras de homens de fertilidade comprovada das amostras de DFS foi avaliada. Nossos resultados mostraram que em conjunÃÃo com a identificaÃÃo de quatro novos pares estÃveis, a comparaÃÃo dos coeficientes de correlaÃÃo dos valores de C(t) dos DSF revelou a interrupÃÃo de quatro pares estÃveis identificados nas amostras de homens normais. Esta seleÃÃo de pares estÃveis resolve a questÃo sobre a DSF. Em conclusÃo, os resultados mostram efetivamente que o desenho de primers e qPCR podem fornecer um ensaio molecular de baixo custo para avaliar a fertilidade masculina. O segundo capÃtulo divide-se em dois estudos e avalia em carneiros os efeitos de uma dieta suplementada com farelo de castanha de caju. No estudo 1, nosso objetivo foi detectar a presenÃa de transcritos para Heat Shock Protein (HSP70), clusterina (CLU), proteÃna semelhante à subunidade alfa do complexo T (TCP1) e proteÃna do complexo T subunidade 8 (CCT8) no espermatozÃide de ovinos, seguindo a mesma metodologia para qPCR utilizada no capitulo 1. As sequÃncias de primers foram desenhadas utilizando os programas Primer3Plus e Oligo Analyzer. Gene para protamina 2 (PRM2) foi usado como controle interno de reaÃÃo. O sÃmen foi coletado de machos pÃberes Morada Nova utlizando eletroejaculador. As amostras selecionadas para extraÃÃo de RNA espermÃtico seguiram as recomendaÃÃes do ColÃgio Brasileiro de ReproduÃÃo Animal quanto aos parÃmetros de motilidade, vigor e concentraÃÃo. Nossos resultados mostraram a presenÃa de mRNA para a HSP70 nos espermatozÃides de ovinos. Maiores estudos sÃo necessÃrios a fim de confirmar ou refutar a presenÃa das chaperonas TCP1 e CCT8 no espermatozÃide ovino. A presenÃa do transcrito da HSP70 no espermatozÃide de ovinos abre perspectivas para estudos futuros sobre os efeitos do mRNA HSP70 no desenvolvimento embrionÃrio, de modo a avaliar se essa expressÃo ocorre de modo espontÃneo, programado e seqÃencial, e se esses mecanismos se refletem na fertilidade e no desenvolvimento embrionÃrio. O segundo estudo tem como principal objetivo avaliar os efeitos de uma dieta contendo farelo de castanha de caju (FCC) na expressÃo de genes relacionados ao metabolismo dos lipÃdios no mÃsculo Longissimus dorsi de carneiros Morada Nova. Vinte carneiros maduros sexualmente foram divididos em dois grupos baseando-se no peso vivo. Os animais foram mantidos em baias individuais. Durante trÃs meses, o grupo castanha (GCA) foi alimentado com raÃÃo contendo FCC, enquanto o grupo controle (GCO) recebeu raÃÃo à base de milho e soja. As duas dietas eram isocalÃricas e isoprotÃicas, adicionadas de suplemento mineral. Os carneiros tambÃm receberam feno de Tifton e Ãgua à vontade. A quantidade de alimento ofertado (raÃÃo e feno) foi ajustada diariamente para sobra de 10%. Sete genes codificantes de proteÃnas envolvidas direta ou indiretamente foram selecionados como alvos, incluindo: GH, ACACA, CAST, CAPN3, LPL, SCD e FASN. Para normalizaÃÃo, foram selecionados cinco genes candidatos: ACTB, GAPDH, RPL4, RPS18 e TBP. Dentre os sete genes alvos selecionados anteriormente, os alvos GH, ACACA e CAST foram removidos. Os dois primeiros foram removidos devido amplificaÃÃo de alinhamento mÃltiplo (baixa especificidade do primers), enquanto CAST apresentou baixa eficiÃncia de amplificaÃÃo. Da lista de gene alvo final, a expressÃo de somente dois genes foi afetada pela dieta, SCD (p<0.01) e FASN (p<0.05), enquanto LPL (p=0,1022) e CAPN3 (p=0,0939) nÃo apresentaram diferenÃa significativa (p<0.05). Os genes SCD e FASN foram reprimidos no GCA comparada ao GCO. Este à o primeiro relato de que uma raÃÃo contendo FCC afetou a expressÃo gÃnica de proteÃnas envolvidas na deposiÃÃo de lipÃdios no mÃsculo em ovinos. Considerando que uma dieta contendo FCC altera a expressÃo de genes lipogÃnicos sem afetar o ganho de peso nem a eficiÃncia reprodutiva de ovinos, faz da castanha de caju uma importante alternativa para o sistema de produÃÃo de ovinos criados em regiÃes tropicais. / This thesis presents two chapters. In the first chapter, its objective was to investigate the potential use of correlative microarray-based transcript pairs as candidate markers for male fertility using dysplasia of the fibrous sheath (DFS) as an affected model. It is widely recognized that microarray technology may be limited by cost and that the quality of the transcript remains relatively unknown. To address these issues, we analyzed the stable transcript pairs by qPCR with a systematic primer design process. On this experimental study, we used men with proven fertility and men with a diagnosis of DFS. Our approach was based on primer sequences for six genes of interest were designed using Oligo7 and Primer3Plus. Primer specificity was initially assessed in silico by searching the ENSEMBL, University of California Santa Cruz, and National Center for Biotechnology Information databases for nontarget complementary sequences throughout the genome. The ability of transcript pairs to classify samples from males of proven fertility away from DFS was assessed. Our results showed that in conjunction with identifying four new stable transcript pairs, comparison of the DFS qPCR C(t) correlation coefficients revealed the disruption of four stable fertile sample transcript pairs. This suite of transcript pairs resolves DFS. In conclusion, the results show that with effectively designed primers, qPCR may provide an affordable molecular assay to assess male fertility status. Second chapter includes two studies regarding evaluations of ram feeded with supplemented diet with cashew nut. On the frist study, our goal was detect transcripts for Heat Shock Protein (HSP70), Clusterin (CLU), Ovis aries T-complex protein 1 alfa subunit-like protein (TCP1) e Ovis aries chaperonin containing TCP1, subunit 8 (theta) (CCT8) on ram sperm by. For primer designing we used published ESTs from NCBI and manually annotated by us using Primer3Plus and OligoAnalizer. PRM2 was used as internal qPCR control. Semen samples from mature Morada Nova ram were collected by eletroejaculator, washed in PBS and prepared for further RNA extraction. Selected samples followed quality recommendatios from ColÃgio Brasileiro de ReproduÃÃo Animal regarding motility, vigor and concentration. Our results showed presence of mRNA HSP70 on ram sperm and they can possible be envolved in early embryo development, oocyte activation and post fertilization events. Further analyses will be necessary to confirm presence of TCP1 and CCT8 on ram sperm. Our findings indicate new perpectives about the effects of these chaperones during embryo development mesuring if its expression reflects male fertility on the early embryo development. On the second study the the main goal is to evaluate the effects of a lipid-enriched diet containing cashew nut brain on the expression of genes related to lipid metabolism in the longissimus dorsi muscle of Morada Nova rams. Twenty sexually mature and reproductively sound rams were divided in two groups based on ram live weight, and each ram was kept on individual pens. During three months, group 1 (G1) rams were fed with a lipid-rich diet, containing cashew nut bran (CNB), while group 2 (G2) was fed with a meal based on corn and soy. Both diets were isocaloric and isoproteic, and had a mineral mix added-in. The rams also were offered Tifton grass hay and had free access to water. The amount of diet offered (ration plus hay) was adjusted everyday to a maximum waste of 10%. Seven genes coding for proteins directly or indirectly involved in lipid metabolism were initially selected as targets, incluiding GH, ACACA, CAST, CAPN3, LPL, SCD, and FASN. Also, five genes were selected as reference genes, ACTB, GAPDH, RPL4, RPS18 and TBP. From the seven genes originally selected as targets, GH, ACACA and CAST were removed, leaving the final list with four targets. The first two genes were removed due to alternative pairing of the primers (low specificity), while CAST showed low amplification efficiency during PCR reaction. From the final target list, the expression of only two genes was affected by diet, SCD (p<0.01) and FASN (p<0.05), while LPL (p=0,1022) and CAPN3 (p=0,0939) were not different at the p<0.05 level. Both SCD and FASN genes were down-regulated in G1 (lipid-rich diet containing CNB) compared to G2. These genes are involved in lipogenic pathways, related to tissue lipid deposition; therefore, these results were expected. This is the first time that a fat-rich diet based on CNB was shown to affect gene expression of proteins involved in fat deposition in carcass muscles of rams. Longissimus dorsi is one of the finest meat cuts. Considering that human diets rich in poli-unsaturated fatty acids (PUFA) can decrease the risk of heart and other chronic diseases, a change in the fatty acid profile of this muscle could contribute to a healthier diet, aggregating value to the end-product of the lamb meat market. The effects of CNB-based diet on the gene expression of SCD and FASN support the notion that such diet, as previously shown for other sources of lipid in ruminants, can potentially change the fatty acid composition of L. dorsi, but this hypothesis needs to be experimentally verified by profiling fatty acids in animals fed CNB versus carbohydrate-based diets. CNB use as an ingredient in animal feeding is environmentally-friendly, since it contributes to by-product recycling from the agroindustrial plants in Northeast Brazil. Also, considering that CNB-based diet changes lipogenic gene expression without affecting weight gain or reproductive status of the rams, as shown in another work from our team, makes CNB a very important alternative food in ram production systems in tropical regions.